全 文 ：如表 u所示 o当氯化钠达到 s1x h时 o柽柳种子
不能萌发 ~在 s1ux h氯化钠溶液中 o柽柳种子能够
萌发 o发芽率与对照蒸馏水处理没有差异 o但是发芽
势差异极显著 ∀s1ux h氯化钠溶液处理的柽柳种子
第 t天萌发很少 o蒸馏水处理第 t天就达到萌发高
峰 ∀
表 u 氯化钠处理下柽柳种子发芽势和发芽率k ν vl
氯化钠含量r h 发芽势r h 发芽率r h
s |x qz |z qv
s qst |x |{ qv
s qsx |x qv |z qz
s qt |w qz |z qz
s qux ty
|y qz
s qx s ≤ s
t qs s ≤ s
u qs s ≤ s
214 发芽基质
表 v结果表明 o不同基质上柽柳种子发芽率差
异不显著 ∀因此在对柽柳种子进行发芽检验时 o可
以用纸上或纸间发芽法 ∀
表 v 不同发芽床条件下柽柳种子发芽率
发芽条件 发芽势r h 发芽率r h
土床 |x qz |z qz
沙床 |x qv |z qz
纸上 |x |{
纸间 |x qz |z qz
3 小结与讨论
311 柽柳种子萌发适宜温度为 ux ∗ vx ε o温度低
于 x ε 或高于 wx ε 都不能萌发 o因此在播种时应选
择地温稳定高于 x ε 时适时播种 o若播种过早 o造成
缺苗 ∀成年柽柳虽然非常耐盐碱≈y o但是柽柳种子
在盐分 s1x h时就不能萌发 o因此选择柽柳育苗地
时应注意土壤不要过于盐碱 o否则容易造成缺苗 ∀
另外由于柽柳种子细小 o对光照又不敏感 o建议播种
后 o不要覆土 o既节省人力物力 o又可避免覆土过厚
埋种过深 ∀
312 对柽柳种子批进行发芽率检验时 o可选择
ux ∗ vx ε 温度条件 o用双层滤纸发芽法对柽柳种子
批进行发芽率的测定 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 q一部 qussx }{z q
≈u 刘铭庭 q柽柳属植物综合研究及大面积推广应用 q兰州 }兰州
大学出版社 ot||x qu{w q
≈v 杨太新 o王华磊 o王长林 o等 q管花肉苁蓉田间接种技术的研
究 q中国中药杂志 oussx ovskzl }w{{ q
≈w 荀守华 o何洪兵 o陈纪香 o等 q柽柳扦插育苗试验报告 q山东
林业科技 oussw oy }vw q
≈x 颜启传 q种子学 q北京 }中国农业出版社 ousst }wuy q
≈y 赵明范 o葛 成 o翟志中 q干旱地区次生盐碱地主要造林树种
抗盐指标的确定及耐盐能力排序 q林业科学研究 ot||z oktsl o
u }t|w q
≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussx2s{2u|
≈通讯作者 3 尹华 oר¯ }ksxztl{yytvysw o∞2°¤¬¯}°¤µ¼¼¬±«∏¤
tyv q¦²°
骨健口服液中黄芪甲苷及丹酚酸
的含量测定
尹 华 3 o章建华u o董晓烨t o周爱珍t
k t1 浙江中医药大学 药学院 o浙江 杭州 vtssxv ~
u1 浙江省中医院 骨伤科 o浙江 杭州 vtsssy l
骨健口服液是浙江省中医院和浙江省骨关节病
中心研究开发的医院制剂 o由黄芪 !丹参 !杜仲 !当
归 !延胡索 !菟丝子等数味中药制成 o具有益气补肾 !
养血活血 !通络壮骨之功效 o临床治疗骨股头坏死疗
效显著 o现正研究开发成中药新药≈t ∀方中重用黄
芪补阳升气 !生血行滞 o具有双向调节体液及细胞免
疫 o扩张痉挛血管 o抑制血小板凝聚 o抗血栓形成 !抗
炎的作用 o其生理活性成分为黄芪甲苷等皂苷类成
分≈u ~丹参为方中臣药 o具有活血通络 !养血止痛之
功效 o现代药理研究表明丹参具有改善微循环 !降低
血液黏度及抗菌消炎等作用 o其生理活性成分为丹
#z|tt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy
酚酸
!丹参素等≈v ∀为保证制剂质量的稳定可控 o
实现临床用药的安全有效 o本研究采用 °≤ 对其
君药和臣药的主要有效成分黄芪甲苷 !丹酚酸
进
行了含量测定 ∀
1 仪器与试药
ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪k安捷伦科技有限
公司l o≥¨ §¨¬zx型 ¶¨§¨µ¨蒸发光散射检测器k安捷伦
科技有限公司l o usw型旋转蒸发仪k上海申生科技
有限公司l o°xtuw型纯水机 °otrts万电子分
析天平k德国塞多利斯l ∀
黄芪甲苷对照品k中国药品生物制品检定所 o
sz{t2ussutsl ~丹酚酸
对照品k中国药品生物制品
检定所 otttxyu2ussvsul ~骨健口服液制剂k浙江省中
医院制剂室l ~黄芪 !丹参 !杜仲 !当归 !延胡索 !菟丝
子等药材均购自浙江省华东医药公司 o由浙江中医
学院药学系资源鉴定教研室张如松教授鉴定 ~水为
过 s1u Λ°滤膜的蒸馏水 ~甲醇 !乙腈k色谱纯l o其余
试剂均为分析纯 ∀
2 含量测定
211 黄芪甲苷的含量测定
21111 色谱条件 µ²°¤¶¬¯ ≤t{色谱柱kw1y °° ≅
uxs °° ox Λ°l ~流动相 甲醇2水kzxΒuxl ~流速 s1{
°#°¬±pt ~柱温 us ε ~进样量 us Λ~∞≥⁄参数 }漂
移管温度 wx ε ~空气压力 v1x ¥¤µ~灵敏度 y ∀本实
验条件下 o黄芪甲苷与相邻峰的分离度大于 t1x ~理
论塔板数按黄芪甲苷峰计不低于 x sss ∀
21112 溶液制备 对照品溶液的制备 精密称取
黄芪甲苷对照品 11144 °ª置于 ts °量瓶中 o加甲
醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o得 t1tww °ª#°pt的黄
芪甲苷对照品储备液 ~逐级稀释得黄芪甲苷对照品
溶液 ∀
供试品溶液的制备 精密量取骨健口服液
vs1ss °置分液漏斗中 o用水饱和的正丁醇萃取 w
次 o每次 ux °~合并正丁醇萃取液 o用氨试液洗涤 u
次 o每次 ux °~弃去碱水层 o将正丁醇液蒸干 o残渣
用甲醇溶解并转移至 x °量瓶中 o加甲醇稀释至刻
度 o摇匀 o用 s1wx Λ°微孔滤膜滤过 o取续滤液作为
骨健口服液供试品溶液 ∀
缺黄芪阴性对照溶液的制备 按处方比例称得
除黄芪的其他药味 o按照骨健口服液的制备工艺制
成缺黄芪的骨健口服液阴性样品 o按/供试品溶液的
制备0项下的方法制成缺黄芪的阴性对照溶液 ∀
31113 空白试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶
液 !骨健口服液供试品溶液 !缺黄芪的阴性对照溶液
各 us Λo在上述色谱条件下分别注入色谱仪 o得相
应的色谱图 o如图 t所示 o骨健口服液供试品在与黄
芪甲苷对照品相应的位置上 o有一相同保留时间的
色谱峰 ~而缺黄芪的阴性对照溶液在此保留时间处
无色谱峰 o说明骨健口服液中其他药味对黄芪甲苷
的测定不产生干扰 ∀
21114 线性关系考察 精密量取 t1tww °ª#°pt
的黄芪甲苷对照品储备液 s1ys os1xs os1ws os1vs o
s1us os1ts °于 u °的量瓶中 o分别用甲醇稀释至
刻度 o得 vwv1u ou{y1s ouu{1{ otzt1y ottw1w oxz1u Λª#
°pt的黄芪甲苷对照品溶液 ~另取 vwv1u Λª#°pt
对照品溶液 s1us °于 u °量瓶中 o用甲醇稀释至
刻度 o得 vw1vu Λª#°pt的对照品溶液 ∀将 z个质量
浓度的黄芪甲苷对照品溶液 o在上述色谱条件下分
别进样 us Λ测定 ∀以黄芪甲苷对照品溶液质量浓
度的对数k Ξl对峰面积的对数kΨl进行回归 o结果表
明黄芪甲苷在 vw1vu ∗ vwv1u Λª#°pt线性关系良
好 o回归方程为 Ψ t1wz| Ξ n s1z|v y(ρ s1||| y) ∀
图 t 骨健口服液 °≤图
1 对照品 ~
1 样品 ~≤1 缺黄芪的阴性对照 ~t1 黄芪甲苷
21115 精密度试验 精密吸取 uu{1{ Λª#°pt的黄
芪甲苷对照品溶液 us Λo在上述色谱条件下 o连续
重复进样 y次 o结果黄芪甲苷峰面积的 ≥⁄为 s1|z
h o表明精密度良好 ∀
21116 重复性试验 精密量取同一批次骨健口服
液k批号 ussxsvusly份 o每份 vs1ss °o按/供试品
溶液的制备0项下方法制备供试品溶液 o并在上述色
谱条件下进样测定 o结果样品中黄芪甲苷的平均质
量浓度为 s1su{ tx °ª#°pt o ≥⁄为 t1{ h o表明重
复性良好 ∀
21117 稳定性试验 精密吸取 uu{1{ Λª#°pt黄芪
甲苷对照品溶液 us Λo在上述色谱条件下 o分别于
s ot ou ow o{ otu ot{ ouw ow{ «进样测定 o结果对照品溶
液中黄芪甲苷峰面积的 ≥⁄为 u1w h o表明对照品
溶液在 w{ «内保持稳定 ∀
21118 加样回收率试验 精密量取已测含量的骨
#{|tt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy
健口服液k批号 ussxsvusly份 o每份 tx1ss °o各精
密加入 s1|zw °ª#°pt黄芪甲苷对照品溶液 s1yvs
°o用蒸馏水补足体积至 vs °∀按/供试品溶液的
制备0项下方法处理 o并在上述色谱条件下进样测
定 o计算回收率 o结果见表 t ∀
表 t 黄芪甲苷加样回收率k ν yl
测得量r°ª 回收率r h 平均值r h ≥⁄r h
t qstw z |y qx
t qsxt u tsu qx
t qswt w tss q| tss qv u qu
t qsws z tss q{
t qsu| t |{ q|
t qsw{ v tsu qs
注 }样品中含量均为 s1wuu v°ª~加入量均为 s1ytv y °ª
21119 样品测定 取 v 个批号 kussxsvtt o
ussxsvus oussxsvuxl的骨健口服液 o每批各 v份 o每
份各精密量取 vs1ss °o按/供试品溶液的制备0项
下方法制备供试品溶液 o并在上述色谱条件下进样
测定 o以外标两点法计算 o结果样品中黄芪甲苷质量
浓度分别为 uz1|v ou{1tx ou{1vz Λª#°pt o ≥⁄分别
为 u1t h ot1w h ot1{ h ∀
212 丹酚酸
的含量测定
21211 色谱条件 ²µ¥¤¬ ∞¦¯¬³¶¨ ≥
≤t{色谱柱kw1y
°° ≅ txs °° ox Λ°l ~流动相甲醇2乙腈2甲酸2水kuzΒ
{ΒuΒyvl ~检测波长 u{y ±° ~流速 t1s °#°¬±pt ~柱温
ux ε ~进样量 us Λ∀此条件下 o丹酚酸
与相邻组
分分离完全 o分离度大于 t1x ~理论塔板数以丹酚酸
峰计不低于 w sss ∀
21212 溶液制备 对照品溶液的制备 精密称取
丹酚酸
对照品 ts1sx °ª置于 ts °棕色量瓶中 o
加 zx h甲醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o得 t1ssx °ª#
°pt的丹酚酸
对照品储备液 ∀精密吸取此储备
液 t1ss °置于 ts °棕色量瓶中 o用 zx h甲醇稀
释至刻度 o摇匀 o即得 s1tss x °ª#°pt的对照品溶
液 ~再逐级稀释得 us1t Λª#°pt的丹酚酸
对照品
溶液 ∀
供试品溶液的制备 精密量取骨健口服液
u1xs °o用 s1t °²¯#pt盐酸调节 ³至 v o用醋酸乙
酯萃取 v次 o每次 us °o合并萃取液 o蒸干 ∀残渣用
zx h甲醇溶解并稀释至 ts1ss °~再精密量取 t1ss
°置 ts °棕色量瓶中 o加 zx h甲醇稀释至刻度 o
摇匀 o用 s1wx Λ°微孔滤膜滤过 o取续滤液作为供试
品溶液 ∀
缺丹参阴性对照溶液的制备 按处方比例称取
除丹参的其他药味 o依照骨健口服液的制备工艺制
成缺丹参的骨健口服液阴性样品 o再按供试品溶液
的制备方法制成缺丹参的阴性对照溶液 ∀
21213 空白试验 取 us1t Λª#°pt丹酚酸
对照
品溶液 !骨健口服液供试品溶液及缺丹参的阴性对
照溶液 o在上述色谱条件下分别进样 o见图 u ∀结果
表明骨健口服液供试品溶液和丹酚酸
对照品溶
液均在保留时间 ts1x °¬±处出现丹酚酸
的色谱
峰 ~而缺丹参的阴性对照溶液在相同保留时间处无
色谱峰 o说明骨健口服液中其他药味对丹酚酸
的
测定不产生干扰 ∀
21214 线性关系考察 精密吸取 s1tss x °ª#°pt
对照品储备液 s1xs ot1ss ou1ss ov1ss ow1ss ox1ss
°o分别置于 ts °棕色量瓶中 o用 zx h甲醇稀释
至刻度 o摇匀 o得 x1sux o ts1sx o us1ts o vs1tx o
ws1us oxs1ux Λª#°pt的丹酚酸
对照品溶液 ∀在
上述色谱条件下 o分别进样 usΛ进行测定 o以丹酚
酸
对照品的进样量 ΞkΛªl为横坐标 o丹酚酸
峰
面积积分值 Ψ为纵坐标进行线性回归 o回归方程为
Ψ t1vt| ≅ tsv Ξ (ρ s1||| w ) o结果表明丹酚酸
在 x1sux ∗ xs1ux Λª#°pt与峰面积呈良好的线性关
系 ∀
图 u 骨健口服液 °≤图
1 对照品 ~
1 样品 ~≤1 缺丹参的阴性对照样品 ~t1 丹酚酸
21215 精密度试验 精密吸取 us1t Λª#°pt的丹
酚酸
对照品溶液 us Λo在上述色谱条件下连续重
复进样 y次 o丹酚酸
峰面积的 ≥⁄为 s1w h ~取该
对照品溶液和供试品溶液分别于 t ou ov ow ox §测定
峰面积 o结果对照品和供试品丹酚酸
峰面积的
≥⁄分别为 s1{ h ou1t h o表明日内精密度和日间精
密度均良好 ∀
21216 重复性试验 精密吸取同一批次骨健口服
液k批号 ussxsvuslx份 o每份 u1xs °o按/骨健口服
液供试品溶液的制备0项下方法制备供试品溶液 o并
在上述色谱条件下进行测定 ∀结果样品中丹酚酸
的平均质量浓度为 s1zwu x °ª#°pt o ≥⁄为 t1w h o
表明重复性良好 ∀
21217 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液
#||tt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy
k批号 ussxsvusl o分别于 s ou ow oy o{ otu ouw ovy ow{ «
k保存于冰箱中l进样 us Λo测定峰面积 o结果供试
品溶液中丹酚酸
峰面积的 ≥⁄为 t1x h o表明骨
健口服液供试品溶液在 w{ «内保持稳定 ∀
21218 加样回收率试验 精密量取已测含量的骨
健口服液制剂k批号 ussxsvuslt1ux °共 y份 o分别
精密加入 t1ssx °ª#°pt对照品溶液 s1|s °o按
/供试品溶液的制备0项下方法处理 o并在上述色谱
条件下进样测定 o计算加样回收率 o结果见表 v ∀制
剂中丹酚酸
的平均回收率为 |z1z h o ≥⁄为
t1y h ∀
21219 样品含量测定 精密量取 v批kussxsvtt o
ussxsvus oussxsvuxl骨健口服液制剂 o每批平行测定
表 v 骨健口服液中丹酚酸
加样回收率 k ν yl
样品中含量
r °ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
≥⁄
r h
t1{ss | |y1x
t1{vv x tss1t
s1|u{ t s1|sw x t1z|y w |y1s |z1z t1y
t1{uu y |{1|
t1{tu z |z1{
t1{sy w |z1t
v份 o按/供试品溶液的制备0项下方法制备供试品
溶液 o以 us1t Λª#°pt的对照品溶液作对照 o在上述
色谱条件下采用外标一点法进样测定 o计算样品中
丹酚酸
的含量 o结果分别为 s1z{x s os1zus t o
s1{{t v °ª#°pt o ≥⁄分别为 s1v{ h ot1t h ot1y h ∀
3 讨论
311 黄芪甲苷的含量测定
供试品前处理工艺的考察 根据黄芪甲苷的理
化性质 o分别考察了萃取溶剂 !萃取次数 !萃取体积
及纯化方式k氨水碱洗 !上大孔吸附树脂l等前处理
工艺 o发现用水饱和正丁醇萃取 o并用氨试液洗涤所
得的供试品溶液 o加样回收率达 tss1v h o且操作简
便 ~而上大孔树脂后样品的加样回收率往往达不到
要求 ∀为此 o确定用 ux °水饱和正丁醇萃取 w次 o
并用 ux °氨试液洗涤 u次作为供试品的前处理条
件 ∀
312 丹酚酸
的含量测定
31211 色谱柱的确定 最初采用 ²µ¥¤¬ ∞¦¯¬³¶¨
÷⁄
≤t{kw1y °° ≅ txs °° ox Λ°l 色谱柱 o由于丹酚
酸
酸性较强 o增大流动相中甲酸比例至 ³ u时 o
色谱峰仍有拖尾 o而 ³过低对色谱柱的损害较大 o
考虑各种型号色谱柱的适用性 o采用 ²µ¥¤¬ ∞¦¯¬³¶¨
≥
≤t{kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l色谱柱试验 o结果峰
形大为改善 o分离度 !理论塔板数 !拖尾因子均符合
系统适应性试验要求 o故最终确定采用 ²µ¥¤¬ ∞2
¦¯¬³¶¨ ≥
≤t{色谱柱 ∀
31212 流动相的优化 丹酚酸
为酸性物质 o在
中性流动相中易发生离解 o使含量偏低且拖尾严重 o
故采用反相离子抑制色谱 o在流动相中加入少量甲
酸以抑制其离解并改善峰形 ∀本实验分别考察了不
同的流动相配比 o甲醇2乙腈2甲酸2水kvsΒtsΒtΒx|l o
甲醇2乙腈2甲酸2水ku|Β|Βt1xΒys1xl o甲醇2乙腈2甲
酸2水ku{Β|Βt1xΒyt1xl o甲醇2乙腈2甲酸2水kuzΒ{Βu
Βyvl o结果发现当流动相为甲醇2乙腈2甲酸2水kuzΒ
{ΒuΒyvl时 o能显著改善拖尾 o丹酚酸
稳定在 ts1x
°¬±左右出峰 o峰形较好 o分离度 !理论塔板数 !拖尾
因子均达到要求 ∀
31213 供试品前处理条件的考察 根据丹酚酸
的理化性质≈w ox o考察了萃取溶剂 !萃取 ³ 值对丹
酚酸
含量的影响 o发现醋酸乙酯的萃取效率最
高 o乙醚次之 o氯仿最低 ~不同 ³值萃取对丹酚酸
含量的影响依次为 ³ v ³ w ³ t ³ u o故采
用加 s1t °²¯#pt盐酸调节 ³ v o再用醋酸乙酯萃取
的供试品处理方法 ∀
31214 丹酚酸
的含量测定采用三锐色谱工作站
处理数据 o该色谱软件优先以标准曲线过原点进行
线性回归 o故截距为 s o样品测定可采用外标一点
法 ∀
≈参考文献
≈t 章建华 o童培键 o季卫峰 1 骨健口服液治疗激素性股骨头坏死
ys例临床报告 1浙江中医学院学报 oussx ou|kwl }t|1
≈u 姚嘉励 1黄芪药理研究进展 1 海峡药学 oussu otwkwl }z1
≈v 戈升荣 o俞一心 o谢更新 1 丹酚酸的药理作用研究进展 1 中药
材 oussu ouxk|l }y{v1
≈w 张启伟 o张 颖 o李计萍 o等 1 高效液相色谱法测定丹参中丹酚
酸
的含量 1 中国中药杂志 ousst ouyktul }{w{1
≈x 曹 枫 o马长华 o乔延江 1°≤ 测定丹参 !三七配伍水煎液中
丹酚酸
的含量 1北京中医药大学学报 oussv ouykyl }wx1
≈责任编辑 鲍 雷
#ssut#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy