全 文 ：含药血清药理作用强度与体内给药的
量效 !时效关系研究
刘建勋 3 o韩 笑 o孙宇扬
k中国中医科学院 西苑医院 o北京 tsss|tl
≈摘要  目的 }考察含药血清药理作用强度与体内给药的量效 !时效关系 ∀方法 }以中药有效组分配伍方剂双
参通冠方不同灌胃剂量 !药后不同取血时间所得的药物血清为受试药物 ~培养心肌细胞 o进行缺氧复氧实验 o复氧
同时给予不同双参通冠方药物血清处理 o实验结束后取培养上清检测 ⁄‹ 值 o以 ⁄‹ 释放抑制率为指标 o观察含
药血清药理作用强度与体内给药的量效 !时效关系 ∀结果 }体内给药量大所获得的药物血清其 ⁄‹ 释放抑制率并
不一定高 o二者之间无明显量效关系 ~药后不同时间取血所获得的药物血清对 ⁄‹释放的抑制率亦不相同 o以药后
|s °¬±所得药物血清药理效应最佳 ∀结论 }体内给药量并非越大其药物血清药理效应越好 o药后最佳取血时间亦
得自行摸索 ∀
≈关键词  中药血清药理学 ~缺氧复氧
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussylts2s{u|2sv
≈收稿日期  ussx2sz2uy
≈基金项目  国家 {yv课题kussu„„uvwy…l
≈通讯作者  3刘建勋 oר¯kƒ¤¬l }kstslyu{zwsw| o∞2°¤¬¯}­¬¤±¬∏±
ƒ «·qµ²¯ q¦±q±¨ ·
中药血清药理学研究方法是以含药血清在体外
的药理效应来反映药物在机体内的作用 o它与含药
血清中的药物浓度直接相关 ∀由于含药血清的血药
浓度真实地反映了当时机体的血药浓度 o在其他条
件一致的情况时 o主要与给药剂量有关 ∀在一定范
围内 o动物给药剂量越多 o其吸收进入血循环的药物
就越多 o血药浓度就高 o因而所取含药血清的体外药
理效应就越强 ∀同时 o药物进入体内后 o不同药物剂
量其在体内的吸收 !分布 !代谢 !排泄不同 o血药浓度
达峰时间亦不同 o起效时间亦不同 ∀为了验证上述
推论 o以中药有效组分配伍方剂双参通冠方的药物
血清为受试药物 o进行了以下研究 ∀
1 材料
111 动物 健康 ≥⁄大鼠 o体重 uss ∗ uus ªo雌雄各
半 ~新生 uw «内 ≥⁄大鼠乳鼠k雌雄不分l o北京维通
利华实验动物技术有限公司提供 o动物许可证号
≥≤÷Žk京l ussu2sssv ∀
112 药物 双参通冠方 }简称 ≥≥׊ o由人参 !丹参 !
延胡索 v味药的提取物按比例配伍而成 ∀以多种有
效成分控制其质量 o由本实验室提供 ∀
113 试剂 胰酶 !⁄≥’k„ • ∞≥≤’l ~µ型胶原酶 !
⁄∞ 培养基kŠ¬¥¦²l ~类标准胎牛血清k美国 ‹¼2
¦¯²±¨ 合资兰州民海生物工程公司l ~⁄‹试剂盒k中
生北控生物科技股份有限公司l ∀
114 仪器 超净工作台k苏州净化设备厂l ~≤’u培
养箱k≥¤±¼² ≤’tzxl ~全自动生化仪k×∞≤‹‘Œ≤’‘
• „ p tsssl ∀
2 方法
211 药物血清的制备 取 ≥⁄大鼠 o分别灌服生理
盐水 !≥≥׊ wx o|s ot{s ovys °ª#®ªpt k每剂量各 x
只l o连续 x §o末次给药前禁食 tu «o药后 vs oys o|s o
tus °¬±腹主动脉取血 o自然分离血清 oxy ε 灭活 vs
°¬±os1u Λ°一次性滤器过滤除菌 o分装 op us ε 短
期保存备用 ∀
212 心肌细胞的培养 无菌取出生 uw «内的 ≥⁄
大鼠心室 o剪成 s1x ∗ t °°v碎块 os1tux h胰蛋白酶
及 s1sx h µ型胶原酶消化 ovz ε 恒温水浴振荡器中
消化 t «ks1x «时取出吹打 t次l o胎牛血清终止消
化 ouss目筛子过滤 o细胞悬液 t xss µ#°¬±pt离心去
除消化液 o⁄∞ 培养基k含 tx h胎牛血清l将心肌
细胞沉淀混匀 o差速贴壁分离 t1x «≈t  o得到纯化的
心肌细胞 o调整细胞含量 s1x ≅ tsy#°pt o接种于铺
有 t h明胶的培养板中 ∀放入 x h ≤’u培养箱 ow{ «
后换液 ∀培养 v ∗ w §后细胞基本融合成片 o选择生
#|u{#
第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ ts
¤¼oussy
长良好 !搏动规律的细胞实验 ∀
213 实验分组及培养心肌细胞缺氧复氧损伤模型
的建立 实验分为正常组 !模型k缺氧复氧l组 !
≥≥׊药物血清组 ∀正常组 }取培养于 w{孔板的心
肌细胞 o洗净旧培养基 o换成含 t h葡萄糖的 ×¼µ²§¨
液≈×¼µ²§¨ 液kª#ptl }≤¤≤¯ u s1u oŽ≤¯ s1u oª≤¯ u#y‹u
’s1t o‘¤≤¯ {1s o‘¤‹≤’vt1s o‘¤‹u°’w#‹u’ s1sx  o
每孔 t °ox h ≤’u培养箱中培养 t1x «后取出换为
含 ts h ≥⁄大鼠空白血清的 ⁄∞ 液继续培养 u «∀
模型组 }洗净旧培养基 o换成 ‘u饱和的无糖 ×¼µ²§¨
液 o置自制密闭盒中持续通以 |x h ‘u n x h ≤’u混合
气 s1x «o充分排尽盒中残余的氧气 o放入 x h ≤’u培
养箱中培养 w «后 o取出换为含 ts h ≥⁄大鼠空白血
清的 ⁄∞ 液继续培养 u «o作复氧处理 ∀ ≥≥׊药
物血清组 }复氧时换成含 ts h ≥⁄大鼠 ≥≥׊药物血
清的 ⁄∞ 液 ox h ≤’u培养箱继续培养 u «o其余处
理同模型组 ∀
214 ⁄‹检测 复氧结束后 o取心肌细胞培养上清
液全自动生化仪检测 ⁄‹值 ∀
215 统计处理 数值采用 cξ ? σ表示 o≥°≥≥tt1x软
件作 ’±¨ 2 • ¤¼ „‘’∂ „统计分析 ∀
3 结果
由于血清自身 ⁄‹较高 o有可能对心肌细胞缺
氧复氧损伤时释放出的 !相对血清 ⁄‹ 值较低的
⁄‹测定产生影响 o故本实验每一板心肌细胞在缺
氧复氧的同时 o另取一板细胞作为平行对照 o用以扣
除血清本身对细胞⁄‹检测的干扰 o计算⁄‹释放
量 ∀由于实验不是在同一板细胞上进行 o其 ⁄‹释
放量无可比性 o故以 ⁄‹释放抑制率k h l作为评判
标准 ∀结果见表 t ∗ w o图 t ∀
图 t 不同给药量r不同药后取血时间
所得的药物血清对 ⁄‹释放率影响的比较
4 讨论
中药含药血清药理研究的规范化 !标准化依赖
于其方法学研究的不断发展 ∀近年来 o在中药含药
表 t ≥≥׊kwx °ª#®ªp tl药后不同时间药物血清
对 ⁄‹的影响kcξ ? σ, ν € {l
τr°¬± 释放量r˜#pt 抑制率r h
空白血清 t| qss ? u q|z p
vs wy qvv ? ts qxu p twv q{w
ys us qyz ? { qu| p { qz|
|s { qtz ? t q|wul xz qss
tus | qvv ? t qxvtl xs q{|
注 }与空白血清相比tl Π s1sx oul Π s1sstk表 u ∗ w同l
表 u ≥≥׊k|s °ª#®ªp tl药后不同时间药物血清
对 ⁄‹的影响kcξ ? σ, ν € {l
τr°¬± 释放量r˜#pt 抑制率r h
空白血清 t{ qvv ? v qxs p
vs tv qxs ? u quytl uy qvx
ys tw qvv ? y qsu ut q{s
|s ts qvv ? u qx{ul wv qyw
tus tx qyz ? w quv tw qxt
表 v ≥≥׊kt{s °ª#®ªp tl药后不同时间药物血清
对 ⁄‹的影响kcξ ? σ, ν € {l
τr°¬± 释放量r˜#pt 抑制率r h
空白血清 vy qx ? us qty p
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tus vu qtt ? z quz tu qsv
表 w ≥≥׊kvys °ª#®ªp tl药后不同时间药物血清
对 ⁄‹的影响kcξ ? σ, ν € {l
τr°¬± 释放量r˜#pt 抑制率r h
空白血清 |w qvv ? tt q|| p
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ys {u qxs ? | qzz tu qxt
|s zy qvv ? t| q|{tl t| qs{
tus |v qyz ? t| qvv s qyz
血清药理研究方法上进行了较为系统的研究 o其中 o
药物血清的时效 !量效关系是研究的重要部分 ∀
411 含药血清的量效关系研究
如果把含药血清作为一种药物来看待 o那么 o药
量的大小主要取决于两个方面 }一是动物的给药量 o
在一定范围内 o动物给药剂量越多 o进入血循环的药
物就越多 o血药浓度就高 o因而所取含药血清的体外
药理效应就越强 ~二是培养体系或反应体系中的含
药血清浓度k体积比l o血清浓度愈高则药量愈大 ∀
含药血清的量效是由动物给药量和血清浓度共
同决定的 o由于培养体系中血清浓度的增减是十分
有限的k血清浓度过高会对细胞产生毒性作用 o在研
究含药血清抑制细胞增殖或促细胞凋亡作用时 o有
可能得出假阳性结果l o所以 o相对固定含药血清浓
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第 vt卷第 ts期
ussy年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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度 o通过改变动物给药量来调整药物血清的含药量 o
是一种较为现实的办法 ∀
412 含药血清的时效关系研究
利用含药血清来评价药效 o何时能够采集到含
药量较高的血清 o是一个非常重要的问题 ∀由于血
清中确切的药效成分并不清楚 o因此应行 / 时效关
系0研究 o以药效指标来评判给药时间和取血时间的
优劣 ∀有研究者在对大量的中药药代动力学参数进
行分析后 o提出一种通行的方案 o即每天给药 u次 o
连续 v §o末次给药后 t «采血 o称之为/通法0 ∀这
有利于节约财力 o人力和时间≈u  ∀但是 o由于选择动
物 !给药次数的不同 o采血时间可能有所不同 ∀
因此 o在采用血清药理学方法进行试验前 o进行
时效关系研究是必要的 o以找出给药后采血的最佳
的时间 o避免由于药效物质被代谢减少殆尽或尚未
吸收造成的假阴性结果≈v  ∀
≥≥׊药物血清的时效 !量效关系研究结果表
明 }≠ w个剂量的药物血清均能抑制缺氧复氧心肌
⁄‹的释放 owx °ª#®ªptr|s °¬±owx °ª#®ªptrtus
°¬±o|s °ª#®ªptrvs °¬±o|s °ª#®ªptr|s °¬±ot{s °ª
#®ªptrys °¬±ot{s °ª#®ªptr|s °¬±ovys °ª#®ªptr|s
°¬±的抑制作用最佳 o与空白血清相比具统计学差
异k Π  s1sxl ~ 从给药剂量来看 o剂量从 wx °ª#
®ªpt加大到 vys °ª#®ªpt o药物血清对⁄‹的抑制率
反而有减弱的趋势 ~≈就药后取血时间而言 o同一剂
量下药后 |s °¬±所得到的药物血清抑制 ⁄‹ 释放
的作用 o与空白血清相比有统计学差异k Π s1sxl ∀
可见 o体内给药量大的所获得的药物血清其
⁄‹释放抑制率并不一定高 o二者之间无明显量效
关系 ~体内给药后不同时间所获得的药物血清对
⁄‹释放的抑制率亦不同 o以药后 |s °¬±药理效应
最佳 ∀因此 o体内给药量并非越大其药物血清药理
效应越好 o药后取血时间在采用血清药理学方法进
行试验前均得自行摸索 ∀
≈参考文献 
≈t  李连达 o靖雨珍 q中医药研究 q北京 }科学技术文献出版社 o
usst1zy q
≈u  詹红生 q含药血清实验方法及其在中药新药研制中的应用展
望 q浙江中医学院学报 ousss ouwkul }z| q
≈v  陈长勋 o金若敏 o贺劲松 o等 q用血清药理学实验方法观察附
子的强心作用 q中国中医药科技 ot||y ovkvl }tu q
Στυδψ ον τιµε2εφφεχτ ανδ δοσε2εφφεχτ οφ σερυµ χονταινινγ
Χηινεσε ηερβαλ µεδιχινε
Œ˜ ¬¤±2¬∏±o ‹„‘÷¬¤²
( Ξιψυαν Ηοσπιταλ, Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Μεδιχιαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsss|t , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ·¬° 2¨ ©¨©¨ ¦·o§²¶¨2 ©¨©¨ ¦·²©¶¨µ∏° ¦²±·¤¬±¬±ª≥«∏¤±ª¶«¨ ±·²±ªª∏¤± k≥≥׊l o¤©²µ°∏¯¤¦²°³²¶¨§¥¼
¤¦·¬√¨©µ¤¦·¬²± ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ q Μετηοδ : ≥¨ µ∏° ¦²±·¤¬±¬±ª≥≥׊ º¤¶²¥·¤¬±¨ §¤·§¬©©¨µ¨±··¬°¨¤©·¨µ³¨µ²µ¤¯ ¼¯ ¤§°¬±¬¶·µ¤·¨§º¬·«§¬©©¨µ¨±·
§²¶¨ ²©≥≥׊ q׫¨ ¦¤µ§¬²°¼²¦¼·¨¶º µ¨¨ §¨³µ¬√ §¨²©²¬¼ª¨ ± ¤±§ª¯∏¦²¶¨ ·² °¬°¬¦«¼³²¬¬¤µ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±¬±­∏µ¼ ¤±§º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§¥¼ ¶¨µ∏° ¦²±2
·¤¬±¬±ª≥≥׊ º«¨ ± µ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±q⁄‹ ¦²±·¨±·¬± ¶∏³¨µ±¤·¤±·º¤¶§¨·¨¦·¨§¤©·¨µµ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±q⁄‹ µ¨¯¨ ¤¶¨ ¶∏³³µ¨¶¶¬²± µ¤·¨ º¤¶∏¶¨§·²
¶·∏§¼·«¨ ·¬° 2¨ ©¨©¨ ¦·¤±§§²¶¨2 ©¨©¨ ¦·²©¶¨µ∏° ¦²±·¤¬±¬±ª≥≥׊ q Ρεσυλτ : ׫¨ ¶∏³³µ¨¶¶¬²±µ¤·¨ ²©⁄‹ µ¨¯¨ ¤¶¨ º¤¶±²·¶¤·¬¶©¬¨§¬± ¶¨µ∏° ¦²±2
·¤¬±¬±ª«¬ª«§²¶¨ ²©≥≥׊ q׫¨ µ¨ º¤¶±²¶¬ª±¬©¬¦¤±·§²¶¨2 ©¨©¨ ¦·µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¥¨·º¨¨ ±·«¨ ° q׫¨ ¶∏³³µ¨¶¶¬²±µ¤·¨ ²©⁄‹ µ¨¯¨ ¤¶¨ º¤¶¤¯¶²§¬©©¨µ2
±¨·¬± §µ∏ª¶¨µ∏°·¤®¨ ± ¤·§¬©©¨µ¨±··¬°¨¤©·¨µ≥≥׊·µ¨¤·° ±¨·qΧονχλυσιον : Œ·º¤¶±²··«¨ ¦¤¶¨ ·«¤··«¨ «¬ª«¨µ·«¨ §²¶¨ ª¬√ ±¨·²¤±¬°¤¯ o·«¨
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[ Κεψ ωορδσ] ¶¨µ∏° ³«¤µ°¤¦²¯²ª¼ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ «¨µ¥¤¯ ° §¨¬¦¬±¨ ~«¼³²¬¬¤¤±§µ¨²¬¼ª¨ ±¤·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
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