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Studies on isolation and identification of flavonoids in herbs of Agrimonia pilosa

仙鹤草中黄酮类化学成分研究



全 文 :[J].中国天然药物,2004,2(2):78.
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derivatives,cornosideandrengyosides[J].ChemPharmBul,
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(5):729.
PhenoliccomponentsfromherbsofDendrobiumaphylum
ZHANGChaofeng1,SHAOLi1,HUANGWeihua2,WANGLei1,WANGZhengtao1,XULuoshan1
(1.KeylaboratoryofModernChineseMedicines,MinstryofEducation,DepartmentofPharmacognosy,
ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038,China;
2.DepartmentofPhytochemistry,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210038,China)
[Abstract] Objective:TostudythephenolicconstituentsofDendrobiumaphylum.Method:Variouschromatographictech
niqueswereusedtoisolateandpurifytheconstituents,theirphysicochemicalpropertiesandspectraldatawereemployedtoelucidate
theirstructures.Result:Ninebibenzylsandtwobenzylethanylcompoundswereisolatedandidentifiedas:moscatilin(1),gigantol
(2),batatasin(3),tristin(4),3,5,4′trihydroxylbibenzyl(5),3,5dimethoxyl4,4′dihydroxylbibenzyl(6),moscatin(7),
2,4,7trihydroxyl9,10dihydrophenanthrene(8),hircinol(9),2(4hydroxyphenyl)ethylβDglucopyranoside,salidroside(10)
andphydroxylbenzylaceticacid(11).Conclusion:Alcompoundswereobtainedfirstlyfromtheplant,andthecompounds10and11
wereisolatedinthisgenusforthefirsttime.
[Keywords] Orichidaceae;Dendrobiumaphylum;chemicalconstituents
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20080520
[通讯作者] 邱峰,Tel:(024)23986463,Email:fengqiu2000
@tom.com
仙鹤草中黄酮类化学成分研究
潘 娅,刘红霞,庄玉磊,丁丽琴,陈丽霞,邱 峰
(沈阳药科大学 中药学院,辽宁 沈阳 110016)
[摘要] 目的:对仙鹤草Agrimoniapilosa全草的70%乙醇提取物中的化学成分进行研究。方法:利用多种色
谱方法进行成分分离,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果:分离得到9个化合物,分别鉴定为山柰
酚3O(6p香豆酰基)βD吡喃葡萄糖苷(1),山柰酚 3OαL吡喃鼠李糖苷(2),槲皮素 3OαL吡喃鼠李糖
(3),槲皮素3OβD吡喃葡萄糖苷(4),山柰酚3OβD葡萄糖苷(5),山柰酚(6),芹菜素(7),木犀草素(8),槲皮
素(9)。结论:化合物1~3,5,6,8为首次从该植物中分离得到。
[关键词 ] 仙鹤草;化学成分;黄酮类
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)24292504
  仙鹤草为蔷薇科龙芽草属植物龙芽草 Agrimo
niapilosaLedeb.的全草,为我国传统中药,主要用于
治疗衄血、咯血、尿血、便血、崩漏等各种出血证[1]。
国内外对该植物的化学成分研究主要集中在
20世纪90年代,其主要的化学成分为鞣质、间苯三
酚衍生物、异香豆素、黄酮、三萜及三萜皂苷、有机酸
等[2]。现代药理学研究表明其具有较强的降血糖、
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抗肿瘤、抑菌和抗病毒活性[3]。研究者对其降血糖
作用机制作了深入的研究,但具体药效物质尚未明
确[45]。为了研究该植物的化学成分,进一步明确其
降血糖的活性物质,作者采用溶剂萃取法和各种色
谱分离纯化方法,对仙鹤草全草的70%的乙醇提取
物中的化学成分进行了研究,分离得到9个化合物,
并通过理化性质和波谱数据分析确定了它们的化学
结构,其中化合物1~3,5,6,8为从该种植物中首次
分离得到。
1 仪器、试剂和试药
BrukerARX-300型核磁共振仪(TMS为内标
物,瑞士 Bruker公司);Waters600(waters,USA)高
效液相色谱仪[检测器为 PDA996(waters,USA)],
色谱工作站为 Milennium32(waters,USA);Inertsil
PerpODS(200mm×250mm),GL.SciencesInc.制
备型反相色谱柱。薄层色谱及制备薄层色谱用硅胶
G及GF254、柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂);ODS
薄层板(Merk公司);聚酰胺(30~60目)(浙江省台
州市路桥四甲生化塑料厂产品);ODS(Pharmacia公
司);SephadexLH-20(Pharmacia公司);色谱甲醇
(康科德科技有限公司)。其余试剂均为分析纯或
色谱纯。
试验药材于2006年10月购自沈阳东北大药房
(安徽协和成药业有限公司),经沈阳药科大学生孙启
时教授鉴定为仙鹤草A.pilosa,凭证标本(20061010)
存于沈阳药科大学天然药物化学教研室。
2 提取分离
干燥仙鹤草药材10kg用10倍量70%的乙醇
回流提取2次,每次2h,合并提取液,经减压浓缩得
乙醇浸膏约1kg,该浸膏水混悬,依次用环己烷、醋
酸乙酯,正丁醇萃取,其中醋酸乙酯萃取层经减压
浓缩得到醋酸乙酯萃取物。醋酸乙酯萃取物
(1080g)经硅胶(200~300目)柱色谱,CHCl3
MeOH快速梯度洗脱(100∶0~30∶1~20∶1~10∶1~
5∶1,2∶1,1∶1,0∶100),得到Fr.E1~9。其中Fr.E
7中析出黄色沉淀,用甲醇反复重结晶得到化合物1
(20g);Fr.E4,E6经反复硅胶、聚酰胺、Sephadex
LH-20、开放 ODS柱色谱以及制备薄层和制备高
效液相等分离纯化,得到化合物 2(35mg),3(200
mg),4(4mg),5(30mg),6(220mg),7(25mg),8
(22mg),9(6mg)。
3 结构鉴定
化合物1 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁氰化
钾反应阳性,盐酸镁粉反应阳性,Molish反应阳性;
酸水解检出葡萄糖。1HNMR(DMSOd6,300MHz)
δ:1256(5OH),614(1H,d,J=18Hz,H6),
637(1H,d,J=18Hz,H8),798(2H,d,J=87
Hz,H2′,6′),685(2H,d,J=87Hz,H3′,5′),
543(1H,d,J=73Hz,H1″),610(1H,d,J=165
Hz,Hα),733(1H,d,J=165Hz,Hβ),735(2H,
d,J=83Hz,H2,6),678(2H,d,J=83Hz,H
3,5);13CNMR(DMSOd6,75MHz)δ:1565(C
2),1330(C3),1775(C4),1615(C5),989(C
6),1643(C7),938(C8),1564(C9),1038(C
10),1209(C1′),1309(C2′,6′),1152(C3′,
5′),1601(C4′),1010(C1″),743(C2″),763
(C3″),700(C4″),742(C5″),630(C6″),
1663(C=O),1137(Cα),1447(Cβ),1250(C
1),1303(C2,6),1158(C3,5),1599(C
4)。其理化性质和NMR数据与文献[6]报道的一
致,故鉴定该化合物为山柰酚3O(6p香豆酰基)
βD吡喃葡萄糖苷(tiliroside)。
化合物2 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁氰化
钾反应阳性,盐酸镁粉反应阳性,Molish反应阳性,
酸水解,水层与标准品共薄层,检出鼠李糖。1HNMR
(DMSOd6,300MHz)δ:1262(5OH),619(1H,
brs,H6),639(1H,brs,H8),775(2H,d,J=84
Hz,H2′,6′),692(2H,d,J=84Hz,H3′,5′),530
(1H,brs,H1″),079(3H,d,J=54Hz,H6″);
13CNMR(DMSOd6,75MHz)δ:1566(C2),1342
(C3),1777(C4),1613(C5),990(C6),1640
(C7),939(C8),1571(C9),1039(C10),
1206(C1′),1342(C2′,6′),1155(C3′,5′),
1601(C4′),1018(C1″),704(C2″),707(C
3″),712(C4″),702(C5″),175(C6″)。其理化
性质和NMR数据与文献[7]报道的一致,故鉴定该
化合物为山柰酚3OαL吡喃鼠李糖苷。
化合物3 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁氰化
钾反应阳性,盐酸镁粉反应阳性,Molish反应阳性,
酸水解检出鼠李糖。1HNMR(DMSOd6,300MHz)
δ:1267(5OH),622(1H,d,J=18Hz,H6),
641(1H,d,J=18Hz,H8),731(1H,d,J=18
Hz,H2′),727(1H,dd,J=82Hz,18Hz,H6′),
688(1H,d,J=82Hz,H5′),527(1H,brs,H
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1″),083(3H,d,J=57Hz,H6″);13CNMR
(DMSOd6,75MHz)δ:1566(C2),1343(C3),
1779(C4),1614(C5),988(C6),1643(C7),
938(C8),1574(C9),1042(C10),1212(C
1′),1156(C2′),1453(C3′),1486(C4′),
1158(C5′),1208(C5′),1020(C1″),704(C
2″),707(C3″),713(C4″),702(C5″),176(C
6″)。其理化性质和 NMR数据与文献[8]报道一
致,故鉴定该化合物为槲皮素3OαL鼠李糖苷。
化合物4 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁氰化
钾反应阳性,盐酸镁粉反应阳性,Molish反应阳性,
酸水解检出葡萄糖。1HNMR(DMSOd6,300MHz)
δ:1263(5OH),619(1H,brs,H6),639(1H,
brs,H8),758(1H,brd,J=90Hz,H6′),757
(1H,brs,H2′),684(1H,d,J=90Hz,H5′),
546(1H,d,J=72Hz,H1″);13CNMR(DMSOd6,
75MHz)δ:1562(C2),1334(C3),1775(C4),
1613(C5),988(C6),1645(C7),936(C8),
1564(C9),1040(C10),1216(C1′),1153(C
2′),1450(C3′),1486(C4′),1153(C5′),
1212(C5′),1009(C1″),742(C2″),766(C
3″),700(C4″),777(C5″),611(C6″)。其理化
性质和NMR数据与文献[9]报道的一致,故鉴定该
化合物为槲皮素3OβD吡喃葡萄糖苷。
化合物5 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁氰化
钾反应阳性,盐酸镁粉反应阳性,Molish反应阳性,
酸水解检出葡萄糖。1HNMR(DMSOd6,300MHz)
δ:1264(5OH),623(1H,d,J=18Hz,H6),
645(H,d,J=18Hz,H8),806(2H,d,J=87
Hz,H2′,6′),690(2H,d,J=87Hz,H3′,5′),
548(1H,d,J=74Hz,H1″);13CNMR(DMSOd6,
75MHz)δ:1565(C2),1333(C3),1775(C4),
1613(C5),988(C6),1643(C7),937(C8),
1565(C9),1040(C10),1210(C1′),1310(C
2′,6′),1152(C3′,5′),1600(C4′),1010(C
1″),743(C2″),776(C3″),700(C4″),765(C
5″),610(C6″)。其理化性质和 NMR数据与文献
[10]报道的一致,故鉴定该化合物为山柰酚3Oβ
D葡萄糖苷。
化合物6~8 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁
氰化钾反应阳性,盐酸镁粉反应阳性。1HNMR
(DMSOd6,300MHz)与
13CNMR(DMSOd6,75
MHz)数据分别和理化性质与文献[8,1112]比较一
致,鉴定为该化合物为山柰酚、芹菜素、木犀草素。
化合物9 黄色粉末(甲醇),三氯化铁铁氰化
钾反 应 阳 性,盐 酸镁 粉 反 应 阳 性。 1HNMR
(DMSOd6,300MHz)δ:1252(5OH),623(1H,br
s,H6),645(H,brs,H8),758(1H,brd,H2′),
693(1H,d,J=85Hz,H3′),772(1H,brs,H
6′),与对照品槲皮素共薄层,经3种不同的展开剂
展开,Rf值均一致,故鉴定该化合物槲皮素。
[参考文献]
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StudiesonisolationandidentificationofflavonoidsinherbsofAgrimoniapilosa
PANYa,LIUHongxia,ZHUANGYulei,DINGLiqin,CHENLixia,QIUFeng
(SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsinAgrimoniapilosa.Method:Thecompoundswereisolatedandpu
rifiedbyvariouscolumnchromatographicmethodsandelucidatedonthebasisofchemicalandspectroscopicevidences.Result:Nine
flavonoidswereobtainedandidentifiedastiliroside(1),kaempferol3OαLrhampyranoside(2),quercetin3OαLrhampyranoside
(3),quercetin3OβDglucopyranoside(4),kaempferol3OβDglucopyranoside(5),kaempferol(6),apigenin(7),luteolin
(8),quercetin(9).Conclusion:Compounds13,5,6and8wereisolatedfromthisplantforthefirsttime.
[Keywords] Agrimoniapilosa;chemicalconstituents;flavonoids
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20080528
[通讯作者] 刘文英,Tel:(025)83271251,13951001251,E
mail:lwcpu@126.com
关木通 HPLCESIMS指纹图谱的化学模式识别研究
樊夏雷1,2,丁一冰3,阿基业1,赵 恂2,刘文英1
(1.中国药科大学,江苏 南京 210009;
2.江苏省药品检验所,江苏 南京 210008;3.南京大学医学院,江苏 南京 210008)
[摘要] 目的:以24批不同产地关木通的HPLCESIMS指纹图谱为基础,采用化学计量学方法对其进行化学
模式识别,并对不同的模式识别方法进行比较。方法:将关木通指纹图谱信息进行预处理,采用关木通 HPLCESI
MS指纹图谱中的29个特征峰为基准,以各峰的保留时间、相对峰面积和质荷比作为数量化基础,采用 SIMCA,
SPSS115等数据处理软件进行化学模式识别,比较SIMCA分类法和聚类分析法异同。结果:2种模式识别方法可
以对关木通样品进行产地鉴别。结论:综合色谱指纹图谱技术和多变量的化学计量学分析方法研究可用于关木通
的质量分析。
[关键词] 关木通;HPLCESIMS指纹图谱;化学模式识别;SIMCA分类法;聚类分析
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)24292804
  为加快中医药的发展,国家提出了使用现代科
学技术来研究中药作用的物质学基础、质量控制和
中药的安全性等事关中医药事业健康发展的重大课
题。关木通为马兜铃科马兜铃属植物东北马兜铃
AristolochiamanshuriensisKom.(AmK)的干燥藤茎,
目前认为关木通的肾脏毒性与其所含的马兜铃酸及
其代谢产物有关,由于大部分中药应用过程中缺少
明确的体内过程及量效关系的理论依据,现有的研
究结果尚难以判定关木通等含马兜铃酸中药的安全
剂量和使用期限。且发现对于不同产地,不同批次
关木通的分析研究较少,更没有全面控制关木通内
在质量的标准和方法。鉴于中药具有复杂的作用机
制和化学成分,且很多化学组分还缺乏相应的对照
品,色谱指纹图谱是全面评价中药质量的有效方法
之一。将传统的化学成分分离、纯化技术与现代的
液相色谱质谱联用技术对关木通指纹图谱中的指
纹峰进行系统的指认和定量研究,寻找指纹特征和
毒性相关性,使指纹图谱技术更加合理可靠地控制
质量,寻求避免其毒性的出路。本研究用 HPLC
ESIMS指纹图谱结合化学计量学的方法对24批不
同产地的关木通进行分类和识别分析,为关木通肾
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    中 国 中 药 杂 志
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