全 文 ：比色法测定通光藤的 ≤ut甾体糖苷成分含量
沈 帆 o陈道峰 3
k复旦大学 药学院 o上海 usssvul
≈摘要  目的 }建立通光藤中 ≤ut甾体糖苷成分的含量测定方法 o为通光藤药材的质量控制提供依据 ∀方法 }
样品用甲醇提取 o经 „⁄≥2z大孔吸附树脂纯化 o以通光藤苷2‹ 为对照品 o浓硫酸2甲醇kwΒtl显色 o在 vux ±°处测定
通光藤中 ≤ut甾体糖苷含量 ∀结果 }在 ts1y ∗ tw{1w Λª吸光度与含量成良好线性关系 oρ€ s1||| |k ν € yl ov个含量
的加样回收率分别为 |x1w h o|z1z h o|y1| h o• ≥⁄ u1w h k ν € xl ∀结论 }本法操作简便 !快速 !灵敏 !重复性好 o可以
作为通光藤药材质量评价的定量分析方法 ∀
≈关键词  通光藤 ~≤ut甾体糖苷 ~通光藤苷2‹ ~比色法
≈中图分类号  • u{v ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluu2tzwx2sw
≈收稿日期  ussx2st2tx
≈通讯作者  3 陈道峰 oר¯ }ksutlxwuvzwxv o∞2°¤¬¯}§©¦«¨ ± ƒ
¶«°∏1 §¨∏1¦±
通光藤系萝 科 „¶¦¯ ³¨¬¤§¤¦¨¤¨ 牛奶菜属植物
通光藤 Μαρσδενια τεναχισσιµα k•²¬¥1l •¬ª«· ·¨„µ±1
的干燥茎 ∀主要分布于云南 !贵州 !广西等地 o在民
间被用于治疗多种癌症 o具有平喘 !降压及抑制肺炎
球菌和流感杆菌等药理作用≈t ou  ∀通光藤富含 ≤ut
甾体衍生物k主要是 ≤ut甾体的糖苷l和多糖 o还含有
少量生物碱及树脂等 o其中 ≤ut甾体糖苷是通光藤抗
炎 !抗肿瘤及抗生育活性的物质基础≈v ow  ∀
文献曾报道有关通光藤苷2的高效毛细管电泳
分析和通关藤注射液酚酸类成分指纹图谱的 ‹°≤
测定≈x oy  o但关于通光藤中 ≤ut甾体糖苷成分的含量
测定方法文献尚未见报道 o作者通过对样品提取分
离及纯化条件的考察 o采用比色法 o建立了通光藤中
≤ut甾体糖苷成分的含量测定方法 o并测定了不同产
地通光藤药材中 ≤ut甾体糖苷成分的含量 o为通光藤
的质量控制提供了可靠的分析方法和依据 ∀
1 仪器与试药
zxy≤紫外可见分光光度计k上海第三分析仪
器厂l o≠≤± p vss超声波器k上海凯波超声设备有限
公司l o÷ p |t旋转蒸发仪k中国科学院上海有机化
学研究所l o电热恒温水浴锅k上海医疗器械五厂l ∀
对照品通光藤苷2‹k本课题组自制 o经 Œ• o≥ o
t‹‘ • otv≤ ‘• 确定其化学结构 o纯度经 ‹°≤2
∞≥⁄法测定 o归一化法计算纯度大于 |{ h l ∀大孔
吸附树脂 „⁄≥2zk天津南开和成科技有限公司l o浓
硫酸 !甲醇均为分析纯 ∀
通光藤药材购于云南等地 o经陈道峰教授鉴定 ∀
2 方法与结果
211 溶液制备
21111 对照品溶液
精密称定通光藤苷2‹ 对照品适量 o用甲醇溶
解 o制成 t1sy °ª#°pt的溶液 ∀
21112 供试品溶液
精密称定通光藤药粉末k过 ws目筛ls1x ª左
右 o准确加入甲醇 us °o称重 o超声提取 us °¬± o
用甲醇补足减失重量 o摇匀 o过滤 ∀精密吸取续滤
液 t °o蒸去溶剂 o精密加入 ts °水溶解 o过滤 o
精密吸取续滤液 t °o加于已处理好的大孔树脂
柱 k玻璃柱 o内径 | °° o大孔树脂 t1x ªo湿法装
柱 o用水 ts °预洗 l o先用 ts °水洗至还原糖
反应呈阴性 o弃去水洗液 o甲醇溶液 tx °洗脱至
苷类的浓硫酸显色反应呈阴性 o收集甲醇洗脱液 o
浓缩至干 o加甲醇溶解 o定容至 x °o摇匀 o作为供
试样品溶液 ∀
212 方法学考察
21211 测定波长的选择
取对照品溶液 s1x °o挥干溶剂 o加新配制的
浓硫酸2甲醇kwΒtlx °后于 ys ε 水浴中加热 ys
°¬±后取出 o立即以冰水冷却 x °¬±o摇匀 o在冰水中
静置 ts °¬±o以浓硫酸2甲醇kwΒtl为空白对照 o在
uss ∗ wss ±°扫描 o测定结果显示最大吸收波长为
#xwzt#
第 vs卷第 uu期
ussx年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uu
‘²√¨ °¥¨µoussx
vux ±°∀取样品溶液 o同法操作 o显示最大吸收波长
为 vux ±°∀
结果表明对照品和待测样品最大吸收波长一
致 o选定 vux ±°作为测定波长 ∀
21212 显色条件的考察
2121211 显色温度的考察 精密吸取对照品溶液
ws ˏo挥干溶剂 o加入新配制的浓硫酸2甲醇kwΒtlx
°o置于不同温度kus ows oxs oys ozs o{s ε l的水浴
中加热 ys °¬±后取出 o立即用冰水冷却 x °¬±o摇匀 o
在冰水中静置 ts °¬±o在 vux ±°处测定吸光度值
k同时设各温度下的空白对照 o平行 v份l o结果表
明 o温度 ys ε 时吸光度值最大kys ozs o{s ε 的吸光
度平均值为 s1vsy o• ≥⁄s1vv h l ∀确定 ys ε 为显色
温度 ∀
2121212 显色时间的考察 精密吸取对照品溶液
ws ˏo挥干溶剂 o加入新配制的浓硫酸2甲醇kw }tlx
°o置于 ys ε 水浴中加热不同时间kts ous ovs ows o
ys ozs o{s o|s °¬±l后 o同上操作 o在 vux±°处测定吸
光度值k同时设各时间下的空白对照 o平行 v份l o结
果反应时间 ys °¬±时吸光度值最大kys ozs o{s o|s
°¬±的吸光度平均值为 s1vs| o• ≥⁄s1uy h l ∀确定 ys
°¬±为显色反应时间 ∀
2121213 显色剂中浓硫酸浓度的考察 精密吸取
对照品溶液 ws ˏo挥干溶剂 o加入新配制的浓硫酸2
甲醇ktΒt ouΒt ovΒt owΒt oxΒt oyΒt ozΒtlx °o置于 ys
ε 水浴中加热 ys °¬±后 o同上操作 o在 vux ±°处测
定吸光度值k同时设各含量下的空白对照 o平行 v
份l结果表明 o浓硫酸2甲醇比为 wΒt时吸光度值最
高 ∀确定显色剂为浓硫酸2甲醇kwΒtl ∀
2121214 显色稳定性的考察 取通光藤样品溶液 o
挥干溶剂 o加新配制的浓硫酸2甲醇kwΒtlx °o置于
ys ε 水溶加热 ys °¬±后取出 o同上操作 o以浓硫酸2
甲醇kwΒtl为空白溶液 o在 vux ±°处每间隔 us °¬±
测定吸光度k测定完立即放回冰水中l ∀结果表明 o
样品在冰水中放置稳定性较好k至少在 u «内稳定 o
吸光度平均值为 s1wvw o• ≥⁄ t1x h l o但在常温下操
作吸光度值变化较大k• ≥⁄z1w h l ∀
21213 标准曲线绘制
精密吸取对照品溶液 ts ous ows oys o{s otss otus
ˏo挥干溶剂 o按 2121214 项下操作 o在 vux ±°处测
定吸光度 ∀以对照品质量kΛªl为横坐标 o以吸光度
为纵坐标 o绘制标准曲线 ∀求得回归方程 Ψ €
x1uvu ≅ tsp v Ξ n s1tx{ v oρ € s1||| | o线性范围
ts1y ∗ tw{1w Λª∀
21214 样品溶液制备方法考察
2121411 提取方法 提取溶剂 }用不同的提取溶
剂≈甲醇 !甲醇2氯仿ktΒtl !氯仿  o同 21112 项下操
作 o制备 | 份供试品溶液 o挥干溶剂后按 2121214
项下操作 o在 vux ±°处测定吸光度值 o计算含量 o
结果以甲醇为提取溶剂时总皂苷溶出量最多 o且
含量相对稳定k• ≥⁄ u1v h l o所以选择甲醇作为提
取溶剂 ∀
提取方式和时间 }用不同提取方式k超声 o加热
回流 o索氏提取l处理不同时间 o同 21112 项下操作 o
制备 ut份供试品溶液 o挥干溶剂后按 2121214 项下
操作 o测定吸光度值 o计算含量 ∀结果见表 t ∀
表 t 不同提取方式和时间处理通光藤药材
所得 ≤ut甾类成分含量k ν € v , cξ ? σl
提取方式 提取时间r°¬± 含量r°ª#ªpt
超声 us vt1ts ? u1wu
ws vt1uv ? t1u{
ys vs1yz ? t1xs
回流 vs uy1{y ? v1vw
ys uz1z{ ? u1uy
|s u{1y| ? u1wv
索氏提取 u|1sx ? w1wt
结果表明 o采用超声提取所测得的含量较回流
和索氏提取量高 o且超声提取时间对提取量影响不
显著 o所以决定采用超声提取 us °¬±制备样品溶
液 ∀
提取溶剂用量 }加入不同量甲醇kts ous ovs ows
°l o同 21112项下操作 o制备 tu份供试品溶液 o挥
干溶剂后按 2121214项下操作 o测定吸光度值 o计算
含量 ∀不同甲醇用量对 ≤ut甾体糖苷成分含量进行
单因素方差分析 o发现用 ts °甲醇提取与用 us o
vs ows °提取有显著差异k Π s1stl ous °与 vs o
ws °提取无显著性差异k平均含量为 vt1yt o• ≥⁄
u1t h l o所以确定提取溶剂用量为 us °o即提取溶
剂用量为样品量的 ws倍 ∀
2121412 纯化方法的考察 精密称定同一通光藤
药材粉末k过 ws目筛ls1x ª左右共 |份 o分为 v组 o
每组 v份 o按 2121411项下处理后 o其中一组用水饱
和的正丁醇 x °萃取 w次 o提取液用正丁醇饱和过
的水 ts °洗涤后 o合并正丁醇溶液 o减压回收正丁
醇至干 ~一组同 21112 项下操作 o挥干溶剂 ~一组经
#ywzt#
第 vs卷第 uu期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨ °¥¨µoussx
甲醇超声后 o精密吸取续滤液 tss ˏo蒸干溶剂 ∀|
份样品按 2121214项下操作 o测定吸光度值 o计算含
量 o结果正丁醇萃取kuy1us ? t1zyl °ª#ªpt !大孔树
脂纯化为 kvt1ut ? s1z{l °ª#ªpt !甲醇超声为
kvy1zz ? tw1txl °ª#ªpt ∀采用甲醇超声提取所测得
的含量虽较高 o但极不稳定k• ≥⁄v{ h l o说明其他杂
质较多 o而经正丁醇萃取和大孔树脂纯化后所测得
的含量相对稳定 o大孔树脂所得的含量较高 ∀所以
确定样品的纯化方法为大孔树脂洗脱 ∀洗脱时 o流
速控制在 ts ∗ tx滴r°¬±o避免造成 ≤ut甾体糖苷成
分损失使测定结果偏低 ∀大孔树吸附树脂用量经反
复试验得出 o其净化回收率达 || h以上 o• ≥⁄小于
u h k ν € xl ∀
21215 精密度试验
精密吸取对照品溶液 ws ˏo按 2121214 项下操
作 o分别测定样品吸光度值 o求得 • ≥⁄ u1x h k ν €
yl ∀
21216 重复性试验
按 21112项下平行制备 y份样品溶液 o挥干溶
剂后按 2121214项下操作 o分别测定样品吸光度值 o
求得 • ≥⁄u1v h k ν € yl ∀
21217 加样回收率试验
精密称定通光藤药材粉末k过 ws目筛ls1ux ª
左右 o分别加入对照品溶液kt1sy °ª# °ptltss o
uss ovss ˏo按 21112 项下操作 o挥干溶剂后按
2121214项下操作 o测定其吸光度值 o计算含量 o求得
加样回收率 o见表 u ∀
213 含量测定
取供试品溶液 x °o按 2121214 项下操作 o在
vux ±°测定其吸光度值 o根据标准曲线 Α€ x1uvu ≅
tsp v Ω n s1tx{ v计算得到 ≤ut甾体糖苷的进样量
Ω oΩ ≅ ussrk Ω ≅ t sssl得到生药中 ≤ut甾体糖苷的
含量k°ª#ªptlk Ω为通光藤药材粉末的质量 o精密
称定 x ª左右l ∀结果见表 v ∀
3 讨论
311 含量测定方法
比色法≈z 测定植物中甾体化合物具有显色灵敏
度高 !重复性好 o且操作简便 !快速等优点 o因此在甾
类成分测定中仍占有较为重要的地位 ∀本实验选择
近年来文献常用的浓硫酸2甲醇法≈z  o与香兰素2高
氯酸2冰醋酸法≈{ 相比有显色稳定 !空白吸收小 !重
复性好的优点 ∀
表 u 通光藤药材中通光藤苷2‹的加样回收率
称样量
rª
样品含量
r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
• ≥⁄
r h
s1uxt u uv1{ ts1y vv1s |y1s |x1{ u1u
s1uxt s uw1s ts1y vu1{ |z1{
s1uxv y uw1u ts1y vv1u |y1x
s1uxu x uw1w ts1y vv1u |w1|
s1uxy t uw1y ts1y vv1{ |y1s
s1uxs z uv1y ut1u ww1s |{1s |z1t u1w
s1uxt | uv1{ ut1u ww1t |w1t
s1uxt w uw1s ut1u ww1s |z1u
s1uxv y uw1{ ut1u ww1u |{1v
s1uxt y uv1y ut1u ww1x ||1v
s1uxu t uv1{ vt1{ xv1{ |y1| |z1s u1w
s1uxu y uw1s vt1{ xw1s |{1y
s1uxw t uw1u vt1{ xw1u |y1|
s1uxu y uw1s vt1{ xw1u |z1u
s1uxu w uw1u vt1{ xw1w |w1u
表 v 不同产地通光藤药材中的 ≤ut甾体糖苷成分含量k ν € vl
收集地点 收集日期 含量r°ª#ªpt • ≥⁄r h
云南丽江 ussw2su ws1t t1x
云南保山 ussw2su vz1y t1w
云南罗平 t ussw2su wu1s u1u
云南罗平 u ussu2su uy1w t1s
云南寻甸 ussw2su uz1z t1|
云南澜沧 ussw2su ux1{ t1z
云南富源 ussw2su vx1| u1w
云南会泽 ussw2su ws1v t1u
云南崇明 ussw2su vv1z u1v
云南宜良 ussw2su vy1x t1w
云南宣威 ussw2su uz1u t1t
云南马龙 ussw2su u|1w u1x
云南师宗 ussw2su vx1y x1y
云南陆良 ussw2su vy1w t1s
云南临沧 ussw2su vu1s t1z
贵州盘县 t ussu2su vs1| u1|
贵州盘县 u ussu2su vw1x t1t
广西百色 ussu2su uz1w u1u
在比较不同加热时间和不同加热温度时发现 o
当温度低于 ys ε !时间小于 ys °¬±时 o加热温度越
高 !时间越长其吸光度值越高 o但加热温度超过 |s
ε o尤其是在沸水浴中加热 t «以上 o溶液出现部分
炭化而引起吸收峰形变差 ∀
对通光藤同属多种植物的研究结果显示 o它的
次生代谢产物 ≤ut甾体的糖苷是其抗肿瘤或抗生育
活性的物质基础≈w ox  o且分布具有特异性 o所以以通
光藤中的 ≤ut甾体苷作为其指征性成分 o选择其中含
量较高的通光藤苷2‹作为对照品进行含量测定 ∀
312 供试品中 ≤ut甾体糖苷成分纯化方法学考察
#zwzt#
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通光藤中除了 ≤ut甾体糖苷外 o还含有少量多
糖 !生物碱及树脂 o其中多糖为含量测定的主要干扰
成分≈w ox  ∀ ≤ut甾体糖苷具有甾体皂苷的性质 o经浓
硫酸加热处理后 o其可见光吸收一部分来源于糖基
的糠醛生成反应 o一部分来源于苷元 o所以样品中的
游离糖基及 ≤ut甾体糖苷以外的糖苷对测定结果有
很大影响 ∀样品经超声处理后通过大孔吸附树脂 o
用水洗脱可将游离多糖除去 o用甲醇洗脱可保留通
光藤中 ≤ut甾体糖苷成分而除去少量在可见光区有
吸收的其他杂质 o避免对测定的干扰 ∀
313 通光藤药材的品质
含量测定结果发现 o不同产地的通光藤药材中
≤ut甾体糖苷成分的含量差别较大 o其中云南丽江 !
会泽和罗平的含量最高kws1s| ∗ wt1|| °ª#ªptl o云
南保山 !富源 !崇明 !宜良 !师宗 !陆良和临沧的含量
较高kvz1xz ∗ vu1su °ª#ªptl o云南寻甸 !澜沧 !宣威
和马龙的含量较低kux1z| ∗ u|1vy °ª#ªptl o贵州的
kvs1{| ovw1xs °ª#ªptl较广西的kuz1vy °ª#ªptl含
量高 ~同一地区的不同批次药材中 ≤ut甾体糖苷成分
的含量差别也较大 ∀
综上所述 o从 ≤ut甾体糖苷成分的含量来看 o通
光藤商品药材的质量不稳定 o对通光藤药材建立含
量测定是很有必要的 ∀
≈致谢  本教研室邓君博士提供通光藤苷2‹ 对照品 o
云南省建坤肿瘤药物研究所李建坤副研究员提供通光藤药
材 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药科大学 1 中药辞海 1 第二卷 1 北京 }北京医药科技出版
社 ot||y1uvys1
≈u  张民庆 1 抗癌中药的临床研究 1 北京 }人民卫生出版社 o
t||{1tss1
≈v  全国中草药汇编编写组 1 全国中草药汇编 1 第二版 1 北京 }人
民卫生出版社 ot||y1
≈w  陈纪军 o张壮鑫 o张润珍 o等 1 裂冠牛奶菜的化学成分 1 云南植
物研究 ot||s otuktl }|v1
≈x  刘峰群 o曹 红 o靳守东 o等 1 通关藤注射液酚酸类成分指纹图
谱的 ‹°≤测定 1 中成药 oussv ovkuxl }tzx1
≈y  邢旺兴 o程荣珍 o林培英 o等 1 中药通光藤中通光藤苷2的高效
毛细管电泳分析 1 第二军医大学学报 1ussw ouwktul }tvv{1
≈z  王 琴 o张 虹 o王洪泉 1黄精及玉竹中甾体皂甙成分的测定 1
中华临床医药 oussv owkul }zx1
≈{  张 新 o王志伟 1 娑罗子中总皂甙的比色测定 1 天然产物研究
与开发 ousss otktul }u{1
∆ετερ µινατιον οφ Χut στεροιδαλ γλψχοσιδεσιν Μαρσδενια
τεναχισσιµα βψ χολοριµετριχ µετηοδ
≥‹∞‘ƒ¤±o≤‹∞‘⁄¤²2©¨ ±ª
( Σχηοολ οφ Πηαρµαχψ, Φυδαν Υνιϖερσιτψ, Σηανγηαι usssvu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨ ° ·¨«²§·² §¨·¨µ°¬±¨ ≤ut ¶·¨µ²¬§¤¯ ª¯¼¦²¶¬§¨¶¬± Μαρσδενια τεναχισσιµα1 Μετηοδ :
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º¬·«¬±·«¨ µ¤±ª¨ ²©ts1y2tw{1w Λª1 ׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²©·¨±¤¦¬¶¶²¶¬§¨2‹ ¤·§¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶º µ¨¨ |x1{ h ·²|z1t h º¬·« • ≥⁄¯¨ ¶¶
·«¤± u1w h k ν € xl1 Χονχλυσιον : ׫¬¶° ·¨«²§¬¶µ¨ ¬¯¤¥¯¨¤¶¤ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼·¬¦¤¯ ° ·¨«²§©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¤¶¶¨¶¶° ±¨·²© Μ1τεναχισσιµα1
[ Κεψ ωορδσ] Μαρσδενια τεναχισσιµα~≤ut ¶·¨µ²¬§¤¯ ª¯¼¦²¶¬§¨¶~·¨±¤¦¬¶¶²¶¬§¨2‹ ~¦²¯²µ¬° ·¨µ¬¦° ·¨«²§
≈责任编辑 刘  
5中国中药杂志6荣获中华人民共和国新闻出版署
组织的第三届国家期刊奖百种重点期刊
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