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防风三种茎与根中色原酮类成分含量比较分析



全 文 :防风三种茎与根中色原酮类成分含量比较分析
孟祥才,孙 晖,孙小兰,王喜军
(黑龙江中医药大学,哈尔滨 150040)
[收稿日期] 20070826
[基金项目] 黑龙江教育厅科学技术研究项目(1531344)
[通讯作者] 王喜军,Tel(0451)82110818,Email:wxj@hljucm.
net
  防风为伞形科防风属植物防风 Saposhnikovia
divaricata(Turcz.)Schischk的干燥根。主要分布在
我国北方平原,而东北产的防风产量大、质量佳,素
有“关防风”之称,有关种质[1]、栽培方式[2]、采收
期[3]、加工方法[4]、产地以及抽薹[5]等影响质量的
因素均有报道。本草考证表明防风的根、叶、花、果
均可入药[6]。《中国药典》(2005年版)规定防风的
药用部位为“未抽花茎的干燥根”,对其药材性状的
描述为“根头有明显密集的环纹,有的环纹上残存
棕褐色毛状叶基”,防风的这种性状的部位习称“蚯
蚓头”,位于地上与地下的交界处,从生物学角度属
于防风的根茎,并不包括在在药用部位根中,可见两
部分的描述有冲突。在防风药材的应用中,茎也作
为药材的组成部分一同入药,有关茎的用药问题未
见报道。防风的根茎为多年生,长度与营养生长时
间长短有关,主产区气候干旱,营养时间长,根茎长
达3~5cm,占防风整个地下部分的1/5~1/3,其品
质的优劣直接影响防风的疗效。地上茎是进入生殖
生长防风的地上部分茎,只有1年生。防风进入生
殖生长后,随着叶片的长出,节间延长,形成了整个
植株的主干,并不断进行分支。地上茎一般形成层
较早地停止活动,使茎不能无限地增粗,所以韧皮层
较少,髓部占直径的90%以上。再生茎指防风采收
后从被挖断根所产生的不定芽发育而来的地下茎,
自然条件下不能产生。在人为干预下,主产区采挖
后的野生防风和栽培防风田中经常产生此类茎,习
称“二窝子”,与根相似,常与根一同入药。再生茎
从生物学角度属于茎,也有髓部,但能够产生较多的
韧皮部,韧皮部随生长年限的延长而增加,再生茎髓
部直径约占50%左右。目前关于防风三种茎的药
用价值无人评价,其有效成分方面亦无研究,为此,
本研究对三种类型茎的色原酮的含量进行研究可为
其药用价值的评价提供依据。
1 仪器、试药与材料
岛津LC2010型高效液相色谱仪;KromasilC18色
谱柱(46mm×20mm,5μm);Shimpack保护柱;
H66MC型超声震荡仪。升麻苷(primOglucosyl
cimifugin)、升麻素(cimifugin)、5O甲基维斯阿米醇
苷(4′OβDglucosyl5Omethylvisamminal)、亥茅
酚苷(secOglucosylhamaudol)由中国中医研究院
中药研究所肖永庆研究员提供,HPLC分析纯度均
为98%以上;甲醇为色谱醇;水为纯净水;其他试剂
为分析纯。
实验样品为2006年8月采集黑龙江省泰康县
5年生栽培防风,经黑龙江孟祥才鉴定为伞形科防
风属防风S.divaricata。地上茎、一年生和多年生再
生茎、根茎及根各10株。
2 方法
2.1 色谱条件 KromasilC18(46mm×200mm,5
μm)色谱柱,Shimpack保护柱,甲醇(B)水(A)梯
度洗脱;检测波长254nm;流速1mL·min-1;柱温
40℃;进样10μL。含量测定梯度程序:0~15min,
A∶B(60∶40~60∶40);15~25min,A∶B(60∶40~35∶
65)。全成分梯度程序:0~15min,A∶B(60∶40~
60∶40);15~25min,A∶B(60∶40~35∶65);25~60
min,A∶B(35∶65~0∶100);60~65min,A∶B(0∶
100~0∶100)。
2.2 样品制备 取防风干燥药材,粉碎成均匀粉
末,过40目筛,45℃烘至恒重。精密称取防风药材
粉末约500mg置于50mL锥形瓶中,精密加入甲醇
20mL,称定质量,水浴70℃加热回流提取2h,放冷
称重,用甲醇补足减重,摇匀,滤过。取滤液经微孔
滤膜(045μm)滤过,得供试品溶液。
2.3 线性关系考察 精确称取升麻苷、升麻素、5
O甲基维斯阿米醇苷和亥矛酚苷标准品,用适量甲
醇溶解,分别配制成02,004,01,001mg·mL-1
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第33卷第11期
2008年6月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 11
June,2008
的对照品溶液,升麻苷分别进样2,4,6,8,10μL,其
余3种分别进样1,3,5,7,9μL,以进样量(X,μg)为
横坐标,以峰面积为纵坐标(Y),做标准曲线,并进
行回归分析(表1)。
表1 防风中4种色原酮的回归方程
对照品 回归方程 r 线性范围/μg
升麻苷 Y=1307638X-10444 09999 0130~1650
升麻素 Y=1548225X-21469 09996 0025~0330
 5O甲基 Y=1915910X-21605 09998 0089~0801
维斯阿米醇苷      
亥矛酚苷 Y=2520882X-10536 09997 0009~0081
2.4 精密度试验 取4种上述对照品的溶液,连续
进样5次,RSD131%。
2.5 稳定性试验 按2.3项下方法制备供试品溶
液,分别在0,6,12,24h重复进样,RSD186%。
2.6 重复性试验 按2.3项下样品制备方法平行
制备5份供试品溶液,连续进样,RSD211%。
2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的防风
根药材500mg左右,共5份,分别加入一定量的升
麻苷、升麻素、5O甲基维斯阿米醇苷和亥矛酚苷对
照品,按供试液制备方法制备样品5份,每份样品连
续进样3次,每次进样10μL,用标准曲线法计算含
量。升麻苷、升麻素、5O甲基维斯阿米醇苷和亥矛
酚苷的平均加样回收率分别为(9832±192)%,
(9736±262)%,(10136±196)%,(10364±
187)%,其 RSD分别为 195%,269%,193%,
180%。表明该方法稳定均一。
2.8 含量测定方法 每种样品平行取3个样,按样
品制备方法平行制备,制备的每份样品连续进样3
次,用标准曲线法计算含量,最后取含量平均值。
3 结果与讨论
3.1 防风3种茎及根中4种色原酮含量差异 由
于根茎、茎和再生茎与根不同的是具有髓部,结构上
的差异会导致活性成分含量的差异。对防风不同种
类的茎和根中色原酮类成分进行含量测定结果表明
各种茎的活性成分含量均低于根的含量,结果见表
2。
表2 防风根、根茎、地上茎及再生茎主要活性成分含量 % 
编号 药用部位
升麻苷
质量百分数 RSD
升麻素
质量百分数 RSD
5O甲基维斯阿米醇苷
质量百分数 RSD
亥茅酚苷
质量百分数 RSD
总量
1 根 05784 171 00246 154 04907 251 00163 061 11100
2 根茎 03272 294 00087 061 02249 217 00378 051 05986
3 地上茎(绿果期) 01780 151 00254 073 00226 070 00061 061 02321
4 再生茎1年 03846 073 00157 042 03227 264 00550 049 07781
5 再生茎多年 04192 182 00128 030 03718 185 00628 037 08665
  防风根茎的4种活性成分含量和总含量只达到
根的50%(表2),影响整体药材的质量。防风地上
茎 4种活性成分的含量很小,仅为防风根的
209%,药用价值很小。防风再生茎随着生长年限
的延长,活性成分含量有增高的趋势。防风再生茎
4种色原酮的含量略低于主根,可以作为防风药材
入药。
3.2 防风不同药用部位的高效液相色谱图谱 采
用计算机辅助中药指纹图谱相似度计算软件对防风
不同部位中药材高效液相色谱图谱进行初步分析,
结果表明根、一年生再生茎、多年生再生茎和根茎的
共有峰峰面积相似度均在0920~0950之间,表明
成分种类及比例无明显差异,地上茎相似度为
0692,相差较大。
中药材质量是影响中药疗效的1个重要的瓶
颈,中药现代化的1项基础工作就是要从药材抓起,
为此我国2003年6月1日开始实施《中药材生产质
  
图1 防风不同茎和根高效液相色谱图谱
1.升麻苷;2.升麻素;3.5O甲基维斯阿米醇苷;4.亥矛酚苷
a.根;b.根茎;c.地上茎;d.再生茎1年;e.再生茎多年
量管理规范》(GAP),目的就是要提高、稳定中药材
的质量,做到中药材“真实、优质、稳定、可控”。在
黑龙江省西部草原地区为野生防风和栽培防风的主
产区,由于根茎上生有较多的棕褐色毛状叶基,人工
摘除费工费力,从活性成份种类和含量的角度分析,
防风商品带有大量根茎将降低药材的质量,因此,许
多种植者将根茎部分除去,具有一定的合理性。防
风再生茎与根成分种类及含量相近,可一同入药。
[参考文献]
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 11
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[2] 孟祥才,娄志红,曹 玲.防风直播和移栽对有效成分含量的
影响[J].特产研究,2004,1:29.
[3] 孙 晖,曹 玲,王喜军,等.防风药效物质基础季节积累规律
的研究[J].中国中医药科技,2003,10(6):355.
[4] 孙 晖,曹 玲,孟祥才,等.规范化种植防风最适加工方法的
研究[J].中国中药杂志,2003,28(5):402.
[5] 孙 晖,孟祥才.中药材防风药学与临床的研究[M].北京:中
国中医药出版社,2007:3.
[6] 王建华,楼之岑.中药防风的本草考证[M].中国中药杂志,
1989,14(10):3.
[责任编辑 王亚君]
不同产地独一味中苯乙醇苷类的含量测定与品质评价
张 凤1,孙连娜2,陈万生1
(1.第二军医大学 附属长征医院 药学部,上海 200003;
2.第二军医大学 药学院 生药学教研室,上海 200433)
[收稿日期] 20071009
[基金项目] 上海SK研究与发展基金(2004007t)
[通讯作者] 陈万生,Tel:(021)6361010973711,Email:
chenws@vnet.citiz.net
  独一味Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo为唇
形科独一味属植物,主要分布于西藏、青海等省,为
藏族和蒙古族等民间传统常用草药[1]。具有消炎
止痛,活血化瘀等功效,用于治疗跌打损伤,外伤出
血,筋骨疼痛,骨质疏松等症[2]。独一味主要含有
黄酮类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类等成分[3]。目前
尚未见有关独一味中苯乙醇苷类含量测定方法的报
道。作者建立了独一味中苯乙醇苷类的HPLC含量
测定方法,并且分别对不同产地的独一味药材进行
了苯乙醇苷类的含量测定和比较,为药材的选优及
临床用药提供一定的参考依据。
1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱(HPLC)仪(包括二
元泵系统,自动进样器,可变波长检测器(VWD),
Agilent1200色谱工作站);Sartorius电光分析天平
(最大载荷210g,分度值001mg);粉碎机(DJ-
04B灵巧型,上海淀久中药机械公司)。毛蕊花糖苷
和连翘酯苷(由本课题组从独一味中分离纯化,经
光谱学和波谱学分析鉴定其结构,液相色谱鉴定纯
度分别为993%和999%);甲醇为色谱纯;水为双
蒸水。
独一味药材采自6个不同产地,经第二军医大
学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定为唇形科植
物独一味L.rotata。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Aglilent1200HPLC系统,Diamon
silC18色谱柱(46mm×250mm,5μm)。流动相为
甲醇27%醋酸水溶液(30∶70),流速为10mL·
min-1。VWD检测器,检测波长为320nm。柱温为
30℃,检测时间为30min。进样量为20μL。
2.2 样品的制备 独一味6种样品各自取全草适
量,于60℃烘干48h,粉碎,过60目筛。
2.3 对照品溶液的配制 精密称取对照品毛蕊花
糖苷,连翘酯苷各10mg分别置10mL量瓶中,以甲
醇溶解并定容,配制成102,106mg·mL-1的对照
品储备液,4℃保存。
2.4 样品溶液的配制 取独一味6种样品各10g,
精密称定,放入 500mL圆底烧瓶中,加入 200mL
70%甲醇溶液,加热回流3次,每次回流时间分别为
2,15,15h,合并回流液,过滤,减压回收适度,移
入100mL量瓶中,70%甲醇溶液定容,4℃保存。
各样品1mL用045μm微孔滤膜过滤,精密量取
续滤液05mL于1mL量瓶中,加70%甲醇稀释至
刻度,静置4℃保存,作为样品待测。对照品与样品
的色谱图见图1。
2.5 线性关系考察 将对照品储备液分别稀释得
到25,50,100,250,500μg·mL-1的对照品溶液,按
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