全 文 ：参 考 文 献 5
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( 1 9 9 8
一
0 3
一
2 1 收稿 )
E f f e e t s o f n
一
B u t a n o l E x t r a e t o f D i v a r i c a t e S a P o s h n i k o v i a
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.
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柴胡注射液对小鼠灌流肝脏缺氧复氧损伤的保护作用
重 庆医科大学卫生毒理学教 研室 ( 4 0 0 0 1 6) 汤 兵 ` 吴逸人 “ 康格非 ” ’
摘 要 采 用小 鼠离体肝灌流术在 K er b s 一 H en se le it ( K 一 H )灌 流液 中加 人柴胡注射液 , 观察柴胡对
肝缺氧 ( l h )复氧 ( l h ) 的影 响 。 结 果表明 : 柴胡组与缺氧组相 比 , 光镜 电镜下肝组织损伤较 轻 , 且肝
组织 乳酸脱氢酶 ( L D H )漏 出量 显著减 少 , 脏 /体 比 、 还原型谷胧甘 肤 (G S H )及黄嗦吟氧化 酶 ( X O D )
含量 有显著性差异 , 丙二醛 ( M D A ) 生成 延迟 。 揭示柴胡对 小鼠离体灌流肝缺 氧复氧损伤有 明显拮
抗作 用 , 其机制与抑制氧 自由基形成 有关 。
关键词 柴胡 氧 自由基 缺氧复氧 损伤
肝脏的缺血再灌注损伤是导致肝功能不
良的重要因素 , 氧自由基的形成在此过程中发
挥了重要作用 〔` 〕 。 柴胡作为一种传统中药 ,具
有和解退热 、 疏肝解郁的功效 。 近年来 ,研究发
现柴胡对实验性肝损伤有保护作用 〔2〕 。 我们采
用小鼠离体肝灌流术做成肝缺氧复氧模型 ,观
察柴胡在此过程中对肝抗缺氧复氧损伤的影
响 , 并初步探讨其作用机制 , 为获得一种安全
有效且价廉的器官移植保存液作基础性研究 。
1 材料与方法
1
.
1 动物 : 1 3 9 只 N I H 小 鼠 , 雌雄各半 , 体
重 18 一 2 2 9 , 由重庆医 科大学动物实验 中心
年为
旅
A d dr e s s
:
T a叹 B i n g , D e p a r t m e n t o f H y g i e n e T g x i e o l o g y , C h o n g g q in g U n i v e r s i t y o f M e d i e a l S e ie n e e s , C h o n g q in g汤 兵 1 9 9 0 年毕业于华 西医科大学公共卫生学院 , 获医 学学士学位 ,在重 庆医科 大学卫生毒理教研室 任教 。 1 9 9 7重庆医科大学医学检验 系临床检验诊断学获医学硕士学位 , 仍在重庆 医科大学卫生毒理 教研室任教 , 讲师 , 专业研究方 向
肝脏生化毒理 。
井 ` 劳动卫生教研 室 “ ` 医学检验 系临床 生化教研室
一
8 1 4
.
提供 。 收集灌 注流 出液 , 以 后每 隔 10 m in 收集一
1
.
2 药 物与 试剂 : 柴 胡注 射液 (1 g 生药 / 次 , 直至 12 0 m in , 用乳酸基质法测灌流液 中
m L ) 购于成都制药 六厂 ; 酚嚓二 甲醋硫酸盐 L D H 活 力 〔3〕 , 按 B ue ge JA 法 测 肝 组 织 中
( P M S ) 和 5 , 5气硫 代 双 C 二 硝 基 苯 甲 酸 ) M D A 含量 〔 6〕 , 灌 注 2 0 、 4 0 、 6 0 、 8 0 、 1 0 0 、 1 2 0
( D T N B ) 均为 F l u k a 公 司 产 品 ; 其余试剂 均 m in , 分别取肝按张平法测 肝组织 中 G S H 含
为国产分析纯 。 量 〔4 〕 , 按吴 晓生的方 法测肝组 织 中 X O D 活
1
.
3 动物模型及分组 : 动物禁食 24 h , 称重 力 〔 5〕 , 按 B ue ge J A 法测 肝 组织 中 M D A 含
后用 1 %戊巴 比妥溶液 i p 麻醉 (9 O m g k/ g ) , 量 〔创 , 灌流 12 o m in 后分别测肝 的脏 /体 比及
小 鼠按 门静脉插管术进行肝灌流 , 流速为 4 取肝组织作光镜和电镜检查 。
m L /m in
, 温度 3 7 C 士 0 . 5 ` C , 灌流 液采 用 2 结果
p H 7
.
4 不含血红蛋 白的 K 一 H 液 , 灌流液灌洗 2 . 1 肝灌流液 L D H 漏出量的变化 : 结果见
肝脏内部稳定 2 0 m in 后正式取样 。 充氧组 : 表 1 。 缺氧组从 4 0 m in 起显著增加 , 与柴胡
K
一
H 灌注液充以 95 % O : 和 5% C O : 的混合 组和充氧组都有显著性差异 ,而柴胡组 L D H
氧作饱和 灌流肝 Z h 。 缺氧组 : K 一 H 灌注液充 漏出量 明显减少 ( P < 0 . 0 1 ) , 柴胡组 与充氧
以 9 5 % N : 和 5% C O : 的混合 氮作饱和灌 流 组在整个灌流过程均无显著性差异 。
肝 l h , 再充以 同样混合氧作饱和灌流肝 l h 2 . 2 肝组织 中 G S H 含量 的变化 : 结果见表
做 成肝缺 氧复氧损伤模型 。 柴胡实验组 : 在 2 。 缺氧给 20 m in G S H 含量开始显著下降 ,
K
一
H 灌注液 中加入柴胡 注射液 4 m l一 / L , 其 柴胡组 60 一 12 O m in G S H 含量与缺氧组有
余 同缺氧组 。 显著性差异 ( P < 0 . 0 1 ) , 80 m in 后才与正常
1
.
4 测定方法 : 灌流插管完后 20 m in , 立 即 值有显著性差异 。
表 1 L D H 漏 出量变化 比较 ( U / h · g 肝而士 s )
t (m in )
组别 20 30 40 50 60 70 50 90 1。。 110 12。
缺氧组 859士132 94 7士 179 1093士193 14 18士 380 2 564士 1294 3476士1432 3923士935 3460士 100 7 26 28士 1460 1819士 974 1507士 629
柴胡组 889士91 93 9士 207 938士 16 9 ` 10 16士 102“ 1113士 145 ` 二 1436士330 “ 1476士 19 3“ 1335士2 07“ 12 78士 222 “ “ 1257士 250 ` 1099士 191
充氧组 833士77 88 0士 158 861士 16 1“ 98 9士 116 ’ ` 1075士 186 “ 1189士211 ` ’ 1238生202 ’ ` 114 1士2 12“ 10 61士 130“ 1016士 156 ` “ 941士 76 ’ `
。 = 10 ,与缺氧对照组相比: ’ 尸< 0 . 05 “ 尸< 0 . 01
表 2 肝组织 G S H 含 t 变化比较 ( n m o l / m g 肝 厉士 s )— 一 -一 矛 ( m in )组别 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 12 0( n 一 1 0 ) ( n = 6 ) ( 刀 一 6 ) ( n = 6 ) ( n 一 6 ) ( n 一 6 ) ( n = 10 )缺氧组 1 2 . 9 5士 0 . 6 6 12 . 1 1士 1 . 0 4 1 1 . 5 8士 1 . 0 3 8 . 1 2士 1 . 0 4 4 . 6 0士 0 . 4 7 3 . 6 7士 0 . 4 6 3 . 4 6士 0 . 6 4柴胡组 12 . 5 7士 0 . 5 1 1 2 . 1 4士 1 . 0 2 1 1 . 5 8士 0 . 7 0 于 餐 1 1 . 1 4士 0 . 7 2 份 备 10 . 8 8士 0 . 5 7 芳 鉴 1 0 . 5 1士 1 . 0 2 普 “充氧组 12 . 5 8士 0 . 5 2 1 2 . 3 1士 0 . 4 7 1 2 . 3 8士 0 . 3 5 ’ ` 1 1 . 0 1士 0 . 6 9 ` “ 10 . 9 8士 0 . 9 9 ” 1 0 . 9 1士 1 . 0 1 “与缺氧对照组相 比 : “ 尸 < 0 . 012 . 3 肝 组织 中 X O D 含量 的变化 : 结果见表 显著性差异 ( P < 0 . 0 1 ) , 柴 胡组 与充氧组在3 。 缺氧组 20 m in X O D 开始下降与柴胡组有 整个灌流过程均无显著性差异 。表 3 肝组织 X O D 含 t 变化 比较 ( U / g 肝反士 s)t ( m i n )组 别 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0( n = 10 ) ( n = 6 ) ( n = 6 ) ( n = 6 ) ( n = 6 ) ( n = 6 ) ( n = 1 0 )缺氧组 16 . 55士 1 . 0 1 1 4 . 5 9士 0 . 8 7 1 2 . 1 5士 1 . 1 1 8 . 7 5士 0 . 9 1 7 . 6 9士 0 . 8 7 7 . 1 4士 0 . 8 4 6 . 1 1士 0 . 6 4柴胡组 1 6 . 96士 0 . 5 0 “ 1 5 . 8 6士 1 . 1 6 ` “ 1 5 . 5 1士 0 . 7 4 ` ’ 1 4 . 4 3士 1 . 27 ` “ 1 3 . 3 0士 0 . 9 2 ” 1 2 . 5 0士 1 . 2 0 “充氧组 16 . 8 2士 0 . 8 3 “ 1 6 . 5 7士 0 . 9 5 “ 1 5 . 3 3士 1 . 2 1“ 1 4 . 8 2士 1 . 1 3 “ 1 2 . 9 3士 1 . 1 8 “ 1 1 . 7 5士 1 . 3 0 “
与缺 氧对 照组 相比 : “ 尸 < .0 01
《中草药 》 1 9 9 8 年第 29 卷第 12 期 . 8 1 5
2
.
4 肝组织中 M D A 含量的变化 : 结果见表
4
。 缺氧组 4 0 m i n M D A 开始上升 , 6 0 m i n 达
峰值 , 而 后又 下 降 , 柴 胡组 M D A 在 8 0 m in
才开始上升 , 1 0 m in 时达峰值 。
表 4 肝组织 M D A 含 . 变化 比较 ( n m ol / g 肝 厉士 、 )
组别
( n = 1 0 )
2 O
( n 一 6 ) ( n = 6 )
t ( m i n )
6 O
( n = 6 ) ( n = 6 ) (
护己
= 6 )
1 2 0
(
n
= 1 0 )
缺 氧组
柴胡组
充 氧组
6
.
3 1士 1 . 5 3 7 . 2 6士 1 . 3 8
6
.
0 9士 1 . 2 0
5
.
9 8士 1 . 3 8
9
.
5 5士 1 . 7 7
7
.
0 5士 1 . 4 0 粉 去
6
.
6 7士 1 . 5 5 势 爹
2 0
.
3 0士 3 . 98
7
.
6 9士 1 . 9 5
7
.
2 7士 2 . 1 3
1 3
.
2 5士 1 . 9 7
1 1
.
4 3士 1 . 5 9
9
.
3 0士 1 . 9 8 替 备
1 0
.
2 6士 1 . 9 5
1 3
.
14 士 2 . 6 5 苦
8
.
6 5士 1 . 8 5
1 0
.
5 4士 1 . 5 4
1 1
.
3 5士 2 . 5 1
9
.
1 7士 1 . 7 7
与缺氧 对照组相 比 : ` 尸 < 0 . 05 二 二 P < 0 . 01
2
.
5 肝 脏 脏 /体 比 ( g / 1 0 0 9 ) : 缺 氧 组 为
6
.
5 2 士 0 . 6 6 , 柴 胡组 为 4 . 7 6士 0 . 4 5 , 充氧组
为 4 . 4 0士 0 . 3 0 ,各组动物均为 10 只 ,柴胡组
和 充 氧 组 与 缺 氧 组相 比 都有 显 著 性 差 异
(尸 < 0
.
0 1 )
。
2
.
6 肝组织光镜 和 电镜检查 : 结果见表 5 。
缺氧组光镜下病变总积分 最高 , 但 3 个组无
显著性差异 , 3 组肝组织透射 电镜检查 , 缺氧
组肝细胞 内有大量空泡 , 多集 中在肝细胞 核
周 , 内皮及整个血窦损伤严重 ; 柴胡组内皮损
伤较轻 , 肝细胞 内有空 泡 , 空泡 内容物电子密
度与血窦腔 中电子密度一样 ; 充氧组肝细胞
内空泡较少 , 但 内皮损伤较严重 。 3 组都有肝
细胞 内紧密连接破坏 , 毛细胆管打开 , 线粒体
损伤不 明显 的特点 , 这与灌流时 间长造成的
肝组织机械损伤有关 。
表 5 光镜检查结果 比较
胞浆小空泡 空泡变性 点状坏死 灶性坏死 间质性炎症
A B C A B C A B 〔’ A B C A B C 总积分
缺氧组 1 1 0 0 2 1 3 2 3 3 3 0 0 1 0 20
柴胡组 1 0 2 0 1 3 1 1 3 1 1 0 0 0 0 上4
充氧组 0 1 0 1 0 2 1 2 1 1 1 1 0 0 0 11
。 : 一 1 : + 2 :什 3 :拼 A 、 B 、 C为动物代号
3 讨论
由于 小鼠离体肝脏已排除了来 自其他脏
器的干扰 , 流出液 中 L D H 含量 随时 间变化
是检查肝 细胞坏死 的灵敏指标 〔 7〕 , 柴胡在缺
氧 l h 复氧 l h 过程中能很好地防止肝细胞
的破坏 。
X O D 活 力 在 复 氧 后 没 有 升 高 , 3 组
X O D 活力都有不同程度下降 ,缺氧组下降更
多 ,提示肝缺氧复氧时氧 自由基 的产生主要
不是通过黄嚓吟一黄嚷吟氧化酶系统产生 ,或
·
8 1 6
.
是 由于肝中黄嗓吟脱氢酶 ( X D H ) 向 X O D 转
化速度很慢 , 也可能是长时 间灌流导致 X O D
失活 。 目前许多研究认为 , 中性粒细胞及枯否
氏细胞产生的活性氧在缺氧复氧损伤中发挥
了重要作用 〔3〕 。
缺 氧组 G SH 4 0 m i n ~ 1 0 0 m i n 下 降明
显 , 提示此时段氧 自由基性 成较多 , 而柴胡组
能有效地防止 G S H 的消耗 , 阻止大部分氧自
由基生成 , 但柴胡组与充氧组在 80 m in 以后
与正常值相 比有 显著性差异 , 说 明均不能完
全阻止 G S H 的消耗 。
缺 氧组在 6 0 m in 时 M D A 生成达峰值
后下 降 , 提示复氧过程 中脂质过氧化程度较
少 。 柴胡组在 1 0 m in M D A 生成达峰值 , 生
成量相对减少 , 使缺氧复氧过.程中的脂质过
氧化作用延迟 。
结合脏 /体比 ,光镜 、 电镜观察结果 , 缺氧
组肝组织水肿较明显 , 肝细胞及血窦损伤均
较严 重 , 肝细胞 内空泡的形成是缺氧损 伤肝
组织酶释放的结果 。 充氧组血窦损伤较柴胡
组严重 , 柴胡组肝细胞 内空泡可能与灌 流液
渗透压增大有关 ,柴胡组 内皮损伤较轻 , 这对
于整个缺氧复氧过程至关 重要 , 目前认 为血
窦 内皮及枯否氏细胞损伤激活是整个缺血再
灌损伤的始发因素 〔9〕 。 因此 , 本实验结果提示
柴胡注射液对小鼠离体肝缺氧复氧损伤有较
好 的保护作用 , 其作用机制与阻止氧 自由基
的形成有关 。
参 考 文 献
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M i e r o s o m a l L i p id P e r o x id a t i o n
V o l
.
1 11
,
M
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i n E n z y m o l o g y
.
B i o m e m b r a n e
.
N e w
Y o r k
:
A e a d e m i e P r e s s
, 19 7 8
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L e m a s t e r s J J
, ` t a l
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J C
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C a r a e e n i P
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A m J P h y
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G 7 9 9
L a n g d a l e L A
, e t a l
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J L
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1 9 9 3 ; 5 3 ( 5 )
: 5 1 1
( 1 9 9 8
一
0 5
一
0 4 收稿 )
P r o t e e t i v e E f f e e t o f C h a i h u I n j e e t i o n o n H y P o x i a
一 r e o x y g e n a t i o n
-
i n d u c e d M o u s e L i v e r I n j u r y
T a n g B in g
,
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r e n a n d K
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,
C h
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M e d ie a l S e ie n e e s
,
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A b s t r a e t B y u s i n g i
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a t e d m o u s e l iv e r p e r f u s i o n m o d e l
, t h e p r o t e e t iv e e f f e e t o f C h a ih u in j
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a 一 r e o x y g e n a t i o n l iv e r in j
u r y w a s s t u d i
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i n l iv e r h o m o g e n a t e w e r e in v e s t ig a t e d a t d i f f e r e n t t im e e o u r s e s
.
L iv e r p a t h
o lo g y b y li g h t m ie r o s e o p y a n d e le e
-
t r o n ie m i e r o s e o p y w e r e o b s e r v e d a f t e r p e r f u s io n
·
T h e r e s u l t im p li e d t h a t C h a ih u in j
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p r o t e e t i v e e ff e e t o n m o u s e li v e r i n i
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一 r e o x y g e n a t io n in i
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乌祀蝎精酒对失血性血虚动物的补血作用
河南省 医学科 学研究所 (郑州 4 5 0 0 5 2) 华海婴 ` 叶启 霞 戈士文
摘 要 乌祀蝎精酒对急性失血模型小 鼠及慢性失血模型大 鼠均具有明显的改善作
用 ,可加速动物 R B C 及 H b 的恢复 , 并可有效地刺激网织红细胞的生成 。
关键词 乌祀蝎精 酒 红细胞 (R B C ) 血色 素 ( H b) 网织 红细胞 ( R et )
乌祀蝎精酒是 由首乌 、 拘祀 、 全蝎 、 山药 、 g ; 健康 W i st a : 远交系大鼠 ,体重 3。 。 g一 3 30
大枣等多味中药配伍 , 经低度 曲酒炮制而成 g , 雌雄兼用 。 由河南省实验动物中心提供 。
的 口服药酒 。 具有补气健脾 、 养血和营 、 活血 常规饲料喂养 , 自由饮水 。 实验室环境温度为
化察等功效 。 临床用于治疗面色苍白 、 头 目眩 2 C 一 25 C 。
晕 、 心悸怔冲 、 失眠健忘 、 四肢麻木等证候 ,根 2 方法与结果
据该制剂的功能主 治 , 我们对其 治疗失血性 2 . 1 对急性血虚模型小 鼠红细胞 ( R B C ) 及
血虚证的作用进行 了实验研究 。 血色素 ( H b) 的影响 〔 1〕 : 取 50 只健康小 鼠 , 随
1 实验材料 机分为 5 组 , 每组 10 只 。 将每 鼠尾部以 70 %
1
.
1 乌祀蝎精酒 : 药酒含生药 为 30 % ,赋形 酒精反复擦拭 ,使之充血后剪去尾尖 0 . 5 Cm
剂为 35 “ 曲酒 , 由河南 省宝 丰县东 亚钳蝎研 一 0 . 75 Cm , 即刻采血测 定 R B C 及 H b 的正
究所提供 ,批号 9 4 0 9 0 4 。 铁维隆 口服液 , 河南 常值 。 采血后同期置小 鼠尾部于 4 0 `C 左右定
省安 阳市保健品厂生产 , 批号 9 2 0 9 1 8 。 量 温水 的刻 度 试 管 内 , 使 其 出血 量 达 0 . 5
1
.
2 动物 : 健康昆明种小 鼠 , 体重 21 9 一 23 m L 。 Z h 后重复采血检测 ,观察造型结果 ,必
案
A d d r e s s
:
H u a H a iy in g
,
H e n a n In s t i t u t e o f M e d i e a l S e i e n e e s
,
Z h e n g z h o u
《中草药 ) 1 9 9 8 年第 2 9 卷第 1 2 期 · 8 1 7 ·