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Studies on chemical constituents of in herb Pyrola calliatha

鹿蹄草化学成分研究



全 文 :2.2 讨论
2.2.1 从杏叶防风根挥发油中分离出109个色谱峰,
鉴定了其中的65个成分,已鉴定成分占挥发油总量的
9217%,主要成分为萜类化合物。含量较高的是α姜
烯(2482%)、前 盖 介 烯 (1627%)、β没 药 烯
(482%)、2异丙基5甲基9亚甲基二环[4.4.0]萘
烷1烯(403%)、β倍半水芹烯(398%)、反式β金
合欢烯(368%)和芳姜黄烯(354%)。
2.2.2 本研究样品前处理方法采用固相微萃取技
术,该方法比水蒸气蒸馏法的条件温和、加热时间
短、其萃取纤维头对物质吸附和解吸附的能力都非
常好,主要分析实验药材的根部,药材产地不同,所
以鉴定的化合物数量优于文献[3]报道,部分相同
的化合物含量也有差别。
3 结论
采用固相微萃取气相色谱质谱联用技术分析
了杏叶防风根部挥发性化学成分,共分离出109个
色谱峰,确定了65种化学成分,主要为萜类化合物,
挥发油中的萜类化合物是存在于植物界的一大类化
合物,具有多种生物学活性,值得进一步研究。
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AnalysisofvolatileoilinherbofPimpinelacandoleanabySPMEGCMS
ZHAOChao1,CHENHuaguo1,CHENGLi2,ZHOUXin1,YANGZaibo3,ZHANGYisha1
(1.ResearchCenteroftheQualityControlofNaturalMedicines,GuizhouNormalUniversity,Guiyang550001,China;
2.TheSecondAfiliatedHospital,GuiyangTraditionalMedicalColege,Guiyang550002,China;
3.ChemistryandChemicalEngineeringDepartment,QiannanNormalUnivesityforNationalities,Duyun558000,China)
[Abstract] Objective:ToanalyzecomponentsofvolatileoilfromtheherbofPimpinelacandoleana.Method:Thecompo
nentsofvolatileoilwereinvestigatedbySPMEGCMS.Result:Sixtyfivecompoundswereidentifiedwhichaccountedfor9217% of
totalvolatileoil.Conclusion:Themainconstituentsintheessentialoilwereαzingiberene(2482%),pregeijerene(1627%),β
bisabolene(482%),2isopropyl5methyl9methylenebicyclo[4.4.0]dec1ene(403%),βsesquiphelandrene(398%),
transβfarnesene(368%),arcurcumene(354%).
[Keywords] Pimpinelacandoleana;volatileoil;SPME;GCMS
[责任编辑 牛泽宇]
[收稿日期] 20070314
[通讯作者] 屠鹏飞,Tel:(010)82802750,Email:pengfeitu@vip.163.com
鹿蹄草化学成分研究
刘 蕾1,陈玉平1,万 ?2,李安良1,李若瑜2,屠鹏飞1
(1.北京大学 药学院,北京 100083;
2.北京大学 第一医院皮肤性病科,北京大学 真菌和真菌病研究中心,北京 100034)
[摘要] 目的:研究鹿蹄草Pyrolacaliatha全草的化学成分。方法:采用硅胶及SephadexLH-20凝胶柱色谱
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    中 国 中 药 杂 志
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Vol.32,Issue 17
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法等分离化合物,运用波谱学方法确定结构;并对化合物1~4,6~9进行抗真菌活性测定。结果:从鹿蹄草全草中
分离得到10个化合物,分别为梅笠草素(1),熊果醇(2),熊果酸(3),2β,3β,23三羟基12烯28乌苏酸(4),胡萝
卜苷(5),2α,3β,23,24四羟基12烯28乌苏酸(6),大黄素(7),没食子酸(8),水晶兰苷(9),腺苷(10)。结论:化
合物2,4,6,7,10为首次从该属植物中分离得到,化合物5,9为首次从该种植物中分离得到;化合物1,3,4,6,8对
新生隐球菌、白色念珠菌、红色毛癣菌等真菌生长有不同的抑制作用,其中化合物1的抗真菌活性较强。
[关键词] 鹿蹄草属;鹿蹄草;化学成分;抗真菌活性
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)17176204
  鹿蹄草 PyrolacaliathaH.Andres为鹿蹄草科
鹿蹄草属植物,作为中药鹿衔草的基源植物之一收
载于《中国药典》2005年版中,具有祛风除湿,补肾
健骨,止血,解毒的功能。用于风湿关节痛,肾虚腰
痛,腰膝无力,虚劳咳嗽,崩漏,白带,外伤出血,痈肿
疮毒,蛇咬伤等[1]。文献报道从中分离得到的化合
物主要有黄酮类,酚苷类和醌类等化合物[24]。作者
在前期进行的抗真菌天然产物筛选中发现鹿蹄草提
取物具有较好的抗真菌作用,在此基础上对其化学
成分和抗真菌活性进行了研究,本研究报道从其全
草中分离得到的 10个化合物,分别为梅笠草素
(1),熊果醇(2),熊果酸(3),2β,3β,23三羟基12
烯28乌苏酸(4),胡萝卜苷(5),2α,3β,23,24四羟
基12烯28乌苏酸(6),大黄素(7),没食子酸(8),
水晶兰苷(9),腺苷(10)。对其中化合物1~4,6~9
进行了抗真菌活性测定,化合物1,3,4,6,8对新生
隐球菌、白色念珠菌、红色毛癣菌等真菌生长有不同
的抑制作用,其中化合物1的抗真菌活性较强。
1 仪器与材料
X-4数字显示显微熔点测定仪(温度未校
正);JEOLJNM -A300型核磁共振仪,Varian
Unity-500型核磁共振仪(TMS为内标);AEI-MS
-50型质谱仪器,(MDSSCIEX)QSTAR(ABI,USA)
ESI-TOF质谱仪。SephadexLH-20为 Pharmacia
公司产品,柱色谱硅胶及硅胶 GF254为青岛海洋化
工厂出品,D101大孔树脂为天津南开大学化工厂生
产,其他试剂为分析纯。
试验用植物鹿蹄草于2004年6月购自安徽亳
州药材市场,经北京大学屠鹏飞教授鉴定为 P.cal
liatha的全草,凭证标本存放于北京大学中医药现
代化研究中心标本室。
2 提取分离
鹿蹄草干燥全草20kg,以95%乙醇回流提取3
次,每次2h,提取液减压浓缩得总浸膏,将总浸膏混
悬于水中,分别用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取。
取醋酸乙酯部分(110g),甲醇溶解,进行柱色谱
(SephadexLH-20,MeOH),得到 2个主要流分
Fr.1,2。Fr.1经过反复硅胶柱色谱,得到化合物1
(30mg),2(3mg),3(17g),4(500mg),5(30
mg)和6(5mg)。Fr.2进行 MCI柱色谱和硅胶柱
色谱,结合重结晶得到化合物7(4mg)和化合物8
(7mg)。正丁醇部分用水溶解,滤去不溶性沉淀后
(约100g)上 D101大孔树脂,依次用水、20%和
100%乙醇洗脱,减压回收溶剂得水洗脱物 Fr.1,
20%乙醇洗脱物Fr.2。Fr.1进行硅胶柱色谱,以氯
仿甲醇系统进行洗脱,析出化合物9(1g)。Fr.2
经反复硅胶柱色谱纯化得到化合物10(5mg)。
3 抗真菌活性实验
将受试样品1~4,6~9用RPMI1640培养基配
制成512,256,128,64,32,16,8,4,2。1μg·mL的
样品溶液,加入96孔培养板中,每孔加入100μL。
取对数生长期细胞,用 RPMI1640药敏培养基制成
05×103~25×103个/mL(白色念珠菌,新生隐球
菌)或14×104~20×104个/mL(烟曲霉菌,红色
毛癣菌)的菌悬液,接种于96孔培养板中,每孔加
入100μL。白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉菌置
于35℃恒温箱中分别培养24,48,72h,红色毛癣菌
置于28℃恒温培养96h。恒温培养后,在不搅动的
情况下肉眼判断,孔内无菌落视为真菌完全不生长,
取完全不生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度
(MIC),结果见表1。
表1 化合物1,3,4,6,8的MIC值 μg·mL-1
化合物 白色念珠菌 新生隐球菌 烟曲霉菌 红色毛癣菌
1 16 4 16 <05
3 - 32 - -
4 32 - - 32
6 128 64 - 64
8 - - - 128
  注:-表示MIC值>256μg·mL-1
  表1中未列出的化合物对4种真菌的 MIC值
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均>256μg·mL-1。
4 结构鉴定
化合物 1  黄色针晶。EIMSm/z:1859
[M]+;1HNMR(CDCl3,300MHz)δ:794(1H,d,
J=81Hz,H5),788(1H,s,H8),751(1H,d,
J=78Hz,H6),680(1H,d,J=15Hz,H3),
249(3H,s,7CH3),218(3H,d,J=12Hz,2
CH3);
13CNMR(CDCl3,75MHz)δ:1859(C4),
1849(C1),1479(C2),1446(C3),1357(C
6),1343(C7),1320(C9),1300(C10),1269
(C8),1263(C5),218(7CH3),164(2CH3)。
经与文献[5]对照,鉴定该化合物为梅笠草素。
化合物2 白色结晶(丙酮)。ESIMSm/z:465
[M+Na]+。1HNMR(C5D5N,500MHz)δ:523
(1H,t,J=35Hz,H12),392(1H,d,J=105Hz,
H28),347(1H,dd,J=35,110Hz,H3),345
(1H,d,J=105Hz,H28),125,121,105,101,
093(each3H,s,CH3×5),104(3H,d,J=65
Hz,CH3),093(3H,d,J=65Hz,CH3)。
13CNMR
(C5D5N,125MHz)δ:1391(C13),1245(C12),
776(C3),687(C28),552(C5),542(C18),
476(C9),419(C14),399(C8),394(C19),
393(C20),389(C1),388(C4),382(C17),
367(C10),357(C22),328(C7),307(C21),
283(C23),277(C2),261(C15),234(C11),
232(C27),232(C16),212(C29),183(C6),
173(C26),165(C30),161(C25),154(C
24)。以上数据与文献[6]一致,故鉴定该化合物为
熊果醇。
化合物3 白色粉末(甲醇),mp270~272℃。
与熊果酸标准品共薄层,其色谱行为一致。该化合
物1HNMR和13CNMR数据与文献报道[8]的熊果
酸一致。
化合物 4 白色固体。ESIMSm/z:511[M+
Na]+。1HNMR(DMSOd6,300MHz)δ:516(1H,
brs,H12),441419(3H,m,H2,3,23),349
(1H,m,H23),318(OH),304(OH),211(1H,
d,J=105Hz,H18β),105,093,088,081,
071,054(each3H,CH3×6);
13CNMR(DMSO
d6,75MHz)δ:1783(C28),1383(C13),1245
(C12),755(C3),674(C23),639(C2),524
(C18),470(C5),468(C17),460(C9),454
(C4),425(C1),417(C14),391(C8),385
(C19),384(C20),373(C10),363(C22),
322(C7),303(C21),275(C15),238(C16),
233(C11),230(C27),211(C30),174(C6),
170(C25),170(C26),169(C29),138(C
24)。以上数据经与文献[8]对照,推断该化合物为
2β,3β,23三羟基12烯28乌苏酸。
化合物5 白色固体,经与对照品薄层对比,混
合测定熔点,鉴定该化合物为胡萝卜苷。
化合物 6 白色固体。ESIMSm/z:503[M-
H]-。1HNMR(CD3OD,500MHz)δ:530(1H,brs,
H12),404(2H,d,J=115Hz,H23,24),384
(1H,m,H2),362(1H,d,J=115Hz,H23),350
(1H,d,J=115Hz,H24),346(1H,d,J=95Hz,
H3),220(1H,d,J=115Hz,H18β),113,104,
097,089,083(each3H,CH3 ×5);
13CNMR
(CD3OD,125MHz)δ:1816(C28),1398(C13),
1266(C12),794(C3),698(C2),645(C24),
627(C23),543(C18),483(C17),482(C5),
479(C9),472(C4),433(C1),431(C14),
431(C22),408(C19),404(C8),388(C20),
381(C10),340(C7),318(C21),292(C15),
253(C16),241(C27),247(C11),216(C
30),196(C6),177(C29),177(C26),176(C
25)。经与文献[10]对照,推断该化合物为2α,3β,
23,24四羟基12烯28乌苏酸。
化合物 7  橙黄色固体。EIMSm/z:270
[M]+。经与文献[10]对比,且和标准品对照,确定
该化合物为大黄素。
化合物 8 白色结晶。ESIMSm/z:169[M-
H]-。经与文献[11]对照,推断该化合物为没食子
酸。
化合物 9 白色针晶(MeOHH2O)。ESIMS
m/z:413[M+Na]+。1HNMR(D2O,500MHz)δ:
747(1H,s,H3),629(1H,dd,J=55,30Hz,H
6),574(1H,d,J=55,15Hz,H7),567(1H,d,
J=15Hz,H1),483(1H,d,J=8Hz,H1′),274
(1H,dd,J=20,85Hz,H9);13CNMR(D2O,125
MHz)δ:1716(C11),1527(C3),1382(C6),
1330(C7),1112(C4),993(C1ofGlc),953
(C1),858(C8),774(C5ofGlc),767(C3of
Glc),738(C2ofGlc),707(C4ofGlc),675(C
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10),618(C6ofGlc),451(C9),381(C5)。经
与文献[12]对照,鉴定该化合物为水晶兰苷。
化合物 10 白色固体。ESIMSm/z:2681
[M+H]+,2901[M+Na]+;1HNMR(CD3OD,500
MHz)δ:829(1H,s,H2),816(1H,s,H8),595
(1H,d,J=65Hz,H1′),472(1H,dd,J=50,65
Hz,H2′),431(1H,dd,J=25,50Hz,H3′),
415(1H,m,H4′),387(1H,dd,J=25,125Hz,
H5′),373(1H,dd,J=30,125Hz,H5′);13C
NMR(CD3OD,125MHz)δ:1576(C6),1535(C
2),1500(C4),1420(C8),1200(C5),912(C
1′),882(C4′),755(C2′),727(C3′),635(C
5′)。经与文献[13]对照,推断该化合物为腺苷。
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(1.SchoolofPharmaceuticalSciences,PekingUniversity,Beijing100083,China;
2.DepartmentofDermatology,PekingUniversityFirstHospital,Beijing100034,China)
[Abstract] Objective:ToinvestigatethechemicalconstituentsofPyrolacaliatha.Method:Thechemicalconstituentswere
isolatedbyvariouscolumnchromatographicmethods.Thestructureswereidentifiedbyspectraldata.Result:Tencompoundswereiso
latedandidentifiedaschimaphilin(1),uvaol(2),ursolicacid(3),2β,3β,23trihydroxy12ene28ursolicacid(4),daucosterol(5),
2α,3β,23,24tetrahydroxy12ene28ursolicacid(6),emodin(7),galicacid(8),monotropein(9),adenosine(10).Conclusion:
Compounds2,4,6,7,10wereobtainedfromthisgenusforthefirsttime,compounds5,9wereobtainedfromthisspeciesforthefirst
time.Antifungalactivityofcompounds14,69wereevaluated.Compound1showedthestrongactivity.
[Keywords] Pyrola;Pyrolacaliatha;chemicalconstituents;antifungalactivity
[责任编辑 牛泽宇]
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