全 文 :thefinalofcatalpolconcentrationwere025,05,1,25,5mg·mL-1,respectively.ThecorticalneuronwasidentifiedbyNF200
antigenanditssurvivalactivitydetectedbyMTTassay.Theaxonalgrowthofculturedcorticalneuronwereobservedbyinvertedmicros
copywithmicrometer.Result:Immunocytochemistrydemonstratedmorethan95% oftheprimaryculturedcorticalneuronswereposi
tiveforNF200antigen,whichindicatedtheculturedcelswereneurons.Neuronssurvivedgrowingontheconcentrationof025,05,
1,25,5mg·mL-1.Comparedwithblankand1mg·mL-1citicolinegroup,neuronssurvivalrateswerenotstatisticalsignificant
diference.However,itdemonstratedthatcatalpolsignificantlypromotedaxonalgrowthfrom15mg·mL-1(P<005).Interestedly,
comparedwiththedoseof25mg·mL-1,axonalgrowthwasshorteratthedoseof5mg·mL-1,and25mg·mL-1catalpolshowed
thestrongestpromotionefect.Conclusion:Thecatalpolcanenhancecorticalneuronaxonalgrowth,butnotpromotecorticalneuron
survival.
[Keywords] catalpol;corticalneurons;primaryculture;axonlength
[责任编辑 古云侠]
鹅绒藤对小鼠镇静催眠作用的研究
彭晓东,闫乾顺,王 锐,杨卫东,彭建中
(宁夏医学院,宁夏 银川 750004)
[摘要] 目的:研究鹅绒藤全草水提物和氯仿提取物对小鼠的镇静催眠作用。方法:观察鹅绒藤全草提取物
对小鼠正常自主活动的影响,以及对阈下戊巴比妥钠镇静催眠作用的协同作用;采用转轮法测定提取物对小鼠的
最小中枢神经系统毒性。结果:腹腔给予鹅绒藤全草提取物对实验小鼠自主活动有剂量依赖性抑制作用;对阈下
剂量戊巴比妥钠(30mg·kg-1,ip)的催眠效应有协同作用,水提物作用的ED50为236g·kg
-1,氯仿提取物作用的
ED50为075g·kg
-1;2种提取物在本实验条件下,未呈现出中枢神经系统毒性。结论:鹅绒藤全草水提物和氯仿
提取物对实验小鼠有镇静催眠作用。
[关键词] 鹅绒藤;自由活动;镇静催眠
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)17177403
[收稿日期] 20061015
[通讯作者] 彭晓东,Tel:(0951)4075005,4072614,Email:
pengxd@nxmc.edu.cn
鹅绒藤别名心叶牛皮消,系萝雐科Asclepiadace
ae鹅绒藤属植物,宁夏全区普遍分布,民间以其根及
茎的乳汁入药[1]。作者已有的研究结果表明[2],宁夏
产鹅绒藤的根、茎正丁醇提取物有较强的抗超强电休
克惊厥(maximalelectroshockseizure,MES)和抗戊四
氮惊厥(metrazolseizuretest,MET)的作用。近来,作
者对宁夏产鹅绒藤的抗惊厥药理作用的进一步研究
表明,其水提物可以对抗戊四氮惊厥,氯仿提物无对
抗超强电休克惊厥作用。而氯仿提取物可以MES惊
厥,其水体物无对抗作用。结果说明鹅绒藤抗惊厥作
用广泛,有效成分可能比较分散。
研究表明,抗惊厥药物的筛选,除了要求药物具
有好的抗惊厥药效学特性外,其对中枢抑制作用的
强度,也是评价其筛选前景的重要因素。即对中枢
的抑制作用的强度越低,临床治疗的中枢抑制不良
反应也就越弱,病人的治疗依从性也就越好。所以,
本研究拟采用自主活动实验和阈下剂量戊巴比妥钠
催眠作用的协同实验,观察鹅绒藤全草提取物对实
验小鼠中枢神经系统的影响,进一步评价其作为抗
惊厥药物的开发前景。
1 材料
1.1 动物
ICR小鼠,体重18~22g,雌雄各半。宁夏医学
院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(宁)2005
0001。
1.2 药品试剂
苯妥因钠,戊巴比妥钠为 Sigma公司产品。鹅
绒藤全草,秋季采集于宁夏银川南郊,经我院化学室
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吴玉德教授鉴定为萝雐科鹅绒藤属植物鹅绒藤
CynanchumchineseR.Br。
1.3 仪器
YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪,山东省
医学科学院设备站。
2 方法
2.1 鹅绒藤提取物的制备
2.1.1 鹅绒藤水提物的制备 原料经清洗、晾晒、
粉碎,加入蒸馏水浸泡过夜;加热煮沸,回流2h;放
置3h后抽滤;滤液经减压蒸馏,得黑褐色浸膏。每
克浸膏相当于34g原生药。实验时以生理盐水配
制成所需剂量,冷藏备用。
2.1.2 鹅绒藤氯仿提取物的制备 粉碎后的原料,
加入氯仿,加热回流3h,冷抽滤,滤液经减压蒸馏,
得墨绿色提取物。原料共提取3次,每克提取物相
当于237g原生药。因难溶于水,实验时以4%的
山梨醇甲酯配成不同浓度的混悬液,冷藏备用。
2.2 急性毒性实验
依照文献[7],将小鼠随机分组,每组10只,雌
雄各半;分别腹腔注射(ip)不同剂量的供试药品,以
72h内的死亡只数为指标,统计结果,计算 LD50和
95%可信限[8]。
2.3 中枢神经系统毒性测定
本实验采用转轮法测定供试样品对小鼠的最小
中枢神经系统毒性[3,4]。
2.3.1 小鼠的筛选和训练 随机挑选小鼠,雌雄各
半。旋转仪的转棒直径为30cm,筛选转棒转速为
16r·min。观察10min,剔除掉落3次者。连续训
练3d,每天1次,上午9:00开始,第4天进行实验。
2.3.2 给药方法 阴性对照组分别 ip注射001
mL·g-1生理盐水(NS)或4%的山梨醇甲酯(等容,
下同);阳性对照药苯妥因钠 80mg·kg-1,ip,30
min后测定;鹅绒藤水提物和氯仿提取物各剂量组
分别ip给予。观察指标以转棒转速为16r·min-1,
10min内掉落3次者为中枢神经系统毒性的阳性反
应。
2.4 提取物对正常动物自主活动的影响
2.4.1 小鼠筛选 依文献[5,6],选用体重18~22
g小鼠,雌雄各半。预试训练观察5min内的自主活
动数(先适应2~3min,每次5只同时实验,下同)。
预试结束后,同笼饲养。连续训练3d,每天1次,上
午9:00开始。第4天实验。在3d训练中,以小鼠
的平均自主活动数为5min内(200±21)次为标准,
剔除不合格的小鼠。
2.4.2 自主活动数测定 小鼠随机分组,雌雄各
半。ip025mL生理盐水或4%的山梨醇甲酯作为
对照组。通过预实验,鹅绒藤水提物以 082g·
kg-1(1/12LD50)剂量的实验结果为最大有效剂量,
按1/2等比递减,选择总共 5个剂量(01,021,
041,082g·kg-1)进行实验。氯仿提取物以012
g·kg-1(1/32LD50)剂量的实验结果为最大有效剂
量,分别取其1/5(0024g·kg-1),1/10(001g·
kg-1),1/20(0006g·kg-1)进行实验,各组以ip药
物30min后开始观察5min内的自主活动数。
2.5 对阈下巴比妥钠催眠作用的协同实验
小鼠体重18~22g,随机分组,雌雄各半。依文
献[7],分别ip生理盐水或4%的山梨醇甲酯(025
mL)作为对照,及分别相应剂量的供试样品,30min
后ip阈下催眠剂量戊巴比妥钠(30mg·kg-1,
03%溶液按001mL·g-1体重给药,室温25℃),
以小鼠翻正反射消失为指标,观察鹅绒藤提取物对
阈下戊巴比妥钠催眠作用的影响。
2.6 统计方法
数据资料均按四格表的直接计算概率法处理,
比较显著性差异。LD50及 ED50按 Litchfield法计
算[8]。各组进行组间单因素方差分析比较。
3 结果
3.1 急性毒性实验
鹅绒藤水提物和氯仿提取物的小鼠半数致死量
LD50分别为 991(916~1072)g·kg
-1和 388
(337~446)g·kg-1。
3.2 中枢神经系统毒性实验
鹅绒藤水提物和氯仿提取物在供试剂量范围和
各自的LD50剂量,无中枢神经系统毒性。对照药物
苯妥因钠的阳性率为60%(16只小鼠)。
3.3 对小鼠自主活动的影响
3.3.1 鹅绒藤水提物 在实验剂量范围内,鹅绒藤
水提物对实验小鼠自主活动有剂量依赖性的抑制作
用。结果见表1。
3.3.2 鹅绒藤氯仿提取物 实验剂量范围内,氯仿
提取物对实验小鼠自主活动有剂量依赖性的抑制作
用。结果见表2。
3.4 阈下巴比妥类药物催眠作用的协同实验
鹅绒藤水及氯仿提取物自身无催眠作用,但对
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表1 鹅绒藤水提物对小鼠自主活动的影响
(珋x±s,n=16)
组别 剂量/g·kg-1 自主活动/次
NS - 2057±22
鹅绒藤水提物 010 1764±511)
021 1371±431)
041 713±271)
082 336±211)
注:与NS组比较1)P<005
表2 鹅绒藤氯仿提物对小鼠自主活动的影响
(珋x±s,n=16)
组别 剂量/g·kg-1 自主活动/次
04%山梨醇甲酯 - 2113±13
鹅绒藤氯仿提取物 0006 2084±21
001 1241±361)
0024 902±211)
012 486±161)
注:与04%山梨醇甲酯溶剂组比较1)P<005
阈下戊巴比妥的催眠作用有协同作用。水提取物的
ED50为236(194~287)g·kg
-1,约为1/4LD50
剂量。氯仿提取物的 ED50为075(066~085)g
·kg-1,约为1/5LD50剂量。
4 讨论
作者曾报道了宁夏产鹅绒藤的根、茎正丁醇提
取物有较强的抗MES和抗MET的作用[2]。新近的
研究结果表明,宁夏产鹅绒藤的全草水及氯仿2种
提取物可以对抗不同的急性实验性惊厥模型,药理
作用存在差别。并且,提取系统的溶液极性可能影
响其抗惊厥的药理作用性质。本研究进一步观察了
宁产鹅绒藤对中枢神经系统的影响。结果表明,2
种全草提取物均可抑制正常小鼠的自主活动,以及
增强阈下剂量巴比妥钠的催眠作用。两种提取物无
明显的神经毒作用。提示鹅绒藤全草水及氯仿提取
物均有中枢抑制作用。
[参考文献]
[1] 刑世瑞.宁夏中药资源[M].银川:宁夏人民出版社,1987:
165.
[2] 彭建中,蒋袁絮.鹅绒藤提取物的抗惊厥作用研究[J].中国药
理学会通讯,1996,13(3):26.
[3] 刘菊芳,裴印权,王振东,等.吡咯烷酮类化合物的抗惊厥作用
[J].药学学报,1994,29(3):166.
[4] SwinyardEA,WoodheadJH.Generalprinciples,experimental
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WoodburyDM,PeryJKAntiepilepticDrugs[M].NewYork:
RavenPress,1982:111.
[5] 涂人顺,张国玺,孙斌辉.关于小鼠自主活动规律的研究[J].
中国药理学通报,2002,18(4):464.
[6] 魏凤环,莫志贤,王永刚.灌胃刺激对小鼠自主活动计数的影
响[J].中国药理学通报,2004,20(3):356.
[7] 徐叔云,卞如濂,陈 修.药理学实验方法学[M].北京:人民
卫生出版社,1982.
[8] LitchfieldJT,WilcoxonFA.Asimplifiedmethodofevaluating
doseefectexperiments[J].JPharmacolExpTher,1949,96:99.
HypnoticefectofChinesemateriamedicaCynanchumchineseinmice
PENGXiaodong,YANQianshun,WANGRui,YANGWeidong,PENGJianzhong
(NingxiaMedicalColege,Yinchuan750004,China)
[Abstract] Objective:TostudythecentralpharmacologicalefectofthewaterandchloroformextractcompoundsfromC.chi
neseinmice.Method:Theindependentactivitytestandthehypnoticsynergismtestbysubthresholdhypnoticdosageofpentobarbital
wereemployedtoevaluatethecentralpharmacologicalefectoftheextractcompounds,andtheminimalneurotoxicitywasevaluatedby
therotorodtest.Result:theextractcompoundsexhibitedsignificantdoserelatedinhibitionefectofthespontaneousmotoractivityin
miceafterintraperitonealadministration.Andthetwoextractcompoundspromotedthehypnoticefectbysubthresholdhypnoticdosage
administrationofpentobarbital,andproducedED50valueof236g·kg
-1and075g·kg-1,respectively.Also,bothextractcom
poundsshowednoneurotoxicityintheexperiment.Conclusion:TheextractcompoundsfromC.chineseshowedinhibitionalefecton
CNS.
[Keywords] Cynanchumchinese;independentactivity;hypnoticefect
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