全 文 ：犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的测定及益心酮
缓释片药动学研究
曲 璐，郑杭生，冯年平，李淞明
（上海中医药大学 中药学院 药剂教研室，上海 ２０１２０３）
［摘要］ 目的：建立测定犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的ＨＰＬＣ法，初步研究益心酮缓释片在 Ｂｅａｇｌｅ犬体内的药
动学。方法：应用自身对照设计实验法，用反相高效液相色谱法测定单剂量口服益心酮缓释片（２片 ×２８８ｍｇ／片）
和市售普通片（４片×１４４ｍｇ／片）后，Ｂｅａｇｌｅ犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的浓度，应用非隔室模型统计矩方法和３ｐ８７
程序对药动学参数进行分析。结果：益心酮缓释片和普通片口服后在Ｂｅａｇｌｅ犬体内过程可分别用单室和双室模型
描述；药动学参数为：口服普通片：Ｔ１／２＝８９４ｈ，Ｔｍａｘ＝１ｈ，ＡＵＣ０∞ ＝５８８０４ｎｇ·ｈ·ｍＬ
－１，ＭＲＴ＝６１ｈ；口服缓释
片：Ｔ１／２＝５２２ｈ，Ｔｍａｘ＝４ｈ，ＡＵＣ０∞ ＝６７９２７５ｎｇ·ｈ·ｍＬ
－１，ＭＲＴ＝８４ｈ，相对生物利用度为１１５５％。结论：自制
缓释片在犬体内表现出了缓释特性。
［关键词］ 益心酮；牡荆素鼠李糖苷；缓释片；药动学
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１０１１６８０３
［收稿日期］ ２００７０６１０
［基金项目］ 上海市教委资助项目（０３ＣＫ０１）；上海市教委重
点学科建设项目（Ｊ５０３０２）
［通讯作者］ 冯年平，Ｔｅｌ：（０２１）５１３２２１９７，Ｅｍａｉｌ：ｎｐｆｅｎｇ＠
ｓｈ１６３．ｎｅｔ
益心酮是从中药山楂中提取的总黄酮，有降压、
降血脂、耐缺氧等多种药理作用［１５］。益心酮片即为
益心酮的普通片剂，２０００，２００５年版《中国药
典》［６，７］均有收载，功能为活血化瘀，宣通血脉，主治
瘀血阻脉所致的胸痹，症见胸闷憋气、心前区刺痛、
心悸健忘、眩晕耳鸣；冠心病心绞痛、高脂血症、脑动
脉供血不足见上述证候者。普通片剂的服用方法为
１日３次，病人顺应性较差，因此，作者试制了益心
酮缓释片。牡荆素鼠李糖苷（ｖｉｔｅｘｉｎｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ，
ＶＩＴＲ）是益心酮中主要活性成分［８］，已有研究［９］从
体外培养细胞实验证明了 ＶＩＴＲ有保护实验性心肌
缺血、改善血流动力学等作用。经过文献检索，作者
未发现关于ＶＩＴＲ的药物动力学的国内外研究，故本
研究建立了１种高效液相色谱方法用于测定 ｂｅａｇｌｅ
犬血浆中ＶＩＴＲ的浓度，并对自制益心酮缓释片与市
售益心酮普通片的药物动力学进行了初步研究。
１ 材料
１．１ 药物
益心酮缓释片（批号２００４１１０４，自制，每片含山
楂叶提取物２８８ｍｇ），益心酮片（批号２００４０２０１，山
西金甲药业有限公司，每片含山楂叶提取物 １４４
ｍｇ），ＶＩＴＲ对照品（批号１１１６６８２００４０１，中国药品
生物制品检定所）。
１．２ 动物
健康Ｂｅａｇｌｅ犬２只，体重１２ｋｇ，雌雄各一，由中
国科学院上海药物研究所动物中心提供，动物许可
证号ＳＹＸＣ（沪）２００３００２９。
１．３ 试剂
甲醇（色谱纯，Ｍｅｒｃｋ），乙腈（色谱纯，Ｍｅｒｃｋ），
四氢呋喃（色谱纯，Ｓｉｇｍａ），９５％乙醇（分析纯，国药
集团）。
１．４ 仪器
１１００型高效液相色谱仪（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；
ＦＡ１００４Ｎ电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；
ＳＫ５２００Ｈ超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公
司）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械厂）；ＸＷ－８０Ａ
旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；２００μＬ微量取
样器（北京青云卓立精密设备有限公司）；ＴＧＬ－１６Ｇ
－Ａ型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）。
２ 方法与结果
２．１ 血浆中ＶＩＴＲ的ＨＰＬＣ测定
２．１．１ 色谱条件 色谱柱：ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（２５０
ｍｍ×４６ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇乙腈四氢呋喃
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０５％冰醋酸溶液（１∶１∶１９４∶７８６）；流速１０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；检测波长３４１ｎｍ；柱温２５℃。
２．１．２ 样品的预处理与分析 取肝素抗凝血浆
２００μＬ，置２０ｍＬ具塞离心试管中，甲醇５００μＬ，
涡旋混合３０ｓ，离心（１２×１０４ｒ· ｍｉｎ－１）１０ｍｉｎ。
分取上清液，于５０℃氮气流下吹干。残渣加入稀乙
醇１００μＬ，涡旋溶解 ３０ｓ，离心（１２×１０４ ｒ·
ｍｉｎ－１）１０ｍｉｎ，取上清液２０μＬ注入高效液相色谱
仪，记录色谱图。
２．２ 分析方法的确证
２．２．１ 系统适用性试验 在上述色谱条件下，
ＶＩＴＲ的理论板数不小于２０００。
２．２．２ 标准曲线的绘制 取犬空白血浆２００μＬ，
加入ＶＩＴＲ系列对照品溶液１００μＬ，使ＶＩＴＲ的血药
浓度为 ０１２４，０２４８，１２４，２４８，４９６，９９２，１２４
μｇ·ｍＬ－１。其他按照２．１．２项下方法操作。以血
浆中待测物的浓度（μｇ·ｍＬ－１）为横坐标，待测物对
应峰面积为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运
算，标准曲线回归方程为：Ｙ＝２８６８６Ｘ－００３１３，
Ｒ＝０９９９７。本方法在０１２４～１２４μｇ·ｍＬ－１线性
较好，定量限为００６２μｇ·ｍＬ－１。
２．２．３ 方法回收率考察 取空白血浆２００μＬ，按
２．２．２项下方法操作，分别取低、中、高３个质量浓
度（０２４８，２４８，１２４μｇ·ｍＬ－１）的样品各５样本，
照２．１．２项下方法操作，记录被测物的峰面积，与未
经处理的相同浓度的标准溶液峰面积比较，测得方
法回收率分别为７３３％，７４２％，７５８％。
２．２．４ 方法专属性 通过将供试动物的空白血浆
的色谱图与空白血浆中加入待测物牡荆素鼠李糖苷
后得到的色谱图及给药后犬血浆色谱图进行比较
（图１），证明血浆中内源性物质不干扰测定。
图１ 牡荆素鼠李糖苷血浆样品的色谱图
Ａ．犬空白血浆；Ｂ．犬空白血浆加对照品；Ｃ．给药后犬血浆；
１．为牡荆素鼠李糖苷
２．２．５ 精密度 取空白血浆２００μＬ，按２．２．２项
下方法操作，分别取高、中、低３个质量浓度（１２４，
２４８，０２４８μｇ·ｍＬ－１）的样品各５份，按照２．１．２
项下方法操作，连续５ｄ，分析方法在高、中、低３个
质量浓度的精密度良好，ＲＳＤ分别为２３％，２９％，
５３％；同一样品同日内连续进样５次，高、中、低３
个质量浓度日内精密度良好，ＲＳＤ分别为 ３６％，
４８％，５２％。
２．３ 犬体内药物动力学研究
２．３．１ 给药方案与方法 ２只 Ｂｅａｇｌｅ犬分别口服
益心酮自制缓释片２片与市售普通片４片，１周后
交叉给药试验。用药前禁食１２ｈ（不禁水），试验中
在给药后６ｈ统一进食。整个实验过程禁食含大豆
饲料。将片剂以完整形式直接塞入会厌部，使 Ｂｅａ
ｇｌｅ犬自动吞咽并注入适量清水送下。
２．３．２ 血样采集与分析 于给药前取空白血样约
２ｍＬ，给药后０，０５，１，２，３，４，５，６，８，１０，１２，１４，１６，
２０，２４ｈ时间点分别取前肢静脉血约２ｍＬ，离心分
离出血浆，冷冻保存，待分析。
２．３．３ 结果 Ｂｅａｇｌｅ犬服普通片和自制缓释片后，
取２００μＬ血浆样品，按２．１．２项下方法操作，进样
２０μＬ，将所得的峰面积代入标准曲线，求得血浆中
ＶＩＴＲ的浓度，血药浓度时间曲线见图２。
图２ Ｂｅａｇｌｅ犬口服益心酮制剂（含提取物５７６ｍｇ）
药时曲线
２．３．４ 药动学参数计算 隔室模型拟和：用３ｐ８７
程序拟合，对市售益心酮普通片和自制缓释片的血
药浓度时间数据进行拟合。结果表明，自制益心酮
缓释片的体内过程符合单室模型特征，而普通片符
合双室模型。
药动学参数：Ｃｍａｘ，Ｔｍａｘ采用实测值；采用梯形法
计算ＡＵＣ值，以半对数作图法由消除相的末４个浓
度点计算 ｔ１／２和 Ｋｅ；用统计矩分析计算 ＭＲＴ和
ＡＵＭＣ，结果见表１。
可见自制益心酮缓释片的平均滞留时间大于市
售普通片。
生物利用度：以非隔室模型计算得到的血药浓
度时间曲线下面积 ＡＵＣ０∞求得相对生物利用度为
１１５５％。
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表１ 益心酮普通片和缓释片药动学参数
药动学参数 普通片／５７６ｍｇ 缓释片／５７６ｍｇ
Ｔ１／２／ｈ ８９４ ５２２
Ｋｅ／ｈ ００７８ ０１３３
Ｃｍａｘ／μｇ·ｍＬ－１ １１２ ０７９
Ｔｍａｘ／ｈ ２０ ４０
ＡＵＣ０ｔ／ｎｇ·ｈ－１·ｍＬ－１ ５０１５０ ６１２００
ＡＵＣ０∞／ｎｇ·ｈ
－１·ｍＬ－１ ５８８０４ ６７９２７５
ＡＵＭＣ／ｎｇ·ｈ２·ｍＬ－１ ３６１２９４ ５７１１１４
ＭＲＴ／ｈ ６１ ８４
４ 讨论
４．１ 指标成分的选择
对中药多成分缓释片而言，无论是释放度还是后
期动物体内药物动力学实验都要求一个可以被测得
的指标成分。２０００年版《中国药典》只有测定益心酮
中总黄酮的紫外法，但不适用于体内研究；２００５年版
药典新增了对金丝桃苷含量的测定，但是原料药山楂
叶提取物中金丝桃苷的含量较低，仅占总提取物的
０４％，使得后期药物动力学实验中ＨＰＬＣ难以检测。
本研究选择了山楂叶提取物中含量较高的牡荆素鼠
李糖苷为指标成分，满足了体内研究的要求。
４．２ 样品预处理方法
牡荆素鼠李糖苷有一定水溶性，用液液萃取方法
如二氯甲烷、氯仿、异丙醇、醋酸乙酯等萃取血浆中牡
荆素鼠李糖苷，提取效率较低，故采用沉淀蛋白法。选
用乙腈、甲醇、三氯醋酸等试剂进行考察，甲醇效率最
高，杂峰干扰较小，操作简便，故采用甲醇沉淀蛋白法。
４．３ 药动学
自制益心酮缓释片及市售普通片在 Ｂｅａｇｌｅ犬
体内药动学的初步研究表明：自制益心酮缓释片的
体内特征符合单室模型，自制缓释片的平均滞留时
间大于市售普通片，具有缓释特征。
［参考文献］
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ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｉｔｅｘｉｎｒｈａｍｎｏｓｉｄｅｉｎＢｅａｇｌｅｄｏｇｐｌａｓｍａａｎｄ
ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆＹｉｘｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓ
ＱＵＬｕ，ＺＨＥＮＧＨａｎｇｓｈｅｎｇ，ＦＥＮＧＮｉａｎｐｉｎｇ，ＬＩＳｏｎｇｍｉｎｇ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０１２０３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｖｉｔｅｘｉｎｒｈａｍｎｏｓｉｄｅｉｎｐｌａｓｍａｏｆＢｅａｇｌｅｄｏｇｓａｎｄｓｔｕｄｙｔｈｅ
ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆＹｉｘｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓｉｎＢｅａｇｌｅｄｏｇｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡｎｅｗｌｙｄｅｖｅｌｏｐｅｄＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄ
ｕｓｉｎｇＣ１８ｃｏｌｕｍｎａｎｄｍｅｔｈａｎｏｌａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｎｆｕｒａｎ０５％ ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（１∶１∶１９４∶７８６）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｖａｌｉｄａｔｅｄ，
ａｎｄｔｈｅｎｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｖｉｔｅｘｉｎｒｈａｍｎｏｓｉｄｅｉｎｐｌａｓｍａｏｆＢｅａｇｌｅｄｏｇｓａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＹｉｘｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅ
ｔａｂｌｅｔｓａｎｄｇｅｎｅｒａｌｔａｂｌｅｔｓ．Ｔｈｅｍａｉｎｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｅｓｔｉｍａｔｅｄｂｙｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐｒｏｇｒａｍ３ｐ８７．Ｔｈｅｎｏｎｃｏｍｐａｒｔ
ｍｅｎｔａｌｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅａｌｓｏｃａｌｃｕｌａｔｅｄｏｎｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｓｔａｔｉｓｔｉｃｍｏｍｅｎｔｔｈｅｏｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐｒｏｆｉｌｅｓ
ｏｆＹｉｘｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓａｎｄｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅｆｉｔｅｄｔｏａｏｎｅａｎｄｔｗｏｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｏｐｅｎｍｏｄｅｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ
Ｔ１／２，Ｔｍａｘ，ＡＵＣ０∞ ａｎｄＭＲＴｆｏｒＹｉｘｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅ５２２ｈ，４０ｈ，６７９２７５ｎｇ·ｈ·ｍＬ
－１ａｎｄ８４ｈ，ｒｅｓｐｅｃ
ｔｉｖｅｌｙ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ８９４ｈ，１０ｈ，５８８０４ｎｇ·ｈ·ｍＬ－１ａｎｄ６１ｈｆｏｒｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｔａｂｌｅｔｓ．ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅＹｉｘ
ｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓｗａｓ１１５５％ ｉｎＢｅａｇｌｅｄｏｇｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆＹｉｘｉｎｔｏｎｇｓｕｓｔａｉｎｅｄ
ｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｔｕｄｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｙｉｘｉｎｔｏｎｇ；ｖｉｔｅｘｉｎｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ；ｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｔａｂｌｅｔｓ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ
［责任编辑 古云侠］
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