全 文 :alystrengthentheantitumoreficiencyofH22celsmodifiedbyTIM2gene,withthehighesttumorinhibitoryrate(IR)(906%)in
altheexperimentalmice.Thespleenindex,populationsofCD4positivelymphocytesandtheratioofCD4positivetoCD8positive
lymphocytesofspleeninmicevaccinatedofH22TIM2celswereobviouslyhigherthanthoseintheothergroups.Conclusion:Theon
cogenicityofH22celsismarkedlyimpairedaftermodifiedbyTIM2gene.MatrinecanstrengthentheinhibitoryefectofH22TIM2
celsontumorinmice.ThesedatagiveusimportantcluestofurtherstudythebiologicalroleofTIM2geneintumorimmunityandex
plorethemolecularmechanismofmatrineinsuppressingtumor.
[Keywords] TIM2gene;matrine;vaccine;tumorimmunity;H22hepatocarcinomacelline
[责任编辑 古云侠]
[收稿日期] 20070410
[基金项目] 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET040657),
河南省高等学校创新人才培养工程(200423)
[通讯作者] 苗明三,Tel:(0371)65962546,Email:miaomingsan
@163.com
玉米须总皂苷对大鼠糖尿病模型肾脏和
胰脏超微结构的影响
苗明三,张桂兰,苗艳艳,史晶晶,刘会丽
(河南中医学院,河南 郑州 450008)
[摘要] 目的:探讨玉米须总皂苷对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型肾脏和胰脏超微结构的影响。方法:采
用尾静脉注射链脲佐菌素造大鼠糖尿病模型,通过观察肾脏、胰脏超微结构的改变,探讨玉米须总皂苷不同剂量
(200,100,50mg·kg-1)对该模型大鼠血糖及肾脏和胰脏组织的影响。结果:采用尾静脉注射 STZ的方法成功复
制出大鼠糖尿病模型。与模型组比,高、中剂量玉米须总皂苷和二甲双胍均可显著降低第30天血糖(P<001);各
剂量玉米须总皂苷和二甲双呱均显著对抗链脲佐菌素对胰岛细胞的损伤;二甲双胍、高、中剂量玉米须总皂苷均可
显著升高肾小管上皮细胞线粒体体密度(Vv)、比膜面(δm)、常染色质 Vv(P<001),均可显著降低比表面(δ)、核
δ、异染色质Vv(P<001);低剂量玉米须总皂苷可明显增加近曲小管上皮细胞 Vv(P<005)。结论:玉米须总皂
苷有较好的降糖作用,对链脲佐菌素致糖尿病大鼠模型所引起的肾脏、胰脏损伤有较好保护作用。
[关键词] 玉米须总皂苷;糖尿病;链脲佐菌素;超微结构
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)10117905
玉米须为禾本科植物玉蜀黍ZeamayL.的干燥
花柱和柱头,性平、味甘,具有利水消肿、利湿退黄之
功。临床用于治疗糖尿病、慢性肾炎、乳糜血尿、泌
尿系感染等疗效确切[1,2]。玉米须含皂苷、挥发油、
多糖、黄酮等成分。作者的前期研究表明,玉米须总
皂苷有一定的预防和治疗糖尿病的作用,其降糖作
用可靠,降糖效果明显[1,2];玉米须总皂甘对大鼠糖
尿病肾病模型也有较好疗效,可显著降低模型大鼠
血肌酐、尿肌酐、肾指数、尿微量白蛋白(MAU)、尿
素氮(BUN)水平,光镜观察可显著改善胰脏、肾脏
等病理变化[3]。我国玉米须资源极为丰富,研究及
应用玉米须作为降糖药用资源具有广阔的前景。
1 材料
1.1 药品及试剂 玉米须总皂苷(ZMLS),由本院
化学教研室提供,含量近60%;盐酸二甲双胍片,上
海医药集团有限公司信宜制药总厂生产,批号
040602;链脲佐菌素,美国Sigma公司。
1.2 动物 Wistar大鼠,雄性,体重165~185g,河
南医学动物实验中心提供,动物许可证号410117。
1.3 仪器 UV-2000分光光度计,尤尼柯(上海)
仪器有限公司;日立H-7500透射电子显微镜。
2 方法与结果
取大鼠100只,禁食12h后尾静脉注射链脲佐
菌素(STZ)60mg·g-1[2](用 pH42的枸橼酸缓冲
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液配制),另选同批大鼠10只设空白对照组,尾静
脉注射等体积的枸橼酸缓冲液。第10天各鼠尾部
取血测禁食6h血糖值,选取血糖值 >111mmol·
L-1并具有明显多饮、多食、多尿症状的大鼠50只,
按血糖值随机均分为5组,分别灌高、中、低剂量玉
米须总皂苷(200,100,50mg·kg-1,配成终浓度
20,10,5mg·mL-1),阳性药二甲双胍片250mg·
kg-1(25mg·mL-1),灌胃体积均为10mL·kg-1。
模型组与空白对照组给予同体积生理盐水。每天给
药1次,连续给药30d。分别于给药的第10,20,30
天,于灌药2h后,取血,分离血清,测禁食6h血糖
值[2],见表1。取血后处死大鼠,取胰脏、肾脏作切
片,透射电镜观察,见表2~4。
数据分析用 SPSS100统计软件,实验数据以
珋x±s表示。计量资料组间比较采用单因素方差分
析,等级资料采用Ridit分析。
表1 玉米须总皂苷对STZ所致大鼠糖尿病模型血糖的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1
血糖/mmol·L-1
开始 第10天 第20天 第30天
空白 - 7661±05061) 7354±06661) 5883±05991) 4526±05441)
模型 - 15147±3322 17150±2783 18825±2355 20731±3185
二甲双胍 025 16293±4056 17525±4016 13102±28911) 11819±23891)
ZMLS 020 16436±2505 17449±2380 15658±27122) 13799±29411)
010 15957±4684 15397±3319 12917±28651) 11523±21741)
005 14244±2955 16774±4500 17759±6418 17296±6254
注:与模型组比1)P<001,2)P<005(表2~4同)
表1显示,与空白组比,模型组血糖水平显著高
于空白组(P<001),说明链脲佐菌素造糖尿病模
型成功。与模型组比,二甲双胍可显著降低给药后
第20,30天血糖值(P<001),对第10天血糖值无
明显影响;高剂量玉米须总皂苷可明显降低第20天
血糖值(P<005),可显著降低第30天血糖值(P<
001);中剂量玉米须总皂苷可显著降低第20,30天
血糖值,有降低第10天血糖值趋势;低剂量玉米须
总皂苷有降低第30天血糖值趋势。
表2显示,与空白组比,模型组胰岛细胞(β细
表2 玉米须总皂苷对STZ所致大鼠糖尿病模型胰岛超微结构的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1
分泌颗粒Vv
/%
内质网δm
/μm-1
线粒体Vv
/%
δ
/μm-1
δm
/μm-1
空白 - 2491±8241) 11845±063421) 897±1651) 287±0861) 233±0471)
模型 - 112±207 00362±00286 065±034 096±0741) 008±0111)
二甲双呱 025 3061±7481) 13627±041271) 886±2851) 258±0622) 312±0261)
ZMLS 020 3752±6851) 15166±048171) 957±1621) 272±0821) 284±0421)
010 3462±5611) 16862±053281) 928±1801) 286±0541) 328±0521)
005 2872±4361) 06784±062421) 731±1361) 263±0471) 224±0671)
胞)的分泌颗粒体密度、内质网比膜面、线粒体体密
度、比表面和比膜面显著减少(P<001),细胞核及
核内染色质几乎完全溶解消失。与模型组比,各剂
量的玉米须总皂苷和二甲双呱显著对抗链脲佐菌素
所致胰岛细胞的损害,分泌颗粒体密度、内质网比膜
面、线粒体体密度、比表面和比膜面均显著或明显增
高(P<001,P<005),分泌颗粒、内质网和线粒体
较模型组丰富,从微观角度提示玉米须总皂苷对胰
岛细胞具有保护作用。
表3,4显示:造模后肾小管近曲小管和远曲小
管上皮细胞线粒体体密度(Vv)、比膜面(δm)、近曲
小管上皮细胞常染色质体密度和远曲小管上皮细胞
异染色质体密度均显著降低(P<001),近曲小管
和远曲小管腺粒体比表面(δ)、近曲小管和远曲小
管上皮细胞核比表面、近曲小管上皮细胞异染色质
体密度和远曲小管上皮细胞常染色质体密度均显著
升高(P<001)。与模型组比,二甲双胍、高、中、低
剂量玉米须总皂苷均可显著升高近曲小管和远曲小
管上皮细胞线粒体体密度、比膜面、近曲小管上皮细
胞常染色质体密度和远曲小管上皮细胞异染色质体
密度(P<001),均可显著降低近曲小管和远曲小
管上皮细胞线粒体比表面、上皮细胞核比表面、近曲
小管上皮细胞异染色质体密度和原曲小管上皮常染
色质体密度(P<001)。
电镜下观察动物肾小管上皮细胞超微结构可
见:与空白对照组比,糖尿病模型大鼠近曲小管上皮
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表3 玉米须总皂苷对STZ所致糖尿病模型大鼠肾小管上皮细胞线粒体Vv,δ,δm的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1
近曲小管上皮细胞线粒体
Vv/% δ/μm-1 δm/μm-1
远曲小管上皮细胞线粒体
Vv/% δ/μm-1 δm/μm-1
空白 - 7468±16241) 022±0071) 4238±10201) 6842±12451) 026±0051) 4016±9361)
模型 - 4723±1148 064±002 1630±276 2776±632 038±004 1724±274
二甲双呱 025 5849±10721) 049±0061) 2846±6281) 5820±8061) 036±0021) 2368±4321)
ZMLS 020 6424±7361) 025±0031) 4764±8421) 5637±11281) 028±0041) 4438±8621)
010 6072±17801) 028±0081) 4527±11061) 4827±12361) 026±0041) 4262±10241)
005 5226±8472) 027±0041) 3978±7231) 6438±16281) 028±0071) 3627±6701)
表4 玉米须总皂苷对STZ所致糖尿病模型大鼠肾小管上皮细胞核δ,异染色质Vv,常染色质Vv的影响(珋x±s,n=45)
组别
剂量
/g·kg-1
近曲小管上皮细胞核
δ/μm-1 异染色质Vv/% 常染色质Vv/%
远曲小管上皮细胞核
δ/μm-1 异染色质Vv/% 常染色质Vv/%
空白 - 028±0041) 1134±2381) 8946±2381) 030±0061) 467±0121) 9533±0121)
模型 - 048±003 6228±179 3772±179 042±007 382±008 9618±008
二甲双呱 025 032±0071) 968±2721) 9032±2761) 036±0081) 390±0041) 9610±0041)
ZMLS 020 036±0081) 860±1381) 9140±1381) 032±0041) 1028±0071) 8972±0071)
010 030±0041) 1062±2301) 8938±2301) 031±0061) 1162±0041) 8838±0141)
005 044±007 1274±1841) 8726±1841) 032±0041) 527±0061) 9473±0061)
细胞细胞核呈不规则皱缩,染色质呈现异染色质增
多而常染色质减少,胞浆内线粒体丰富,但大多数线
粒体呈水肿状态,嵴呈现不规则,嵴间腔大小不等,
部分线粒体嵴溶解或消失;远曲小管上皮细胞呈现
水肿状态,胞浆内特别核周围出现大小不一的空泡,
基质溶解,线粒体明显减少,嵴部分溶解消失,嵴间
腔增大,少部分线粒体嵴排列整齐密集,核膜部分出
现皱折,染色质降解;二甲双胍组大鼠近曲小管上皮
细胞呈现高度水肿,线粒体水肿,嵴变短或消失,嵴
间腔扩大,部分染色质降溶;远曲小管上皮细胞呈现
高度水肿,胞浆基质全部溶解,线粒体明显减少,线
粒体嵴变短或消失,嵴间腔扩大,呈水肿状态,核肿
大染色质降解;低剂量玉米须总皂苷组大鼠近曲小
管上皮细胞有排列较整齐密集绒毛,胞浆内出现大
小不等空泡变,线粒体明显减少,嵴减少、变短紊乱、
消失,嵴间腔扩大,核固缩、染色质集聚核膜周围;远
曲小管上皮细胞内线粒体丰富,线粒体嵴部分排列
系数整齐密集,小部分紊乱、消失,嵴间腔扩大,核膜
皱折,染色质部分降解;中剂量玉米须总皂苷组大鼠
近曲小管上皮细胞呈现水肿状态,微绒毛排列紊乱
和部分减少,线粒体水肿,嵴大部水肿呈曲线或束
状,嵴间腔部分扩大,核部分染色质降解;远曲小管
上皮细胞水肿,基质部分溶解,线粒体有所减少,呈
水肿,嵴紊乱变短或消失,嵴间腔扩大;高剂量玉米
须总皂苷组近曲小管上皮细胞微绒毛排列密集,线
粒体较丰富,嵴大部线粒体排列整齐密集,个别线粒
体嵴间腔增大,核染色体常染色质多,而异染色质
少;远曲小管上皮细胞出现轻度水肿,线粒体减少,
嵴排列部分整齐密集,部分紊乱、变短,嵴间腔扩张,
常染色质多而异常染色质少。结果表明,模型组动
物肾小管上皮细胞近曲小管及远曲小管上皮细胞均
出现水肿现象,以远曲小管较重,这一变性病理改
变,主要是影响到细胞能量代谢障碍而造成的,线粒
体水肿,嵴变短或消失,嵴间腔增大。而核的改变与
细胞水肿密切相关,同时也因此而影响到核酸代谢。
见图1~3。
3 讨论
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的严重并发症和主
要死亡原因,目前已成为终末肾衰竭的主要原因,糖
尿病肾病是糖尿病患者最常见的并发症,也是终末
期肾病(ESRD)的首位病因。DN的临床表现包括
微量白蛋白尿、蛋白尿、高血压、肾小球硬化、肾小管
间质纤维化、肾小球滤过率下降。在强调降糖的同
时,研究对糖尿病常见肾脏并发症的防治,具有重要
意义[4]。
本研究表明,用 STZ可成功复制大鼠糖尿病肾
病模型,模型组血糖水平显著升高,胰岛β细胞的分
泌颗粒、内质网、线粒体显著减少,细胞核及核内染
色质几乎完全溶解消失;近曲小管上皮细胞细胞核
呈不规则皱缩,染色质呈现异染色质增多而常染色
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图1 玉米须总皂苷对链脲佐菌素性大鼠糖尿病
模型胰岛超微结构的影响
图2 对链脲佐菌素性大鼠糖尿病模型近曲小管
上皮细胞超微结构的影响
图3 对链脲佐菌素性大鼠糖尿病模型近曲小管
上皮细胞超微结构的影响
质减少,胞浆内线粒体大多数呈水肿状态,嵴呈现不
规则,嵴间腔大小不等,部分线粒体嵴溶解或消失;
远曲小管上皮细胞呈现水肿状态,胞浆内特别是核
周围出现大小不一的空泡,基质溶解,线粒体明显减
少,嵴部分溶解消失,嵴间腔增大,少部分线粒体嵴
排列整齐密集,核膜部分出现皱折,染色质降解。玉
米须总皂苷可显著对抗链脲佐菌素对胰岛细胞的损
害,使胰岛β细胞分泌颗粒、线粒体、内质网较模型
组丰富;可显著对抗链脲佐菌素对肾脏的损害,改善
和增强细胞能量代谢,增加线粒体数量,使嵴增多,
使肾小管上皮细胞的损伤变性得到恢复和改善。玉
米须总皂苷在降糖同时,对链脲佐菌素致糖尿病动
物模型所引起的肾脏、胰脏损伤也有保护作用,一定
程度延缓了糖尿病的发展进程。
[参考文献]
[1] 苗明三,苗艳艳,宰炎冰,等.玉米须总皂苷对病因性糖尿病模
型小鼠的降糖效应[J].中国临床康复,2006,10(39):123.
[2] 苗明三.法定中药药理与临床[M].西安:世界图书出版社,
1998:1354.
[3] 苗明三,苗艳艳,纪晓宁,等.玉米须总皂苷对链尿佐菌素致糖
尿病大鼠肾脏、胰腺、胸腺组织细胞病变的影响[J].中国现代
应用药学,2007,24(3):171.
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[4] 胡传峰,李立明.2型糖尿病危险因素研究进展[J].中国全科 医学,2001,4(4):253.
InfluenceofZeamaysL.saponin(ZMLS)onultrastructureofkidneyand
pancreasindiabetesratsinducedbystreptozocin.
MIAOMingsan,ZHANGGuilan,MIAOYanyan,SHIJingjing,LIUHuili
(HenanColegeofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China)
[Abstract] Objective:TodiscusstheefectofZeamaysL.saponin(ZMLS)onultrastructureofkidneyandpancreasinthe
diabetesratsinducedbystreptozocin.Method:ThediabeticratmodelwasestablishedbyinjectionsofSTZ,bloodglucose,theultra
structureofthekidneyandpancreaswereobserved.Result:Comparedwiththemodelgroup,thelarge,middledoseZMLSgroupsand
melbinumgroupcouldremarkablydecreasethebloodglucose(P<0.01),thelarge,middle,smaldoseZMLSgroupscouldremark
ablypreventthepancreaticisletβcelfromtheinjuryinducedbyStreptozotocin.Melbinumandthelarge,middledoseZMLSgroups
couldremarkablyincreasemitochondrialVv,δmandeuchromatinVv(P<0.01),andsignificantlydecreasetheδ,Nucleusδandhet
erochromatinVv(P<0.01).ThesmaldoseofZMLSobviouslyincreasesmitochondrialVv(P<0.05).Conclusion:ZMLSshowed
goodefectondecreasingbloodglucoseandprotectionactiononthekidneyandpancreasinjuryofinducedbySTZ.
[Keywords] ZeamaysL.saponin(ZMLS);diabetes;streptozocin(STZ);ultrastructure
[责任编辑 古云侠]
[收稿日期] 20070720
[通讯作者] 孟琼,Tel:(0731)6711305,Email:mengqiong1973@sina.com
清心开窍方对 AD小鼠学习记忆能力及海马 CA1区
神经细胞形态的影响
胡海燕1,孟 琼2,蒋 哲2,朱未名3,王文花1,张晓艳1
(1.温州医学院 第二临床医学院 中医教研室,浙江 温州 325003;
2.湖南中医药大学,湖南 长沙 410007;
3.温州市鹿城精神病医院,浙江 温州 325003)
[摘要] 目的:探讨清心开窍方对AD模型小鼠学习记忆能力及海马CA1区神经细胞形态的影响。方法:将
150只小鼠随机分为5组,即空白组、模型组、清心开窍方高、低剂量组(1482,741g·kg-1)、脑复康组(042g·
kg-1)。除空白组外,其余各组均每日灌服三氯化铝(AlCl3)(200mg·kg
-1)造模,用药各组自造模第7天起,每日
上午给予AlCl3灌胃,下午给予相应的药物,每日1次,连续8周,9周后评定疗效,测小鼠学习记忆功能和脑内一氧
化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及乙酰胆碱脂酶(AchE),及对海马CA1区神经细胞形态学观察。结果:中药各组
能明显改善AD小鼠学习记忆能力,与对照组比较有显著性差异(P<005,P<001);清心开窍方各组能明显减少
海马神经细胞的破坏,降低AD小鼠脑组织中NO,NOS含量及AchE活性,与模型组比较有统计学意义(P<005,
P<001)。结论:清心开窍方能改善AD小鼠学习记忆的能力,对海马神经细胞具有保护作用。
·3811·
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