全 文 ：槲寄生乙醇提取物抗肺癌作用的研究
莫剑翎１，方 青１，楼海舟１，金晓滢２，孙 梅２
（１．浙江大学 医学院 附属邵逸夫医院，浙江 杭州 ３１０００６；
２．浙江大学 医学院 附属第二医院，浙江 杭州 ３１０００６）
［收稿日期］ ２００６０３２３
［基金项目］ 浙江省中医药管理局立项课题（２００３Ｃ１１３）
［通讯作者］ 楼海舟，Ｔｅｌ：（０５７１）８６００６９２１，Ｅｍａｉｌ：ｌｏｕｈｕａ３３
＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
中国槲寄生 Ｖｉｓｃｕｍ．ｃｏｌｏｒａｔｕｍ（Ｋｏｍ）Ｎａｋｏｉ在
传统中药中有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎作
用［１］。近年来研究发现，槲寄生是一种天然的抗肿
瘤药物。作者从槲寄生中提取到具有抗肿瘤活性的
乙醇提取物，发现其对人肺腺癌细胞株（Ａ５４９）有显
著的抑制作用，并能诱导其凋亡。
１ 材料
１．１ 细胞株 人肺腺癌细胞株（Ａ５４９）购于中国科
学院上海细胞所，在邵逸夫医院中心实验室常规传
代培养。
１．２ 药物 槲寄生由浙江大学农学院屠幼英研究
员鉴定。槲寄生乙醇提取物由浙江大学农学院茶叶
研究所制备。制备过程如下：称取槲寄生生药粗粉
共计２９８ｇ，９５％乙醇１５８ｍＬ加双蒸水１４２ｍＬ为
３００ｍＬ５０％乙醇溶液，在８０℃萃取３０ｍｉｎ，同时用
回流管自来水回流冷却到室温，然后抽滤，并去残渣
（用３０ｍＬ的５０％乙醇洗１次），在６０℃旋转浓缩
回收乙醇，真空抽冷凝管真空，冷水循环冷凝后得
２２０ｍＬ提取物，生药含量每毫升０１３５ｇ。
１．３ 试剂 ＲＰＭＩ１６４０培养液（含１００Ｕ·Ｌ－１青霉
素，１００μｇ·Ｌ－１链霉素），胎牛血清及０２５％胰酶
溶液，均购自ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司；ＭＴＴ及琼脂糖（Ａｇａｒ
ｏｓｅＩＨ）购自上海生工生物工程有限公司；二甲亚
枫（ＤＭＳＯ）购自Ｓｉｇｍａ公司。
１．４ 仪器 ＣＯ２培养箱（ＨＥＲＡＥＵＳＭａｄｅｉｎＧｅｒｍａ
ｎｙ）；全自动酶标仪（ＢＩＯＲＡＤＭｏｄｅｌ５５０ＭａｄｅｉｎＪａ
ｐａｎ）；紫外分光光度计（ＩｎｎｏｖａｔｉｎｇＨＰＷａｙＭａｄｅｉｎ
Ｇｅｒｍａｎｙ）。
２ 方法
２．１ 细胞培养 Ａ５４９细胞用含１０％胎牛血清的
ＲＰＭＩ１６４０培养液在３７℃，５％ ＣＯ２培养箱中培养，
每２～３ｄ传代１次。待细胞传至３～４代后取形态
良好的对数生长期细胞用于实验。
２．２ 细胞生长抑制检测 将处于对数生长期的
Ａ５４９细胞接种于 ９６孔培养板中，细胞密度每孔
１×１０９个／Ｌ细胞悬液２００μＬ，置３７℃，５％ＣＯ２培养
２４ｈ后弃原培养液，分别加入含１０，５，２，１，０５ｍｇ
·Ｌ－１的槲寄生乙醇提取物培养液各２００μＬ，每个
浓度设９个复孔（分３次重复），并设无药物（含配
制药物的乙醇）培养液和空白对照孔。作用２４ｈ后
倾去上清液，各孔加入１０％ ＭＴＴ２０μＬ，３７℃，４ｈ
后吸去上清液，加入 ＤＭＳＯ２００μＬ于各孔，振荡１０
ｍｉｎ，使结晶物充分溶解后上酶标仪５７０ｎｍ处测吸
光度（Ａ）并计算抑制率（％）。
抑制率（％）＝（对照孔 Ａ－实验孔 Ａ）／对照孔 Ａ×
１００％
２．３ 细胞凋亡检测 取培养于６孔板上处于对数
生长期的同一代细胞，分别加入不同浓度的槲寄生
乙醇提取物使其终浓度分别为２，０５ｍｇ·Ｌ－１及设
空白培养液对照孔。３７℃，５％ＣＯ２培养箱中培养
２４ｈ后收集各组细胞 ＰＢＳ洗两次，取细胞沉淀物，
加入ＤＮＡ抽提液（１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＴｒｉｓＣｌ，０１ｍｏｌ·
Ｌ－１ＥＤＴＡ，２０μｇ·Ｌ－１ＲｎａｓｅＡ，０５％ ＳＤＳ）６００μＬ，
吹打裂解，加入６μＬ蛋白酶 Ｋ，５５℃水浴３ｈ。加
入饱和酚 ７５０μＬ，１２０００ｒ·ｍｉｎ－１，４℃离心 １０
ｍｉｎ，吸取上清液，加入３００μＬ饱和酚：３００μＬ氯仿
（１∶１）１万ｒ·ｍｉｎ－１，４℃离心１０ｍｉｎ，收集水相，加
入１ｍＬ饱和酚，吸取上清液，加入３ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＡｃ
５０μＬ，无水乙醇１ｍＬ混匀，１２０００ｒ·ｍｉｎ－１，４℃
离心１０ｍｉｎ；留沉淀干燥后加适量ＤＨ２Ｏ溶解，并在
紫外分光光度计测 Ａ２６０值定量，取４μｇ在１８％琼
脂糖凝胶上点样后６０Ｖ下电泳２～２５ｈ，紫外光下
观察提取的ＤＮＡ电泳情况，并拍照。
２．４ 统计方法 数据采用 ＳＰＳＳ１００统计分析软
·５４９１·
第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
件进行统计学分析，数据用表示，组间比较采用 ｔ检
验，两组以上均数比较应用方差分析。
３ 结果
３．１ 对Ａ５４９细胞生长的影响 槲寄生乙醇提取
物１ｍｇ·Ｌ－１以上质量浓度作用于Ａ５４９细胞后，细
胞生长均受到不同程度的抑制，并呈量效关系。与
空白组比较具有显著性差异，结果见表１。
表１ 不同质量浓度槲寄生乙醇提取物对Ａ５４９
细胞生长的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝９）
剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ａ 抑制率／％
０ ２６０５±００１６ ０
１０ ０３９４±００５２２） ８４８８
５ ０７２２±００５８２） ７２２８
２ １１３８±００１９２） ５６３０
１ １９３７±０００２１） ２５６４
０５ ２４０８±００２０ ７５６
注：与空白组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
３．２ 对Ａ５４９细胞凋亡的影响 ３组细胞与药物共
培养２４ｈ后，ＤＮＡｌａｄｄｅｒ法分析结果显示，槲寄生乙
醇提取物（２ｍｇ·Ｌ－１）处理组细胞有凋亡特征的
ＤＮＡ改变，即形成典型的ＤＮＡ降解“梯带”（图１）。
图１ 不同质量浓度槲寄生乙醇提取物诱导
Ａ５４９细胞凋亡的ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳
１．２ｍｇ·Ｌ－１；２．０５ｍｇ·Ｌ－１；３．空白对照
４ 讨论
近年国内外研究发现，槲寄生具有免疫调节及
直接的细胞毒作用，可用于治疗乳腺癌、胃癌、结肠
癌等多种常见恶性肿瘤［２］。但各国研究的种类有
所不同，欧洲主要研究的是白果槲寄生（简称欧槲
寄生，ＶｉｓｃｕｍａｌｂｕｍＬ．），韩国研究的是其本土生长
的白果槲寄生的一个亚种（简称韩槲寄生，Ｖ．ａｌｂｕｍ
Ｌ．ｃｏｌｏｒａｔｕｍ），《中国药典》中收载的为中国槲寄生。
研究表明，槲寄生不仅具有辅助抗肿瘤及免疫
调节作用，而且还具有直接抗肿瘤和抑制肿瘤转移
作用［２］。Ｐａｒｋ等［３］研究发现槲寄生提取物诱导
Ｕ９３７细胞的凋亡率为 （６５±３７）％，ＨＬ６０细胞为
（６０±２６）％，ＲＡＷ２６４７细胞为（５２±３９）％，Ｊｕｒ
ｋａｔＴ细胞为（５５±２５）％，结果还显示出槲寄生提
取物对正常嗜中性粒细胞和淋巴细胞影响不大，暗
示了癌细胞对槲寄生提取物的敏感程度比正常细胞
高。Ｙｏｏｎ等［４，５］经小鼠体内实验发现，静脉注射
１００μｇ／只 韩槲寄生提取物可提高小鼠抗肿瘤的免
疫力，并预防性抑制高度转移性肿瘤细胞 Ｂ１６ＢＬ６
黑色素瘤细胞、结肠 ２６Ｍ３１癌细胞和 Ｌ５１７８Ｙ
ＭＬ２５淋巴瘤细胞导致的肿瘤转移。国内彭海燕［６］
等人采用ＭＴＴ法测定槲寄生碱对乳腺癌细胞生长
有显著的抑制作用。对乳腺癌细胞生长抑制率为
４２７％～７０２％，体内实验也证实槲寄生碱对肿瘤
细胞生长有显著的抑制作用。
本研究首次应用中国槲寄生乙醇提取物研究其
对人肺腺癌细胞株的抗肿瘤作用，并从分子生物学角
度初步探讨了作用机制。研究结果发现，槲寄生乙醇
提取物对人肺腺癌细胞株与对照组比较有明显的抑
制作用，亦有明显的量效关系。槲寄生乙醇提取物２
ｍｇ·Ｌ－１即能诱导人肺腺癌细胞株凋亡。笔者将进
一步提取其有效单体成分并研究其作用机制。
［参考文献］
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ｓｉｓｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆＮＫｃｅｌａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＩｎｔＪＩｍ
ｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９９８，２０（４２５）：１６３．
［６］ 彭海燕，章永红，韩 英，等．槲寄生碱对乳腺癌细胞抑制作用
的实验研究［Ｊ］．吉林中医药，２００３，２３（９）：５０．
［责任编辑 古云侠］
·６４９１·
第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７