全 文 ：Εϖαλυατιον οφ γρεεν τανγερινε πεελ προχεσσεδ ωιτη ϖινεγαρ
υσινγ ΗΠΛΧ φινγερπριντ τεχηνιθυε
• ≠¤²2¯¬u o ≠²±ª2¬¬±t o ≥«∏2¬¨t o ±¬2º ¬¨t
(t1 Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα , Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsszss , Χηινα ;
u1 Τηε Ταιψυαν Σεχονδ Πεοπλε. σ Ηοσπιταλ, Ταιψυαν svsssu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³ ¤± °≤ ° ·¨«²§©²µ§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©©¬±ª¨µ³µ¬±·¶¤±§ √¨¤¯∏¤·¨ ªµ¨ ±¨ ·¤±ª¨µ¬±¨ ³¨ ¨¯k×°l ³µ²2
¦¨¶¶¨§ º¬·«√¬±¨ ª¤µ1 Μετηοδ : ׫¨ ¶¤°³¯ ¶¨º µ¨¨ ¬¨·µ¤¦·¨§º¬·«xs h ·¨«¤±²¯ ∏¶¬±ª∏¯·µ¤¶²±¬¦¥¤·«¤±§¤±¤¯¼½¨ §²± ¤ ≤«µ²°¤¶¬¯ ≤t{ ¦²¯∏°± 2¨
∏¯·¨§º¬·« ° ·¨«¤±²¯ ¤±§º¤·¨µ¦²±·¤¬±¬±ªs1u h ¤¦¨·¬¦¤¦¬§¬± ¤ ¬¯±¨ ¤µªµ¤§¬¨±·³µ²ªµ¤°1 ׫¨ ©¯²º µ¤·¨ º¤¶t1s °#°¬±p t o¤±§ §¨·¨¦·¬²±
º¤√¨¯ ±¨ª·« º¤¶¶¨·¤·u{s ±°1 Ρεσυλτ : ׫¨ ≥⁄ √¤¯∏¨¶²©µ¨ ¤¯·¬√¨µ¨·¨±·¬²±·¬° ¶¨¤±§³¨ ¤®¤µ¨¤¶²© °¤¬± ³¨ ¤®¶º µ¨¨ ¤¯¯¯¨ ¶¶·«¤± x h 1 ׫¨
©¬±ª¨µ³µ¬±·¶²© ¨ ¬´±ª³¬¤±§≥¬«∏¤´¬±ª³¬º µ¨¨ §¬©©¨µ¨±·1 ׫¨ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¶²©·«¨ ³µ²¦¨¶¶¨§¤±§·«¨ ∏±³µ²¦¨¶¶¨§º µ¨¨ ¤¯°²¶·¶¤°¨o¤±§·«¨ ©¬±2
ª¨µ³µ¬±·§¬©©¨µ¨±¦¨¶¤°²±ª·«¨ §¬©©¨µ¨±·¥¤·¦«¨¶³µ²¦¨¶¶¨§º¬·«·«¨ ¶¤°¨·¨¦«±²¯²ª¼©µ²°·«¨ ¶¤°¨∏±³µ²¦¨¶¶¨§×° º µ¨¨ ±²·²¥√¬²∏¶1 Χονχλυ2
σιον : ׫¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²©³µ²¦¨¶¶¬±ªº¬·«√¬±¨ ª¤µ²± xs h ·¨«¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¶º µ¨¨ ±²·¨ √¬§¨±·o¤±§·«¨ ·¨¦«±²¯²ª¬¦¤¯ ³µ²¶¶º¤¶¶·¤¥¯ 1¨ ·º¤¶©²∏±§
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[ Κεψ ωορδσ] µ¨ ±¨ פ±ª¨µ¬±¨ °¨ ¨¯ ³µ²¦¨¶¶¨§º¬·«√¬±¨ ª¤µ~ ¨ ¬´±ª³¬~≥¬«∏¤´¬±ª³¬~©¬±ª¨µ³µ¬±·¶~ °≤
≈责任编辑 刘
≈收稿日期 ussx2st2us
≈通讯作者 3 许明旺 oר¯ }ksuzl{yz|vswy o∞2°¤¬¯ }¯¬ª¨ ±¯∏²¬¬
¼¤«²²1¦²°1¦±
°≤测定复方龟鹿颗粒中甜菜碱的含量
许明旺t 3 o袁秀枝t o刘焱文u o孙绪举t
kt1 华中科技大学 同济医学院 附属梨园医院 o湖北 武汉 wvsszz ~
u1 湖北中医学院 o湖北 武汉 wvssytl
≈摘要 目的 }建立测定复方龟鹿颗粒中甜菜碱含量的方法 ∀方法 }采用 °≤ 柱前衍生化来测定复方中的甜
菜碱 o¶«¬°2³¤¦® ≤≤2⁄≥色谱柱ky1s °° ≅ txs °° ox Λ°l o流动相乙腈2水kvxΒyx o其中含有 s1t °²¯#pt¤≤¯ wl o流
速 t °#°¬±p t o检测波长 uxw ±° ∀结果 }甜菜碱在 s1s|s ∗ s1x{x Λª线性关系良好kρ s1||| zl o平均回收率 |{1w h o
≥⁄u1x h k ν xl ∀结论 }本法准确可靠 o可用于复方龟鹿颗粒的质量控制 ∀
≈关键词 复方龟鹿颗粒 ~甜菜碱 ~ °≤
≈中图分类号 u{v ~ u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylsy2swyu2sv
复方龟鹿颗粒为四类新药 o是由龟甲 !鹿角 !枸
杞子和党参等组成的复方制剂 o方中枸杞子的用量
是党参的 u倍 o具有益精生血之功 o临床用其防治衰
老 !增强免疫力 o而甜菜碱是它的主要有效成分之
一 ∀有文献报道用薄层扫描法≈t !比色法≈u 测定其
含量 o也有用气相色谱法≈v 对其酯的降级产物进行
测定 ∀国外学者采用核磁共振k l≈w 对甜菜碱进
行含量测定 ∀本研究采用 °≤ 测定甜菜碱衍生物
的含量来控制该制剂的质量 o结果满意 ∀
1 仪器与试药
≤ p ts⁄高效液相色谱仪k日本岛津l o⁄× p
tss型电子分析天平k上海天平仪器厂l o超声波清
洗器k上海超声波仪器厂l o{s p t电动离心机k上海
手术器械厂l ∀对照品甜菜碱k中国药品生物制品检
#uyw#
第 vt卷第 y期
ussy年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ y
¤µ¦«oussy
定所l ot{2冠醚2y与 u ow2溴代苯甲酰甲基溴k≤ ≥
≤≥公司l ∀所用试剂为分析纯 !色谱纯 ∀
2 方法与结果
211 色谱条件
≥«¬°2³¤¦® ≤≤2⁄≥ky1s °° ≅ txs °° ox Λ°l o流
动相水2乙腈kyxΒvx o其中含有 s1t °²¯#pt¤≤¯ wl o
流速 t °#°¬±pt o检测波长 uxw ±° o灵敏度 s1s{
ƒ≥ o柱温 vs ε o理论塔板数按甜菜碱峰计算不
低于 u sss ∀
212 溶液的制备
21211 衍生试液的配制 精密称取 t{2冠醚2y
tt1zv °ª及 u1w2溴代苯甲酰甲基溴 ut|1wz °ª溶于
xs °乙腈中 o混匀作为衍生试液 o备用 ∀
21212 s1t °²¯#pt磷酸二氢钾溶液的配制 称取
磷酸二氢钾 s1vw ªo加水至 ux °溶解 o摇匀即可 ∀
21213 供试品溶液的制备 取复方龟鹿颗粒适量 o
研细 o精密称取约 v1w ªk相当于枸杞子 s1z ªl置具
塞锥形瓶中 o精密加入 {s h甲醇 xs °o密塞 o称重 o
超声处理 vs °¬±o放至室温 o用甲醇补足减失量 o摇
匀 o过滤 ∀精密吸取续滤液 ts °o水浴浓缩至干 o
过 ztz 3 k≤¯ p型l强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂柱
ku ¦° ≅ ts ¦°l o用 vs °水洗脱 o收集洗脱液 o再过
zvu 3 k¤n型l强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱ku
¦° ≅ ts ¦°l o先用 ws °水洗脱 o弃去水洗脱液 o再
用 ws °tx h氨水洗脱 o收集洗脱液于水浴上蒸干 o
加水 u °使溶解 o备用 ∀
21214 阴性对照液的制备 按处方比例取除去枸
杞子的其他中药按复方龟鹿颗粒制备工艺制成阴性
对照品 ∀取阴性对照品适量 o精密称定 o照供试品溶
液的制备方法制得阴性对照液 ∀
21215 对照品溶液的配制 精密称取甜菜碱对照
品 uu1x °ªo加蒸馏水 ux °使溶解 o摇匀即可 ∀
21216 甜菜碱衍生物的制备 精密吸取对照品溶
液 !供试品溶液和阴性对照溶液各 tss Λo分别加入
磷酸二氢钾溶液ks1t °²¯#ptltss Λo混匀后 o再加
入 t {ss Λ的衍生试液 o混匀 o称重 o于 {s ε 加热 t
«o取出冷却至室温 o称重补充减失的乙腈量 o摇匀后
离心 ts °¬±o取上清液 o备用 ∀
21217 色谱峰的确定 分别取对照品 !供试品和阴
性对照衍生物溶液注入高效液相色谱仪中进行测
定 ∀结果显示阴性对照液在甜菜碱衍生物相应峰的
位置k保留时间约 tv °¬±l无任何峰出现 o说明复方
中其他成分对甜菜碱测定无干扰 o见图 t ∀
图 t °≤ 图
对照品 ~
阴性对照 ~≤样品 ~t1甜菜碱衍生物
213 线性关系的考察
将对照品溶液按 21216项甜菜碱衍生物的制备
方法制成衍生物 o分别吸取 u ow oy o{ ots otv Λ注入
高效液相色谱仪中 o测定峰面积 o根据进样量和测得
的峰面积计算回归方程得 Ψ t suw tw| Ξ p y zs| ,
ρ s1||| z ∀结果显示甜菜碱进样量与峰面积在
s1s| ∗ s1x{x Λª具有良好的线性关系 ∀
214 精密度试验
精密吸取供试品溶液 tss Λo依法制成衍生物
溶液 o重复进样 x次 o测定峰面积并计算 ≥⁄s1y h ∀
215 稳定性试验
精密吸取供试品溶液 tss Λo依法制成衍生物
溶液 o间隔 s ot ov oy o{ ouw «依次进样 o分别测定峰面
积变化情况 o其 ≥⁄ t1s h ∀试验结果表明 o供试品
衍生物溶液在常温下 uw «内较稳定 ∀
216 重复性试验
取同一批复方龟鹿颗粒 x份 o按供试品溶液制
备及衍生物制备方法处理后 o分别进样测定 o计算
甜菜碱含量 ∀计算 ≥⁄u1u h ∀
217 加样回收率试验
取已知甜菜碱含量的复方龟鹿颗粒适量 o精密称
定 o分别加入一定量的甜菜碱对照品 o照供试品溶液制
备和衍生物制备法处理后 o精密吸取 ts Λo注入液相
色谱仪中 o测定峰面积并计算回收率 ∀结果见表 t∀
表 t 甜菜碱加样回收率
样品中含量r°ª 测得量r°ª 回收率r h 平均值r h ≥⁄r h
u qtvv x qsxt tss qw
u qutz x qssx |x q|
u qtvw w q|t| |x q{ |{ qw u qx
u qt{| x qtu| tst qt
u qtyw x qsvx |{ q{
注 }加入量均为 u q|sz °ª
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第 vt卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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218 样品的含量测定
取样品 v批 o按供试品溶液制备方法和衍生物
制备法处理后 o精密吸取供试品衍生物溶液 us Λ
注入高效液相色谱仪中 o测得的峰面积代入回归方
程计算 o再乘以稀释倍数得样品含量 ∀结果见表 u ∀
表 u 样品含量测定
批号 平均含量r°ªr袋 ≥⁄r h
sts{tu u qxy u qw
sts{us u qyx u qx
sts{uz v qs| t q|
3 讨论
311 甜菜碱系甘氨酸的三甲基衍生物 o季胺型水溶
性生物碱 o基本结构为k≤vlv2n2≤u2≤ p o分子
式为 ≤xttu o分子质量为 ttz1tt o无共轭结构 o在
近紫外吸收区测定甜菜碱含量 o其他成分干扰大 o因
此本试验通过制备衍生物进行测定 ∀而甜菜碱为水
溶性 ou ow2溴代苯甲酰甲基溴是脂溶性 o二者不相
溶 o则 t{2冠醚2y作为相转移剂促使二者在酸性条件
下能相溶发生反应 ∀多次试验亦表明在 {s ε 加热
t «反应完全 ∀首先甜菜碱与磷酸二氢钾生成甜菜
碱钾盐 o此钾盐与 t{2冠醚2y形成一个络合物 o该络
合物很容易与溴代烷即 u ow2溴代苯甲酰甲基溴发生
反应 o使溴代烷中苯环 u位上的活泼溴被甜菜碱所
取代 o从而生成 u2甜菜碱2w2溴代苯甲酰甲基溴衍生
物 ∀该衍生物比较稳定 o能溶于水 o且在紫外区 uxw
±°处有最大吸收 ∀本研究正是利用该性质进行含
量测定的 ∀
312 本制剂是一个复方 o成分复杂 o通过上阴 !阳离
子交换树脂柱进行洗脱 o除去其中的氨基酸 !蛋白
质 !多糖和苷类等成分 o达到纯化供试液的目的 o使
含测结果准确可靠 ∀
313 采用 °≤测定本制剂中甜菜碱的含量 o结果
显示回收率较高 o稳定可靠 o可有效地控制复方龟鹿
颗粒的质量 ∀
≈参考文献
≈t 杨东辉 o王积福 o魏璐雪 q枸杞子浸膏甜菜碱的含量测定 q中
国中药杂志 ot||z ouuktsl }ys{ q
≈u 张淑运 o巢志茂 o陈妙华 q肉苁蓉炮制前后甜菜碱的含量测
定 q中国中药杂志 ot||x ouskzl }ws| q
≈v 沙世炎 q中草药有效成分分析法 q上册 q北京 }人民卫生出版
社 ot|{u qtst q
≈w
¯ ∏±§¨± q׫¨ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬½¤·¬²±¤±§ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨ ¶¨·¬°¤·¬²±²©¥¨·¤¬±¨ ¶
¬± ¦²°°¨ µ¦¬¤¯ ¶¨¤º¨¨§ ¬¨·µ¤¦·¶q Βοτανιχα Μαρot|{y ou| }txx q
∆ετερµινατιον οφ βεταινειν Φυφανγ Γυιλυ γρανυλε βψ ΗΠΛΧ
÷ ¬±ª2º¤±ªt o ≠÷¬∏2½«¬t o ≠¤±2º ±¨ªu o≥∞÷∏2∏t
(t1 Αφφιλιατεδ Λιψυαν Ηοσπιταλ, Μονγϕι Μεδιχαλ Χολλεγε , Ηυαζηονγ Υνιϖερσιτψ οφ Σχιενχε ανδ Τεχηνολογψ, Ωυηαν wvsszz , Χηινα ;
u1 Ηυβει Χολλεγε οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Ωυηαν wvssyt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨¶¦µ¬¥¨ ¤ °≤ ° ·¨«²§©²µ¤¶¶¨¶¶¬±ª¥¨·¤¬±¨ ¬± ƒ∏©¤±ª ∏¬¯∏ªµ¤±∏¯¨q Μετηοδ : ׫¨ ¦²±·¨±·²© ¥¨·¤¬±¨ 2
³«¨ ±¤¬¦¼¯ ¥µ²°¬§¨ ¬± ƒ∏©¤±ª ∏¬¯∏ªµ¤±∏¯¨ º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ °≤ q׫¨ ¤±¤¯¼·¬¦¤¯ ¦²¯∏°± º¤¶¤¶«¬°2³¤¦® ≤≤2⁄≥ky1s °° ≅ txs °°l
©¬¯¯¬±ª¤x Λ° ¶·¤·¬²±¤µ¼ ³«¤¶¨ ~׫¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¦²±¶¬¶·¨§²©¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2º¤·¨µkvxΒyxl º¬·«s qt °²¯#pt¤≤¯ w ~׫¨ ©¯²º2µ¤·¨ º¤¶t °#
°¬±p t ~׫¨ §¨·¨¦·²µº¤¶¶¨·¤·uxw ±° q Ρεσυλτ : ׫¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± ¦∏µ√¨º¤¶¬¯±¨ ¤µ²√ µ¨·«¨ µ¤±ª¨ ²©s1s|2s1x{x Λªkρ s1||| zl q׫¨ ¤√ µ¨2
¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ²©·«¨ ° ·¨«²§º¤¶|{1w h o ≥⁄u1x h k ν xl qΧονχλυσιον : ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º §¨·«¤··«¬¶° ·¨«²§º¤¶µ¨ ¬¯¤¥¯¨¤±§¤¦¦∏µ¤·¨o¤±§
¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©ƒ∏©¤±ª ∏¬¯∏ªµ¤±∏¯¨q
[ Κεψ ωορδσ] ƒ∏©¤±ª ∏¬¯∏ªµ¤±∏¯¨~¥¨·¤¬±¨ ~ °≤
≈责任编辑 刘
本刊启事
本刊自 t||x年 t月 t日开始对来稿收取处理费k每篇 xs元 o有发票l o请作者在寄发稿件的同时将处理费通过邮局寄汇本
刊k请勿在稿件中夹带现金l ∀汇单上请注明论文题目及第一作者姓名 ∀收款地址 !单位 }北京市东直门内南小街 ty号5中国
中药杂志6社 o邮编 tsszss ∀
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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