全 文 ：ＨＰＬＣ测定不同产地决明子中蒽醌类成分
张 毅１，黄小平１，翁代群１，杨大坚１，２
（１．重庆市中药研究院，重庆 ４０００６５；
２．香港理工大学 现代中药研究所，深圳 ５１８０５７）
［摘要］ 目的：测定不同产地决明子中蒽醌类成分的含量。方法：以ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３为色谱柱，乙腈０１％磷
酸水溶液为流动相，梯度流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２７８ｎｍ，测定决明子药材中７个蒽醌类化学成分的含量。
结果：各类成分的回收率均在９５％～１０５％，含量因产地不同差异较大。结论：ＨＰＬＣ梯度洗脱法测定决明子药材中
蒽醌类成分，方法简便、准确，为决明子质量评价和标准制定提供方法。
［关键词］ 决明子；ＨＰＬＣ；蒽醌；钝叶素；橙黄决明素
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２３２７９７０３
［收稿日期］ ２００８０１０２
［通讯作者］ 杨大坚，Ｔｅｌ：（０２３）８９０２９０２５，Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｇｄａｊｉ＠
ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
决明子为豆科植物决明 ＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａＬ．或
小决明Ｃ．ｔｏｒａＬ．的干燥成熟种子，其性微寒，味甘、
苦、咸，归肝、肾、大肠经，具有清肝明目、润肠通便之
功效，是国家卫生部公布的６９种药食同源的物种之
一。现代药理学研究表明决明子具有较好的降血
脂、抗动脉粥样硬化作用，还具有较好降压、抑菌、增
强机体免疫力和抗衰老等多方面作用［１］。化学成
分研究表明，决明子中主要含有蒽醌类化合物［２］，
以结合蒽醌和游离蒽醌形式存在。近年来一些测定
其蒽醌类化合物的分析方法，其分离效果不佳，化合
物成分定性困难。本研究采用高效液相色谱测定决
明子蒽醌类化合物方便、准确，为决明子的质量评价
和标准制定提供依据。
１ 仪器与试药
ＷａｔｅｒｓＴＭ２６９５－９９６ＨＰＬＣ仪，ＥｍｐｏｗｅｒＴＭ色谱
数据处理系统。ＳｈｉｍａｄｚｕＬｉｂｒｏｒＡＥＧ－４５ＳＭ型１／
１０万电子天平；ＳｈｉｍａｄｚｕＡＷ２２０型 １／１万电子天
平。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
决明子药材分别采集于湖北宜春、安徽亳州、陕
西（汉阴、西安）、深圳。望江南、伪品决明采集于深
圳。所有药材均由杨大坚研究员鉴定。
对照品大黄素甲醚（ｐｈｙｓｃｉｏｎ，批号７５８２００００６）、
大黄酚（ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ，批号 ０７９６２００２０８）、大黄素
（ｅｍｏｄｉｎ，批号 １１０７５６２００１０）、大黄酸（ｒｈｅｉｎ，批号
０７５７２００２０６）、芦荟大黄素（ａｌｏｅｅｍｏｄｉｎ，批号１１０７９５
２００５０４）均购自中国药品生物制品检定所。钝叶素
（ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｎ）、橙黄决明素（ａｕｒａｎｔｉｏｏｂｔｕｓｉｎ）为自制，
经ＨＰＬＣ归一化法检测纯度≥９９％。
２ 方法及结果
２．１ 色谱条件 ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈０１％磷酸水溶液，线
性梯度为 ０（４０％乙腈）～５ｍｉｎ（５０％乙腈）～２０
ｍｉｎ（１００％乙腈）～２５ｍｉｎ（１００％乙腈），流速 ０８
ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２７８ｎｍ；柱温２５℃。在此色
谱条件下，大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、钝叶素、大
黄酸、芦荟大黄素、橙黄决明素等７个蒽醌类成分的
理论塔板数均大于１万，分离度均大于２。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取６０℃下真空干
燥至恒重的对照品大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、钝
叶素、大黄酸、芦荟大黄素、橙黄决明素适量，分别用
醋酸乙酯甲醇（１∶２）超声溶解于１０ｍＬ量瓶中，使
每１ｍＬ含大黄素甲醚０１０９ｍｇ、大黄酚０１１９ｍｇ、
大黄素０１１２ｍｇ、钝叶素 ０１３５ｍｇ、大黄酸 ００９５
ｍｇ、芦荟大黄素０１５５ｍｇ、橙黄决明素０１４２ｍｇ，为
对照品储备液。
分别精密吸取上述各对照品储备液大黄素甲醚
１０ｍＬ、大黄酚１０ｍＬ、大黄素１０ｍＬ、钝叶素２５
ｍＬ、大黄酸１０ｍＬ、芦荟大黄素０５ｍＬ、橙黄素８０
ｍＬ于２５ｍＬ量瓶中，加醋酸乙酯甲醇（１∶２）稀释至
刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 游离蒽醌类成分的供试
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中 国 中 药 杂 志
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００８
品溶液：取决明子药材细粉约０５ｇ，精密称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇５０ｍＬ，称定质量，置水
浴上加热回流３０ｍｉｎ，放冷，再称定质量，用甲醇补
足失重，摇匀，滤过，精密吸取２５ｍＬ续滤液，至１００
ｍＬ烧瓶中，减压回收甲醇，残渣用醋酸乙酯甲醇
（１∶２）溶解至１０ｍＬ量瓶中并定容，摇匀，即得游离
蒽醌类成分的供试品溶液。
总蒽醌类成分的供试品溶液照“游离蒽醌类成
分的供试品溶液”的制备方法制备，精密吸取２５ｍＬ
续滤液，蒸干，加１０％盐酸溶液３０ｍＬ，置水浴中加
热水解１ｈ，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取４次，每
次３０ｍＬ，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用
醋酸乙酯甲醇（１∶２）溶解至１０ｍＬ量瓶中并定容，
摇匀，滤过，即得总蒽醌类成分的供试品溶液。
２．４ 标准曲线的制定 精密吸取混合对照品溶液
０５，１０，２０，４０，８０ｍＬ分别置于１０ｍＬ量瓶中，
加甲醇至刻度。分别用０４５μｍ滤膜过滤，各吸取
２０μＬ注入ＨＰＬＣ仪，记录色谱峰，见图１。以各成
分的峰面积平均值为纵坐标（Ｙ），其对应进样量为
横坐标（Ｘ），绘制回归曲线，得其线性方程和相关系
数，结果见表１。
１．橙黄决明素；２．大黄酸；３．芦荟大黄素；４．钝叶素；５．大黄素；
６．大黄酚；７．大黄素（图２同）
图１ ７个对照品的色谱图
表１ ７个蒽醌类对照品的线性关系
对照品 回归方程 ｒ 线性范围／μｇ
大黄素甲醚 Ｙ＝８６３９６Ｘ－８０４ ０９９９６ ４３６×１０－３～８７２×１０－２
大黄酚 Ｙ＝６３６９９Ｘ＋８２０２ ０９９９９ ４７６×１０－３～９５２×１０－２
大黄素 Ｙ＝１０７０９２Ｘ－１８２１ ０９９９９ ４４８×１０－３～８９６×１０－２
钝叶素 Ｙ＝１１７１４４Ｘ－５８７８ ０９９９９ １４２×１０－２～２８４×１０－１
大黄酸 Ｙ＝６３６２１Ｘ＋１０３８ ０９９９２ ３８×１０－３～７６×１０－２
芦荟大黄素 Ｙ＝６５３３８Ｘ＋４７３ ０９９９９ ３１×１０－６～６２×１０－２
橙黄决明素 Ｙ＝１０２９８０７４１Ｘ＋５３３７１ ０９９９８ ４３２～８６４
２．５ 精密度试验 吸取对照品溶液，连续进样 ６
次，每次进样１０μＬ，测定对照品的峰面积，对照品
大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、钝叶素、大黄酸、芦荟
大黄素、橙黄决明素的峰面积 ＲＳＤ分别是 １７％，
２２％，２７％，０６４％，０３５％，０４３％，０３６％，仪器
精密度良好。
２．６ 稳定性试验 吸取上述对照品溶液，分别在
０，２，４，６，８，１２ｈ进样，每次进样１０μＬ，测得各对照
品峰面积，大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、钝叶素、大
黄酸、芦荟大黄素、橙黄决明素等７个对照品的峰面
积ＲＳＤ分别为 １０％，１６％，３２％，２５％，２２％，
３６％，２４％，表明样品在１２ｈ内稳定。
２．７ 重复性试验 取供试品６份，每份各约０５ｇ，
精密称定，按２３方法制备样品，按照２．１项下色谱
条件进行测定，大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、钝叶
素、橙黄决明素含量的 ＲＳＤ分别是０８７％，１４％，
１５％，１４％，１２％，大黄酸、芦荟大黄素在此样品
中未检出。
２．８ 回收率试验 采用加样回收率方法。取供试
品（产地湖北）６份，每份各约０２５ｇ，精密称定，按
游离供试品溶液制备方法制备样品，进样 ＨＰＬＣ系
统，测得各成分的含量，并计算各成分的加样回收
率，均在９５％～１０５％，结果见表２。
表２ ７个蒽醌类对照品加样回收率（ｎ＝６）
化合物
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
ＲＳＤ
／％
大黄素甲醚 ０．０２２７ ００２４２ ００４６９ ９６２０ １．６
大黄酚 ０．０３８６ ００４０６ ００７９２ ９８０２ １．５
大黄素 ０．０１１９ ０００９０ ００２０９ ９８８８ ２．２
钝叶素 ０．０１４７ ０１４８０ ０２６２７ １０２８０ ３．４
大黄酸 － ００１０２ ００１０１ ９９３４ ０．４７
芦荟大黄素 － ００４４０ ００４４０ ９９８８ １．８
橙黄决明素 ０．３０８１ ０３０４０ ０６１２１ １０４１６ ２．７
２．９ 样品含量测定 取各产地的药材细粉和望江
南细粉各０５ｇ，按照２３方法制备供试品溶液。精
密吸取对照品溶液 １０μＬ和药材供试品溶液 ２０
μＬ，注入高效液相色谱仪，见图２。计算样品中各游
离蒽醌类成分的含量和游离总蒽醌类成分的含量，
见表３，４。伪品决明子望江南没有检测出上述７个
蒽醌类化合物。
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图２ 决明子药材（湖北）样品液相色谱图
表３ 游离蒽醌类成分的质量分数 ｍｇ·ｇ－１
产地 大黄素甲醚 大黄酚 大黄素 钝叶素 橙黄决明素
湖北 ００４７２ ０１９０３ ００４９９ ０４３７３ １０８６６
安徽 ００１９２ ００８６４ ００４１８ ０４２５９ １４３２７
河南 ００２９０ ００３８２ ００４７２ ０１３７２ ０４９９３
汉阳 ００１２０ ００１４０ ００４２１ ０１４２７ ０４１９５
西安 ００３２３ ００４９４ ０１３１４ ０１５０８ ０２７６５
深圳 ００１６３ ００１４２ ００９３５ ０１７０１ ０９１９３
注：大黄酸和芦荟大黄素未检出（表４同）
表４ 总蒽醌类成分的质量分数 ｍｇ·ｇ－１
产地 大黄素甲醚 大黄酚 大黄素 钝叶素 橙黄决明素
湖北 １３７７３ ４８５１５ ０５８５８ ０７２０６ １９９２２
安徽 ０８２７１ ３２２４１ ０３８６５ ０６１１９ ２１７４８
河南 ０６０２４ ３５７９９ ０４３７１ ０５３９６ １４９４１
汉阳 ０２８０９ ２４０７９ ０３３６９ ０７９２７ １９７６５
西安 ０３９４１ ３８５８６ ０５０９８ ０６１４９ ０９４４１
深圳 ０５３６９ １８５５６ ０６８７８ ０４２６１ １６６６６
３ 讨论
共有检测波长确定，除钝叶素在２２５，２７５ｎｍ处
有最大吸收外，其他６个化合物在２２５，２５８，２８５ｎｍ
处有较好的吸收；在２２５ｎｍ波长时，溶剂峰对橙黄
决明素造成干扰。采用２７８ｎｍ为检测波长时，７个
蒽醌类成分达基线分离，且溶剂峰对各色谱峰无干
扰。
在同一色谱条件下，经对７个化合物的混合对
照品多次、反复检测，各化合物的保留时间ｔＲ相差较
小，ＲＳＤ均在２％以内；同时也对多个产地、多个批
次药材样品检测，没有发现芦荟大黄素和大黄酸的
色谱峰。关于药材中芦荟大黄素和大黄酸２个成分
有无或含量过低的问题，还须进一步对决明子的化
学成分进行研究。
含量分析结果表明，各产地决明子中蒽醌类成
分的含量差异较大，伪品决明子———望江南不适药
用。对橙黄决明素成分讲，药材中无论游离还是总
的橙黄决明素，安徽产药材含量最高；对钝叶素成分
讲，药材中游离钝叶素，湖北和安微产药材含量最
高，但相差不大；药材中总的钝叶素只有陕西汉阳产
药材含量最高；对同一种药材，某些成分呈结合态和
游离态因产地不同，其比例也不同；决明子药材结合
大黄酚含量较大，这也说明以大黄酚指标作为决明
子的含量测定时，对药材要进行水解。
［参考文献］
［１］ 肖崇厚．中药化学［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：
２１９．
［２］ 宋立人，洪 恂，丁绪亮，等．现代中药学大辞典［Ｍ］．北京：人
民卫生出版社，２００１：８８７．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｉｎＳｅｍｅｎＣａｓｓｉａｅｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｒｅｇｉｏｎｓ
ｂｙＨＰＬＣ
ＺＨＡＮＧＹｉ１，ＨＵＡＮＧＸｉａｏｐｉｎｇ１，ＷＥＮＧＤａｉｑｕｎ１，ＹＡＮＧＤａｊｉａｎ１，２
（１．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｃｉａ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００６５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｏｄｅｒｎＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｏｎｇＫｏｎｇＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８００７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ７ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｉｎＳｅｍｅｎＣａｓｓｉａｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｖｅｌ
ｏｐｅｄ，ｗｉｔｈＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ３ｃｏｌｕｍｎ，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄ０１％ Ｈ３ＰＯ４ｓｏｌｕｔｉｏｎａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅ
ｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２７８ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０８ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆａｌ７ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ９５％
１０５％．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｉｎｃｒｕｄｅｄｒｕｇｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｉｏｎｗｅｒｅｄｉｆｅｒｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓ
ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｓｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆＳｅｍｅｎＣａｓｓｉａｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＳｅｍｅｎＣａｓｓｉａｅ；ＨＰＬＣ；ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ；ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉｎ；ａｕｒａｎｔｉｏｏｂｔｕｓｉｎ
［责任编辑 王亚君］
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