全 文 :女贞子中2种主要裂环环烯醚萜苷类
成分的含量考察
李 阳1,孙文基2
(1.第四军医大学 药学系 药物研究所,陕西 西安 710032;
2.西北大学 陕西省生物医药重点实验室,陕西 西安 710069)
[摘要] 目的:建立分析女贞子中主要裂环环烯醚萜苷类成分女贞苷(nuezhenoside)及女贞苷 G13(G13)的
HPLC定量分析方法,并考察了不同采集时间及不同产地女贞子样品中上述2种成分的含量。方法:以国产 YMG
C18(46mm×250mm,10μm)为色谱柱,流动相为乙腈水,梯度洗脱(乙腈:0min,20%;15min,25%),流速为1
mL·min-1,检测波长240nm,室温(25℃)。结果:女贞苷和女贞苷G13分别在0341~341μg,0331~331μg
与峰面积线性良好;平均回收率分别为975%,RSD14%(n=3)和981%,RSD18%(n=3)。不同地区女贞子
药材中女贞苷和女贞苷G13的含量差别较大,可能与不同品种来源及加工炮制方法等因素有关;实验数据表明,采
集期在11月初至中旬上述2种成分的含量最高。结论:所建立的HPLC梯度洗脱法可用于同时测定女贞子药材中
主要裂环环烯醚萜苷类成分女贞苷及女贞苷G13的含量,可作为女贞子中水溶性指标性成分的检测方法,为全面
控制女贞子药材内在质量提供参考。
[关键词] 女贞子;裂环环烯醚萜苷;女贞苷;女贞苷G13;高效液相色谱
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18209904
[收稿日期] 20071121
[通讯作者] 孙文基,Tel:(029)88304569,Email:leeyond2
@126.com
女贞子为木犀科植物女贞 Ligustrumlucidum
Ait.的干燥成熟果实,具有滋补肝肾、明目乌发等功
效[1]。它是我国传统的扶正固本药物,应用历史悠
久,在中国最早的药学专著《神农本草经》(约公元
200年)中已有记载,列为上品[2]。但长期以来对它
的化学成分研究主要集中在其脂溶性部分,《中国
药典》以齐墩果酸为其代表性成分,薄层扫描法作
为其含量测定方法。
而女贞子水溶性化学成分中的裂环环烯醚萜类
也是另一类重要的活性成分[3],具有较强的生理活
性和药理作用[45],因此它的含量也代表着女贞子药
材的内在质量。在以往的文献资料中,测定女贞子
中主要裂环环烯醚萜苷类成分女贞苷和女贞苷G13
的定量分析方法一直未见报道。本研究采用 HPLC
法考察了收集自中国不同地区及不同采集时间的女
贞子样品中女贞苷(nuezhenoside)及女贞苷 G13的
含量,建立了分析女贞子中水溶性活性成分的色谱
方法。
1 仪器和试药
高效液相色谱仪为美国 Beckman公司产品,
125型泵;168型可变紫外监测器;SystemGold操作
软件;32Karat色谱工作站;Hamilton微量进样器。
YCQ-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有
限公司)。
乙腈(山东禹城化工厂)和甲醇(西安化学试剂
厂)为分析纯;水为二次重蒸水并经045μm水系
滤膜过滤。
对照品均为自行分离精制,并经 UV,IR,1H
NMR,13CNMR鉴定其结构,与文献[67]报道一
致,并经 HPLC检测,面积归一划法计算,纯度分别
为女贞苷9851%,女贞苷G139863%。
不同地区女贞子样品经咸阳市药品检验所李正
勇教授鉴定为FructusLigustriLucidi,其原植物为L.
lucidum;不同采集期女贞子样品全部采自西北大学
校园内(由西北大学生命科学学院挂牌鉴定),自
2005年9月7日起至2005年12月30日间每隔10
日分别采集。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:YMG-C18(46mm×250
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mm,10μm),流动相:乙腈水,梯度洗脱(乙腈:0
min,20%;15min,25%),流速1mL·min-1,检测波
长240nm,检测温度室温(25℃)。在上述色谱条
件下,计算女贞苷的理论塔板数为 2500,女贞苷
G13的理论塔板数为 7000,二者的分离度为 14。
对照品及样品HPLC图见图1。
1.女贞苷(978min);2.女贞苷G13(2669min)
图1 对照品与样品的色谱图(240nm)
2.2 对照品溶液的制备 精密称取女贞苷对照品
341mg,女贞苷 G13331mg置于10mL量瓶中,
加30%甲醇溶液溶解并定容至刻度,摇匀,作为对
照品溶液。所制得混合对照品溶液的浓度分别为女
贞苷0341g·L-1、女贞苷G130331g·L-1。
2.3 供试品溶液的制备 取女贞子药材(粉碎,过
40目筛)1g,精密称定,精密加入30%甲醇溶液50
mL,称重,超声处理30min,放冷,用30%甲醇溶液
补足重,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(045
μm)过滤,即得。
2.4 线性关系的考察 精密吸取上述混合对照品
溶液1,2,4,8,16,24,30,50,100μL进样,在上述色
谱条件下测定峰面积,以峰面积为纵坐标、对照品进
样量为横坐标绘制标准曲线,女贞苷、女贞苷 G13
的线性回归方程分别为:Y=3305×105X+2014×
105,r=09991,线性范围 0341~341μg;Y=
3720×105X+1186×105,r=09992,线性范围
0331~331μg。
2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10
μL,连续进样6次,记录峰面积,实验结果表明,2种
成分的 RSD分别为女贞苷 032%,女贞苷 G13
039%。
2.6 重复性试验 取同一批样品6份,每份1g,精
密称定,按2.3项下方法制备供试品溶液,各取50
μL进样,在上述色谱条件下测定峰面积,实验结果
表明,2种成分的 RSD分别为女贞苷062%,女贞
苷G13043%。
2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 50
μL分别在0,2,4,8,12,24,48h进样,在上述色谱
条件下女贞苷在 24h内稳定,峰面积平均值为
1562413,RSD097%;女贞苷G13在24h内稳定,
峰面积平均值为1645664,RSD19%。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批样品
5份,每份1g,精密称定,分别加入女贞苷约2mg,
女贞苷G13约15mg,按2.3项下方法制备供试品
溶液,各取50μL进样,在上述色谱条件下测定峰面
积,2种成分的平均回收率分别为女贞苷 975%
(RSD135%)和女贞苷G13981%(RSD18%)。
2.9 最低检测限和最低定量限 取混合对照品溶液
01mL,定容至 10mL量瓶中,精密吸取 100,50,
40,30,20,10μL进样,测得2种物质的最低检测限
(S/N=3)和最低定量限(S/N=10)分别为:女贞苷
0102,0184μg,女贞苷G130129μg,0307μg。
2.10 样品的测定 取不同产地的女贞子药材粉末
1g,精密称定,按2.3项下方法制备供试品溶液,各
取50μL进样,在21色谱条件下测定峰面积,按照
外标法计算含量,结果见表1。
取不同采集时期的女贞子药材粉末1g,精密称
定,按2.3项下方法制备供试品溶液,各取50μL进
样,在上述色谱条件下测定峰面积,按照外标法计算
含量,结果见图2。
3 结果与讨论
3.1 提取条件的选择 实验首先比较了甲醇、30%
甲醇、50%甲醇、70%甲醇、水等5种提取溶剂,结果
表明以30%甲醇提取的女贞苷和女贞苷 G13含量
较高,故选择30%甲醇为提取溶剂。其次比较了超
声、回流及冷浸这3种提取方法,数据表明超声处理
后的提取率较高,且超声提取操作简便。最后比较
了超声提取时间对女贞苷及女贞苷 G13提取率的
影响,实验结果表明超声30min时上述2种成分已
基本提取完全,因此选择30%甲醇超声处理30min
为最终的提取方法。
3.2 流动相的选择 实验先后试用了甲醇水、乙
腈水、甲醇乙腈水等体系,从分离情况和出峰时
间、峰形效果等因素综合分析选择乙腈水梯度(乙
腈:0min,20%;15min,25%)洗脱,能够使待测组
分与其他组分有效分离,且保留值适宜。
3.3 检测波长的确定 女贞苷在240,280nm处均
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表1 不同来源样品中女贞苷和女贞苷G13质量分数 %
No. 来源 女贞苷 女贞苷G13
1 陕西西安 0888 0478
2 陕西咸阳 0037 0059
3 陕西彬县 0026 0060
4 陕西南郑县 1089 0346
5 陕西宁强县 0034 0162
6 陕西宝鸡 0234 0268
7 陕西凤县 0214 0318
8 陕西洛南县 0045 0099
9 陕西丹凤县 0119 0121
10 陕西安康 0399 0326
11 陕西延安 0127 0045
12 北京 0433 0112
13 上海 0967 0219
14 天津 0375 0174
15 重庆 0090 0040
16 河北石家庄 0047 0017
17 江苏南京 0402 0083
18 江苏苏州 0840 0360
19 浙江杭州 0039 0013
20 广西南宁 0062 0040
21 河南洛阳 0808 0212
22 山东济南 0200 0140
23 山东青岛 0254 0073
24 云南昆明 0028 0084
25 四川成都 0152 0074
26 辽宁锦州 0039 0125
27 安徽合肥 0287 0049
图2 不同采集时期样品的含量变化趋势
有最大吸收,而女贞苷 G13只在240nm处有最大
吸收。在此波长下,待测组分与杂质峰能够实现基
线分离,检测灵敏度高,确定检测波长为240nm。
4 结论
女贞苷和女贞苷 G13由于结构类似,极性相
近,用一般的硅胶柱色谱色谱反复色谱仍难得到较
高纯度的化合物。薄层色谱也表现为1个斑点(硅
胶G板,氯仿甲醇水(65∶35∶10)为展开剂,10%硫
酸乙醇溶液显色),使用反相硅胶柱采用梯度洗脱
分离效果满意也未见杂质峰干扰。
由表1可知所收集的女贞子样品中均可检出女
贞苷和女贞苷 G13,但不同来源女贞子药材中上述
2种成分的含量差别较大,女贞苷和女贞苷 G13质
量分数最高可达 1089%和 0478%,最低分别为
0026%和 0013%,平均值则分别为 0305%和
0152%。其结果可能是由于不同的品种来源和不
同的加工炮制方法所致,但总的来看,以颗粒大、肉
厚、蓝黑色者为佳。由表2中可以看出从9月到12
月之间,女贞苷和女贞苷 G13的含量先增后减,在
11月初至中旬左右达到最大值,这与女贞子药材的
传统采收季节一致。
[参考文献]
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[2] 肖培根.新编中药志.第 2卷[M].北京:化学工业出版社,
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天然产物研究与开发,2003,15(1):77.
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glucosidesfromLigustrumjaponicum[J].PlantaMed,1987,53
(5):427.
Quantitativeanalysisoftwomajorsecoiridoidglucosidesin
fruitsofLigustrumlucidum
LIYang1,SUNWenji2
(1.InstituteofPharmaceuticalResearchofFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032,China;
2.BiologyandMedicineKeyLaboratoryofShaanxiProvince,NorthwestUniversity,Xi'an710069,China)
[Abstract] Objective:TodevelopanHPLCmethodfordeterminationoftwomajorsecoiridoidglucosides(nuezhenosideand
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G13)fromFructusLigustriLucidi.anddeterminaenuezhenosideandG13insamplesfromdiferentacquisitiontimesanddiferent
places.Method:ThesamplewasseparatedonaYMGC18(46mm×250mm,10μm)column.Themobilephasewasacetonitrile
water,gradientelution(CH3CN:0min,20%;15min,25%)withtheflowrateof1mL·min
-1,thedetectionwavelengthwas240
nm,andthecolumntemperaturewassetat25℃.Result:InHPLCanalysis,thelinearrangesofnuezhenosideandG13were0341
341μgand0331331μg,respectively;theiraveragerecoverieswere975% (RSD135%)and981% (RSD182%),re
spectively.Theresultsofcontentdetermination(nuezhenosideandG13)ofsamplesfromdiferentplacesvariedgreatly.Thismaybe
causedbydiferentspeciessourcesanddiferentpreparationmethods,etc.Theexperimentleduptothefactthatfromthebeginningto
themiddleofNovemberthecontentofnuezhenosideandG13reachedthemaximum.Conclusion:Theestablishedmethodcanbeused
todeterminetwomajorsecoiridoidglucosides(nuezhenosideandG13)inFructusLigustriLucidisimultaneously.Meanwhileitcanbe
usedforthequalitycontrolofFructusLigustriLucidi.
[Keywords] FructusLigustriLucidi;secoiridoidglucosides;nuezhenoside;G13;HPLC
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20071218
[基金项目] 青海省重点科技攻关(2007N136)
[通讯作者] 邵
,Tel:(0971)6117264,Email:shaoyun11@
126.com
RPHPLC测定几种花类药材黄酮含量
牛迎凤1,2,邵
1,赵晓辉1,文怀秀1,陶燕铎1
(1.中国科学院 西北高原生物研究所,青海 西宁 810001;
2.中国科学院 研究生院,北京 100049)
[摘要] 目的:为充分利用花类药材,建立马蔺花、桃花、月季等15种花类药材中黄酮含量测定的 RPHPLC
方法,并比较它们的含量。方法:花类药材用甲醇提取,反相高效液相色谱法分析药材中槲皮素、山柰酚、异鼠李素
3种黄酮苷元。结果:采用KromasilC18柱(46mm×250mm,5μm),以甲醇01% 磷酸(50∶50)为流动相,可使3
种黄酮苷元达到基线分离,其中马蔺花含槲皮素1536%,桃花含山柰酚0572%,茶花含异鼠李素0029%,皆为
听测样品中最高。结论:本实验首次采用RPHPLC法测定这15种花类药材的总黄酮含量,本方法操作简便,快速,
准确,可作为黄酮的定量分析方法。
[关键词] RPHPLC;槲皮素;山柰酚;异鼠李素;含量测定
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18210203
黄酮类化合物类型多样,分布广泛,最集中分布
于被子植物中。研究表明,黄酮类化合物具有抗癌、
抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血
糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗
辐射等作用[12]。近年来,世界上掀起了植物药开发
的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄
酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。目前我
国黄酮类保健食品的功效成分测定是比色法测总黄
酮,测定的是一大类混合物的总量,但这不一定是有
效成分的含量,为了使黄酮类物质的有效成分与功
效对应起来,测定黄酮类物质的功效成分单体是势
之所趋[3]。本实验定了15种花类药材中3种苷元
的含量,桃花、菊花、雪梨花、月季、马蔺花、绿绒蒿中
均含有较为丰富的黄酮类化合物,具有广泛的开发
和利用价值。
1 材料
Waters515高效液相色谱输液泵;Waters2996
DAD检测器;WatersEmpower色谱工作站;Waters
色谱柱恒温箱;DZKW-C型电子恒温水浴锅(北京
化玻联医疗器械公司);超声振荡仪。
葛花、千日红、桃花、凤尾花、杭白菊、菊花、雪梨
花、月季、鸡冠花、槐花、雪莲花、马蔺花、绿绒蒿、细
果角茴香、镰形棘豆由中国科学院西北高原生物研
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