全 文 ：Στυδψ ον χορρελατιον βετωεεν δεχοχτινγ τιµ ε, αδµ ινιστρατιον δοσε ανδ
εφφιχαχψ οφ ωαρµ ινγ Ψανγ οφ χρυδε λατεραλροοτ οφ αχονιτε
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(t. ∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχογνοσψ, Σχηοολοφ Πηαρµ αχψ, Σεχονδ ΜιλιταρψΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Σηανγηαι usswvv, Χηινα;
u. Πηαρµ αχψ Χολλεγε, Χηενγδυ Υνιϖερσιτψ οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Χηενγδυ ytsszx, Χηινα)
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≈责任编辑 鲍 雷  
≈收稿日期   ussy2tu2uu
≈基金项目   贵州省省长专项资金项目 ≈黔省专合字 kussxluyt
号  ~贵州省 /十一五 0农业科技攻关项目 ≈黔科合 ‘≠字 kussylvsus 
≈通讯作者   3 郁建生 oר¯}ks{xyl{|{yuxyo∞2°¤¬¯}¼∏­¬¤±¶«2
±¨ªƒ ¶²«∏q¦²°
大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮
郁建生 t3 o郁建平 u
ktq铜仁职业技术学院 o贵州 铜仁 xxwvss~ uq贵州大学 生命科学学院 o贵州 贵阳 xxssuxl
≈摘要   目的 }研究大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮工艺 o为野菊花总黄酮的工业化生产提供实验依据 ∀
方法 }以贵州产野菊花为原料 o以野菊花总黄酮含量及回收率等为考察指标 o选用大孔吸附树脂对野菊花总黄酮进
行分离纯化 o分别采用静态试验 !动态试验等考察大孔树脂对野菊花总黄酮的分离纯化效果及影响因素 ∀结果 }„…
p {型大孔吸附树脂对野菊花总黄酮静态饱和吸附量为 ttw1yx °ª# ªpt k干树脂 lo洗脱率 |w1|h o动态饱和吸附
量为 |w1x °ª# ªpt k干树脂 lo总黄酮回收率在 |u1yh !纯度在 |sh以上 o是实验树脂中分离纯化野菊花总黄酮的
最佳大孔吸附树脂 ∀结论 }分离纯化野菊花总黄酮最佳工艺条件为 }„… p {型大孔吸附树脂 o洗脱剂为 zsh乙醇 o
洗脱剂用量为 u ∗ v倍树脂体积 o上柱总黄酮量 Β树脂 € tΒts1yo上柱液总黄酮质量浓度为 t|1{ °ª# °pt o流速 u ∗
v °# °¬±pt o上柱液 ³‹ w ∗ x∀
≈关键词   大孔树脂 ~野菊花 ~总黄酮 ~分离 ~纯化
≈中图分类号   • u{v ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlus2utuv2sx
野菊花又称野菊 !野黄菊 !山菊花 !路边菊等 o为
多年生草本菊科植物野菊 Χηρψσαντηεµ υµ ινδιχυµ
q的干燥头状花序 o具有清热解毒 !疏风明目 !生津
止渴 !宁心安神等功效 ≈t  ∀现有研究表明黄酮类化
合物是野菊花中含量最多 !最主要的活性成分 ∀目
#vutu#
第 vu卷第 us期
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’¦·²¥¨ µo ussz
前国内对野菊花总黄酮分离纯化研究尚未见到系统
报道 ∀为了开发利用野菊花资源 o本研究以野菊花
总黄酮含量及回收率等为考察指标 o选用大孔吸附
树脂对野菊花总黄酮进行分离纯化 o分别采用静态
试验 !动态试验等考察大孔树脂对野菊花总黄酮的
分离纯化效果及影响因素 o研究探讨分离纯化野菊
花总黄酮的最佳工艺及各种最佳条件因素 o从而为
生产中最有效的开发利用野菊花总黄酮 !发挥野菊
花的最大经济效益提供科学依据 ∀
1 仪器与试药
ט pt{ss紫外可见分光光度计 k北京普析 lo
不锈钢提取锅 k武汉立中 lo°‹≥p vƒ精密酸度计
k上海雷磁 lo„Šxrts自动灌装封口机 k上海国
彩 l~植株样本粉碎机 k上海实验仪器厂 l~液体自动
混合机 k北京长安仪器厂 l∀
野菊花全草均采自贵州省松桃县大兴镇同一地
点 o由本院生物技术重点实验室进行鉴定 o采用统一
的干燥方法加工制样 o避免背景干扰 ~所用试剂
‘¤‘’u o„ k¯‘’v lv o‘¤‹≥’v o‘¤u ≥’v o∞⁄ׄo׺¨¨ ±2
{s等均为分析纯 o乙醇为 |xh食用酒精 o对照品芦
丁为美国 ≥¬ª°¤公司产品 !纯度大于 |{h ~大孔吸附
树脂 } ⁄vxus型 o„… p{型 o‘Ž„ p |型 o⁄wsus型 o≥
p{型 k南开大学化工厂 l∀
2 方法
2q1 野菊花总黄酮的测定方法 野菊花总黄酮的测
定方法采用芦丁比色法 ≈x  o测定波长 xss ±°o回归方
程 }Χ €{w1vuzΑ ps1zzv yxoρ€s1||| {o吸光度线性范
围 s1t ∗ s1yo加样回收的平均回收率 ||1wzh o• ≥⁄
t1{|h kν €yl~精密度测定 • ≥⁄ s1|xh ∀
2q2 野菊花总黄酮上柱样品液的制备 取野菊花
干品粗粉 xss ªo根据作者已有经验 | kvw l正交设
计筛选出的野菊花总黄酮的乙醇浸提最优水平组合
工艺 }即采用 ysh乙醇 !{s ε 温度 !每次 v «!提取 v
次进行提取制备 o制得野菊花总黄酮提取液 k总黄
酮 |1wy °ª# °pt l冷藏备用 ∀
2q3 大孔吸附树脂的筛选 ≈yoz  将 ⁄vxus型 !„… p
{型 !‘Ž„ p |型 !⁄wsus型 !≥ p {型树脂先用 w倍
体积量 |xh乙醇或丙酮浸洗数次每次 uw «o至浸洗
液加适量水无白色浑浊现象止 o用水反复清洗干净
至无醇味 o加入 w倍体积量 u °²¯# pt的 ‘¤’‹ o浸
泡 tu «o以水洗至中性 ~再加入 w倍体积量 w °²¯ #
pt的 ‹≤ o¯浸泡 tu «o用水洗至中性后备用 ∀
精密称取已预处理好的干树脂各 v份 o每份 t
ªo置 tss °三角瓶中 o精密加入样品液 us °后于
电动震荡机上 o频率 tus次 r°¬±o间隔振摇 u «o然后
静置 us «o使其达到饱和吸附 o吸取上层液测定总黄
酮质量浓度 o按下式计算树脂饱和吸附量 }饱和吸附
量 € ≈k初始浓度 p吸附后浓度 l ≅吸附液体积   r树
脂量 k°ª# ªpt干树脂 lo取 v次平均值 ∀将经静态
饱和吸附总黄酮后树脂滤出 o吸干表面水分 o精密加
入 ysh乙醇 us °后放于电动震荡机上 o频率 tus
次 # °¬±pt o间隔振摇 u «后滤出 o测定洗脱液黄酮
的质量浓度 o计算洗脱率 }洗脱率 € ≈洗脱液浓度 ≅
洗脱液体积   r饱和吸附量 ≅ tssh o取 v次平均值 ∀
2q4 洗脱剂浓度对洗脱率的影响 精密称取处理
好的 „… p{型干树脂 z份 o每份 t ªo分别置 tss °
三角瓶中 o精密加入 us °样品液后于电动震荡机
上 o按 2q3项下同法震荡 o使其达到饱和吸附 o分离
树脂 o吸干表面水分 ∀对应加入 vsh owsh oxsh o
ysh ozsh o{sh o|sh的乙醇 us °后于电动震荡
机上 o同法间隔振摇洗脱 u «后滤出 o测洗脱液中总
黄酮质量浓度 o按 2q3项下公式计算洗脱率 o取 v次
平均值 ∀
2q5 ³‹对 „… p {型树脂吸附量的影响 精密称
取已预处理好的 „… p {型干树脂各 {份 o每份 t ªo
置 tss °三角瓶中 o精密加入 ³‹ vowoxoyozo{o|o
ts样品液各 us °后于电动震荡机上 o按 2q3项下
同法震荡 o使其达到饱和吸附 o吸取上层液测定总黄
酮质量浓度 o按 2q3项下公式计算树脂饱和吸附量 o
取 v次平均值 ∀
2q6 „… p{型树脂对野菊花总黄酮的动态吸附 p
洗脱性能试验 称取已处理好的 „… p {型吸附树
脂 tss ª和 us ªo分别湿法装入 v ¦° ≅ xss ¦°的色
谱柱中 o将野菊花提取液 vvs °k|1wy °ª# °pt l
以 u ∗ v °# °¬±pt的流速上柱 o过柱完后用 v倍树
脂体积量 kv …∂ o下同 l的水以 v ∗ w °# °¬±pt的速
度洗柱至出水无色 o再用 w …∂ zsh的乙醇以 u ∗ v
°# °¬±pt的洗脱速度洗脱至无色透明 o收集 zsh
的乙醇洗脱液 o减压浓缩 o干燥 o称重 o测定总黄酮含
量 o计算动态吸附洗脱量 ∀
2q7 上柱液浓度对 „… p {型树脂动态吸附野菊花
总黄酮的影响 分别称取已处理好的 „… p {型吸
附树脂 wxs ªov份 o湿法装入 x ¦° ≅ xss ¦°的色谱
柱中 o取野菊花浸膏 v份 o每份 tvs ªk含总黄酮
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uz1{ ªlo分别按 u …∂ kt wss °lov …∂ ku tss
°low …∂ ku {ss °l加水溶解过滤后上柱 o流速
u ∗ v °# °¬±pt o过柱完后分别收集各自的过柱液 o
测其中总黄酮残留量 ∀
2q8 冲洗杂质用水量对 „… p {型树脂动态吸附野
菊花总黄酮影响 分别称取已处理好的 „… p {型
吸附树脂 wxs ªo湿法装入 x ¦° ≅ xss ¦°的色谱柱
中 o取野菊花浸膏 u份 o每份 tvs ªk含总黄酮 uz1{
ªlo分别按 u …∂ kt wss °l加水溶解过滤后上柱 o
流速 u ∗ v °# °¬±pt o过柱完后 t份不冲洗 ot份用
t …∂水 kzss °l冲洗 o共冲洗 v次 o分别测定每份
过柱水中总黄酮残留量并计算损失量及考察水冲洗
对总黄酮纯度影响 ∀
2q9 洗脱剂洗脱次数对 „… p {型树脂动态吸附野
菊花总黄酮收率影响 称取已处理好的 „… p {型
吸附树脂 wxs ªo湿法装入 x ¦° ≅ xss ¦°的色谱柱
中 o取野菊花浸膏 tvs ªk含总黄酮 uz1{ ªlo按 u …∂
kt wss °l加水溶解过滤后上柱 o流速 u ∗ v °#
°¬±pt o过柱完后用 zsh乙醇作洗脱剂 o按 t …∂ kzss
°l洗脱 o共洗脱 x次 o收集每次洗脱剂 o测定其中
总黄酮含量 ∀
3 结果与分析
3q1 不同吸附树脂对野菊花总黄酮的静态吸附量
及洗脱性能 o结果见表 t∀
表 t x种树脂对野菊花总黄酮的静态饱和吸附洗脱结果
树脂种类
饱和吸附量
r°ª# ªpt
k干树脂 l
洗脱量
r°ª# ªpt
k干树脂 l
洗脱率
rh
⁄vxus |y1us zw1z{ zz1v
„… p { ttw1yx ts{1{| |w1|
‘Ž„ p | ||1sx {u1ww {v1u
⁄wsus |{1wx zs1wx zt1w
≥ p { tss1vu {u1tw {t1|
注 }样品液质量浓度均为 |1wy °ª# °pt
上述结果表明 x种树脂对野菊花总黄酮的静态
吸附量均在 |s °ª以上 o以 „… p {型最高 ∀在静态
洗脱中 o„… p{型树脂吸附的总黄酮较易洗脱 o洗脱
率远远高于其他 w种 o使总黄酮得到最大程度的回
收 o„… p{型树脂表现出最佳的综合性能 ∀
3q2 洗脱剂浓度对 „… p {型树脂饱和吸附后洗脱
率的影响 o结果见图 t∀
图 t表明 ozsh ∗ |sh的乙醇洗脱率均在 |sh
以上 o考虑到节约成本及生产安全上的方便 o本实验
选用 zsh乙醇为洗脱剂 ∀
图 t 乙醇体积分数对 „… p {型树脂洗脱率的影响
3q3 ³‹对 „… p{型树脂吸附量的影响 o见图 u∀
图 u 不同 ³‹对 „… p {型树脂饱和吸附量的影响
图 u表明 o上样液以 ³‹ w ∗ x吸附量大 ∀黄酮
类化合物多具酚羟基 o显弱酸性 o当上样液 ³‹偏大
时 o野菊花总黄酮有离子化趋势而不易被吸附 ∀因
此 o上样液 ³‹应约偏酸 ∀
3q4 „… p{型树脂对野菊花总黄酮的动态吸附 p
洗脱性能 根据静态试验结果 o选用 „… p {型树脂
作为分离纯化野菊花总黄酮用树脂 ∀ zsh乙醇为洗
脱剂 o用于野菊花总黄酮的动态吸附 p洗脱 o结果见
表 u∀
表 u表明 o装柱量为 tss ª的色谱柱总黄酮吸
附百分比为 ||1wh k吸附百分比 €每克树脂吸附
量 ≅树脂量 r上样总黄酮量 lo表明样品液中总黄酮
已吸附完全 o而每克树脂吸附量为 vs1{ °ªo未达饱
和 ∀装柱量为 us ª的色谱柱总黄酮吸附比为
yt1sh o表明未吸附完全 o而每克树脂吸附量为
|w1x °ªo吸附量已达饱和 ∀其吸附量 |w1x °ª# ªpt
k干树脂 l即为 „… p {型大孔吸附树脂对野菊花总
黄酮的饱和动态吸附 2洗脱量 ∀上柱总黄酮量与树
脂比为 tΒts1y∀
3q5 上柱液浓度对 „… p {型大孔吸附树脂吸附野
菊花总黄酮的影响 o结果见表 v∀
表 v表明 o上柱液中总黄酮含量相同 o而浓度 !
体积不同 kuovow …∂ l时 o对野菊花总黄酮吸附量有
影响 ∀ w …∂上柱液体积最大 !浓度最低 o过柱后残
液中总黄酮含量最多 o吸附量最低 o损失量 k未被吸
附量 l占总黄酮总量的 y1{wh ~而 u …∂体积上柱液
浓度最大 o其过柱时间最短 o损失量最小为 t1xxh ∀
由此可见 o提高上柱液浓度有利于吸附和节省时间 ∀
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表 u „… p {型大孔吸附树脂对野菊花总黄酮的动态吸附 2洗脱结果
树脂量 rª 上样总黄酮量 rª 收得干物量 rª 收得总黄酮量 rª 总黄酮纯度 rh 吸附量 r°ª# ªpt k干树脂 l 总黄酮收率 rh
tss v1t v1tx u1{z |t1ts vs1{ |u1x{
us v1t u1sy t1{| |t1zx |w1x ys1|z
表 v 上柱液浓度对 „… p {型大孔吸附树脂吸附野菊花总黄酮的影响
上柱液体积
r…∂
上柱液质量浓度
r°ª# °pt
流速
r°# °¬±pt
过柱时间
r«
过柱液总黄酮残留
r°ª# °pt
总黄酮损失量
rª
占总量比率
rh
ukt wss °l t|1{us u1x ∗ v z ∗ | s1vsz s1wvs t1xx
vku tss °l tv1uts u1x ∗ v tu ∗ tw s1w{y t1sut w1sz
wku {ss °l |1|ux u1x ∗ v ty ∗ t| s1yz| t1|st y1{w
3q6 冲洗杂质用水量对 „… p {型大孔树脂吸附野 菊花总黄酮回收率影响 o结果见表 w∀
表 w 用水量对 „… p {型树脂吸附野菊花总黄酮回收率的影响
冲洗用水量
r° 冲洗次数
流速
r°# °¬±pt
过柱水黄酮含量
r°ª# °pt
总黄酮损失量
rª
占总量比
rh
总黄酮纯度
rh
未冲洗 s s s z{1y
zss 第 t次 v ∗ w t1xtv t1sx| v1{t {u1t
zss 第 u次 v ∗ w u1vy t1yxu x1|w {|1u
zss 第 v次 v ∗ w t1vww t1uwt w1wy |t1x
合计 v1|xu tw1ut
表 w表明 o吸附后用水冲洗对已吸附的总黄酮
会有一定量的损失 o水洗次数越多 o损失量越大 o水
洗 v次损失吸附量的 tw1uth o但水洗可除去杂质 o
提高总黄酮纯度 ∀
3q7 洗脱剂洗脱次数对 „… p {型树脂吸附野菊花
总黄酮回收率影响 o结果见表 x∀
表 x 洗脱次数对 „… p {型树脂吸附野菊花总黄酮回收率的影响
洗脱剂用量
r°pt
洗脱次数
流速
r°# °¬±pt
洗脱剂中总黄酮
r°ª# °pt
收得洗脱剂量
r°
总黄酮
rª 占总量比 rh
zss 第 t次 v ∗ w ux1uus yzs ty1|s zz1uy
zss 第 u次 v ∗ w x1w|s y|s v1z|s tz1vv
zss 第 v次 v ∗ w t1x|s yys t1sw| w1{s
zss 第 w次 v ∗ w s1t{x yzs s1tuw s1xyz
zss 第 x次 v ∗ w s1st| y{s s1stv s1sx|
合计 ut1{zx
从表 x可看出 o总黄酮洗脱量主要集中在前 u
次 o占总黄酮洗脱量的 |w1x|h ∀洗脱剂用量为 u
倍树脂体积 ∀
4 结论与讨论
实验表明 o„… p {型大孔吸附树脂对野菊花总
黄酮有较大静态吸附量 o为 ttw1yx °ª# ªpt o洗脱率
为 |w1|h o高于其他 w种大孔吸附树脂 ∀同时 o其
动态吸附 2洗脱性能也最好 o总黄酮回收率为
|u1yh ∀综合考虑各因素 o„… p {型大孔吸附树脂
为分离纯化野菊花总黄酮的最佳树脂 ∀
在选定树脂后 o分别对影响 „… p {型树脂吸
附 !洗脱的因素进行了考察 o研究表明 }洗脱剂乙醇
体积分数增高 o洗脱率逐渐增大 ozsh ∗ |sh的乙醇
洗脱率均在 |sh以上 o而乙醇体积分数高易挥发 o
从经济 o节约出发选用 zsh 乙醇即可 ∀上样液以
³‹ w ∗ x时饱和吸附量最大 ∀因黄酮类化合物多具
酚羟基 o显弱酸性 o当上样液 ³‹偏大时 o野菊花总
黄酮有离子化趋势而不易被吸附 ∀因此 o上样液 ³‹
值偏酸有利于吸附 ∀
目前 o尚未见有大孔吸附树脂分离纯化野菊花
总黄酮上样浓度的报道 o但有报道上样液浓度对吸
附量有影响 ≈{  o本研究表明上样液浓度与吸附量呈
明显的正相关关系 ot|1{ °ª# pt吸附量明显高于
|1|v °ª# pt o适当提高上样液浓度有利于吸附 ∀
#yutu#
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上样液浓度以分离的目标产物野菊花总黄酮计 o可
消除野菊花药材产地 !品种等不同造成的总黄酮含
量的差异 o有利于保证吸附及减少损失 ∀
本研究上样总黄酮量与树脂比为 tΒts1yo为保
证吸附完全 o实际生产中树脂量应大于此比例 o以保
证达到饱和吸附及吸附完全 ~样品液上柱流速为
u ∗ v °# °¬±pt ~冲洗杂质用水量 w …∂ o上柱流速
为 v ∗ w °# °¬±pt ~洗脱剂用量 u ∗ v …∂ o上柱流速
为 u ∗ v °# °¬±pt o即可达到满意效果 o总黄酮纯
度达 |sh以上 !回收率达 |uh以上 ∀
随着吸附 2洗脱次数的增加 o残留在树脂上而
不能被洗脱下来杂质会增加 o使吸附力减弱或丧
失 o总黄酮吸附率 ! 纯度等均呈下降趋势 ∀因此使
用一段时间后 kw ∗ x次 lo必须对树脂进行再生处
理 o以保证总黄酮回收率在 |sh以上 !纯度在 |sh
以上 ∀
≈参考文献  
≈t  江苏新医学院 q中药大辞典 ≈   q下册 1上海 }上海科学技术
出版社 ot||z}utwwq
≈u  陈杖洲 o侯凯东 q野生天然药用植物代用茶野菊花的开发及其
利用 ≈ q茶叶经济信息 oussyokxl}vsq
≈v  石兰萍 o田琳琳 o袁劲松 o等 q野菊花的研究概况 ≈ q中西医结
合心脑血管病杂志 oussxovkxl}wvwq
≈w  王浴生 o邓文龙 o薛春生 q中药药理与应用 ≈   q北京 }人民卫
生出版社 ousss}ztwq
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法的探讨 ≈ q中兽医医药杂志 oussuoutkvl}wtq
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京 }化学工业出版社 oussu}|vq
≈z  韩 丽 o谢秀琼 o周淑芳 o等 q实用中药制剂新技术 ≈  q北京 }
化学工业出版社 oussu}tyzq
≈{  向大雄 o李焕德 o朱叶超 o等 q大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄
酮的研究 ≈ q中国药学杂志 oussvov{ktl}vxq
Σεπαρατιον ανδ πυριφιχατιον οφ φλαϖονοιδσ φροµ χηρψσαντηεµ υµ ινδιχυν
ωιτη µ αχροπορουσρεσιν
≠˜ ¬¤±2¶«¨ ±ªt o ≠ ˜ ­¬¤±2³¬±ªu
(t. Τονγρεν ςοχατιοναλΙνστιτυτε, Τονγρεν xxwvss, Χηινα;
u. Χολλεγε οφ Λιφε Σχιενχε, Υνιϖερσιτψ οφ Γυιζηου, Γυιψανγ xxssux, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: „ ° ·¨«²§©²µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¤±§³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ²©©¯¤√²±²¬§¶©µ²° Χ1 ινδιχυµ º¬·«°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± º¤¶¶·∏§2
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[ Κεψ ωορδσ] °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±~ Χηρψσαντηεµ υµ ινδιχυµ ~ ©¯¤√²±²¬§¶~ ¶¨³¤µ¤·¬²±~ ³∏µ¬©¬¦¤·¬²±
≈责任编辑 鲍 雷  
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第 vu卷第 us期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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