全 文 ：ＳｔｕｄｙｏｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉｗｉｔｈＨＰＬＣ
ＬＩＵＬｉｍｅｉ１，ＣＨＥＮＬｉｎ１，ＷＡＮＧＲｕｉｈａｉ１，ＹＡＮＧＱｉｎｇ２，ＷＥＮＧＸｉａｏｇａｎｇ２，ＷＡＮＧＬｉ３
（１．ＢａｓｉｃＴｈｅｏｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
３．ＳａｎｊｉｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ．Ｌｔｄ．．ＨａｒｂｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＧｒｏｕｐ，Ｈａｒｂｉｎ１５００６９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎＡｇｉｌｅｎｔＥｘｔｅｎｄＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ｅｌｕｔｅｄｗｉｔｈｍｅｔｈ
ａｎｏｌａｎｄｗａｔｅｒ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０．４％ ａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ０６０ｍｉｎ，３４０
ｎｍ；６７４ｍｉｎ，２５４ｎｍ；７４７５ｍｉｎ，３４０ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１．ＦｏｒｔｙｓａｍｐｌｅｓｉｎｆｏｕｒｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉ
ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｅｖｅｒｙｐａｒａｍｅｔｅｒｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｃｏｍｐｌｉｅｄｗｉｔｈｒｅｌａｔｅｄｒｕｌｅｓａｎｄ
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１５ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｉｎｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆ１０Ｆｒａｘｉｎｕｓｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌａｓａｍｐｌｅｓ，ｅｌｅｖｅｎｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｉｎｔｈｅｆｉｎｇｅｒ
ｐｒｉｎｔｏｆ１０Ｆ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ．ａｃｕｍｉｎａｔａ．ｓａｍｐｌｅｓ，ａｎｄｉｎｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆ１０Ｆ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｓａｍｐｌｅｓ．Ｎｉｎｅｔｅｅｎｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｉｎｔｈｅｆｉｎ
ｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆ１０Ｆ．ｓｔｙｌｏｓａｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ５ｃｏｍｍｏｎｐｅａｋｓｉｎｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆ４０ＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｆａｃｔｏｒｓ
ｏｆｔｈｅ１０ｓａｍｐｌｅｓｏｆｅｖｅｒｙｓｐｅｃｉｅｓｗｅｒｅａｌｍｏｒｅｔｈａｎ０．９６ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ．Ｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆｔｈｅ４０ＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉ
ｓａｍｐｌｅｓｗａｓｍｏｒｅｔｈａｎ０．９０．Ｆｏｕｒｅｆｅｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｏｎｅｕｎｋｎｏｗｎｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｗｅｒｅｆｏｕｎｄｉｎ４０ｓａｍｐｌｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｆｉｎ
ｇｅｒｐｒｉｎｔｓｏｆＦ．ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌａｂａｒｋ，Ｆ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｂａｒｋ，Ｆ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ．ａｃｕｍｉｎａｔａｂａｒｋ，Ｆ．ｓｔｙｌｏｓａｂａｒｋａｎｄＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉｗｅｒｅｅｓ
ｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｉｎａｃｃｏｒｄｗｉｔｈｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｆｉｎ
ｇｅｒｐｒｉｎｔ，ａｎｄｉｔｌａｉｄａｇｏｏｄｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＣｏｒｔｅｘＦｒａｘｉｎｉ；ＨＰＬＣ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ
［责任编辑 王亚君］
［收稿日期］ ２００８０５２１
［基金项目］ 国家科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０８Ｂ０３０９）
［通讯作者］ 王智民，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１４１２８，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｍｗ１２３
＠２６３．ｎｅｔ
ＨＰＬＣ测定大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的含量
牛继伟１，２，张启伟２，龚慕辛２，闫利华２，朱晶晶２，王智民２，李勤凡１
（１．西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 ７１２１００；
２．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：建立大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的 ＨＰＬＣ分析方法。方法：采用 ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）色谱柱，以甲醇水（２０∶８０）为流动相，流速为１ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长为２１０ｎｍ，柱温３０℃。结果：无刺枣苄苷
Ⅱ在００４６～０５８２μｇ呈良好的线性关系，ｒ＝０９９９９。１２批不同产地的大枣中无刺枣苄苷Ⅱ质量分数在
００１３％～００４１％。结论：该方法简单、重复性好，可用于大枣的质量控制。
［关键词］ 大枣；无刺枣苄苷Ⅱ；ＨＰＬＣ；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２４２９３５０３
大枣为鼠李科Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ枣属Ｚｉｚｉｐｈｕｓ植物枣 ＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌ．的干燥成熟的果实，味甘，性温，
归脾、胃经。为补中益气、养血安神、缓和药性的常用
中药，用于脾虚食少、乏力便溏、妇人脏躁等［１］。为
了寻找其有效成分，阐明药效物质基础，建立大枣的
有效成分质量控制标准，达到更有效地控制大枣质
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第３３卷第２４期
２００８年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２４
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００８
量的目的，作者对大枣的水溶性成分进行了系统的
化学成分研究，除分离得到黄酮类和皂苷类成分外，
还首次分离得到无刺枣苄苷Ⅱ。经过初步的 ＨＰＬＣ
分析，不同产地的大枣中均含有该成分，本实验选择
无刺枣苄苷Ⅱ作为指标性成分，首次建立了大枣中
无刺枣苄苷Ⅱ的高效液相色谱含量测定方法，并测
定了不同产地大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的含量。
１ 试药与仪器
Ｗａｔｅｒｓ型高效液相色谱仪（美国），１５１５单泵，
２４８７双波长检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ工作站。ＡＥ２４０电子
分析天平（ＭＥＴＴＬＥＲ）。ＫＱ－１００型超声仪（昆山
市超声仪器有限公司）。
大枣购自河南、山西、山东和河北等省，共 １２
份，经中国中医科学院中药研究所何希荣主管药师
鉴定，符合药典项下规定。药材经６０℃减压干燥，
去核后粉碎机粉碎，过６０目筛备用。
对照品无刺枣苄苷Ⅱ由作者分离纯化并通过波
谱鉴定结构，经ＨＰＬＣ检测纯度大于９８％。甲醇为
色谱纯（Ｆｉｓｈｅｒ公司）；水为本所自制高纯水；其他试
剂均为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；检测波长２１０ｎｍ，流动相甲醇水
（２０∶８０）；柱温３０℃；进样量１０μＬ。流速１ｍＬ·
ｍｉｎ－１，对照品和样品的ＨＰＬＣ图如图１。
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．无刺枣苄苷Ⅱ
图１ 对照品及样品的ＨＰＬＣ图
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取对照品 ５８２
ｍｇ，置于２５ｍＬ量瓶中，甲醇溶解，稀释至刻度，得
０２３２８ｇ·Ｌ－１的对照品贮备液，４℃冰箱放置；精
密吸取上述贮备液１ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，甲醇稀释
至刻度得００２３３ｇ·Ｌ－１的对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 精密称取２０ｇ样品粉
末，置１００ｍＬ具塞三角瓶中，精密加入８０％乙醇４０
ｍＬ，称重，超声提取４０ｍｉｎ，放至室温，补足失重，取
上清液１０ｍＬ，减压蒸干，残渣甲醇定容到５ｍＬ量
瓶中，０２２μｍ滤膜滤过，即得。
２．４ 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液
２，５，１０，１５，２０，２５μＬ进样分析，以进样量对峰面积
积分值进行回归处理，得回归方程为 Ｙ＝７７６×１０５
Ｘ－９８×１０２，ｒ＝０９９９９，无刺枣苄苷Ⅱ在００４６～
０５８２μｇ呈良好的线性关系。
２．５ 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 １０
μＬ，连续进样６次，记录无刺枣苄苷Ⅱ的峰面积，其
ＲＳＤ０９１％。表明精密度良好。
２．６ 稳定性试验 称取大枣（河南新郑１）粉末（６０
目）约２０ｇ，精密称定，按供试品溶液处理方法制备
样品，分别于０，２，４，８，１２，２４，３２ｈ进样分析，记录
无刺枣苄苷Ⅱ峰面积，其峰面积ＲＳＤ３２％，表明处
理后的样品溶液在室温放置３２ｈ内稳定。
２．７ 重复性试验 称取大枣（河南新郑１）粉末（６０
目）约２０ｇ，共６份，精密称定，按供试品溶液处理
方法制备样品，分别吸取对照品和供试品溶液各１０
μＬ，注入液相色谱仪，测定，无刺枣苄苷Ⅱ平均含量
为００２０％，ＲＳＤ０９８％。
２．８ 加样回收实验 精密称取适量已知含量的大
枣粉末（６０目）６份，加入一定量的无刺枣苄苷Ⅱ对
照品，按供试品溶液处理方法制备样品，测定，并计
算加样回收率，结果见表１。
表１ 大枣中无刺枣苄苷Ⅱ加样回收率
称样量
／ｇ
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
实测量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０８０１２ ０１６４ ０１６２ ０３２４ ９８８
０８０３６ ０１６５ ０１６２ ０３２３ ９７５
１００２２ ０２０６ ０２０４ ０４０８ ９９０
９７８ １０１００１７ ０２０６ ０２０４ ０４０５ ９７５
１２０１１ ０２４６ ０２４２ ０４８４ ９８３
１２０２４ ０２４７ ０２４２ ０４８０ ９６２
２．９ 样品测定 称取各样品粉末（６０目）约２０ｇ，
精密称定，按供试品溶液处理方法制备样品，分别吸
取对照品和供试品溶液各１０μＬ进行分析，外标一
点法计算含量，不同来源的大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的
测定结果见表２。
３ 讨论
本实验首次建立了大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的
ＨＰＬＣ测定法，并测定了不同产地１２个样品中无刺
枣苄苷Ⅱ的含量，方法稳定可靠，重复性好，适合于
大枣的质量控制。
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第３３卷第２４期
２００８年１２月
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２４
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表２ 大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的质量分数（ｎ＝２）
购（产）地 采集日期 质量分数／％
北京卫仁（河北） ２００７１１１０ ００１８
山西石楼 ２００７０７２０ ００４１
河南郑州 ２００７０６１３ ００２１
河南新郑１ ２００７０６１８ ００２１
河南新郑２ ２００７０６１８ ００１８
山西吕梁 ２００７０７２３ ００３１
河南洛阳 ２００７０４１６ ００１９
河北石家庄 ２００７１２０８ ００１３
中研医院（河北） ２００７１２１０ ００１８
山东乐陵 ２００７１０１１ ００２１
河南灵宝 ２００７０５２２ ００１８
山西柳林 ２００７１２０１ ００３１
在供试品制备方法上，考察了甲醇、９５％乙醇、
８０％乙醇、７０％乙醇和６０％乙醇对大枣中无刺枣苄
苷Ⅱ提取效率的影响，结果表明 ８０％乙醇提取最
好。以８０％乙醇做溶剂，比较超声和回流对提取结
果的影响，回流和超声结果差异不明显。以８０％乙
醇做溶剂，分别超声３０，４０，５０ｍｉｎ，结果４０，５０ｍｉｎ
均较３０ｍｉｎ提取完全，但两者差异较小。故确定
８０％乙醇超声提取４０ｍｉｎ。
不同产地大枣中均含有无刺枣苄苷Ⅱ，１２批不
同产地的大枣中无刺枣苄苷Ⅱ的质量分数在
００１３％～００４１％，其中质量分数 ００１５％以上的
样品 ９１６％，只有河北石家庄的样品含量低于
００１５％。该实验结果为大枣质量新标准的制定提
供参考。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：１６．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｚｉｚｙｂｅｏｓｉｄｅⅡ ｏｆＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａｂｙＨＰＬＣ
ＮＩＵＪｉｗｅｉ１，２，ＺＨＡＮＧＱｉｗｅｉ２，ＧＯＮＧＭｕｘｉｎ２，ＹＡＮＬｉｈｕａ２，ＺＨＵＪｉｎｇｊｉｎｇ２，ＷＡＮＧＺｈｉｍｉｎ２，ＬＩＱｉｎｆａｎ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｒｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｚｉｚｙｂｅｏｓｉｄｅⅡ ｉｎＺｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｔ３０℃ ｏｎａＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８ｃｏｌｕｍｎｅｌｕｔｅｄｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒ（２０∶８０）ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ
ｓｅｔａｔ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２１０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｗａｓｌｉｎｅａｒｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｆｒｏｍ
００４６ｔｏ０５８２μｇ（ｒ＝０９９９９）ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９７２％．１２ｂａｔｃｈｅｓｏｆｔｈｅｃｒｕｄｅｄｒｕｇｓｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔａｒｅａｓ
ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｚｉｚｙｂｅｏｓｉｄｅⅡ ｉｎＦｒｕｃｔｕｓＪｕｊｕｂａｅｗｅｒｅｆｌｕｃｔｕａｔｅｄｆｒｏｍ００１３％ ｔｏ００４１％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ
ｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒｅｐｅａｔａｂｌｅａｎｄｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＺｊｕｊｕｂａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｚｉｚｉｐｈｕｓｊｕｊｕｂａ；ｚｉｚｙｂｅｏｓｉｄｅⅡ；ＨＰＬＣ；ａｓｓａｙ
［责任编辑 王亚君
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
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櫗
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毉
毉
毉
毉
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