全 文 ：人参皂苷 Ｒｇ３诱导膀胱癌细胞系 ＥＪ的凋亡作用
陈俊霞，彭惠民，蒲淑萍，郭玉萍
（重庆医科大学 细胞生物学及遗传学教研室，重庆 ４０００１６）
［摘要］ 目的：探讨Ｒｇ３抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法：用一定质量浓度的Ｒｇ３处理膀
胱癌细胞系ＥＪ细胞，ＭＴＴ法检测细胞增殖活力和抑制率５０％的时候药物的浓度（ＩＣ５０）；Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色观
察凋亡细胞的形态；流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率；免疫细胞化学观察ｃａｓｐａｓｅ３的表达变化；琼脂糖凝胶
电泳测定ＤＮＡ梯状带。结果：Ｒｇ３抑制 ＥＪ细胞生长，呈浓度依赖关系，Ｒｇ３处理细胞４８ｈ的 ＩＣ５０为１２５５ｍｇ·
Ｌ－１；经１５０ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处理细胞２４ｈ和４８ｈ后，观察到典型的凋亡细胞形态，即染色质凝集、核片段化、凋亡小
体、核内致密的颗粒状荧光及ｃａｓｐａｓｅ３的表达增加；并呈时效依赖关系；用７５ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处理细胞２４，４８，１５０ｍｇ
·Ｌ－１的Ｒｇ３处理细胞４８ｈ后，Ｒｇ３诱导了细胞凋亡和调节细胞周期，Ｓ期和Ｇ２／Ｍ期的细胞比率增加，Ｇ０／Ｇ１的细
胞比率下降；凋亡率从对照组的（１０５±０１７）％分别上升到（８４１±０９８）％，（１８５７±２２０）％ 和（３３９８±
１６４）％，琼脂糖凝胶电泳检测出典型的ＤＮＡ梯形条带，其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结
论：Ｒｇ３可通过诱导ＥＪ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。
［关键词］ 人参皂苷Ｒｇ３；凋亡；肿瘤；膀胱癌细胞
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１６１６８００５
［收稿日期］ ２００６０６０６
［通讯作者］ 陈俊霞，Ｔｅｌ：（０２３）６８４８５８０６，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｊｕｎｘｉａ＠
１２６．ｃｏｍ
人参皂苷（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｇ３是从红参中微量提
取的中药单体［１］。实验证实 Ｒｇ３能抑制某些肿瘤
细胞及动物体内某些移植瘤的生长、浸润和转
移［２４］。但其确切的分子机制还不清楚。研究表明，
Ｒｇ３是相对安全和有效的药物，对正常组织无毒副
作用［５］。膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，具
有晚期恶性度加重和易复发的特点。本实验以人膀
胱癌细胞ＥＪ为工作模型，研究探讨Ｒｇ３对细胞生长
抑制和诱导凋亡作用机制，为膀胱癌的临床治疗提
供实验依据和理论基础。
１ 材料
１．１ 细胞株与试剂 人膀胱癌细胞株ＥＪ购自北京
大学医学部免疫学教研室。人参皂苷 Ｒｇ３纯品由
大连富生制药公司提供，纯度９９６９％，用完全培养
基配制成６００ｍｇ·Ｌ－１的储存液，抽滤除菌后分装，
于－７０℃保存备用；ＤＭＥＭ培养基是 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公
司产品；胎牛血清购自中国医学科学院血液学研究
所；ｃａｓｐａｓｅ３多克隆抗体购自美国 ＳａｎｔａＣｒｕｚ生物
技术有限公司，生物素标记的羊抗兔抗体，辣根过氧
化物酶标记的链霉卵白素均购自北京中山生物技术
有限公司。四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）及荧光染料 Ｈｏ
ｅｃｈｓｔ３３２５８为Ｓｉｇｍａ公司产品。
１．２ 主要仪器 ＣＯ２饱和湿度培养箱（ＮｕａｉｒｅＵＳＡｕｔｏ
Ｆｌｏｗ，美国），酶标仪ＥＬＸ８００型全自动定量绘图酶标仪
（ＢＩＯＴＥＫ，美国），Ｏｌｙｍｐｕｓ荧光显微镜（ＢＸ５１，日
本）。ＤＮＡ周期及凋亡分析软件：ＭｏｄｉｔＬＴ；流式细胞
分析仪器及软件：ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（美国ＢＤ公司）。
２．１ 细胞培养 ＥＪ细胞贴壁培养于含１０％ 胎牛血
清、１００ｋＵ·Ｌ－１青霉素、１００ｍｇ·Ｌ－１链霉素的ＤＭＥＭ
培养液中，置３７℃，５％ ＣＯ２饱和湿度培养箱中培养。
２．２ ＭＴＴ法检测细胞增殖活性 ＥＪ经胰蛋白酶消
化，接种于９６孔板，每孔１００μＬ培养液含５×１０３个
细胞，培养２４ｈ后，对照组加５０μＬ培养液，实验组加
入含Ｒｇ３的培养液５０μＬ，使其终浓度分别为３７５，
７５，１５０，３００，６００ｍｇ·Ｌ－１，继续培养４８ｈ，每孔加入５
ｇ·Ｌ－１的ＭＴＴ２０μＬ，３７℃孵育４ｈ，弃培养液，每孔
加入１５０μＬ二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），避光振荡，混匀，待
甲
#
结晶完全溶解后，用酶标仪测定吸光度（Ａ４９０），每
组设４个平行孔，独立重复３次。
抑制率（％）＝（对照组 Ａ４９０－实验组 Ａ４９０／对照组 Ａ４９０）
×１００％
２．３ 细胞凋亡的形态学观察 将一定数量的ＥＪ细
胞接种至放有盖玻片的６孔板中，待细胞爬片达一
定密度后，实验组用１５０ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处理的ＥＪ细
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胞２４ｈ和４８ｈ，对照组加入不含 Ｒｇ３的 ＤＭＥＭ完
全培养基。取出盖玻片，ＰＢＳ冲洗，０２５％戊二醛固
定５ｍｉｎ，用５ｍｇ·Ｌ－１荧光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色
５ｍｉｎ、避光，ＰＢＳ洗涤，甘油封片，在 Ｏｌｙｍｐｕｓ荧光
显微镜下观察凋亡细胞核的形态变化。
２．４ 细胞周期及细胞凋亡测定 用７５ｍｇ·Ｌ－１
Ｒｇ３处理 ＥＪ细胞 ２４ｈ和 ４８ｈ及 １５０ｍｇ·Ｌ－１的
Ｒｇ３处理ＥＪ细胞４８ｈ，同时，对照组加不含 Ｒｇ３的
等量ＤＭＥＭ完全培养基。胰酶消化，收集细胞，ＰＢＳ
洗涤并计数，每一样本含１×１０６个细胞，用７０％乙
醇固定，用４０ｍｇ·Ｌ－１ＲＮａｓｅＡ和１８ｍｇ·Ｌ－１碘化
丙啶（ＰＩ）处理，在流式细胞仪上用 ＣｅｌＱｕｅｓｅ和
Ｍｏｄｆｉｔ软件分析细胞周期的分布和检测凋亡率。
２．５ 免疫细胞化学法观察ｃａｓｐａｓｅ３蛋白表达 ＥＪ
细胞培养在放有窄条盖玻片的６孔板中，用终浓度
１５０ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处理细胞２４ｈ和４８ｈ，对照组为
不含 Ｒｇ３ＤＭＥＭ完全培养基。细胞用 ＰＢＳ洗涤 ３
次，８０％的冷丙酮固定１０ｍｉｎ，细胞用新配制的３％
Ｈ２Ｏ２处理１０ｍｉｎ，以灭活内源性的过氧化物酶。固
定的标本经ＰＢＳ洗３次，正常羊血清３７℃封闭非特
异性的抗体２０ｍｉｎ，用兔抗人ｃａｓｐａｓｅ３多克隆抗体
（１∶５０）３７℃孵育９０ｍｉｎ，ＰＢＳ溶液洗３次，滴加羊
抗兔 ＩｇＧ／Ｂｉｏ标记抗体工作液 ３７℃孵育 ３０ｍｉｎ，
ＰＢＳ彻底洗涤后，在辣根过氧化物酶标记的链霉卵
白素工作液 ３７℃孵育 ３０ｍｉｎ，用 ＰＢＳ彻底洗涤，
ＤＡＢ染色，苏木素复染细胞核，梯度乙醇脱水，二甲
苯透明，中性树胶封片，最后在Ｏｌｙｍｐｕｓ多功能显微
镜下观察并拍照。
２．６ ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳 用７５ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处
理ＥＪ细胞２４ｈ和４８ｈ及１５０ｍｇ·Ｌ－１的Ｒｇ３处理
ＥＪ细胞４８ｈ，同时，对照组加不含Ｒｇ３的等量ＤＭＥＭ
完全培养基，收获细胞，２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，
将细胞重悬于１ｍＬ裂解缓冲液中（１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＴｒｉｓＨＣｌ，ｐＨ７５，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＥＤＴＡ，１００ｍｇ·Ｌ－１蛋白酶Ｋ，０５％ＳＤＳ），于５０℃孵
育１ｈ。然后用等倍体积的饱和酚抽提，１００００ｒ·
ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，取上层，再用等倍体积的氯仿／异
戊醇（２４∶１）抽提一次，除蛋白，１００００ｒ·ｍｉｎ－１离心
１０ｍｉｎ，收集水相，加入２５倍体积冰冷无水乙醇及
０１倍体积的３ｍｏｌ·Ｌ－１醋酸钠－２０℃ 沉淀，过夜。
最后１００００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，用７０％乙醇洗涤２
次，空气干燥后溶于５０μＬ含有０１ｍｇ·Ｌ－１ＲＮａｓｅ
Ａ的ＴＥ缓冲液中。在１５％ 的琼脂糖凝胶中电泳２
ｈ。凝胶成像系统观察、拍照。
２．７ 统计学分析 所有数据用 ＳＰＳＳ１３０统计软
件进行分析，用 珋ｘ±ｓ表示，进行 ｔ检验，用 ＮＤＳＴ软
件计算ＩＣ５０值。
３ 结果
３．１ Ｒｇ３对细胞增殖活性的影响 用６００ｍｇ·Ｌ－１
高质量浓度的Ｒｇ３处理 ＥＪ细胞产生明显的细胞毒
性作用，细胞变圆，最终导致细胞死亡。当 Ｒｇ３的
质量浓度在３７５～６００ｍｇ·Ｌ－１之间时，细胞增殖
被抑制，Ｒｇ３处理ＥＪ细胞４８ｈ的ＩＣ５０为１２５５ｍｇ·
Ｌ－１。Ｒｇ３与细胞生长抑制率之间有显著的浓度依
赖关系（见表１）。
表１ Ｒｇ３对细胞增殖活性的抑制作用（珋ｘ±ｓ，ｎ＝４）
剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ａ４９０ 抑制率／％
０ １１１０±００７１ －
３７５ ０７８５±００２７１） ２９２８
７５ ０５８９±００２５１） ４６９４
１５０ ０５００±００３５１） ５４９５
３００ ０４１６±００１２１） ６２５２
６００ ０３３３±００１９１） ７０００
注：与空白组比较１）Ｐ＜００１
３．２ Ｒｇ３诱导细胞凋亡的形态学观察 １５０ｍｇ·
Ｌ－１Ｒｇ３处理的ＥＪ细胞２４，４８ｈ后，荧光显微镜下观
察可见典型的凋亡细胞形态，即细胞体积变小，染色
质凝集、核片段化、凋亡小体、核内可见致密的颗粒状
荧光，并呈时效依赖关系。而对照组细胞核呈弥漫均
匀荧光，且荧光较弱，无凋亡细胞的特征（见图１）。
图１ Ｒｇ３处理４８ｈ的荧光显微照片（×４００）
Ａ．对照组细胞；Ｂ．Ｒｇ３处理的２４ｈ细胞；Ｃ．Ｒｇ３处理的４８ｈ细胞
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３．３ Ｒｇ３对细胞周期和细胞凋亡率的影响 流式
细胞仪检测表明，Ｒｇ３能诱导细胞凋亡及调节细胞
周期，用７５ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处理 ＥＪ细胞２４，４８ｈ及
１５０ｍｇ·Ｌ－１的 Ｒｇ３处理 ＥＪ细胞 ４８ｈ后，Ｓ期和
Ｇ２／Ｍ期的细胞比率增加，Ｇ０／Ｇ１的细胞比率下降；
细胞凋亡率分别从对照组的（１０５±０１７）％上升
到（８４１±０９８）％，（１８５７±２２０）％，（３３９８±
１６４）％，实验重复３次（见表２）。
表２ 不同质量浓度Ｒｇ３对细胞周期和细胞凋亡率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
时间／ｈ 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ｇ０Ｇ１／％ Ｓ／％ Ｇ２Ｍ／％ 凋亡率／％
－ － ７１２４±１９９ ８８６±１３６ １９９０±２７７ １０５±０１７
２４ ７５ ５８７７±１６４１） １５７６±１３８１） ２５４７±３０２１） ８４１±０９８１）
４８ ７５ ４６０６±１４２１） ２４６８±０９１１） ２９２６±２０６１） １８５７±２２０１）
４８ １５０ ３１８６±１２９１） ３２７８±２６０１） ３５３５±２２６１） ３３９８±１６４１）
注：与相应的空白组比较１）Ｐ＜００１
３．４ Ｒｇ３对细胞 ｃａｓｐａｓｅ３蛋白表达的影响 １５０
ｍｇ·Ｌ－１的 Ｒｇ３处理细胞２４，４８ｈ后，实验组细胞
（见图２）与对照组细胞相比显示更强的棕色信号
和更高的 ＤＡＢ灰度，并呈时效依赖关系。从
ｃａｓｐａｓｅ３的表达水平上证实 Ｒｇ３诱导了 ＥＪ细胞
的凋亡。
图２ ｃａｓｐａｓｅ３的免疫细胞化学（×２００）
Ａ．对照组细胞；Ｂ．Ｒｇ３处理的２４ｈ细胞；Ｃ．Ｒｇ３处理的４８ｈ细胞
３．５ ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳 用７５ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３处
理ＥＪ细胞２４，４８ｈ及１５０ｍｇ·Ｌ－１的 Ｒｇ３处理 ＥＪ
细胞４８ｈ后，提取细胞ＤＮＡ，进行琼脂糖凝胶电泳，
检测到细胞发生凋亡时，由于ＤＮＡ有规律的降解而
出现典型的ＤＮＡ梯形条带，其效应随药物浓度的增
加和作用时间的延长而增强（见图３）。
图３ ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳分析Ｒｇ３诱导ＥＪ细胞的凋亡
Ｍ：１００ｂｐＤＮＡＭａｋｅｒ；１．对照组；２．７５ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３２４ｈ组；
３．１５０ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３４８ｈ组；４．７５ｍｇ·Ｌ－１Ｒｇ３４８ｈ组
４ 讨论
近年来，人们致力于寻求抑制肿瘤发生和转移
的新的天然药物［６］。人参作为传统中药在亚洲国
家广泛地用于治疗各种疾病，它具有多种药理功能，
人参中的某些成分已经显示出抗癌和抗突变活性。
人参皂苷Ｒｇ３是从红参中提取的微量中药单体，能
显著抑制某些肿瘤的生长、浸润和转移。人参皂苷
Ｒｇ３抑制肿瘤细胞增殖、生长和转移可能与其诱导
细胞凋亡作用有关，然而其确切的分子机制仍不清
楚。凋亡是由基因编码调控的细胞主动自杀过程，
既是生物体维持自身稳定和平衡的一个重要机制，
也是消除异常增殖细胞的理想途径［８］。细胞凋亡
率下降是肿瘤的特征变化之一，肿瘤细胞的恶性生
长是由于细胞增殖的异常或细胞死亡机制的调节缺
陷，细胞增殖和细胞凋亡之间的不平衡将导致肿瘤
的发生。诱导肿瘤细胞凋亡，是抗肿瘤药物的重要
研究方向。凋亡也被认为是一个在形态、生化和分
子水平上起变化的特殊细胞死亡模式。形态学上的
变化是判断凋亡发生最可靠的标准［９］。笔者用荧
光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳
观察到 Ｒｇ３诱导了典型的凋亡细胞的特征即染色
质凝集、细胞核碎片、ＤＮＡ片段和凋亡小体。通过
流式细胞仪检测细胞周期时相和凋亡率显示，人参
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皂苷Ｒｇ３能显著地调节细胞周期和诱导细胞凋亡，
主要作用于 Ｇ２／Ｍ期，使细胞阻滞在 Ｓ期及 Ｇ２／Ｍ
期，减慢癌细胞的增殖生长速度。与以前实验结果
相同。Ｋｕｎｇ等［１０］认为细胞周期的阻滞和细胞凋亡
诱导是一致的，他们得出结论，细胞死亡的发起不是
由于生物化学上的异常，而是由于完整的细胞周期
事件被分裂。凋亡，一个进化上保守的细胞自杀形
式，需要特殊的机制，这个机制的中心成分是包括了
一个叫 ｃａｓｐａｓｅｓ的蛋白酶家族的蛋白裂解系统，这
些酶积累并参与了一个启动发生凋亡信号反应的瀑
布，导致了细胞的解体。ｃａｓｐａｓｅ３是凋亡反应的重
要执行者，在细胞凋亡的过程中起一个中心的作用，
在分子水平上 ｃａｓｐａｓｅ３的表达和活性的增加将导
致细胞凋亡［１１，１２］。笔者通过细胞免疫化学实验证
实ｃａｓｐａｓｅ３在Ｒｇ３处理的细胞有强的表达，而对照
组细胞则呈弱的或阴性的表达。结果显示，Ｒｇ３能
显著地抑制膀胱移行细胞癌细胞系ＥＪ的细胞增殖，
调节细胞周期和诱导细胞凋亡。
综上所述，本实验从形态学观察、流式细胞分
析、ＤＮＡ梯状带检测和ｃａｓｐａｓｅ３表达等方面首次证
实了一定浓度的 Ｒｇ３在体外能够诱导膀胱移行细
胞癌细胞系ＥＪ发生凋亡。这个研究对 Ｒｇ３应用于
临床的肿瘤包括膀胱癌的化疗提供了有价值的实验
依据，人参皂苷Ｒｇ３可望成为具有良好应用前景的
抗癌药物。
［参考文献］
［１］ ＫｉｔａｇａｗａＩ，ＹｏｓｈｉｋａｗａＭ，ＹｏｓｈｉｈａｒａＭ，ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓ
ｏｆｃｒｕｄｅｄｒｕｇｓ．ＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＧｉｎｓｅｎｇｒａｄｉｘｒｕｂｒａ［Ｊ］．Ｙａｋｕ
ｇａｋｕＺａｓｓｈｉ，１９８３，１０３（６）：６１２．
［２］ ＺｈａｎｇＱ，ＫａｎｇＸ，ＺｈａｏＷ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｅｆｅｃｔｏｆｌｏｗｄｏｓｅｙｃｌｏ
ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ３ｏｎＬｅｗｉｓｌｕｎｇｃａｒｃｉｎｏ
ｍａ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００６，３４２（３）：８２４．
［３］ 刘基巍，陈俊霞，于丽华，等．人参皂甙 Ｒｇ３和核糖核酸酶抑
制因子转基因对小鼠黑色素瘤的抑制作用研究［Ｊ］．中华肿
瘤杂志，２００４，２６（１２）：７２２．
［４］ ＫｉｍＨＳ，ＬｅｅＥＨ，ＫｏＳＲ，ＥｆｅｃｔｓｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓＲｇ３ａｎｄ
Ｒｈ２ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｓ［Ｊ］．ＡｒｃｈＰｈａｒｍ
Ｒｅｓ，２００４，２７（４）：４２９．
［５］ ＣｏｏｎＪＴ，ＥｒｎｓｔＥ．Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ：ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗｏｆａｄｖｅｒｓｅ
ｅｆｅｃｔｓａｎｄｄｒｕｇｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＤｒｕｇＳａｆ，２００２，２５（５）：３２３．
［６］ ＥｌＢａｙｏｕｍｙＫ，ＳｉｎｈａＲ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｍａｍｍａｒｙｃａｎｃｅｒｃｈｅ
ｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｂｙｏｒｇａｎｏｓｅｌｅｎｉｕｍｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．ＭｕｔａｔＲｅｓ，
２００４，５５１（１２）：１８１．
［７］ ＧｅｒｌＲ，ＶａｕｘＤＬ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｏｆｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００５，２６（２）：２６３．
［８］ ＡｈａｒｏｎｉＤ，Ｄａｎｔｅｓ，Ａ，Ｏｒｅｎ，Ｍ，ｅｔａｌ．ＡＭＰｍｅｄｉａｔｅｄｓｉｇｎａｌｓ
ａｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｆｏｒａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ
ＣｅｌＲｅｓ，１９９５，２１８（１）：２７１．
［９］ ＫｕｎｇＡＬ，ＺｅｔｅｒｂｅｒｇＡ，ＳｈｅｒｗｏｏｄＳＷ，ｅｔａｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｅｆｅｃｔｓ
ｏｆｃｅｌｃｙｃｌｅｐｈａｓｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｇｅｎｔ：ｒｅｓｕｌｔｏｆｃｅｌｃｙｃｌｅｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ
［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９０，５０（２２）：７３０７．
［１０］ ＪｏｈｎＣＲ，ＭａｕｒｉｚｉｏＰｅｌｅｃｃｈｉａ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｂａｓｅｄｔｈｅｒａｐｉｅｓｆｏｒｈｅ
ｍａｔｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００５，１０６（２）：４０８．
［１１］ ＣｒｏｎｉｎＤ，ＤａｌｙＣ，Ｏ’ＤｏｈｅｒｔｙＴ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓ
ｆｅｃｔｉｏｎｏｆａｒｉｂｏｚｙｍｅｔａｒｇｅｔｉｎｇｈｕｍａｎｃａｓｐａｓｅ３［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ，２００４，２４（２）：４２５．
ＩｎｄｕｃｅｍｅｎｔｅｆｅｃｔｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ３ｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｕｍａｎ
ｂｌａｄｄｅｒｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌｃｅｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｉｎｅＥＪ
ＣＨＥＮＪｕｎｘｉａ，ＰＥＮＧＨｕｉｍｉｎ，ＰＵＳｈｕｐｉｎｇ，ＧＵＯＹｕｐｉｎｇ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｅｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＲｇ３ｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇａｎｄｉｎｄｕｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ
ｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｅＥＪｗａｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＲｇ３ｏｆｖａｒｉｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．ＣｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉ
ｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｃｅｌｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｔａｉｎｉｎｇｏｆＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８．Ｃｅｌｃｙｃｌｅａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍ
ｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ３ｉｎｃｅｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．ＤＮＡｌａｄｄｅｒｗａｓｓｈｏｗｅｄｂｙａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃ
ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｒｇ３ｉｎｈｉｂｉｔｅｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＥＪｃｅｌｓｉｎａｍａｎｎｅｒｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ，ＩＣ５０ｏｆＲｇ３ｉｎ４８ｈ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗａｓ１２５５ｍｇ·Ｌ－１ｔｏＥＪｃｅｌｓ．Ｗｈｅｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ１５０ｍｇ·Ｌ－１ｏｆＲｇ３ｆｏｒ２４ｈａｎｄ４８ｈ，ｔｈｅｃｅｌｓｓｈｏｗｅｄａｐｏｐｔｏｔｉｃｍｏｒ
ｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｃｏｎｄｅｎｓｅｄｃｈｒｏｍａｔｉｎ，ｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｂｏｄｙａｎｄｂｒｉｇｈｔｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｇｒａｎ
ｕｌｅｓａｓｗｅｌａｓａｈｉｇｈｅｒｃａｓｐａｓｅ３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＦＣＭａｓｓａｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＲｇ３ｒｅｇｕｌａｔｅｄｃｅｌｃｙｃｌｅａｎｄｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＥＪｃｅｌｓ．
·３８６１·
第３２卷第１６期
２００７年８月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００７
Ｗｈｅｎｔｒｅａｔｅｄｆｏｒ２４ｈａｎｄ４８ｈｗｉｔｈ７５ｍｇ·Ｌ－１ｏｆＲｇ３ａｓｗｅｌａｓｆｏｒ４８ｈｗｉｔｈ１５０ｍｇ·Ｌ－１ｏｆＲｇ３，ｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓｏｆｃｅｌｓｉｎＳ
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ｆｒｏｍ（１０５±０１７）％ ｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｃｅｌｓｔｏ（８４１±０９８）％，（１８５７±２２０）％ ａｎｄ（３３９８±１６４）％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
ＲｅｍａｒｋａｂｌｅＤＮＡｌａｄｄｅｒｓｗｅｒｅｒｅｖｅａｌｅｄＴｈｅｅｆｅｃｔｓｓｈｏｗｅｄａｍａｎｎｅｒｉｎｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆＲｇ３．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ３ｅｘｅｒｔｓａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｆｅｃｔｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＥＪｃｅｌｓｂｙｉｎｄｕｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ３；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｔｕｍｏｒ；ｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００６１２２０
［基金项目］ 重庆市卫生局科研项目（２００３Ｂ３８）
［通讯作者］ 肖农，Ｔｅｌ：（０２３）６３６２２９１４，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｏｎｏｎｇｗｌ＠
１６３．ｃｏｍ
麻黄碱对脑缺氧缺血后新生大鼠
神经可塑性影响的研究
李石志１，肖 农１，张晓萍２
（１．重庆医科大学 附属儿童医院 神经内科，重庆 ４０００１４；
２．重庆医科大学 儿科研究所，重庆 ４０００１４）
［摘要］ 目的：研究麻黄碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）后神经可塑性的影响。方法：７日龄 ＳＤ大
鼠６０只，制成ＨＩＢＤ模型，随机分为麻黄碱组（１５ｍｇ·ｋｇ－１）、Ｄ苯丙胺（ＤＡＭＰＨ，１０ｍｇ·ｋｇ－１）组、三磷酸胞苷
二钠（ＣＴＰ，７０ｍｇ·ｋｇ－１）组、神经节苷脂（ＧＭ１，２０ｍｇ·ｋｇ－１）组和自然康复组。用免疫组织化学方法检测海马
ＣＡ３区生长相关蛋白４３（ＧＡＰ４３）、突触素（ＳＹＰ）表达的变化，术后４周进行５ｄ的 Ｍｏｒｉｓ水迷宫学习和记忆的测
试。结果：①麻黄碱组海马ＣＡ３区ＧＡＰ４３和ＳＹＰ表达水平高于自然康复组（Ｐ＜００５），与ＤＡＭＰＨ，ＣＴＰ组的表达
无显著性差异；②各组平均逃避潜伏期明显短于自然康复组（Ｐ＜００５），原平台穿过次数各组明显多于自然康复组
（Ｐ＜００１）。麻黄碱组逃避潜伏期长于ＧＭ１组，原平台穿过次数麻黄碱组少于ＧＭ１组，但与ＣＴＰ和ＤＡＭＰＨ组比
无差异。结论：麻黄碱能提高新生ＨＩＢＤ大鼠年长后的空间定向能力和学习记忆能力。这种保护作用和麻黄碱减
少ＨＩＢＤ后神经元的丢失、促进参与神经元重塑的蛋白分子ＧＡＰ４３和ＳＹＰ的表达有关。麻黄碱对ＨＩＢＤ的保护作
用和ＤＡＭＰＨ及ＣＴＰ起同样的效果，而改善新生ＨＩＢＤ大鼠年长后的空间定向能力和学习记忆能力的效果稍差于
ＧＭ１，这可能和麻黄碱的剂量有关。
［关键词］ 麻黄碱；缺氧缺血；神经可塑性
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１６１６８４０４
麻黄早在《神农本草经》就有治中风后遗症的
记载。研究证实，麻黄的主要成分麻黄碱可促进大
鼠 ＭＣＡＯ后运动功能的恢复［１］。新生儿缺氧缺血
性脑损伤（ｈｙｐｏｘｉｃｉｓｃｈｅｍｉｃｂｒａｉｎｄａｍａｇｅ，ＨＩＢＤ）是
严重威胁新生儿生命健康甚而致残的常见原因。作
者研究麻黄碱对新生大鼠ＨＩＢＤ后神经可塑性的影
响，通过对海马生长相关蛋白（ｇｒｏｗｔｈａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏ
ｔｅｉｎ４３，ＧＡＰ４３）及突触素（ｓｙｎａｐｔｏｐｈｙｓｉｎ，ＳＹＰ）表达
的检测，探讨其分子机制，并与 Ｄ苯丙胺（Ｄａｍ
ｐｈｅｔａｍｉｎｅ，ＤＡＭＰＨ）、三磷酸胞苷二钠（ＣＴＰ）［２］和
神经节苷脂ＧＭ１［３］的作用相比较，以寻找更为有效
的治疗药物。
１ 材料
１．１ 动物
健康清洁级７日龄 ＳＤ新生大鼠６０只，雌雄不
拘，体重１２～１６ｇ，由重庆医科大学试验动物中心提
供，动物使用许可证号：ＳＹＸＫ渝２００４０００１。
１．２ 药物与试剂
盐酸麻黄碱，纯度 ＞９９％（赤峰制药厂，批号
４２０３２５）；Ｄ苯丙胺由重庆市公安局购自国家麻醉
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第３２卷第１６期
２００７年８月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００７