全 文 ：ｅｒａｌｂｌｏｏｄ，ｓｅｒｕｍ，ｏｒｇａｎｉｃｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ，ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｗｅｒｅｎ＇ｔｏｂｖｉｏｕｓｃｈａｎｇｅｓａｆｔｅｒ１ｍｏｎｔｈａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｎｇａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔ
ｏｆｃｒｕｄｅａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄｄｒｕｇｉｎｔｈｒｅｅｄｏｓｅＳｅｒｕｍｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎ，ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｔｏｔａｌ，ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｍａｎｉｆｅｓｔｌｙｗｅｒｅ
ｈｅｉｇｈｔｅｎｅｄａｎｄｓｏｍｅａｎｉｍａｌｓ＇ｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｓ，ｎｅｐｈｒｉｃｔｕｂｕｌｅｓａｎｄｍｕｃｏｓａｅｍｅｒｇｅｄｄｉｆｅｒｅｎｔｌｙｄａｍａｇｅａｔｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｂｙｇｉｖｉｎｇｃｒｕｄｅ
ｈｉｇｈｄｏｓｅａｆｔｅｒ２ｍｏｎｔｈｓＡｂｏｖｅｏｒｇａｎｓｅｍｅｒｇｅｄｄｉｆｅｒｅｎｔｄａｍａｇｅｉｎｃｒｕｄｅｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄｈｉｇｈｄｏｓｅａｆｔｅｒ３ｍｏｎｔｈｓ
ａｎｄｓｅｒｕｍｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎｍａｎｉｆｅｓｔｌｙｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆｌｉｖｅｒ，ｋｉｄｎｅｙａｎｄｇａｓｔｅｒｍａｎｉｆｅｓｔｌｙｗｅｒｅ
ｈｅｉｇｈｔｅｎｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｉｄｅｎｔｉｃａｌｄｏｓｅｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｃｒｕｄｅｏｎｅＡｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔａｎｄａｌｃｏｈｏｌｉｃ
ｅｘｔｒａｃｔｏｆｃｒｕｄｅａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＲａｄｉｘＡｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃｅｃｏｕｌｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｎｏｒｍａｌａｎｄｒｅｖｕｌｓｉｖｅｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｅｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｏｔｉｌｉｔｙｂｙ
ｎｅｏｓｔｉｇｍｉｎｅｏｆｍｉｃｅ，ｒｅｌｉｅｖｅｐａｉｎｉｎｍｏｕｓｅ，ｓｔｒｅｔｃｈｉｎｇａｎｄｈｅａｔｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｅｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅｉｎｄｕｃｍｏｕｓｅ，ａｕｒｉｃｌｅ
ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃａｃｔｉｏｎｗａｓｎ＇ｔｏｂｖｉｏｕｓｄｉｆｅｒｅｎｃｅｉｎｓａｍｅｄｏｓｅｏｆｃｒｕｄｅｐｒｏｄｕｃｔａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄｏｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｃｕｔｅ
ｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｃｈｒｏｎｉｃａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｔｏｘｉｃｉｔｙａｒｅｓｔｅｐｐｅｄｄｏｗｎａｆｔｅｒｇｉｖｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｅｄＲａｄｉｘＡｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃｅ，ｂｕｔｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｅｆｅｃｔｗａｓｎ
＇ｔｌｏｗｅｒＩｎｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｅｆｅｃｔ，ａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｃａｎ′ｔｃｏｍｐａｒｅｗｉｔｈａｌｃｏｈｏｌｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｎｓａｍｅｄｏｓｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃｒｕｄｅＲａｄｉｘＡｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃｅ；ｐｒｏｃｅｓｓｅｄＲａｄｉｘＡｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃｅ；ｅｌｉｍｉｎａｔｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ；ｒｅｌｉｅｖｅｐａｉｎ；ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙ；
ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｔｏｘｉｃｉｔｙ
［责任编辑 古云侠］
漏芦多糖对小鼠激发态免疫功能的影响及其可能机制
李发胜１，杨 光１，咸 丰２，刘 辉１
（１．大连医科大学 检验医学院，辽宁 大连１１６０２７；
２．大连市沈阳军区第一疗养院，辽宁 大连 １１６０１３）
［摘要］ 目的：探讨漏芦多糖对小鼠免疫反应的影响及作用机制。方法：分别用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）和卵清蛋
白为抗原给小鼠注射后，将漏芦多糖分为３个剂量（５０，１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）灌服小鼠７ｄ，加强免疫后，检测相
应抗体生成水平和血清中白细胞介素２（ＩＬ２），γ干扰素（ＩＦＮγ）生成水平。结果：中剂量给药组 ＳＲＢＣ抗体生成
水平和卵清抗体生成水平，ＩＬ２，ＩＦＮγ激发水平均显著高于对照组（Ｐ＜００５）。结论：漏芦多糖对正常小鼠机体免
疫有增强作用。
［关键词］ 漏芦多糖；免疫；ＩＬ２；ＩＦＮγ
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０５０４３３０３
［收稿日期］ ２００５０７１０
［基金项目］ 辽宁省教育厅项目（２０２２００９５３）
［通讯作者］ 刘辉，Ｔｅｌ：（０４１１）８４７２００３０，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｈｕｉ６０＠
ｓｉｎａ．ｃｏｍ
漏芦为菊科植物 Ｒｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍ（Ｌ．）ＤＣ
漏芦的干燥根，始载于《神农本草经》，列为上品。
味苦、咸，性寒，入胃，大肠经，具有清热解毒、消痈排
脓、通乳的功效。药理研究表明，漏芦提取液具有较
好的抗动脉粥样硬化［１］、抗缺氧和益智作用［２，３］。
为深入探讨漏芦提取液中活性成分的作用，作者从
漏芦中提取出漏芦多糖，并对灌服漏芦多糖的小鼠
免疫应答水平进行了检测，得到了较为理想的结果。
１ 材料
１．１ 药材
漏芦购于大连国药大药房，经大连药品检验所
郭月秋主任药师鉴定为正品。漏芦多糖提取参照文
献［４］进行，主要过程如下：称取已干燥的漏芦２５０
ｇ，加入适量８０％乙醇过夜，回流提取３ｈ脱脂，药渣
挥尽乙醇后，沸水提取２次，每次２ｈ，合并提取液，
浓缩至 ２００ｍＬ，加 ９５％乙醇使醇体积分数达到
８０％，于４℃冰箱中醇沉过夜，抽滤，滤渣依次用无
水乙醇、丙酮洗涤，得到多糖。将多糖溶于水，用三
氯醋酸除蛋白，反复进行 ３次至无蛋白，流水透析
后，蒸发浓缩至２００ｍＬ，加９５％乙醇使醇体积分数
达到８０％，于４℃冰箱中醇沉过夜，抽滤，滤渣依次
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第３２卷第５期
２００７年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ５
Ｍａｒｃｈ，２００７
用无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，即得粗漏芦多糖，
得率为５６％。
１．２ 动物
昆明种小鼠，雄性，体重１８～２２ｇ，由大连医科
大学动物中心提供，合格证号 ＳＣＸＫ（辽）２００２
０００２。
１．３ 抗原制备
２０％绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）抗原制备：将抗凝绵
羊血用生理盐水洗涤３次，取压积 ＳＲＢＣ２０ｍＬ，加
生理盐水至１００ｍＬ；卵清蛋白抗原的制备：取市售
鸡蛋，将壳击碎后取卵清１∶５倍稀释备用。
２ 方法
２．１ 分组
小鼠随机分为８组，每组１２只，分别为漏芦多
糖高（１，５组）、中（２，６组）、低（３，７组）剂量组及正
常对照组（４，８组）。给药组剂量为５０，１００，２００ｍｇ
·ｋｇ－１，正常对照组为生理盐水。进行第１次免疫，
其中１，２，３，４组注射２０％ＳＲＢＣ抗原，５，６，７，８组注
射卵清蛋白抗原，剂量为每只鼠０２ｍＬ，注射部位
为腹股沟。注射抗原后的第３天开始给药，１，２，３，
５，６，７组小鼠灌胃给予漏芦多糖，４，８组小鼠灌胃给
予生理盐水，每只０５ｍＬ，各组均每天１次，连续７
ｄ，第８天，进行第２次加强免疫（方法同第１次免
疫），继续灌胃给药，１周后，小鼠断头采血，分离血
清备检。
２．２ 抗体效价测定
２．２．１ ＳＲＢＣ抗体测定 采用定量微量血凝法。
具体操作按文献［５］进行。于微量血凝板小孔内滴
加１滴生理盐水，用稀释棒蘸取血清进行倍比稀释
（至少设６个稀释度）设对照孔，加１％ＳＲＢＣ１滴，
放振荡器上振荡１ｍｉｎ，放室温１～２ｈ后观察结果，
将浓度转换成对数进行分析。
２．２．２ 卵清蛋白抗体测定 采用酶联免疫吸附试
验（ＥＬＩＳＡ），具体操作按文献［５］进行。以卵清蛋白
包被酶标板，测定相应抗体，以吸光度值（Ａ）表示抗
体水平。
２．３ γ干扰素（ＩＦＮγ）和白细胞介素２（ＩＬ２）测定
采用小鼠ＩＦＮγＥＬＩＳＡ试剂盒（深圳晶美生物工
程有限公司）和ＩＬ２ＥＬＩＳＡ试剂盒（ＴＰＩＩｎＣ，ＵＳ）测
定，所有操作均严格按试剂盒使用说明书进行。待测
血清作１∶１０稀释。ＩＦＮγ和ＩＬ２检测结果经酶标仪
４５０ｎｍ波长测定Ａ值，据标准品Ａ值绘制标准曲线，
以μｇ·Ｌ－１为单位，计算其含量。
２．４ 数据处理
数据均以 珋ｘ±ｓ表示，采用 ＳＰＳＳ统计软件进行
方差分析。
３ 结果
３．１ 漏芦多糖对小鼠 ＳＲＢＣ和卵清蛋白抗体生成
水平的影响
与对照组小鼠比较，中、高剂量给药组 ＳＲＢＣ抗
体效价明显增高，有显著性差异（Ｐ＜００５）；与对照
组小鼠比较，中剂量给药组卵清蛋白抗体效价明显增
高，有显著性差异（Ｐ＜００５），低剂量给药组卵清蛋
白抗体效价增高，有显著性差异（Ｐ＜００１），见表１。
表１ 漏芦多糖对小鼠ＳＲＢＣ和卵清蛋白抗体
生成水平的影响（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ｎ Ａ
对照（ＳＲＢＣ） － １２ １２０±０２９
漏芦多糖（ＳＲＢＣ） ５０ １２ １３５±０２４
１００ １２ １７０±０４９１）
２００ １１ ２２０±０３８１）
对照组（卵清蛋白） － １２ １２８±０３０
漏芦多糖（卵清蛋白） ５０ １１ １５３±０１６２）
１００ １２ ２１９±０８１１）
２００ １０ ２７５±１０３
注：与对照组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
３．２ 漏芦多糖对小鼠细胞因子 ＩＦＮγ和 ＩＬ２生成
水平的影响
通过漏芦多糖对小鼠ＳＲＢＣ和卵清蛋白抗体生
成水平的影响结果分析，中剂量给药组对小鼠的免
疫调节作用二者全增强，因此对中剂量给药组（ＳＲ
ＢＣ）小鼠 ＩＦＮγ，ＩＬ２水平进行检测。与对照组比
较，给药组 ＩＦＮγ，ＩＬ２的含量均明显增高，有显著
性差异（Ｐ＜００５），见表２。
表２ 漏芦多糖对小鼠细胞因子ＩＦＮγ，ＩＬ２生成
水平的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１２） μｇ·Ｌ－１
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ＩＦＮγ ＩＬ２
对照（ＳＲＢＣ） － １０９±０２６ ０７４±０１３
漏芦多糖（ＳＲＢＣ） １００ ２０２±０２７１） ２２５±０６３１）
注：与对照组比较１）Ｐ＜００５
４ 讨论
漏芦具有广泛的药理作用，其抗动脉粥样硬化、
抗缺氧和益智作用已被较多的研究所证实，但是关
于免疫调节的作用和调节途径及机制尚有许多未解
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决的问题，特别是其是否提高机体对某些特异性抗
原应答的免疫水平以及有关对细胞因子的影响尚没
有研究报告。作者采用颗粒性抗原（ＳＲＢＣ）和可溶
性抗原（卵清蛋白）分别激发小鼠的免疫系统为基
础免疫，然后用漏芦多糖灌服小鼠，再用相同抗原激
发机体免疫系统。发现灌服漏芦多糖的小鼠免疫应
答水平均高于对照组。说明口服漏芦多糖可以增强
机体免疫应答，也说明漏芦多糖是调节免疫应答水
平的重要物质。
同时对小鼠受抗原激发后，ＩＬ２，ＩＦＮγ水平进
行检测。一般认为，ＩＬ２是一种广谱的细胞因子，对
调节整体的免疫水平（体液免疫、细胞免疫）均具有
重要的调节作用；而ＩＦＮγ主要由Ｔ细胞产生，是调
节细胞免疫的重要因子［６］。本实验结果显示２种细
胞因子均明显升高，提示灌服漏芦多糖小鼠的细胞
免疫水平可能有相应提高。
本研究未采用免疫低下小鼠模型，即得到漏芦
多糖提高小鼠免疫水平的结果，说明漏芦多糖具有
较强的免疫调节作用，并且可以作为免疫治疗药物
使用，漏芦多糖具有较大的潜在应用价值，值得深入
研究。
［参考文献］
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研究［Ｊ］．中华医学杂志，１９８５，６５（１２）：７５０．
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［Ｊ］．沈阳药学院学报，１９９２，９（１）：７３．
［３］ 邹立波，于立阳，董爱梅，等．祁州漏芦乙醇提取物益智作用的
实验研究［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００３，２０（２）：１３９．
［４］ 方积年．多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定［Ｊ］．药
学通报，１９８１，１９（１０）：６２２．
［５］ 刘 辉．研究生免疫学教程［Ｍ］．２版．大连：大连出版社，
２０００：３０６．
［６］ ＣｕｒｉｅｒＮＬ，ＬｅｊｔｅｎｙｉＤ，ＭｉｌｅｒＳＣ．Ｅｆｅｃｔｏｖｅｒｔｉｍｅｏｆｉｎｖｉｖｏ
ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎｏｎｉｍｍｕｎｅ
ａｎｄｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌｉｎｅａｇｅｓｉｎｍｕｒｉｎｅｓｐｌｅｅｎａｎｄｂｏｎｅｍａｒｏｗ
［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，１０（２３）：１４５．
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｎｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆ
ｍｉｃｅａｆｔｅｒａｎｔｉｇｅｎｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ＬＩＦａｓｈｅｎｇ１，ＹＡＮＧＧｕａｎｇ１，ＸＩＡＮＦｅｎｇ２，ＬＩＵＨｕｉ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＤａｌｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０２７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｈｅｎｙａｎｇｔｈｅＦｉｒｓｔＰＬＡＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｄａｌｉａｎ１１６０１３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆＲｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｎｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｎｏｒｍａｌｍｉｃｅａｎｄ
ｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＳＲＢＣａｎｄｏｖａｌｂｕｍｉｎｗｅｒｅｅｍｐｌｏｙｅｄａｓａｎｔｉｇｅｎｓｔｏｂｅｉｎｊｅｃｔｅｄｔｏｍｉｃｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｒｅｅｄｏｓｅｓ
ｏｆＲ．ｕｎｉｆｏｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（５０，１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）ｗｅｒｅｇｉｖｅｎｏｒａｌｙｆｏｒｓｅｖｅｎｄａｙｓ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｒｙｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ，
ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｕｍＩＬ２，ＩＦＮγｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ａｎ
ｔｉＳＲＢＣａｎｄａｎｔｉｏｖａｌｂｕｍｉｎ）ａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｓ（ＩＬ２ａｎｄＩＦＮγ）ｉｎｍｅｄｉａｎｄｏｓｅｇｒｏｕｐｏｆＲ．ｕｎｉｆｏｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗｅｒｅａｌｓｉｇｎｉｆｉ
ｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｒ．ｕｎｉｆｏｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｕｌｄｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎ
ｎｏｒｍａｌｍｉｃｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｒｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｏｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｉｍｍｕｎｉｔｙ；ＩＬ２；ＩＦＮγ
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