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Quantitative analysis of two major secoiridoid glucosides in fruits of Ligustrum lucidum

女贞子中2种主要裂环环烯醚萜苷类成分的含量考察



全 文 :女贞子中2种主要裂环环烯醚萜苷类
成分的含量考察
李 阳1,孙文基2
(1.第四军医大学 药学系 药物研究所,陕西 西安 710032;
2.西北大学 陕西省生物医药重点实验室,陕西 西安 710069)
[摘要] 目的:建立分析女贞子中主要裂环环烯醚萜苷类成分女贞苷(nuezhenoside)及女贞苷 G13(G13)的
HPLC定量分析方法,并考察了不同采集时间及不同产地女贞子样品中上述2种成分的含量。方法:以国产 YMG
C18(46mm×250mm,10μm)为色谱柱,流动相为乙腈水,梯度洗脱(乙腈:0min,20%;15min,25%),流速为1
mL·min-1,检测波长240nm,室温(25℃)。结果:女贞苷和女贞苷G13分别在0341~341μg,0331~331μg
与峰面积线性良好;平均回收率分别为975%,RSD14%(n=3)和981%,RSD18%(n=3)。不同地区女贞子
药材中女贞苷和女贞苷G13的含量差别较大,可能与不同品种来源及加工炮制方法等因素有关;实验数据表明,采
集期在11月初至中旬上述2种成分的含量最高。结论:所建立的HPLC梯度洗脱法可用于同时测定女贞子药材中
主要裂环环烯醚萜苷类成分女贞苷及女贞苷G13的含量,可作为女贞子中水溶性指标性成分的检测方法,为全面
控制女贞子药材内在质量提供参考。
[关键词] 女贞子;裂环环烯醚萜苷;女贞苷;女贞苷G13;高效液相色谱
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18209904
[收稿日期] 20071121
[通讯作者] 孙文基,Tel:(029)88304569,Email:leeyond2
@126.com
  女贞子为木犀科植物女贞 Ligustrumlucidum
Ait.的干燥成熟果实,具有滋补肝肾、明目乌发等功
效[1]。它是我国传统的扶正固本药物,应用历史悠
久,在中国最早的药学专著《神农本草经》(约公元
200年)中已有记载,列为上品[2]。但长期以来对它
的化学成分研究主要集中在其脂溶性部分,《中国
药典》以齐墩果酸为其代表性成分,薄层扫描法作
为其含量测定方法。
而女贞子水溶性化学成分中的裂环环烯醚萜类
也是另一类重要的活性成分[3],具有较强的生理活
性和药理作用[45],因此它的含量也代表着女贞子药
材的内在质量。在以往的文献资料中,测定女贞子
中主要裂环环烯醚萜苷类成分女贞苷和女贞苷G13
的定量分析方法一直未见报道。本研究采用 HPLC
法考察了收集自中国不同地区及不同采集时间的女
贞子样品中女贞苷(nuezhenoside)及女贞苷 G13的
含量,建立了分析女贞子中水溶性活性成分的色谱
方法。
1 仪器和试药
高效液相色谱仪为美国 Beckman公司产品,
125型泵;168型可变紫外监测器;SystemGold操作
软件;32Karat色谱工作站;Hamilton微量进样器。
YCQ-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有
限公司)。
乙腈(山东禹城化工厂)和甲醇(西安化学试剂
厂)为分析纯;水为二次重蒸水并经045μm水系
滤膜过滤。
对照品均为自行分离精制,并经 UV,IR,1H
NMR,13CNMR鉴定其结构,与文献[67]报道一
致,并经 HPLC检测,面积归一划法计算,纯度分别
为女贞苷9851%,女贞苷G139863%。
不同地区女贞子样品经咸阳市药品检验所李正
勇教授鉴定为FructusLigustriLucidi,其原植物为L.
lucidum;不同采集期女贞子样品全部采自西北大学
校园内(由西北大学生命科学学院挂牌鉴定),自
2005年9月7日起至2005年12月30日间每隔10
日分别采集。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:YMG-C18(46mm×250
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 18
September,2008
mm,10μm),流动相:乙腈水,梯度洗脱(乙腈:0
min,20%;15min,25%),流速1mL·min-1,检测波
长240nm,检测温度室温(25℃)。在上述色谱条
件下,计算女贞苷的理论塔板数为 2500,女贞苷
G13的理论塔板数为 7000,二者的分离度为 14。
对照品及样品HPLC图见图1。
1.女贞苷(978min);2.女贞苷G13(2669min)
图1 对照品与样品的色谱图(240nm)
2.2 对照品溶液的制备 精密称取女贞苷对照品
341mg,女贞苷 G13331mg置于10mL量瓶中,
加30%甲醇溶液溶解并定容至刻度,摇匀,作为对
照品溶液。所制得混合对照品溶液的浓度分别为女
贞苷0341g·L-1、女贞苷G130331g·L-1。
2.3 供试品溶液的制备 取女贞子药材(粉碎,过
40目筛)1g,精密称定,精密加入30%甲醇溶液50
mL,称重,超声处理30min,放冷,用30%甲醇溶液
补足重,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜(045
μm)过滤,即得。
2.4 线性关系的考察 精密吸取上述混合对照品
溶液1,2,4,8,16,24,30,50,100μL进样,在上述色
谱条件下测定峰面积,以峰面积为纵坐标、对照品进
样量为横坐标绘制标准曲线,女贞苷、女贞苷 G13
的线性回归方程分别为:Y=3305×105X+2014×
105,r=09991,线性范围 0341~341μg;Y=
3720×105X+1186×105,r=09992,线性范围
0331~331μg。
2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10
μL,连续进样6次,记录峰面积,实验结果表明,2种
成分的 RSD分别为女贞苷 032%,女贞苷 G13
039%。
2.6 重复性试验 取同一批样品6份,每份1g,精
密称定,按2.3项下方法制备供试品溶液,各取50
μL进样,在上述色谱条件下测定峰面积,实验结果
表明,2种成分的 RSD分别为女贞苷062%,女贞
苷G13043%。
2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 50
μL分别在0,2,4,8,12,24,48h进样,在上述色谱
条件下女贞苷在 24h内稳定,峰面积平均值为
1562413,RSD097%;女贞苷G13在24h内稳定,
峰面积平均值为1645664,RSD19%。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批样品
5份,每份1g,精密称定,分别加入女贞苷约2mg,
女贞苷G13约15mg,按2.3项下方法制备供试品
溶液,各取50μL进样,在上述色谱条件下测定峰面
积,2种成分的平均回收率分别为女贞苷 975%
(RSD135%)和女贞苷G13981%(RSD18%)。
2.9 最低检测限和最低定量限 取混合对照品溶液
01mL,定容至 10mL量瓶中,精密吸取 100,50,
40,30,20,10μL进样,测得2种物质的最低检测限
(S/N=3)和最低定量限(S/N=10)分别为:女贞苷
0102,0184μg,女贞苷G130129μg,0307μg。
2.10 样品的测定 取不同产地的女贞子药材粉末
1g,精密称定,按2.3项下方法制备供试品溶液,各
取50μL进样,在21色谱条件下测定峰面积,按照
外标法计算含量,结果见表1。
取不同采集时期的女贞子药材粉末1g,精密称
定,按2.3项下方法制备供试品溶液,各取50μL进
样,在上述色谱条件下测定峰面积,按照外标法计算
含量,结果见图2。
3 结果与讨论
3.1 提取条件的选择 实验首先比较了甲醇、30%
甲醇、50%甲醇、70%甲醇、水等5种提取溶剂,结果
表明以30%甲醇提取的女贞苷和女贞苷 G13含量
较高,故选择30%甲醇为提取溶剂。其次比较了超
声、回流及冷浸这3种提取方法,数据表明超声处理
后的提取率较高,且超声提取操作简便。最后比较
了超声提取时间对女贞苷及女贞苷 G13提取率的
影响,实验结果表明超声30min时上述2种成分已
基本提取完全,因此选择30%甲醇超声处理30min
为最终的提取方法。
3.2 流动相的选择 实验先后试用了甲醇水、乙
腈水、甲醇乙腈水等体系,从分离情况和出峰时
间、峰形效果等因素综合分析选择乙腈水梯度(乙
腈:0min,20%;15min,25%)洗脱,能够使待测组
分与其他组分有效分离,且保留值适宜。
3.3 检测波长的确定 女贞苷在240,280nm处均
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  表1 不同来源样品中女贞苷和女贞苷G13质量分数 %
No. 来源 女贞苷 女贞苷G13
1 陕西西安 0888 0478
2 陕西咸阳 0037 0059
3 陕西彬县 0026 0060
4 陕西南郑县 1089 0346
5 陕西宁强县 0034 0162
6 陕西宝鸡 0234 0268
7 陕西凤县 0214 0318
8 陕西洛南县 0045 0099
9 陕西丹凤县 0119 0121
10 陕西安康 0399 0326
11 陕西延安 0127 0045
12 北京 0433 0112
13 上海 0967 0219
14 天津 0375 0174
15 重庆 0090 0040
16 河北石家庄 0047 0017
17 江苏南京 0402 0083
18 江苏苏州 0840 0360
19 浙江杭州 0039 0013
20 广西南宁 0062 0040
21 河南洛阳 0808 0212
22 山东济南 0200 0140
23 山东青岛 0254 0073
24 云南昆明 0028 0084
25 四川成都 0152 0074
26 辽宁锦州 0039 0125
27 安徽合肥 0287 0049
图2 不同采集时期样品的含量变化趋势
有最大吸收,而女贞苷 G13只在240nm处有最大
吸收。在此波长下,待测组分与杂质峰能够实现基
  
线分离,检测灵敏度高,确定检测波长为240nm。
4 结论
女贞苷和女贞苷 G13由于结构类似,极性相
近,用一般的硅胶柱色谱色谱反复色谱仍难得到较
高纯度的化合物。薄层色谱也表现为1个斑点(硅
胶G板,氯仿甲醇水(65∶35∶10)为展开剂,10%硫
酸乙醇溶液显色),使用反相硅胶柱采用梯度洗脱
分离效果满意也未见杂质峰干扰。
由表1可知所收集的女贞子样品中均可检出女
贞苷和女贞苷 G13,但不同来源女贞子药材中上述
2种成分的含量差别较大,女贞苷和女贞苷 G13质
量分数最高可达 1089%和 0478%,最低分别为
0026%和 0013%,平均值则分别为 0305%和
0152%。其结果可能是由于不同的品种来源和不
同的加工炮制方法所致,但总的来看,以颗粒大、肉
厚、蓝黑色者为佳。由表2中可以看出从9月到12
月之间,女贞苷和女贞苷 G13的含量先增后减,在
11月初至中旬左右达到最大值,这与女贞子药材的
传统采收季节一致。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S].2005:31.
[2] 肖培根.新编中药志.第 2卷[M].北京:化学工业出版社,
2002:61.
[3] 周剑宁,欧阳明安.药用女贞属植物化学成分的研究进展[J].
天然产物研究与开发,2003,15(1):77.
[4] 董娟娥,张 靖.植物中环烯醚萜类化合物研究进展[J].西北
林学院学报,2004,19(3):131.
[5] 刘 净,梁净钰,谢 韬.环烯醚萜类化合物近年研究进展
[J].海峡药学,2004,16(1):14.
[6] 梁晓天.常用中药基础研究.第1卷[M].北京:科学出版社,
2003:28.
[7] FukuyamaY,KoshinoK,HasegawaT,etal.Newsecoiridoid
glucosidesfromLigustrumjaponicum[J].PlantaMed,1987,53
(5):427.
Quantitativeanalysisoftwomajorsecoiridoidglucosidesin
fruitsofLigustrumlucidum
LIYang1,SUNWenji2
(1.InstituteofPharmaceuticalResearchofFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032,China;
2.BiologyandMedicineKeyLaboratoryofShaanxiProvince,NorthwestUniversity,Xi'an710069,China)
[Abstract] Objective:TodevelopanHPLCmethodfordeterminationoftwomajorsecoiridoidglucosides(nuezhenosideand
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G13)fromFructusLigustriLucidi.anddeterminaenuezhenosideandG13insamplesfromdiferentacquisitiontimesanddiferent
places.Method:ThesamplewasseparatedonaYMGC18(46mm×250mm,10μm)column.Themobilephasewasacetonitrile
water,gradientelution(CH3CN:0min,20%;15min,25%)withtheflowrateof1mL·min
-1,thedetectionwavelengthwas240
nm,andthecolumntemperaturewassetat25℃.Result:InHPLCanalysis,thelinearrangesofnuezhenosideandG13were0341
341μgand0331331μg,respectively;theiraveragerecoverieswere975% (RSD135%)and981% (RSD182%),re
spectively.Theresultsofcontentdetermination(nuezhenosideandG13)ofsamplesfromdiferentplacesvariedgreatly.Thismaybe
causedbydiferentspeciessourcesanddiferentpreparationmethods,etc.Theexperimentleduptothefactthatfromthebeginningto
themiddleofNovemberthecontentofnuezhenosideandG13reachedthemaximum.Conclusion:Theestablishedmethodcanbeused
todeterminetwomajorsecoiridoidglucosides(nuezhenosideandG13)inFructusLigustriLucidisimultaneously.Meanwhileitcanbe
usedforthequalitycontrolofFructusLigustriLucidi.
[Keywords] FructusLigustriLucidi;secoiridoidglucosides;nuezhenoside;G13;HPLC
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20071218
[基金项目] 青海省重点科技攻关(2007N136)
[通讯作者] 邵

,Tel:(0971)6117264,Email:shaoyun11@
126.com
RPHPLC测定几种花类药材黄酮含量
牛迎凤1,2,邵 

1,赵晓辉1,文怀秀1,陶燕铎1
(1.中国科学院 西北高原生物研究所,青海 西宁 810001;
2.中国科学院 研究生院,北京 100049)
[摘要] 目的:为充分利用花类药材,建立马蔺花、桃花、月季等15种花类药材中黄酮含量测定的 RPHPLC
方法,并比较它们的含量。方法:花类药材用甲醇提取,反相高效液相色谱法分析药材中槲皮素、山柰酚、异鼠李素
3种黄酮苷元。结果:采用KromasilC18柱(46mm×250mm,5μm),以甲醇01% 磷酸(50∶50)为流动相,可使3
种黄酮苷元达到基线分离,其中马蔺花含槲皮素1536%,桃花含山柰酚0572%,茶花含异鼠李素0029%,皆为
听测样品中最高。结论:本实验首次采用RPHPLC法测定这15种花类药材的总黄酮含量,本方法操作简便,快速,
准确,可作为黄酮的定量分析方法。
[关键词] RPHPLC;槲皮素;山柰酚;异鼠李素;含量测定
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18210203
  黄酮类化合物类型多样,分布广泛,最集中分布
于被子植物中。研究表明,黄酮类化合物具有抗癌、
抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血
糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗
辐射等作用[12]。近年来,世界上掀起了植物药开发
的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄
酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。目前我
国黄酮类保健食品的功效成分测定是比色法测总黄
酮,测定的是一大类混合物的总量,但这不一定是有
效成分的含量,为了使黄酮类物质的有效成分与功
效对应起来,测定黄酮类物质的功效成分单体是势
之所趋[3]。本实验定了15种花类药材中3种苷元
的含量,桃花、菊花、雪梨花、月季、马蔺花、绿绒蒿中
均含有较为丰富的黄酮类化合物,具有广泛的开发
和利用价值。
1 材料
Waters515高效液相色谱输液泵;Waters2996
DAD检测器;WatersEmpower色谱工作站;Waters
色谱柱恒温箱;DZKW-C型电子恒温水浴锅(北京
化玻联医疗器械公司);超声振荡仪。
葛花、千日红、桃花、凤尾花、杭白菊、菊花、雪梨
花、月季、鸡冠花、槐花、雪莲花、马蔺花、绿绒蒿、细
果角茴香、镰形棘豆由中国科学院西北高原生物研
·2012·
第33卷第18期
2008年9月
         
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