全 文 ：°≤法测定青蒿素经皮给药体外透皮速率的方法学研究
王乃婕 o张志慧 o邱 琳 o杨华生 o梁秉文 o秦 波 o叶祖光 3
k北京中研同仁堂医药研发有限公司 o北京 tssszxl
≈收稿日期 ussz2sx2us
≈通讯作者 3 叶祖光 oר¯}kstsl{wstyvwwo∞2°¤¬¯}¼¨ ½∏ª∏¤±ª
√¬³1¶¬±¤1¦²°
青蒿素是一种迅速控制疟疾症状的抗疟药 ≈tou o
临床上青蒿素对间日疟 !一般恶性疟及抗氯哇地区恶
性疟均有效 o具有退热快 !原虫转阴时间短的特点 o尤
其适于抢救凶险型疟疾 ∀但青蒿素存在半衰期短 o疟
原虫易复燃等缺点 o为了克服青蒿素半衰期短的缺
点 o作者将其制备成经皮给药缓释制剂 o利用经皮给
药制剂可避免肝脏的首过效应和胃肠道的破坏 o维持
较长的作用时间 o减少给药次数 o延长给药时间 o维持
恒定的有效血药浓度 o降低药物毒性和副作用 o提高
疗效等独特优点 o可在减少给药剂量的同时 o大大降
低疟原虫复燃率 ∀为了给青蒿素经皮给药制剂的处
方筛选提供依据 o本研究建立了高效液相色谱法测定
青蒿素体外透皮速率的含量 o效果满意 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶高效液相色仪 ~uy|x p u||y版工作站 ~
• ¤·¨µ¶uy|x四元泵 ~• ¤·¨µ¶u||y紫外检测器 ~透皮扩
散使用仪 ×puso上海锴凯科技贸易有限公司 ~}
美国 ·¨¯ µ¨×²¯ §¨²
tvx p ≥电子天平 ~甲醇为色
谱纯 o水为自制超纯水 o其他试剂均为分析纯 ~青蒿
素对照品 k批号 tssusu2usswsuo购于中国药品生物
制品检定所 l∀
2 方法与结果
211 皮肤的处理
≥⁄大鼠 k雄性 ot{s ∗ uss ªlo处死后用电动剃
毛器将其脱毛 o取腹部皮肤 ∀剥离脂肪层 o用蒸馏水
冲洗后备用 ∀
212 体外透皮试验条件
立式 ƒµ¤±½扩散池 k体积 y °o扩散面积 u1|u
¦°u l~水浴温度 kvz ? tl ε ~转速 wss µ# °¬±pt ∀
213 接收液的选择
在 vz ε 条件下 o分别测定了青蒿素在 tsh o
ush ovsh owsh的 °∞wss水溶液中的溶解度 o以
便选择适合的接收液 o结果 tsh oush ovsh owsh
°∞wss的溶解度分别是 t{y1vuouwz1w|ou|u1uzo
xsv1|u Λª# °pt ∀可见 o青蒿素在 wsh的 °∞wss
水溶液中溶解度最大 o可以满足体外透皮试验所需
的漏槽条件 o因此选择 wsh的 °∞wss水溶液作为
体外透皮试验的接收液 ∀
214 体外透皮试验含量测定
21411 色谱条件 µ²°¤¶¬¯µ tss色谱柱 kw °° ≅
uxs °°ox Λ°l~流动相甲醇 2磷酸盐缓冲液 ks1st °²¯
# pt ¤u °w 2¤u °w lk ysΒws l~流速 t1s °#
°¬±pt ~检测波长 uys ±°~柱温 vs ε ∀在此条件下青
蒿素与其他成分能达到基线分离 o色谱图见图 t∀
图 t 青蒿素透皮实验 °≤图
t1对照品 ~
1样品 ~≤1阴性 ~t1青蒿素
21412 供试品溶液的制备 取接收液 x1s °置
ts °量瓶 o加 u1s °s1xyh氢氧化钠溶液摇匀 o
于 xs ε 水浴中反应 vs °¬±o取出 o放冷 o加 s1t| °²¯
# pt冰醋酸至刻度 o摇匀 o过微孔滤膜 o即得 ∀
21413 阴性对照试验 在选定的色谱条件下 o取不
含青蒿素的空白贴片按照 212o213 项下条件进行
试验 o得阴性对照接收液 o按照供试品溶液制备方法
#yzsu#
第 vu卷第 t|期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ t|
¦·²¥¨ µo ussz
制备阴性对照供试液进样 o结果表明 o阴性对照液在
青蒿素色谱峰位置处无相应峰出现 ∀阴性对照液的
高效液相色谱图分别见图 t∀
21414 线性关系考察 精密称取青蒿素对照品 ts
°ªo置 ts °量瓶中 o加乙醇至刻度 o摇匀 ∀精密吸
取上述青蒿素对照品 t1s °o置 ux °量瓶中 o加
wsh °∞wss至刻度 o摇匀 o分别精密吸取此溶液
s1tos1uos1vos1wos1xos1yos1{ot1s °于 ts °
量瓶中 o补充 wsh °∞wss至 x1s °∀加 u1s °
s1uh氢氧化钠溶液摇匀 o于 xsε 水浴中反应 vs
°¬±∀冷却至室温 o加 s1t| °²¯# pt冰醋酸至刻度 o
摇匀 o过微孔滤膜 o作为对照品溶液 ~分别吸取 us
Λ进样 o按上述色谱条件测定 o以对照品青蒿素的
纳克数为横坐标 o相应峰面积积分值为纵坐标 o计算
回归方程 Ψ t suw1vΞ n t vyu1x, Ρ s1||| w
(ν v)∀青蒿素在 { ∗ {s ±ª成良好的线性关系 ∀
21415 精密度试验 精密吸取供试品溶液 us Λo
注入液相色谱仪 o测定青蒿素峰面积值 o并重复进样
y次 ∀结果 ≥⁄为 t1x{h
21416 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于 sowo
{otuouw «进样测定 ∀结果表明 o样品供试液在 uw «
内稳定 ∀
21417 回收率试验 分别吸取青蒿素标准品溶液
kxy1yu Λª# °pt ls1uos1xos1{ °各 v份 o置 ts
°量瓶 o用阴性对照接收液补足至 x1s °o按供试
品溶液制备方法制备 o进样测定 o以下述公式计算回
收率 o|份平均回收率为 tsu1x|h o ≥⁄ x1xvh o本
法回收率符合规定 ∀
21418 青蒿素透皮速率测定 青蒿素贴剂制备 }将
青蒿素 !丙二醇 !氮酮 !压敏胶混合均匀 o涂布 o干燥 o
即得溶解型 ~将青蒿素分散于 °∞wss中 o加入丙二
醇 !氮酮 !压敏胶混合均匀 o涂布 o干燥 o即得分散型 ∀
体外透皮试验 }将上述 u种青蒿素贴剂分别贴
于处理好的大鼠腹部皮肤 o置 ƒµ¤±½扩散池 o加入接
收液 o进行体外透皮试验 kvz ε o wss µ# °¬±pt lo分
别于 uowoyo{ouw «取样 k将接收液全部取出 o加入
新的接收液 lo按照供试品溶液制备方法处理 o测定
青蒿素含量 o计算体外透皮速率 o结果见表 to透皮
速率曲线见图 u∀
3 讨论
311 样品前处理方法考察
由于体外透皮试验接收液中青蒿素含量较低 o
表 t u种青蒿素贴片体外透皮速率结果 kν vl
贴片
类型
uw «累积透过
量 r°ª# ¦° pu
透皮速率
rΛª# ¦° pu # «pt
透皮速率曲线 ρ
分散型 s1txw y1xy Ψ y1xxx vΞ2x1u|w v s1||{ x
溶解型 s1twv y1sx Ψ y1sw{ {Ξ2u1szu z s1||| t
图 u 青蒿素贴片体外透皮速率曲线
远远低于正常含量测定浓度 o且青蒿素在乙醇中和
在 wsh °∞wss中反应后峰面积存在差异 ∀故对照
品溶液也采用 wsh °∞wss作为溶剂 o尽量在反应
时多取样 k由原来的 t°增加到 x °lo以便提高
其浓度 o作者按照文献前处理方法 ≈v 测定了其加入
w°s1uh ¤ os1s{ °²¯ # pt冰醋酸后的 ³分
别为 tu1v|ow1{so换算后改为加入 u °s1xyh
¤ 和 s1t| °²¯ # pt冰醋酸 o其 ³ 分别为
tu1x|ow1|to基本与文献报道一致 o更改前处理方法
后 o峰面积可以满足含量测定要求 ∀
312 检测波长的选择
青蒿素紫外没有吸收 o经碱反应后在 u|u ±°有
吸收 o但不适合于高效液相色谱法 o碱反应产物在
³ x1x{ ∗ y1sw的条件下 o可定量地转化为 uys ±°
吸收的化合物 ≈w o故选择碱化后酸化 ouys ±°作为
液相含量测定波长 ∀
本法方便 !快速 !专属性及重复性好 o结果准确
可靠 o可用于青蒿素体外透皮速率的含量测定 o为
青蒿素经皮给药制剂的处方筛选提供了依据 ∀
≈参考文献
≈t 叶祖光 1青蒿素类抗疟药研究二十年 ≈ 1国外医学 #中医中
药分册 ot||xotzkxl}v1
≈u 杨耀芳 1青蒿素及其衍生物的药理作用和临床作用 ≈ 1中国
临床药学杂志 oussvotukwl}uxv1
≈v 汪文来 1 °≤法测定类风湿胶囊中青蒿素的含量 ≈ 1中国
中医基础医学杂志 oussvo|ktul}wvowz1
≈w 曾美怡 o赵世善 1青蒿素分析中的各种定量反应 ≈ 1药物分
析杂志 o t|{yoykvl}t{v1
≈责任编辑 鲍 雷
#zzsu#
第 vu卷第 t|期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ t|
¦·²¥¨ µo ussz