全 文 ：参苏饮含药血清对小鼠巨噬细胞 ײ¯ 样¯受体
及其下游信号转导通路的影响
赵保胜 o李兰芳 o马悦颖 o郭淑英 o李沧海 o霍海如 3 o姜廷良
k中国中医科学院 中药研究所 唐氏中药研究中心 o北京 tsszssl
≈摘要   目的 }研究参苏饮含药血清对脂多糖 k°≥l和聚肌胞 k°’≠ ŒΒ≤ l刺激的小鼠巨噬细胞株 • „•
uyw1z表达 ײ¯ 样¯受体 vk׏• vloײ¯ 样¯受体 wk׏• wl及其下游信号转导通路髓样分化蛋白 k ¼⁄{{lo肿瘤坏死因
子受体相关因子 2ykו „ƒ2yloײ¯ 样¯受体相关分子 kו „ l和 ײ¯ 样¯受体相关的干扰素活化子 kו Œƒl °• ‘„的影
响 ∀方法 }用 °≥kx Λª# °pt lo°’≠ ŒΒ≤kxs Λª# °pt l分别刺激 • „• uyw1z细胞株 o同时给予参苏饮含药血清
ktt1uoy1zow1sou1wot1x ª# ®ªpt # ˜ pt l进行干预 o∞Œ≥„法测定细胞培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子 2Α
kבƒ2Αl和干扰素 2Β kŒƒ‘2Βl的含量 ∀先计算参苏饮 Œ≤xs o然后再以 Œ≤xs kttoxou1xow1| ª# ®ªpt # ˜ pt l做为药物
剂量进行干预 o荧光定量 °≤• 方法测定 ׏• vo׏• w和下游通路相关指标 °• ‘„的表达 o分析评价参苏饮含药血清
清热解毒药效学作用的现代药理学基础 ∀结果 }参苏饮含药血清对 °’≠ ŒΒ≤刺激的 ׏• v及其下游通路的  ¼⁄{{
和 ו „ 有抑制作用 o对 °≥刺激的 ׏• w的病理性升高无抑制作用 o但对 ׏• w下游通路 ו „ 和 ו Œƒ °• ‘„
的表达有明显的抑制作用 ∀以上综合作用引起炎症因子 בƒ2Α和 Œƒ‘2Β的降低 ∀结论 }参苏饮清热解毒的药效学
作用可能与抑制 ׏• vo ¼⁄{{oו „ 和 ו Œƒ等细胞因子的表达有关 ∀
≈关键词   参苏饮 ~含药血清 ~巨噬细胞 ~ײ¯ 样¯受体 vk׏• vl~ײ¯ 样¯受体 wk׏• wl
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlsw2svuz2sy
≈收稿日期   ussy2sz2t{
≈通讯作者   3 霍海如 oר¯}kstslywswtss{o∞2°¤¬¯}«µ«∏²ƒ ¶²2
«∏q¦²°
参苏饮为中医扶正解表的代表方药 o具有益气解
表 o理气化痰等作用 ∀现代药理研究表明其主要有清
热 ≈t  o镇痛 ≈u  o抗炎 o免疫增强和抗病毒 ≈v 等作用 ∀
°’≠ ŒΒ≤是 ׏• v的特异性配体 o能诱导核因
子 2……k‘ƒ2……l和丝裂活化蛋白激酶 k „°Žl的活
化 ∀ ׏• v介导的信号途径中存在着  ¼⁄{{依赖途
径和非依赖途径 ≈w  o׏• v可通过  ¼⁄{{依赖途径
诱导炎症性细胞因子如白介素 2tkŒ2tloבƒ2Α和
白介素 2vkŒ2vl的表达 o参与非特异性抗病毒反应 o
同时通过  ¼⁄{{非依赖途径诱导 Œƒ‘2ΒoŒƒ‘诱导
蛋白 2tskŒ°2tsl等抗病毒性细胞因子的表达 o参与
诱导树突状细胞 k⁄≤ l的分化成熟以及抗病毒免疫
反应 ≈x  ∀
°≥是革兰阴性菌细胞膜成分之一 o可使 ׏• w
°• ‘„水平上调 ∀ °≥与细胞表面 ׏• w作用后迅
速引起细胞内 ≤¤u n反应 o激活 ‘ƒ2ϑ…以及多种促炎
症因子如 בƒ2Αo白介素 2xkŒ2xlo白介素 2tskŒ2
tsl和白介素 2tvkŒ2tvl的释放 ≈y  ∀
本实验用 °≥和 °’≠ ŒΒ≤刺激小鼠巨噬细胞
株来模拟外源性抗原刺激 o观察参苏饮含药血清对
• „• uyw1z细胞分泌炎症因子及其 ׏• vo׏• w和
下游信号转导通路的影响 o以期进一步研究其发挥
解热 o抗病毒药理作用的免疫学基础 ∀
1 材料
1q1 药材
所用中药材均购自北京卫仁中药饮片厂 o经本所
主管药师何希荣鉴定 o其原植物分别为 }人参 Παναξ
γινσενγ ≤q „q  ¼¨qo紫苏叶 ƒ²¯¬∏° ° µ¨¬¯¯¤¨ o葛根 Πυ2
εραρια λοβαταo半夏 Πινελλια τερναταo茯苓 Πορια χοχοσo木
香 • ¤§¬¬ „∏¦®¯¤±§¬¤¨ o枳壳 ƒµ∏¦·∏¶ „∏µ¤±·¬¬o桔梗
Πλατψχοδον γρανδιφλορυµ o陈皮 ° µ¨¬¦¤µ³¬∏° Χιτρυσρετιχυ2
λαταo甘草 Γλψχψρρηιζα υραλενσισ ƒ¬¶¦«q∀按原方比例
k人参 y ªo紫苏叶 y ªo葛根 y ªo姜半夏 y ªo前胡 y ªo
茯苓 y ªo木香 w ªo枳壳 w ªo桔梗 w ªo陈皮 w ªo炙甘草
w ªl配齐药物 o水煎 u次合并药液 o过滤浓缩 o给药时
以蒸馏水稀释至生药含量为 t1wt ª# °pt ∀
1q2 试剂
#zuv#
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∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
°≥o°’≠ ŒΒ≤为美国 ≥¬ª°¤公司产品 ~新生牛
血清为杭州四季青有限公司产品 ~• ° Œ2tyws为德
国 ‹¼¦¯²± 公¨司产品 ~בƒ2Α测定 ∞Œ≥„试剂盒购
自第四军医大学免疫学教研室 ~Œ‘ƒ2Β试剂盒 o• i…
产品 ~• ‘„2’˜×总 • ‘„提取试剂盒 o北京天来生物
医学科技有限责任公司 ~  2 ∂ • √¨ µ¨¶¨ ×µ¤±2
¶¦µ¬³·¤¶¨o °µ²° ª¨¤产品 ~  2 ∂ • √¨ µ¨¶¨ • × x ≅
…∏©©¨µo°µ²° ª¨¤产品 ~• ‘„¶¤©¨o’ ¬¯ª²k§×ltxo§‘×°o
北京天为时代有限公司 ~所有引物均由上海英骏生
物技术有限公司合成 ~其他试剂均为市售分析纯 ∀
1q3 动物与细胞
雄性 ≥⁄大鼠 ots只 o体重 uws ∗ uys ªo购于北
京维通利华实验动物中心 o许可证号 }≥≤÷Žk京 l
ussu2sssv∀小鼠 • „• uyw1z巨噬细胞株 o购于中
国科学院上海细胞学生物研究所 ∀
1q4 仪器
Š≤ p |tt Χ放射免疫计数器 k中国科大创新股
份有限公司 lo……ty型 ≤’u培养箱 k德国 loxxs型酶
标仪 k…¬²p • ¤§o美国 loŒ±x荧光定量 °≤• 仪 k…Œ’
p • „⁄o美国 loŠ ±¨¨ ±∏¤±·µ型核酸定量仪 k°«¤µ2
°¤¦¬¤…¬²·¨¦«o英国 l⁄≠ ≠ p ¶ x型电泳仪 k北京市六
一仪器厂 lo≥≠‘Š∞‘∞ p Š ±¨¨Š ±¨¬∏¶全自动凝胶成
像系统 k北京百晶生物技术有限公司 l∀
2 方法
2q1 小鼠巨噬细胞株 • „• uyw1z的培养
• „• uyw1z细胞株混悬后接种于含 tsh新生
牛血清的 tyws培养基 k‘¤‹≤’v u ª# pt o青霉素 o
链霉素各 tss ˜# pt l中 o置 vz ε oxh ≤’u培养箱
培养 ou ∗ v §换液或传代一次 ∀
2q2 中药含药血清的制备
大鼠随机分为 u组 }正常对照组和参苏饮含药
血清组 o每组 x只 ∀参苏饮按临床等效剂量的 ts倍
进行灌胃 o每天上 o下午各 t次 o共 x次 ∀于末次灌
胃 t «后 o取血 o离心分离血清 ∀ xy ε 水浴 vs °¬±
灭活血清 o微孔滤膜过滤除菌 o pus ε 分装保存 ≈z  ∀
含药血清药物含量采用本研究室的计算方法 o
公式如下 ≈z  }
生药含量 kª# ®ªpt # ˜ pt l €
动物每日公斤体重给药剂量
含药血清在体外试验系统的稀释倍数
2q3 °≥刺激 • „• uyw1z细胞分泌 בƒ2Α的时 2
效关系研究
取生长状态良好的 • „• uyw1z细胞株 o胰酶消
化 o调细胞数为 x ≅ tsy个 r°ow{孔板每孔加入细
胞悬液 s1x °ovz ε oxh ≤’u培养箱培养 t «∀弃
上清 o加入 °≥o使其终含量分别为 toxots Λª#
°pt o刺激时间分别为 tuouwow{ «o每一含量设 {
个复孔 ∀ vz ε oxh ≤’u培养箱培养 o至各刺激时间
点取细胞培养上清 o∞Œ≥„试剂盒测定 בƒ2Α∀
2q4 °’≠ ŒΒ≤刺激 • „• uyw1z细胞分泌 Œ‘ƒ2Β
的时 2效关系研究
细胞铺板同前 o贴壁培养 t «∀弃上清 o加入
°’≠ ŒΒ≤o使其终含量分别为 tsouxoxsotss Λª#
°pt o刺激时间为 uowo{otuouwow{ «o每一含量设 {
个复孔 ∀ vz ε oxh ≤’u培养箱培养 o至各刺激时间
点取细胞培养上清 o∞Œ≥„试剂盒测定 Œ‘ƒ2Β∀
2q5 参苏饮含药血清对 • „• uyw1z细胞分泌
בƒ2ΑoŒ‘ƒ2Β的影响及其 Œ≤xs的计算
细胞铺板方法同前 o贴壁培养 t «∀弃上清 o加入
°≥k根据实验 2q3 o选择终含量 x Λª# °pt lo°’≠
ŒΒ≤k根据实验 2q4 o选择终含量 xs Λª# °pt l及参
苏饮含药血清 ktssoysovyouuotv ˏr孔 lo每一剂量
设 {个复孔 ovz ε oxh ≤’u培养 uw «后 o取上清 w ε
保存 o∞Œ≥„试剂盒测定 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β∀参苏饮含药
血清 Œ≤xs计算方法采用 ’ŠŒ×法 ∀
2q6 参苏饮含药血清对 • „• uyw1z细胞 ׏• vo
׏• w表达及其下游信号转导通路的影响
细胞培养及刺激同前 o同时进行药物干预 o药物
剂量根据实验 2q5结果 o采用参苏饮含药血清相对
于 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β的 Œ≤xs加以干预 o即给药剂量分别
为 tt1xou1xow1| ª# ®ªpt # ˜pt ∀
药物干预 uw «后 o吸取细胞培养上清液 ∞Œ≥„
方法测定 בƒ2ΑoŒƒ‘2Βo细胞板用 °…≥冲洗 v次 o提
取 °• ‘„o逆转录 o荧光定量 °≤•测定 ׏• vo׏• w及
其下游通路 ו „ƒ2yoו „ 和 ו Œƒ °• ‘„的表达 ∀
°≤•反应条件 }扩增条件为 |w ε 变性 x °¬±k|w ε o
vs ¶oys ε ovs ¶ozu ε ovs ¶l ≅ xx个循环 ozu ε 延伸 x
°¬±o同时做熔点曲线 ∀引物序列如表 t∀
2q7 数据统计
相对定量方法是比较经过处理的样品和未经处
理的样品目标转录本之间的表达差异 ∀ u∃ ∃∃≤·方法
是实时定量 °≤• 实验中分析基因表达相对变化的
一种简便方法 ≈{o|  ∀
∃∃≤·€ k≤·样本 p ≤·内参 l受试组 p k≤·样本 p ≤·内参 l对照组
#{uv#
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∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
表 t 引物序列表
引物名称 引物链 序列 kxχ∗ vχl 扩增产物长度 r¥³ 产物区域
׏• 2v ≥ ±¨¶¨ ×≤Š Š„× ×≤× ×ŠŠ ××× ≤„„ ŠŠ u|| u yt| ∗ u |tz
„±¬·¶¨±¶¨ ≤×× Š≤× Š„„ ≤׊ ≤Š× Š„× Š×
׏• 2w ≥ ±¨¶¨ ŠŠ× ŠŠ≤ ×Š× ŠŠ„ Š„≤ „„„ „× u{y wtt ∗ y|y
„±¬·¶¨±¶¨ „„× ×≤≤ ≤׊ „„„ ŠŠ≤ ×׊ Š×
 ¼⁄{{ ≥ ±¨¶¨ „≤× ŠŠ≤ ≤׊ „Š≤ „„≤ ׄŠ Š„ ut| t s|t ∗ t vs|
„±¬·¶¨±¶¨ ≤Š× Š≤≤ „≤× „≤≤ ×Š× „Š≤ „„
ו „ƒ2y ≥ ±¨¶¨ Š≤Š ≤׊ ׊„ „Š× ≤×≤ ׄ≤ ≤≤ uuy t |tx ∗ u tws
„±¬·¶¨±¶¨ Š≤× ≤Š× Š„≤ ≤×≤ „≤× Š„× Š„
ו Œƒ ≥ ±¨¶¨ ≤≤„ ≤Š× ≤≤× „≤„ ≤ŠŠ „„Š „× uwy vuy ∗ xzt
„±¬·¶¨±¶¨ „„≤ „Š≤ „×≤ ׊≤ „Š≤ ׄ≤ ≤„
ו „ ≥ ±¨¶¨ „ׄ „Š× Š≤≤ ≤≤≤ ××× ≤×× ŠŠ uwv uy ∗ uy{
„±¬·¶¨±¶¨ ≤≤× ≤Š× ≤ŠŠ ×Š× ≤„× ≤×× ≤×
Š„°⁄‹ ≥ ±¨¶¨ ≤×≤ „׊ „≤≤ „≤„ Š×≤ ≤„× Š≤ ust xzu ∗ zxv
„±¬·¶¨±¶¨ ≤„≤ „×× ŠŠŠ ŠŠ× „ŠŠ „„≤ „≤
计算各样本的 up ∃∃≤·o所有结果均以 cξ ? σ表示 o
组与组之间进行 τ检验 ∀
3 结果
3q1 °≥刺激后 • „• uyw1z细胞分泌 בƒ2Α含量
的经时变化
从表 u可知 o刺激 tu «时 o°≥各刺激组细胞上
清 בƒ2Α有增加均势 o但未出现统计学差异 ~刺激
uwow{ «时 o°≥各刺激组细胞上清 בƒ2Α含量明显
增加 o与对照组比较 oΠ  s1sto但 w{ «与 uw «相
比 oבƒ2Α含量无明显增加 o为此选择含量为 x Λª#
°pt o刺激 uw «做为 °≥的刺激条件 ∀
表 u °≥刺激后 • „• uyw1z细胞分泌 בƒ2Α
含量的经时变化 kcξ ? σ, ν € {l
分组
剂量
rΛª# °pt
בƒ2Αr±ª# °pt
tu « uw « w{ «
正常 p u1tw ? s1uy t1{u ? s1vt t1|{ ? s1vu
°≥刺激 t u1vz ? s1tu u1zs ? s1v{tl u1zw ? s1uvtl
x u1w{ ? s1ux u1zw ? s1vwtl u1zy ? s1wxtl
ts u1wu ? s1uu u1z| ? s1ustl u1yx ? s1vztl
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1st
3q2 °’≠ ŒΒ≤刺激后 • „• uyw1z细胞分泌 Œ‘ƒ2Β
含量的经时变化
从表 v数据可以看出 o正常对照组自身对照 o
随着培养时间的延长 o细胞上清中的 Œ‘ƒ2Β含量
增加 ~组与组之间平行比较 o在各时间点 o°’≠ ŒΒ
≤不同刺激含量均可引起 • „• uyw1z细胞株分
泌 Œ‘ƒ2Β的量增加 o其中在 tu «o除 tss Λª# °pt
含量外 o其他各组均稍有下降 k正常对照组亦然 lo
可能与实验系统有关 ∀ uw «o各刺激组上清中
Œ‘ƒ2Β含量达到最高峰 ow{ «时各刺激组均呈下降
趋势 ∀
根据以上结果 o选择含量 xs Λª# °pt o刺激 uw
«做为 °’≠ ŒΒ≤的刺激条件 ∀
3q3 参苏饮含药血清对 °≥o°’≠ ŒΒ≤刺激 • „•
uyw1z细胞分泌 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β的影响
从表 wox可以看出 o°≥o°’≠ ŒΒ≤刺激后 o模
型组 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β含量均明显升高 o与正常对照组
比较 o有显著性差异 kΠ  s1stlo表明造模成功 ∀加
入参苏饮含药血清后 o各剂量组 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β含量
均明显下降 o与模型组比较 o有显著性差异 kΠ 
s1stlo且呈明显的量 2效关系 o表明参苏饮含药血清
可以降低 °≥o°’≠ ŒΒ≤引起的 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β等炎
症因子的分泌 ∀
表 v °’≠ ŒΒ≤刺激后 • „• uyw1z细胞分泌 Œ‘ƒ2Β含量的经时变化 kcξ ? σ, ν € {l
分组
剂量
rΛª# °pt
Œ‘ƒ2Βr³ª# °pt
u « w « { « tu « uw « w{ «
正常 p tw1{| ? t1vw ty1xz ? s1yy vt1v| ? z1{| ux1{| ? t1t{ v|1|{ ? w1u| xx1yz ? u1vx
°’≠ ŒΒ≤ ts uu1vz ? s1ytul vw1yz ? {1sttl vu1vs ? v1xy vs1wz ? tt1sx x|1wt ? z1{|tl {z1x| ? |1sstl
ux ut1yt ? s1x{ul xx1ut ? tt1wztl xx1vy ? tz1z| w{1uy ? x1zytl tsw1y| ? v1zvul {x1{v ? t|1yz
xs uz1yw ? x1|v x{1{s ? w1x{ul wy1xt ? t1v{ wu1y| ? |1zs tvy1ss ? x1xyul tut1yx ? ux1svtl
tss t|1s| ? s1x{tl v|1tz ? tx1|x {y1u| ? ts1|yul tsw1uw ? ty1xstl txs1vy ? t|1vzul tvw1vu ? x1u|ul
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1sxo ul Π  s1st
#|uv#
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∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
表 w 参苏饮含药血清对 °≥kx Λª# °pt l刺激
• „• uyw1z细胞分泌 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β的影响 kcξ ? σ, ν € |l
分组
剂量
rª# ®ªpt # ˜ pt
בƒ2Α
r±ª# °pt
Œƒ‘2Β
r³ª# °pt
正常 p s1x| ? s1sz x|1uu ? ty1zv
°≥刺激 p u1xu ? s1u{tl vvt1y{ ? tu1wstl
参苏饮 tt1u u1sw ? s1svul tty1|x ? tv1swul
y1z u1tv ? s1ttul tv{1xy ? v{1twul
w1s t1|t ? s1tuul t{t1t{ ? ux1{|ul
u1w u1tx ? s1svul t{y1sv ? vu1ywul
t1x u1v{t ? s1sv uvw1vy ? v{1uzul
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1st~与 °≥刺激模型组比较 o
ul Π  s1st
表 x 参苏饮含药血清对 °’≠ ŒΒ≤kxs Λª# °pt l刺激
• „• uyw1z细胞分泌 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β的影响 kcξ ? σ, ν € |l
分组
剂量
rª# ®ªpt # ˜ pt
בƒ2Α
r±ª# °pt
Œƒ‘2Β
r³ª# °pt
正常 p t1uz ? s1u{ wt1uy ? |1|s
°’≠ ŒΒ≤刺激 p v1vw ? s1wxtl txv1tz ? z1zwtl
参苏饮 tt1u t1|t ? s1zvul yu1u{ ? |1tuvl
y1z t1z| ? s1tyvl {t1vv ? x1ytvl
w1s u1xu ? s1utvl tuv1|z ? tv1{vvl
u1w u1uz ? s1u{vl tut1ww ? ty1yuvl
t1x u1zx ? s1uyul tvv1su ? tx1vsul
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1st~与 °’≠ ŒΒ≤刺激模型组比
较 ul Π  s1sxovl Π  s1st
为进一步研究参苏饮在解热 o抗病毒作用的现代
药理学基础 o’ŠŒ×法计算参苏饮含药血清相对于
בƒ2ΑoŒƒ‘2Β的 Œ≤xs o以 Œ≤xs做为药物剂量进行干预 o
进一步深入研究参苏饮含药血清对 ׏• vo׏• w及其
下游信号转导通路的影响 ∀经计算 o参苏饮含药血清
对 °≥刺激引起的 בƒ2Α的 Œ≤xs较大 kwt| ˏ含药
血清 r孔 lo不能用其 Œ≤xs做为给药剂量 o故改用最大
给药剂量 tt1x ª# ®ªpt # ˜pt ktss ˏ含药血清 r
孔 lo其对 °’≠ ŒΒ≤刺激引起的 בƒ2ΑoŒƒ‘2Β的 Œ≤xs
较为接近 o分别为 v1x和 w1| ª# ®ªpt # ˜pt o故选择
w1| ª# ®ªpt # ˜pt做为下一实验的 Œ≤xs ∀
3q4 参苏饮含药血清对 • „• uyw1z细胞株 ׏• vo
׏• w °• ‘„及其下游信号传导通路的影响
3q4q1 参苏饮含药血清对 • „• uyw1z细胞株
׏• vo׏• w °• ‘„表达的影响 表 y显示 o°’≠ Œ
Β≤引起 • „• uyw1z细胞 ׏• v °• ‘„的特异性表
达 kΠ s1stl~而 °≥则导致 ׏• w °• ‘„的特异性
表达 kΠ s1stlo佐证了 °’≠ ŒΒ≤是 ׏• v的特异
性配体 o°≥是 ׏• w的特异性配体的理论 ∀参苏
饮含药血清可显著降低 ׏• v °• ‘„的表达 kΠ 
s1stlo但对 ׏• w °• ‘„无明显的抑制作用 ∀
表 y 参苏饮含药血清对 ׏• vo׏• w的影响 kcξ ? σ, ν € |l
分组
剂量
rª# ®ªt #
˜ pt
׏• v ׏• w
正常 p t1su ? s1uv t1su ? s1uv
°≥刺激 p t1uv ? s1u| u1uv ? s1uutl
参苏饮 k°≥刺激 l tt1x t1su ? s1us u1su ? s1vw
参苏饮 k°≥刺激 l u1x t1ty ? s1v| u1ux ? s1xz
°’≠ ŒΒ≤刺激 p v1yw ? s1{stl t1tx ? s1tw
参苏饮 k°’≠ ŒΒ≤刺激 l w1| u1yw ? s1wzul t1s| ? s1tu
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1st~与 °’≠ ŒΒ≤刺激模型组比
较 ul Π  s1st
3q4q2 参苏饮含药血清对 • „• uyw1z细胞株
 ¼⁄{{oו „ 和 ו Œƒw °• ‘„表达的影响 表 z
显示 o°≥o°’≠ ŒΒ≤均可引起 • „• uyw1z细胞
 ¼⁄{{oו „和 ו Œƒ °• ‘„的高表达 kΠ s1stlo
表明两者均通过  ¼⁄{{依赖和非依赖途径参与了
细胞的信号转导过程 ∀参苏饮含药血清可显著降低
ו „ °• ‘„的高表达 kΠ  s1sx或 Π  s1stlo显
著降低 °’≠ ŒΒ≤诱导的  ¼⁄{{ °• ‘„的高表达
kΠ s1stlo对 °≥诱导的  ¼⁄{{ °• ‘„的高表达
没有降低作用 ~与此相反 o参苏饮含药血清可显著降
低 °≥诱导的 ו Œƒ °• ‘„的高表达 kΠ  s1stlo而
对 °’≠ ŒΒ≤诱导的 ו Œƒ °• ‘„的高表达没有降
低作用 ∀
表 z 参苏饮含药血清对  ¼⁄{{oו „ 和 ו Œƒ表达的影响 kcξ ? σ, ν € |l
分组 剂量 rª# ®ªpt # ˜ pt  ¼⁄{{ ו „ ו Œƒ
正常 p t1su ? s1ux t1sv ? s1u{ t1sw ? s1vw
°≥刺激 p v1tv ? s1yztl v1ux ? s1y{tl x1tx ? s1v|tl
参苏饮 k°≥刺激 l tt1x u1yx ? s1xw u1us ? s1vzul v1z| ? s1wyul
参苏饮 k°≥刺激 l u1x u1zu ? s1vu u1xt ? s1vytl w1sx ? s1w|ul
°’≠ ŒΒ≤刺激 p u1|t ? s1vztl x1xw ? s1|ztl w1ut ? s1x|tl
参苏饮 k°’≠ ŒΒ≤刺激 l w1| u1s| ? s1uwvl w1t| ? s1xzvl v1|s ? s1v|
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1st~与 °≥刺激模型组比较 ul Π  s1st~与 °’≠ ŒΒ≤刺激模型组比较 vl Π  s1st
#svv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
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∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ w
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3q4q3 参苏饮含药血清对 • „• uyw1z细胞株
ו „ƒ2y °• ‘„表达的影响 表 {显示 o°≥可引起
• „• uyw1z细胞 ו „ƒ2y °• ‘„ 的高表达 kΠ 
s1stlo而 °’≠ ŒΒ≤对 ו „ƒ2y °• ‘„的表达无影
响 o表明 °≥诱导的一系列病理反应与 ו „ƒ2y的
表达有关 o而 °’≠ ŒΒ≤诱导的病理反应与 ו „ƒ2y
的表达无关 ∀参苏饮含药血清对 °≥诱导的
 ¼⁄{{ °• ‘„的高表达未出现明显的抑制作用 ∀
表 { 参苏饮含药血清对 ו „ƒ2y及其下游信号
转导通路的影响 kcξ ? σ, ν € |l
分组 剂量 rª# ®ªpt # ˜ pt ו „ƒ2y
正常 p t1sv ? s1uy
°≥刺激 p |1wx ? t1wvtl
参苏饮 k°≥刺激 l tt1x {1yx ? t1uv
参苏饮 k°≥刺激 l u1x |1ts ? u1sx
°’≠ ŒΒ≤刺激 p t1uu ? s1ux
参苏饮 k°’≠ ŒΒ≤刺激 l w1| t1tu ? s1uy
注 }与正常对照组比较 tl Π  s1st
4 讨论
免疫系统的基本功能是识别外源性抗原 o并诱
导机体产生一系列反应 o清除外源致病性物质 o以保
持机体的稳定 ∀巨噬细胞是机体免疫系统的重要递
呈细胞 o是机体发挥防御机制的基础 ∀内毒素可刺
激巨噬细胞的活化 o并释放过量炎症递质从而造成
炎症反应 o成为炎症的重要病理过程 ≈ts  ∀
׏• v和 ׏• w在巨噬细胞 o单核细胞中均有表
达 ∀目前研究表明 o׏• v的主要配体是双链 • ‘„
k§¶• ‘„l病毒 o׏• w则主要介导 Šp菌感染 °≥的
信号转导 ∀
 ¼⁄{{依赖的信号传导途径是 ׏• 信号传导
的共同途径 ∀  ¼⁄{{的 ≤端 ׌• 区与 Œ2t• ׏• ¶
胞质区发生作用时 o ¼⁄{{通过 ‘端死亡区募集下
游分子白介素 2t受体相关激酶 kŒ• „Žl的死亡区
域 o并与其结合 ≈tt  o从而介导信号的传导 o其过程可
能有 }≠  ¼⁄{{通过 ײ¯ r¯Œ2t受体同源域 k׌• l区
与 ׏• 胞内区的 ׌• 区结合 o作为接头蛋白募集
Œ• „Ž~ Œ• „Ž结合 ו „ƒ2y从而活化转化生长因
子 2Β活化激酶 kׄŽtl∀
׏• v和 ׏• w还可由 ו Œƒ进行  ¼⁄{{非依赖
途径的信号转导 o诱导 Œƒ‘2Β诱导基因的表达并伴
随 ‘ƒ2®…晚期活化 o其中 ׏• w通过 ו „ 同 ו Œƒ
相连 o而 ׏• v则直接通过 ו Œƒ进行信号转导 ∀
בƒ2ΑoŒƒ‘2Β是具有广泛生物学活性的细胞因子 o
主要由激活的单核 2巨噬细胞分泌 o参与机体的免疫
调节和炎症反应 o也是某些感染性疾病的致病因素 o
两者相互诱导 o协同参与炎症反应 ∀
本研究结果表明 o参苏饮含药血清对 °’≠ ŒΒ≤
刺激的 ׏• v及其下游通路的  ¼⁄{{和 ו „ 有
降低作用 o对 °≥刺激的 ׏• w的病理性升高无抑
制作用 o但对 ׏• w下游通路 ו „ 和 ו Œƒ °• ‘„
的表达有明显的抑制作用 ∀参苏饮含药血清对 °≥
和 °’≠ ŒΒ≤刺激引起病理反应的不同作用靶点可
能是其发挥清热解毒作用不同的物质基础 ∀
≈参考文献  
≈t  魏 云 o唐映红 o刘礼意 o等 q参苏颗粒的药理作用研究 ≈ q
中药药理与临床 ot||uo{kvl}zq
≈u  潘敏求 o杨永华 o徐华雄 q参苏复方颗粒剂与参苏丸的临床对
比观察和实验研究 ≈ q湖南中医杂志 ot||wotskxl}zq
≈v  杨亚斯 o王晓阳 o谢定成 o等 q参苏液的药理作用研究 ≈ q中
药药理与临床 ot||xottkul}twq
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≈z  姜廷良 o霍海如 o李兰芳 o等 qtx种中西药物含药血清对大鼠
成骨细胞增殖成熟的影响 ≈  q中国骨质疏松杂志 oussuo{
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第 vu卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
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בƒ2Α ¤±§Œƒ‘2Βq Χονχλυσιον: ⁄ ³¨µ¨¶¶¬±ª·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©×• vo  ¼⁄{{o ו „ ¤±§×• Œƒ °• ‘„ °¤¼ ¥¨ ·«¨ ¨¯ °¨ ±¨·¤µ¼ ¥¤¶¬¶²©
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[ Κεψ ωορδσ] ≥«¨ ±¶∏¼¬±~ §µ∏ª¶¨µ∏°~ °¤¦µ²³«¤ª¨ ~ ׏• v~ ׏• w ≈责任编辑 古云侠  
叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制研究
裴迎新 tou o衡正昌 t3 o段广才 u o张遵真 t o王明臣 v o胡婵丽 v o高冬玲 v
ktq四川大学 华西公共卫生学院 o四川 成都 ytsswt~
uq郑州大学 公共卫生学院 o河南 郑州 wxssxu~vq郑州大学 基础医学院 o河南 郑州 wxssxul
≈摘要   目的 }探讨叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制 ∀方法 }∞≤|zsy细胞在 • ° Œ培养液 k含
tsh小牛血清 l中进行常规传代培养 ∀常规条件下培养 uw «后 o用叶黄素处理 o同时设溶剂对照组和 x2氟尿嘧啶
kx2ƒ∏l阳性对照组 ∀采用流式细胞术观察叶黄素对细胞凋亡的影响 o并用免疫组织化学方法检测其对凋亡调节蛋
白 …¤¬和 …¦¯2u表达的影响 ∀结果 }在实验条件下 otss Λª# °pt叶黄素处理细胞 |y «可促进细胞凋亡 ∀免疫组化
分析结果表明 o同样条件下 o叶黄素可抑制抗凋亡蛋白 …¦¯2u的表达并促进促凋亡蛋白 …¤¬的表达 ∀结论 }叶黄素
具有促进 ∞≤|zsy细胞凋亡的作用 o此作用可能是通过调节凋亡相关蛋白 …¦¯2u和 …¤¬而实现的 ∀
≈关键词   叶黄素 ~食管癌细胞 ∞≤|zsy~凋亡
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlsw2svvu2sw
≈收稿日期   ussy2s{2uv
≈基金项目   河南省医学科技攻关项目 kussyssz{l
≈通讯作者   3 衡正昌 oר¯}ksu{l{xxstu|{o∞2°¤¬¯}«¨ ±ª¯¬∏ƒ
«∏¤¬¬qº¦∏°¶q §¨∏q¦±
叶黄素 k ∏¯·¨¬±l又名植物黄体素 o存在于蔬菜 !
花卉 !水果 !玉米 !蛋黄与某些藻类中 o万寿菊中含量
尤为丰富 ∀流行病学研究表明 }叶黄素在预防视黄
斑退化 !肿瘤的发生与发展 !心血管疾病和增强机体
免疫力等方面有着广泛的生物学活性 ≈tou  ∀本课题
组前一阶段的研究证明 o叶黄素在体外能明显抑制
人食管癌细胞 ∞≤|zsy的增殖和诱导分化 o但是关
于叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制尚
不清楚 ∀从细胞生物学角度来看 o增殖与凋亡有着
密切的关系 ∀肿瘤细胞与其他活细胞一样 o具有增
殖 !分化 !细胞周期阻滞和凋亡的潜能 o其每一阶段
都具有特异性的代谢表型 ∀凋亡是由多基因控制的
一种主动性细胞自杀过程 ≈v  o与肿瘤的发生 !发展
与转归等病理生理过程有密切关系 ∀因此 o本研究
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第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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