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Study on HPLC fingerprint characteristics of Selaginella plants

卷柏属药用植物的HPLC指纹特征研究



全 文 :水浓度增加而提高 ∀同时 o苦参药材经双氧水短时间
处理 o其生物碱成分影响不明显 o但受反应液 ³‹条
件影响较大 o因此建议在中性条件下处理药材 ∀本研
究结果表明 o双氧水降解农药具有快速 !简便 !成本低
等优点 o因此 o研究改进双氧水降解法来处理中药材
农药污染问题具有实际意义和应用价值 ∀
≈参考文献  
≈t  游贤德 q国内双氧水生产与应用进展 ≈ q江苏化工 ousssou{
ktsl}tyq
≈u  吴永江 o朱 炜 o程翼宇 q气相色谱 2质谱联用检测中药材中 ty
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版 lousswouxktl}wwq
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金属材料与工程 oussvowkvul}u{sq
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Ινφλυενχε οφ Ηu Οu ον δεγραδατιον οφ ρεσιδυαλπεστιχιδεσ
ανδ χονστιτυεντσ ιν Ρ αδιξ Σοπηοραε Φλαϖεσχεντισ
ƒ˜ ÷¬¤²2¼¤±o ˜„‘¬¤±2­∏±o ‹˜ • ¬¨o • ˜ ≠ ²±ª2­¬¤±ª
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¤±§¬±©¯∏¨ ±·¬¤¯ ©¤¦·²µ¶²©·«¨ §¨ ªµ¤§¤·¬²± ²©µ¨¶¬§∏¤¯ ³¨ ¶·¬¦¬§¨ ¶¤±§¤¯®¤2
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≈责任编辑 张宁宁  
≈收稿日期   ussy2sw2uz
≈基金项目   国家自然科学基金项目 kvswzst|vl
≈通讯作者   3 陈科力 oר¯}ksuzlyuvuyx{|o∞2°¤¬¯}®¨ ¬¯¦«¨ ±ƒ tuyq¦²°
卷柏属药用植物的 ‹°≤指纹特征研究
范晓磊 t o万定荣 uov o叶丛进 u o陈科力 u3
ktq武汉市药品检验所 o湖北 武汉 wvsstu~
uq湖北中医学院 o湖北 武汉 wvssyt~ vq中南民族大学 生命科学学院 o湖北 武汉 wvsszwl
≈摘要   目的 }建立卷柏属 ts种药用植物的 ‹ °≤指纹特征分析方法 o对各个种的区别及这些种的相似性从
所含化学成分的角度进行综合评价 o为这 ts种药用植物的鉴定 !品质分析及亲缘关系评价提供依据 ∀方法 }采用
#ustu#
第 vu卷第 us期
ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‹ °≤获得的色谱数据转化为 ‹ °≤指纹谱 o据此对各样品进行鉴定与分析 ∀结果 }卷柏属 ts种药用植物均显示
了它们明显的共性和各自的指纹特征 ~部分种在不同采收期 !不同生境及不同产地的样品在指纹谱上存在一定差
异 ∀结论 }该属 ts种药用植物具有 u个重要的共有峰 ox个峰的指纹数据可以作为主要的指纹特征数据 o这些数据
对于判断各种间亲缘关系的疏密 o评价药材品质具有重要的参考价值 ∀
≈关键词   卷柏属 ~‹ °≤~指纹特征
≈中图分类号   ≥ xyz~• u{w1t ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlus2utsu2sx
卷柏属 Σελαγινελλα植物属蕨类植物门卷柏科 o
为多年生草本植物 o我国分布 ys ∗ zs余种 ≈t  o其中
uu种具有药用价值 ≈u  ∀药典收载该属植物卷柏 Σ.
ταµ αρισχινα k… ¤¨∏√ql ≥³µ¬±ªq和垫状卷柏 Σ. πυλϖινα2
τα k‹²²®q ·¨Šµ¨√ql  ¤¬¬°q为中药卷柏的法定品
种 ∀许多成方制剂配方中含有卷柏 o其中包括 x个
药典品种和 tu个局 k部 l颁品种及地方对照品种 o
其他卷柏属的 us余个品种也分别为制剂原料或常
用中草药 ≈v  ∀现代药理研究表明 }卷柏属的药用种
不仅具有传统的清热 !解毒作用 o还有抗肿瘤 !降血
糖 !抗菌 !增强免疫 !镇痛等多种功效 ≈w  ∀该属植物
某些种的形态较为类似 o易于混淆 o其干燥后的药材
用形态学方法鉴定更具有一定难度 ∀因此 o在野外
采集植物进行形态鉴别的基础上 o利用 ‹°≤分析
方法 o建立了卷柏属 ts个种 tv份样品药材的 ‹°≤
指纹图谱 o为该属药用植物的深入研究及其应用提
供样品鉴定的指纹信息 o并为该属药材的质量控制
提供参考依据 ∀
1 仪器与材料
戴安 °y{s型高效液相色谱仪 o四元梯度泵 o
˜∂ ⁄tzs˜检测器 o‹Ž p {vstzt…„ƒ戴安变色龙
高效液相数据处理系统 k美国戴安公司 l∀ „° p
||s{≥滤过器 k„∏·²°¤·¬¦≥¦¬¨±¦¨ ¤¯¶·µ∏° ±¨·≤²q ·¯§l∀
…° putt⁄型 trts万分析天平 k西德 ≥¤µ·²µ¬∏¶l~乙
腈为色谱纯 o水为去离子水 o其他试剂为分析纯 ∀穗
花杉双黄酮对照品 k中国药品生物制品检定所 l∀
药材样品详见表 to经作者鉴定 k并由中国科学院植
物研究所张宪春研究员核实 l∀
表 t 卷柏属植物样品
‘²q 学名 产地 采集日期
t 薄叶卷柏 Σελαγινελλα δελιχατυτα 湖北宜昌雾渡河 ussw2s{
u 薄叶卷柏 Σ. δελιχατυτα 湖北恩施鹤峰 ussv2s{
v 翠云草 Σ. υνχινατα 湖北宜昌雾渡河 k阴湿环境 l ussw2sx
w 翠云草 Σ. υνχινατα 湖北宜昌雾渡河 k阴湿环境 l ussw2s{
x 翠云草 Σ. υνχινατα 湖北宜昌雾渡河 k向阳环境 l ussw2s{
y 垫状卷柏 Σ. πυλϖινατα 湖北宜昌雾渡河 ussv2ts
z 卷柏 Σ. ταµ αρισχινα 湖北宜昌雾渡河 ussv2s{
{ 细叶卷柏 Σ. λαβορδει 江西庐山 ussv2sz
| 疏叶卷柏 Σ. ρεµ οτιφολια 湖北宜昌车溪 ussw2s{
ts 中华卷柏 Σ. σινενσισ 河南辉县 ussw2sz
tt 伏地卷柏 Σ. νιππονιχα 湖北宜昌雾渡河 ussw2s{
tu 异穗卷柏 Σ. νιππονιχα 湖北宜昌雾渡河 ussw2s{
tv 江南卷柏 Σ. µ οελλενδορφιι 湖北宜昌土城 ussw2s{
2 方法 ≈x 
2q1 色谱条件 ⁄¬¤°²±¶¬¯× ≤t{色谱柱 kxqy °° ≅
uxs °°ox Λ°l~检测波长 vvs ±°o柱温 vs ε o流速
t °# °¬±pt ∀流动相 „为乙腈 o…为水 o进样量为
ts ˏo梯度洗脱 os ∗ x °¬±ouxh „~x ∗ tu °¬±ovxh
„~tu ∗ tz °¬±owxh „~tz ∗ ux °¬±oxsh „~ux ∗ ws
°¬±oxxh „~ws ∗ wx °¬±ozsh „~wx ∗ xs °¬±otssh
„~xs ∗ xx °¬±o保持 tssh „~xx ∗ ys °¬±o线性梯度
回至 uxh „∀
2q2 对照品溶液的制备 精密称取 t °ª的穗花杉
双黄酮对照品 o置 ts °量瓶中 o加入适量甲醇充分
溶解后 o定容至刻度 o配成 s1t °ª# °pt的对照品
溶液 ∀
2q3 供试品溶液的制备 取多株样品药材经干燥
后进行粉碎 o过 ws目筛 o精密称取各样品约 s1x ªo
置索氏提取器中 o加氯仿 xs °o水浴加热回流 w «o
取出药材 o挥干氯仿 o转入 tss °圆底烧瓶中 o精密
加入甲醇 xs °o称定重量 o水浴加热回流 ts «o冷
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至室温后 o用甲醇补足失重 o摇匀 o滤过 o再用 s1wx
Λ°微孔滤膜滤过 o取续滤液即得 ∀
2q4 样品分析 将 tv份卷柏属植物样品的供试
液 o按上述色谱条件进样分析 o记录色谱图 o同时用
对照品溶液进样以确定穗花杉双黄酮的峰位 ∀
2q5 卷柏属色谱相对保留指纹谱的构建 以穗花
杉双黄酮峰为参照峰 o计算各个样品中各峰的相对
保留值 }Α € τ• ¬rτ• t o式中 τ• ¬oτ• t分别为样品和参照品
的保留时间 ∀将各样品色谱峰按相对保留 Α值大
小排序 o计算同一峰位 Α值的平均值作为标准 Α
值 o同一色谱峰 Α值的 • ≥⁄  th ∀在色谱峰的标
准 Α值项下标出各样品色谱峰的百分峰面积值 o标
准 Α值 2百分峰面积值构成了卷柏属样品的 ‹°≤
指纹特征 k表 ul∀每个样品均选取其中峰面积最大
的 {个峰为 {强峰 o以反映该种植物样品所含的主
要化学成分及其含量差异 ∀
表 u 相对保留值 Α2百分峰面积 ‹ °≤指纹特征分析
峰号 Α
各样品的百分峰面积
t u v w x y z { | ts tt tu tv
tf t ut1vz ty1vx {1wt w1t| z1xx zz1yx zs1|v tu1xx ws1tz w{1vw w{1{{ us1wu xt1tz
uf t1sxu {1vu tt1ty ut1{x tz1tu ty1zw u1xw v1yt u1x| t{1zt uz1zx ux1wy t|1us tx1wu
v t1szy t1z| t1{v t1{s s1w|
w t1s|w s1{s s1|y s1{x s1ws s1xu s1ww
x t1tty s1ww s1vx s1ys
y t1ty| w1y{ w1ws u1uz w1tw v1vx v1|s s1wx t1uz t1zu t1wv t1vx
z t1us{ s1vz s1xv t1sy s1v{ t1zv u1zz
{ t1uvv t1zy u1tv
| t1uwy ux1x{ uw1zv xu1xy xt1vv xz1vy s1zz w1sy uv1vz t1vu tw1{v v1xw
ts t1uz| t1us v1{z x1yw x1vt
tt t1vs{ s1xs s1wz s1ys s1wx s1wv s1{|
tu t1vwx s1|t u1v|
tv t1vy{ v1tx u1ut t1tw t1|v x1|s w1ys v1zw tv1tv |1uu |1vz tv1{y t1|{
tw t1v{u w1{t
tx t1wsw s1|v t1vv tv1ws ts1vs s1wt y1z|
ty t1wxt s1|u w1vv tv1w| s1wy u1sy
tz t1wz| s1wy s1v| s1{t
t{ t1xx s1zv t1vv
t| t1x|{ v1zu x1{y s1w| s1wu
us t1yuw t1vv s1xv
ut t1yyy s1yu
uu t1yyu u1w{
uv t1y{z s1zu
uw t1zwz s1wu s1yv t1tw t1vs
ux t1zz{ t1|| x1u| s1wu s1zv u1sw u1yv
uy t1{yu s1yv u1vy t1w|
uz u1st| s1ys t1xy t1s| s1yz
u{ u1usz s1zu s1v| t1{u
u| u1u{x s1wx v1uy v1sw s1y|
vs u1u|s s1{t
注 }下划线表示 {强峰 of表示 ts种 tv份卷柏属药用植物样品的共有峰
重叠率 }以某样品的指纹谱为基准 o以二者总峰
数之和为分母 o两者共有峰数目的 u倍为分子 o求得
其百分率即为峰的重叠率 ∀重叠率是在比较 u个样
品的各自峰数及两者共有峰数 k指 Α值相同的峰 l
的基础上 o从质的角度考虑两者的相似度 ∀
3 结果和讨论
3q1 由各样品的色谱图可见 k图 t ∗ xlo绝大部分
样品在 Α  t的区段峰数极少 o峰面积很小 o但在
Α∴ t的区段 k特别是在 Α为 t ∗ t1wx区段 l样品色
谱峰多而密集 o同时分离清晰 o根据作者的研究 o该
区段的色谱峰主要为该属植物的重要活性物质双黄
酮类成分 ∀因此 o该区段的色谱峰对卷柏属植物的
鉴别与质量评价有重要的意义 o故指纹特征集中以
Α∴ t这一区段进行分析 ∀
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3q2 由表 u可见 o卷柏属 ts种植物样品均有 Α分
别为 tot1sxu的 u个共有峰 o且均为 {强峰 o它们与
出现频率较高的 Α为 t1ty|ot1uwyot1vy{的 v个峰
一起可构成卷柏属这 ts种植物的 x个主要的指纹
特征峰 o这些主要指纹特征峰的存在与否及其相互
之间的比例 o对该植物的品质评价和鉴定分析有重
要的参考意义 }
采自不同产地的 u个薄叶卷柏样品 o以及采自同
一产地 o不同采收期和不同环境的 v个翠云草样品 o虽
然其指纹特征显示了明显的差异 o但它们的 x个主要
特征峰及其比例 o显示了极大的相似性 ~而且它们的第
touov强峰是完全重合的 ∀这些数据可以作为它们鉴
别为同一个种的参考依据 k图 vo图 wl∀
由表 u的数据可以发现 o在卷柏和垫状卷柏的
x个主要特征峰中 o它们的第 tou强峰完全重合 o比
例近似 ~两者都缺少 Α为 t1ty|的主要指纹特征峰 o
这些说明两者在化学成分上有很大的相似性 o再结
合两者在植物形态和组织结构上的相似性 o说明药
典把垫状卷柏和卷柏均作为中药卷柏的来源是十分
合理的 ∀二者的明显区别是二者的第 v强峰处于主
要特征峰的不同位置 o这是它们区分为不同种的重
要化学依据 k图 ul∀
虽然建立某一个特定种某一产地和其他特定条
件下的指纹图谱需要收集大量该种的样品进行深入
研究 o但该属植物的指纹特征分析能为各个种指纹
图谱的建立提供有价值的参考数据 o因为该项同属
植物的指纹分析是从全局的角度分析其共性和主要
个性特征 o某些重要的共性特征是在局部研究中难
以发现的 ∀例如 o卷柏和垫状卷柏有 z个共有的八
强峰 o这是二者的重要数据 o但它们的之间第 v强峰
在不同位置这一重要区别 o只有在比较中才能发现 ~
同时它们都缺失 Α为 t1ty|的主要指纹特征峰也是
一个重要特征 o这一特征如果单纯研究一个种的样
品也是难以发现的 ∀同样 Α为 t1vy{的指纹峰是翠
云草的重要特征之一 o样品 x该峰的缺失可能提示
了向阳环境与阴湿环境质的差异 o促使在指纹图谱
建立中深入研究 ∀
在卷柏属中发现的 u个共有峰均是重要的活性
成分 ∀ Α为 t的峰为穗花杉双黄酮 k¤° ±¨·²©¯¤2
√²± l¨o它是一种磷酸酯酶抑制剂 oŒ≤xs是 u| Λ°²¯ #
pt≈y  o它对呼吸道合胞体病毒 k• ≥∂ l的半数抑制
量 Œ≤xs是 x1x Λª# °pt ≈z  ~Α为 t1sxu的峰根据笔
#xstu#
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者依据该色谱条件指导分离所得的成分鉴定为罗波
斯塔双黄酮 kµ²¥∏¶·¤©¯¤√²± l¨o它对乙肝病毒等多种
病毒有效 ≈{  o同时这两者都有较强的抗氧化作用 ∀
因此 o对这 u个指纹峰的分析对指导进行质量评价
有重要参考价值 ∀
同属植物进行指纹特征分析 o对于从化学成分
的角度了解各品种之间的亲缘关系有参考意义 ∀例
如样品 | ∗ tv的主要指纹特征有较大的相似性 o其
第 touov强峰是完全重合的 ~尤其是样品 ts和 tt
各峰之间的比例也是十分接近的 o这至少说明这些
不同种的样品之间 o从主要化学成分的角度是十分
接近的 o如果要建立一个种的指纹图谱或者要用色
谱法对其进行鉴定 o需要考虑与其邻近的种进行比
较 ∀该指纹特征还提供了重叠率和共有峰占全部峰
的比例等信息 o这些是较相似度更稳定的信息 ∀例
如 o产于鄂西的薄叶卷柏 o依其性状上的差异可分为
u类 ∀尽管两者谱图有较大的相似性 o但两者指纹
峰的重叠率仅为 zt1wvh o其共有峰的峰面积之和
仅分别占到总峰面积的 zv1wvh和 {u1uh ∀其中宜
昌产薄叶卷柏在 Α值 t1vy{为强峰 o而鹤峰产薄叶
卷柏在 Α值 t1wxt为强峰 o说明它们所含的化学成
分存在一定差异 o支持二者宜作为不同的变种处理
的结论 ≈|  ∀
综上所述 o上述同属植物之间的指纹特征分析 o
发现了卷柏属 u个共有峰 o同时提出了 x个主要的
鉴别特征峰 o这些峰的数据对各个种的品种和质量
鉴别具有重要参考价值 ∀
≈参考文献  
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≈|  万定荣 o陈科力 q薄叶卷柏及其变异类型的鉴定研究 ≈ q中国
药学杂志 oussyowtkxl}vv{q
Στυδψ ον ΗΠΛΧ φινγερπριντ χηαραχτεριστιχσ οφ Σελαγινελλα πλαντσ
ƒ„‘÷¬¤²2¯ ¬¨t o • „‘⁄¬±ª2µ²±ªuov o ≠ ∞ ≤²±ª2­¬±u o ≤‹∞‘Ž¨ 2¯¬u
(t. Ωυηαν Ινστιτυτε φορ∆ρυγ Χοντρολ, Ωυηαν wvsstu, Χηινα;
u. Ηυβει Χολλεγε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Ωυηαν wvssyt, Χηινα;
v. Χολλεγε οφ Λιφε2Σχιενχε, Σουτη2ΧεντραλΥνιϖερσιτψ φορΝατιοναλιτιεσ, Ωυηαν wvsszw, Χηινα)
[ Αβστραχτ ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶« ¤ ° ·¨«²§ ·² ¤±¤¯¼½¨ ‹ °≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±· ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶ ²© ts ³¯¤±·¶ ©µ²°
Σελαγινελλα1Μετηοδ : ‹ °≤ º¤¶¤³³¯¬¨§ ©²µ ¶¨·¤¥¯¬¶«° ±¨·²©©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶o º«¬¦« º µ¨¨ ∏¶¨§·² √¨¤¯∏¤·¨ ¤±§ §¬¶·¬±ª∏¬¶« ·«¨ §¬©©¨µ¨±·
¶³¨ ¦¬¨¶²©Σελαγινελλαq Ρ εσυλτ: ׫¨ §¬©©¨µ¨±·¶³¨ ¦¬¨¶©µ²° Σελαγινελλα ¶«²º §¨§¬©©¨µ¨±·‹°≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦q ׫¨ ¶¤°³¯ ¶¨²©
·«¨ ¶¤°¨¶³¨ ¦¬¨¶¥∏·¦²¯¯¨ ¦·¨§¬± §¬©©¨µ¨±·³¨ µ¬²§o§¬©©¨µ¨±·¨ ±√¬µ²±° ±¨·²µ§¬©©¨µ¨±·¯²¦¤·¬²±¶¶«²º §¨ ¦¨µ·¤¬± §¬©©¨µ¨¦¨ ¬± ©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶q
Χονχλυσιον: u ¬°³²µ·¤±·°∏·∏¤¯ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·³¨ ¤®¶º µ¨¨ ©²∏±§¬± ·«¨ ts ³¯¤±·¶²©Σελαγινελλα ¶³¨ ¦¬¨¶¤±§x ³¨ ¤®¶¦¤± ¥¨ ∏¶¨§¤¶/ °¤¬±
©¬±ª¨ µ³µ¬±·³¨ ¤®¶0 q ׫¨ §¤·¨¶²©·«¨ ¶¨ ³¨ ¤®¶¦¤± ∏¶¨§©²µ¤¶¶¨¶¶° ±¨·²©³«¼¯ ²ª¨ ± ·¨¬¦µ¨ ¤¯·¬²± ¤°²±ª¶³¨ ¦¬¨¶¤±§ √¨¤¯∏¤·¬²± ²© ∏´¤¯¬·¼q
[ Κεψ ωορδσ] Σελαγινελλα~ ‹ °≤~ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶
≈责任编辑 张宁宁  
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