全 文 ：第 28卷 第 3期
2 0 1 0年 3月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 28 No. 3
M ar. 2 0 1 0
中华中医药
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学刊
RP -HPLC法同时测定山葛降脂分散片中
葛根素和牡荆素鼠李糖苷的含量
程 岚,王 博,张海燕,陈翠英,康廷国
(辽宁中医药大学药学院, 辽宁 大连 116600)
摘 要:目的: 建立反相高效液相色谱法同时测定山葛降脂分散片中葛根素和牡荆素鼠李糖苷的含量测定方
法。方法:色谱柱为 Diam onsilC18 5Lm ( 200mm @ 4. 6mm ),流动相为乙腈 - 0. 5%冰醋酸, 以流速 1. 0mL# m in- 1
进行梯度洗脱;柱温: 35e ;检测波长为 268nm。结果: 葛根素在 0. 076125~ 0. 380625Lg( r= 0. 9993)、牡荆素鼠李
糖苷在 0. 055~ 0. 275Lg( r= 0. 9998)的范围内呈现良好线性关系, 平均加样回收率为分别 98. 08% 和 98. 82% ,
RSD分别为 2. 2%和 2. 2%。结论: 本方法简便、快速、准确,可用于山葛降脂分散片的质量控制。
关键词: RP -HPLC;山葛降脂分散片;葛根素; 牡荆素鼠李糖苷
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2010) 03 -0548 - 02
Determ ination ofPuerarin and V itex ia - rhamnoside in
Shangejiangzh iD ispersib le Table t by RP -HPLC
CHENG Lan, WANG Bo, ZHANG H ai-yan, CHEN Cui-y ing, KANG T ing-guo
( S chool of Pharmacy, Liaon ing Univers ity of TCM, Dalian 116600, Liaon ing, Ch ina)
Abstrac t: Ob jective: To develop aRP -HPLC me thod for the sim ultaneous de te rm ina tion of puerarin and v itex ia- rh-
am noside in Shangejiang zh i dispe rsible table.t Methods: The ana ly sis wa s pe rform ed on D iamonsilC18 ( 200mm @ 4. 6mm,
5Lm ), The investigated com pounds we re separated w ith g radientm obile phase consisting o f 0. 05% ace tic acid and aceto-
nitrile. The tempe rature o f sam plem anagerw as se t at 35e . The wave le rag th o f the de tectorw as 268nm. R esults: Pue rar-
in and vitex ia - rham noside presented a good linear co rre lation in range of0. 076125 ~ 0. 380625Lg ( r = 0. 9993) and
0. 055~ 0. 275Lg ( r = 0. 9998). The average recovery was 98. 08% ( RSD= 2. 2% ) and 98. 82% ( RSD= 2. 2% ). Con-
c lusion: Them e thod is sim ple, rapid and accurate, and su itab le for the quality con tro l of Shangkejiegu tablets.
Keyw ords: RP -HPLC; Shange jiangzhi dispersib le tab le ;t pue rarin; v itexia - rhamnoside
收稿日期: 2009 - 10 - 22
基金项目:辽宁省教育厅重点实验室项目 ( 200605035 )
作者简介:程岚 ( 1965 - ) , 女,山东冠县人, 副教授,硕士,研究方
向:中药新剂型与中药开发。
通讯作者:康廷国 ( 1955 - ) ,男, 内蒙古赤峰人,教授,博士研究生
导师,研究方向:中药鉴定与品质评价。
山葛降脂分散片由葛根提取物、山楂叶提取物组成的
中药五类新药制剂, 具有活血化瘀, 化浊降脂, 用于气滞血
瘀症和高血脂症。其中葛根素为葛根提取中有效成分,具
有扩张冠状动脉、改善微循环、清除氧自由基、抑制平滑肌
细胞增生 [1 ]等作用。牡荆素鼠李糖苷为山楂叶中有效成
分,具有保护实验性心肌缺血、改善血流动力学等作用 [2 ]。
故本文采用反相高效液相色谱法 [3 - 5 ], 同时测定了本品中
葛根素及牡荆素鼠李糖苷含量, 方法准确、快速、重复性好,
适用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药
Agilen t1100液相色谱仪; 葛根素对照品 (中国药品生
物制品检定所,批号 : 753 - 200007); 牡荆素鼠李糖苷对照
品 (中国药品生物制品检定所, 批号 : 111668 - 200401); 乙
腈为色谱纯,其余均为分析纯;山葛降脂分散片 (自制 3批,
批号: 081201、081202、081203)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱 D iam onsilC
18
( 200mm @ 4. 6mm,
5Lm ) ,流动相: 乙腈 ( A ) - 0. 5% 冰醋酸 ( B )为流动相,梯度
洗脱 ( 0 ~ 12m in, 88% y 82% B; 12 ~ 20m in, 82% y 80%
B); 流速 1. 0mL# m in -1,柱温: 35e ,检测波长: 268nm。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取葛根素、牡荆素鼠李
糖苷对照品适量, 加甲醇溶解, 制成每 1m L含葛根素
01 03045mg、牡荆素鼠李糖苷 0. 022mg的混合对照品溶液,
即得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品 20片, 精密称定,研细,
取粉末约 0. 05g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲
醇 50m L, 称定重量, 超声处理 (功率 250W, 频率 33kH z)
20m in,放冷, 再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀, 滤
过,取续滤液, 即得。
2. 4 阴性干扰试验 取除去葛根提取物、山楂叶提取物
以外的其它辅料,按分散片的制备方法制成空白片, 再按供
试品制备方法同法制成阴性液。精密吸取供试品溶液、阴
性液、对照品溶液各 5LL, 按上述色谱条件测定, 结果阴性
液在与葛根素、牡荆素鼠李糖苷相同保留时间处无色谱峰
出现 (见图 1~ 3), 阴性对本品含量测定无干扰。
2. 5 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品混合溶液
各 2. 5、5、7. 5、10、12. 5LL, 注入液相色谱仪中, 测定峰面
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DOI：10.13193/j.archtcm.2010.03.101.chengl.045
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图 1 对照品 HPLC色谱图
图 2 样品 HPLC色谱图
图 3 阴性 HPLC色谱图
1.葛根素; 2.牡荆素鼠李糖苷
积,以峰面积积分值为纵坐标 ( Y ), 对照品进样量为横坐标
( X ), 绘制标准曲线。其回归方程分别为葛根素: y =
239115x+ 14. 41, r= 0. 9993;牡荆素鼠李糖苷: y= 1348x+
9. 74, r= 0. 9998。结果表明, 葛根素进样量在 0. 076125 ~
0. 380625Lg、牡荆素鼠李糖苷进样量在 0. 055~ 0. 275Lg范
围内线性关系良好。
2. 6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 5LL, 注入
液相色谱仪,连续进样 6次, 分别测定峰峰面积, 结果表明,
精密度良好,葛根素的 RSD为 2. 4% ( n = 6), 牡荆素鼠李
糖苷的 RSD为 2. 6% ( n= 6)。
2. 7 重复性试验 精密称取同一批样品 6份, 分别按供
试品溶液制备方法操作,精密吸取各供试品溶液 5LL,分别
注入液相色谱仪中, 测定。结果葛根素平均含量为
311 64m g# 片 -1, RSD= 1. 0% ( n = 6); 牡荆素鼠李糖苷的平
均含量为 16. 59 mg# 片 - 1, RSD= 1. 3% ( n= 6)。
2. 8 稳定性试验 取同一供试品溶液, 分别于 0、2、4、6、
8h进样 5LL, 测定峰面积, 结果表明, 供试品溶液在 8h内
稳定,葛根素的 RSD为 0. 2% ( n = 5 ), 牡荆素鼠李糖苷的
RSD为 1. 9% ( n = 5)。
2. 9 回收率试验 取已知含量葛根素含量 ( 31. 64m g /
片 )、牡荆素鼠李糖苷含量 ( 16. 59m g /片 )的样品 20片, 分
别称取粉末约 0. 025g, 各 6份, 精密称定, 分别精密加入浓
度为 0. 512m g /m L葛根素对照品溶液 3. 0mL, 浓度为
01 438m g /mL的牡荆素鼠李糖苷对照品溶液 2. 0m L,精密加
入甲醇 45. 0mL,按供试品溶液的制备方法制备及上述色谱
条件,测定, 回收率计算结果见表 1~ 2。
表 1 葛根素回收率试验测定结果
序号 取样量
( g)
葛根素
含量 (mg)
对照品
加入量 (mg)
实测总
量 (mg)
回收率
(% )
€x(% ) R SD (% )
1 0. 0252 1. 587 1. 536 3. 082 97. 3
2 0. 0250 1. 574 1. 536 3. 044 95. 7
3 0. 0248 1. 562 1. 536 3. 053 97. 1 98. 08 2. 2
4 0. 0257 1. 619 1. 536 3. 146 99. 4
5 0. 0256 1. 612 1. 536 3. 105 97. 2
6 0. 0253 1. 593 1. 536 3. 157 101. 8
表 2 牡荆素鼠李糖苷回收率试验测定结果
序号 取样量
( g)
牡荆素鼠李糖
苷含量 ( mg)
对照品
加入量 ( mg)
实测总
量 ( mg)
回收率
(% )
€x(% ) R SD (% )
1 0. 0252 0. 832 0. 876 1. 717 101. 0
2 0. 0250 0. 826 0. 876 1. 667 96. 0
3 0. 0248 0. 819 0. 876 1. 703 100. 9 98. 82 2. 2
4 0. 0257 0. 849 0. 876 1. 722 99. 7
5 0. 0256 0. 845 0. 876 1. 690 96. 5
6 0. 0253 0. 835 0. 876 1. 701 98. 9
2. 10 样品含量测定 取 3批样品, 按供试品溶液的制备
方法制备 ,按上述色谱条件, 精密吸取供试品溶液与对照品
溶液各 5LL, 注入高效液相色谱仪,进行测定, 结果见表 2。
表 2 样品测定结果 ( n = 3)
批号
样品含量 ( mg# 片 - 1 )
葛根素 牡荆素鼠李糖苷
1 2 €x 1 2 €x
081201 31. 56 31. 43 31. 50 17. 04 16. 84 16. 94
081202 31. 56 31. 68 31. 62 16. 28 16. 04 16. 16
081203 31. 63 31. 68 31. 66 16. 53 16. 28 16. 41
3 讨 论
试验中曾以乙腈 - 0. 5%冰醋酸为流动相, 等度洗脱,但
供试品色谱中待测组分牡荆素鼠李糖苷分离不佳,且保留时
间较长,后采用乙腈 - 0. 5%冰醋酸为流动相, 进行梯度洗
脱, 葛根素、牡荆素鼠李糖苷分离较好,方法重复性良好。
经对葛根素、牡荆素鼠李糖苷在 200 ~ 400nm 紫外扫
描发现,葛根素的最大吸收波长约为 250nm,牡荆素鼠李糖
苷的在 268、332nm均有最大吸收, 且二者在 268nm处均有
吸收,故对葛根素、牡荆素鼠李糖苷进行同时含量测定时,
选择 268nm 作为测定波长, 且杂质峰干扰少, 利于色谱峰
的分离。
参考文献
[ 1 ] 张颖,张涛,石凤如,等.葛根素对血管平滑肌细胞凋亡的影
响 [ J].中国药理学通报, 2001, 17( 6) : 717 -718.
[ 2 ] 朱晓新,李连达,刘建勋, 等.牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞血
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工业出版社, 2005: 34.
[ 4 ] 张蓉,陈有根. HPLC法测定益心酮片中牡荆素鼠李糖苷的含
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[ 5 ] 曲璐,郑杭生,冯年平,等. 犬血浆中牡荆素鼠李糖苷的测定
及益心酮缓释片药动学研究 [ J ]. 中国中药杂志, 2008, 33
( 10) : 1168 - 1170.
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