全 文 ：芍药生产工艺过程中 o引起芍药苷含量变化的降解
机制 o可能是水解或缩酮反应 o具体有待进一步研
究 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 q ussx}y{ots|q
≈u  李冬雪 o杜守颖 o贾海英 o等 q对 5中国药典 6usss年版 Œ部白芍
中芍药苷含量测定方法的探讨 ≈  q时珍国医国药 oussxoty
kwl}vttq
≈v  陶巧凤 q白芍中芍药苷提取工艺的优选 ≈ q中药材 ot|||ouu
kul}|wq
≈w  刘 芳 o杨广德 q白芍中芍药苷的提取方法研究 ≈ q中成药 o
ussvouxktsl}z|uq
≈x  王素娟 o杨永春 o李 帅 o等 q牡丹皮乙醇提取物中的 t个新芍
药苷衍生物 ≈ q中国中药杂志 oussxovsktsl}zx|q
≈责任编辑 鲍 雷  
何首乌中二苯乙烯苷提取物的制备工艺及含量测定
刘新桥 o高文远 3 o陈海霞
k天津大学 药物科学与技术学院 o天津 vssszul
≈收稿日期   ussy2sy2t{
≈通讯作者   3 高文远 oר¯}ksuul{zwst{|xo∞2°¤¬¯}³«¤µ°ª¤²
ƒ ·­∏q §¨∏q¦±
何首乌为蓼科植物何首乌 Πολψγονυµ µ υλτιφλο2
ρυµ ׫∏±¥q的干燥块根 o具有补肝肾 !益精血 !乌须
发 !强筋骨的功效 ∀现代药理研究表明何首乌具有
抗衰老 !降低胆固醇 !提高免疫功能 !防治动脉粥样
硬化及保肝等活性 ≈t  ∀二苯乙烯苷是何首乌中重
要的活性成分 o具有抗氧化清除自由基 o降低胆固
醇 o保肝 o减轻脑缺血所致的脑组织损伤等多重功
能 ≈u2w  ∀国际市场对二苯乙烯苷需求较大 ∀目前 o何
首乌中二苯乙烯苷的制备工艺有文献报道用乙醇提
取 o大孔树脂纯化 ≈x  o但其所得产品纯度不够高 o而
且对大孔树脂吸附工艺未考察完全 ∀本实验对何首
乌中二苯乙烯苷的提取纯化工艺进行了系统的研
究 o得到了高纯度的产品 o并在此基础上建立了提取
物中有效成分二苯乙烯苷的含量测定方法 o为二苯
乙烯苷的制备和质量控制及相关新药开发提供参
考 ∀
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 日本岛津 ≤ p ts„×∂ °单泵 o
岛津 ≥°⁄ p ts„∂ ∂ °型紫外可见分光光度检测器 o
‹Œ± p ¶¬¯ ≤t{ kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°l色谱柱 o
…≥uts≥型电子天平 k北京赛多利斯仪器系统有限公
司 lo何首乌药材 k购自天津中药饮片厂 o由天津大
学药学院高文远教授鉴定 louovoxowχ2四羟基二苯
乙烯 2u2Ο2Β2∆2葡萄糖苷对照品 k≥¬ª¤°¤公司 lo乙腈
为色谱纯 o乙醇为分析纯 o⁄tst型大孔树脂 k南开大
学化工厂 lo硅胶 kuss ∗ vss目 o青岛海洋化工厂 l∀
2 方法与结果
2q1 提取工艺
2q1q1 正交试验设计 采用渗漉法对药材进行提
取 o在提取过程中采用正交设计对最佳提取工艺条
件进行了选择 o根据二苯乙烯苷的理化性质及预试
验结果 o影响提取效果的主要因素有加水量 !浸泡时
间 !流速等 o故以二苯乙烯苷的提取率为指标 o按 |
kvw l正交表设计正交实验 o其因素水平表见表 t∀
表 t 因素水平
水平 Α
加水量 r倍
Β
浸泡时间 r«
Χ
流速 r°# °¬±pt # ®ªpt
t { vy vs
u ts uw us
v tu tu ts
2q1q2 提取方法与结果 按照正交设计方案 o分别
称取 {s ª何首乌药材粗粉 kus目 l共 |份 o分别加
入相应体积的水 o浸泡相应时间 o渗漉 o得渗漉液 o加
水定容至 t sss °o分别精密吸取 t °并称取何首
乌药材适量 o按 2q4中方法分别测定 |次渗漉液中
二苯乙烯苷的含量和药材中二苯乙烯苷的含量 o计
算其提取率 k提取率 €渗漉液中二苯乙烯苷的量 r
药材中二苯乙烯苷的量 l∀实验结果见表 uo方差分
析见表 v∀
#wzwt#
第 vu卷第 tw期
ussz年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tw
∏¯¼o ussz
表 u 正交实验及结果
实验号 提取率 rh 实验号 提取率 rh
t w|1xv y x|1xs
u xw1zz z zz1tt
v w{1yv { zs1sv
w y|1sw | yz1tu
x yz1zz
表 v 方差分析表
方差来源 方差平方和 自由度 Φ比 Φ临介值 显著性
Α yyu1{uu u {u1stu t|1sss 显著
Β {s1z{u u |1||x t|1sss 不显著
Χ v|1x|x u w1{|| t|1sss 不显著
误差 {1s{ u
由表 u及表 v的实验结果并考虑生产成本可知
Αv ΒuΧv为最佳条件 o即 tu倍量水 o浸泡 uw «o以每公
斤药材 ts °# °¬±pt的流速渗漉 ∀
按最佳工艺验证 v批 o二苯乙烯苷的转移率为
分别为 z{1zxh o{s1vzh ozz1wxh o所以本提取工
艺较稳定 o且提取率高 ∀
2q2 大孔树脂纯化
将按最佳条件渗漉所得的渗漉液过大孔树脂进
行初步纯化 o对大孔树脂的吸附容量和洗脱条件进
行了考察 o确定了工艺条件 ∀
2q2q1 吸附容量的确定 绘制透过曲线确定二苯
乙烯苷的吸附容量 }取 tx °纯化好的大孔树脂湿
法装柱 o将渗漉液浓缩至一半体积 o取 tvs °浓缩
液 o湿法上样 ots °r瓶收集流出液 o测定每瓶流出
液中二苯乙烯苷的含量 k测定方法见 2q4lo以二苯
乙烯苷的含量为纵坐标 o以瓶号为横坐标 o绘制透过
曲线如图 t∀
图 t 二苯乙烯苷的透过曲线
由透过曲线可知上 {s °样液较好 o根据渗漉
液中二苯乙烯苷的含量可知最佳上样量为 tz °ª#
°pt树脂 ∀
2q2q2 洗脱剂乙醇浓度的确定 绘制洗脱曲线确
定洗脱剂的浓度 }按上述条件取渗漉液上柱 o然后分
别以 tss °的水 oxh otsh otxh oush ouxh ovsh
乙醇洗脱 oux °r瓶收集洗脱液 o‹°≤测出每瓶中
二苯乙烯苷的量 o以二苯乙烯苷的含量为纵坐标 o以
瓶号为横坐标 o绘制洗脱曲线如图 u∀
图 u 二苯乙烯苷的洗脱曲线
洗脱曲线显示 }二苯乙烯苷主要集中在 txh o
ush ouxh的乙醇洗脱液中 !占全部乙醇洗脱液中二
苯乙烯苷的 {sh左右 o而 xh乙醇基本未洗下二苯
乙烯苷 o故确定洗脱条件为先用 xh乙醇洗去水溶
性杂质 o再用 uxh乙醇洗脱二苯乙烯苷 o收集 uxh
乙醇洗脱部分 ∀
2q2q3 乙醇用量的确定 取 ys °大孔树脂 o湿法
装 v根柱 o每根 us °o取 vss °k每根柱 tss °l
渗漉液上样 o然后分别以 xoyoz倍量大孔树脂体积
的 uxh 乙醇洗脱 o测得洗脱率分别为 {u1yvh o
{y1t|h o{{1y|h o综合考虑回收成本和洗脱效果 ox
倍量乙醇是较好的洗脱体积 ∀
2q3 硅胶柱纯化
将过大孔树脂后所得洗脱液减压回收溶剂 o真
空干燥 o取 t ª粉末用硅胶按 tΒt拌样 o将相当于粉
末 xs倍量的硅胶装柱 o干法上样 o用醋酸乙酯 2甲
醇 2水 kussΒwΒvl以 v °# °¬±pt的流速进行洗脱 o
按每份 xs °进行收集 o洗脱体积为 u1x个柱体积 o
弃去前 t1x个柱体积的洗脱剂 o收集后 t个体积的
洗脱剂 o回收 o干燥得何首乌二苯乙烯苷提取物产
品 ∀
综上所述 o何首乌中二苯乙烯苷的制备工艺流
程为何首乌药材粗粉 kus目 l加 tu倍量水 o浸泡 uw
«o以每公斤药材 ts °# °¬±pt的流速渗漉 o渗漉液
上大孔树脂柱 ox倍树脂体积 uxh乙醇洗脱 o洗脱液
回收溶剂 o干燥 o干法上硅胶柱 o以醋酸乙酯 2甲醇 2
水 kussΒwΒvl洗脱 ∀回收溶剂 o干燥得产品 ∀
2q4 何首乌提取物中二苯乙烯苷的含量测定
2q4q1 色谱条件 ‹Œ± 2¶¬¯ ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅
uxs °°ox Λ°lo流动相 乙腈 2水 kutΒz|lo检测波长
vus ±°o流速 t1s °# °¬±pt o柱温 vs ε ∀在上述
条件下二苯乙烯苷达到基线分离 o见图 v∀
#xzwt#
第 vu卷第 tw期
ussz年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tw
∏¯¼o ussz
图 v 何首乌提取物 ‹ °≤图
„q对照品 ~…q提取物 ~tq二苯乙烯苷
2q4q2 标准曲线的制备 精密称取 u1vu °ªuovo
xowχ2四羟基二苯乙烯 2u2Ο2Β2∆2葡萄糖苷对照品置
ux °量瓶中 o用 xsh 乙醇溶解并定容 o摇匀 o用
s1wx Λ°微孔滤膜滤过 o得对照品溶液 o精密吸取对
照品溶液 u1xox1soz1xots1sotu1x ˏ进样 o测定峰
面积 o计算色谱峰面积 kΨl与样品量 kΞl的回归方
程为 Ψ €t {us w|vΞ p vw |uuoρ€ s1||| {o线性范围
s1uvu ∗ t1ty Λª∀
2q4q3 精密度 精密吸取对照品溶液 ts ˏo重复
进样 x次 o测定峰面积 o计算得其 • ≥⁄为 s1wzh ∀
2q4q4 重复性 精密称取同一批样品 x份 o置 ux
°量瓶中 o用 xsh乙醇溶解并定容 o摇匀 os1wx Λ°
微孔滤膜滤过 o进样 ts ˏo测定峰面积 o计算得其
• ≥⁄为 u1tvh ∀
2q4q5 稳定性 精密称取样品 u1yt °ªo置 ux °
量瓶中 o用 xsh乙醇溶解并定容 o摇匀 os1wx Λ°微
孔滤膜滤过 o每 u «测定 t次 o测定 x次 o测定峰面
积 o结果 • ≥⁄为 t1tth o在 { «内稳定性良好 ∀
2q4q6 加样回收率 精密称取同一批样品 x份 o置
ux °量瓶中 o精密加入标准品 o用 xsh乙醇溶解并
定容 o摇匀 os1wx Λ°微孔滤膜滤过 o分别进样 ts
ˏo测定峰面积 o结果见表 w∀
表 w 二苯乙烯苷加样回收率
称样量
r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
rh
平均值
rh
• ≥⁄
rh
t1s| s1|s t1|s |z1{y
t1ty s1|s t1|y |z1uy
t1uw t1tt u1uu |x1xw |{1uz u1y{
t1uu t1tt u1u{ tsu1yv
t1vs t1vu u1xt |{1sy
2q4q7 样品的含量测定 精密称取 v批样品 o置
ux °量瓶中 o用 xsh乙醇溶解并定容 o摇匀 os1wx
Λ°微孔滤膜滤过 o分别进样 ts ˏo测定峰面积 ∀
计算含量分别 |v1twh o|s1yvh o|u1{xh o平均含
量 |u1uth ∀
3 讨论
文献报道二苯乙烯苷的提取方法多采用醇提
法 ≈y  o而本工艺采用水提法 o因为在后续的精制工
艺中要用大孔树脂 o而用大孔树脂纯化二苯乙烯苷
时用水作溶媒上样有利于二苯乙烯苷的吸附 o用醇
提后需要将乙醇回收完全 o用水提则可以直接上样 o
而且实验表明水提时二苯乙烯苷的转移率可达
{sh左右 o基本与醇提相同 ∀另外 o二苯乙烯苷受热
后不稳定 ≈z  o故采用渗漉法 ∀
有文献报道用大孔树脂纯化二苯乙烯苷的工
艺 ≈x  o其采用醇提液浓缩后上样 o这可能导致在浓
缩时二苯乙烯苷析出损失 o且乙醇未回收完全则会
降低大孔树脂对二苯乙烯苷的吸附容量 ∀该文也未
对动态吸附容量进行考察 o对吸附条件未考察完全 o
本文对动态吸附进行了研究 o得出了最佳上样量 ∀
另外 o该文在绘制洗脱出线时采用紫外可见分光光
度法测定二苯乙烯苷含量 o这可能导致所绘洗脱曲
线不准确 o因为其它杂质会对二苯乙烯苷的测定结
果产生干扰 o本文用高效液相色谱法来测定各瓶洗
脱液中二苯乙烯苷含量 o准确描绘出了洗脱规律 ∀
先用大孔树脂对粗提物初步精制 o除去了大部
分糖类等水溶性杂质及脂溶性杂质 o然后上硅胶柱
纯化时样品量较少且较纯 o有利于节约成本并得到
高纯度的二苯乙烯苷 ∀
制备所得二苯乙烯苷纯度高 o总提取率高于
xsh o工艺安全 o重复性较好 ∀
≈参考文献  
≈t  李玉芳 o和玄华 q何首乌现代研究进展 ≈ q中成药 ot||zot|
kxl}vzq
≈u  刘厚淳 o陈万生 q何首乌水溶性成分 uovoxowχ2四羟基二苯乙
烯 2u2Ο2Β2∆葡萄糖苷的体外抗氧化作用研究 ≈ q药学实践杂
志 ousssot{kwl}uvuq
≈v  Ž¬°∏µ¤ ≠ o ’«°¬±¤°¬‹ q ∞©©¨¦·¶²©¶·¬¯¥¨ ±¨ ¦²°³²± ±¨·¶²©·«¨
µ²²·¶²©°²¯¼ª²±∏° ¶³³q ²± ¬¯√ µ¨¬±­∏µ¼ ¬± ³¨ µ²¬¬§¬½¨ §²¬¯2©¨§µ¤·¶
≈ q ° ¤¯±·¤ §¨¬¦¤o t|{vow|}xtq
≈w  刘治军 o李 林 o叶翠飞 o等 q二苯乙烯苷对脑缺血啮齿动物脑
‘ ⁄„受体及细胞内钙离子的影响 ≈  q中国药理学通报 o
ussvot|ktsl}tttuq
≈x  朱丽霞 o宁喜斌 o郭春玉 q大孔树脂纯化何首乌中二苯乙烯苷
的工艺研究 ≈ q食品科学 oussxouykyl}tz{q
≈y  吕丽爽 o汤 坚 q何首乌中二苯乙烯苷的醇提工艺 ≈ q食品与
发酵工业 ousswovsktsl}tvuq
≈z  张 纯 o杨少麟 q高效液相色谱法测定何首乌中二苯乙烯甙的
含量及其稳定性考察 ≈ q中国中药杂志 ot|||ouwkyl}vxzq
≈责任编辑 鲍 雷  
#yzwt#
第 vu卷第 tw期
ussz年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tw
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