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新疆紫草提取物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用



全 文 :于 u个芳氢之间取代基甲基的影响 o表现为宽峰 o为
丙烯型耦合 ow个芳氢中 ou对芳氢都表现为间位耦
合 o因此 u个 Α2羟基的取代位置只能为 tox位 ∀结
合 tv ≤ 2‘ • k≤⁄v ’⁄l和 ⁄∞°×分析 o∆ uu1u和 xy1x
应为 2≤‹v和 2’≤‹v的信号 o∆ t{y1y和 t{z1v为醌
结构中 u个羰基的信号 o由于 ∆值基本接近 o因此 u
个 Α2羟基的取代位置不可能为 to{位置 o而是 tow
或 tox位置 o再结合 t ‹ 2‘ • 则进一步证实 u个 Α2
羟基的取代位置为 tox位置 ∀见表 t∀
表 t 化合物 1的 ‘ • 数据 k≤⁄v ’⁄l
碳位 ∆≤ ∆‹ k‹ ½l
t tyy1| p
u ts{1s y1wuk§oϑ€ u1vx ‹ ½ot‹ l
v tz|1| p
w ts|1t z1sxk§oϑ€ u1vx ‹ ½ot‹ l
x tyv1| p
y tus1w y1|{k§oϑ€ t1wy ‹ ½ot‹ l
z twz1u p
{ tux1w z1wxk§oϑ€ t1tz ‹ ½ot‹ l
| t{z1v p
ts t{y1y p
tt tv{1y p
tu ttz1u p
tv ttx1z p
tw tv{1y p
tx uu1u u1v{k¶ov‹ l
ty xy1x v1{uk¶ov‹ l
综合以上数据 o确定化合物为 tox2二羟基 2v2甲
氧基 2z2甲基蒽醌 ktox2§¬«¼§µ²¬¼2v2° ·¨«²¬¼2z2° ·¨«¼¯ 2
¤±·«µ¤¦¨± 2¨|ots2§¬²± l¨∀结构式见图 t∀该化合物
t||w年由 Ž¤½°¬≈| 等人首次从植物 Χασσια ιταλιχα中
分离得到 o本研究为首次从微生物 k药用真菌竹黄 l
中分离得到该物质 ∀
图 t 色素的结构式
≈参考文献  
≈t  刘 波 q中国药用真菌 ≈  q太原 }山西人民出版社 ot|z{}twq
≈u  赖广辉 o傅乐意 q竹黄菌主要寄主植物的研究 ≈ q中国野生植
物资源 ousssot|ktl}{q
≈v  王景祥 q竹黄的化学成分研究 ≈ q中草药 ot||soutkzl}wq
≈w  胡 晓 o沈联德 q竹黄化学成分的分离和结构鉴定 ≈ q华西药
学杂志 ot||uozktl}tq
≈x  沈云修 o荣先国 o高宗华 q竹黄的化学成分研究 ≈ q中国中药
杂志 oussuo u¯zk|l}yzwq
≈y  楼志华 q药用真菌 2竹黄发酵蒽醌类色素及其结构的研究 ≈⁄ q
≈学位论文  q无锡 }江南大学 oussyq
≈z  石贵阳 o张大兵 o楼志华等 q竹黄菌液体培养条件下生成竹红
菌素的研究 ≈ q药物生物技术 ousswottkxl}u||q
≈{  蔡宇杰 o丁彦蕊 o张大兵 o等 q竹黄菌固态发酵竹红菌素条件的
研究 ≈ q生物技术 ousswotwkwl}wyq
≈|  Ž¤½°¬ ‹ o  ¤¯¬® „o ‹¤°¨¨ §≥o ·¨¤¯q „± ¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨§¨ µ¬√¤2
·¬√¨©µ²° Χασσια ιταλιχα ≈ q °«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼o t||wovykvl}zytq
≈责任编辑 李 禾  
≈收稿日期   ussy2su2s|
≈通讯作者   3 买尔旦 # 马合木提 oר¯}ks||tlwvyxuxyo∞2
°¤¬¯}°¤¬¨µ§¤±ysƒ ¶¬±¤1¦²°
新疆紫草提取物对 ∆2氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
买尔旦 #马合木提 t3 o刘 燕 t o尼加提 #热合木 u
kt1新疆医科大学 药学院 o新疆 乌鲁木齐 {vssxw~
u1新疆医科大学 第一附属医院 o新疆 乌鲁木齐 {vssxwl
新疆紫草 Αρνεβια ευχηροµ α k• ²¼¯ l¨ ²«±¶·1又
名新疆软紫草 !新藏假紫草 o属紫草科 …²µ¤ª¬±¤¦¨¤¨
多年生草本植物 o是 5中国药典 6收录的 v种紫草科
植物之一 ∀紫草的有效成分主要为 u大类 ≈tou  }一
类是脂溶性很强的萘醌类色素 o包括紫草素 k¶«¬®²2
±¬±lo乙酰紫草素 k¤¦¨·¼¯ ¶«¬®²±¬±loΒ2羟基异戊酰紫
草素 kΒ2«¼§µ²¬¼¬¶²√¤¯ µ¨¼¯ ¶«¬®²±¬±loΒ, Βχ2二甲基丙
烯酰紫草素 kΒ, Βχ2§¬° ·¨«¼¯ ¤¦µ¼¯ ¶«¬®²±¬±lo去氧紫草
#ywyt#
第 vt卷第 t|期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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素 k§¨ ²¬¼ ¶«¬®²±¬±l等 ∀另一类是水溶性成分 o主要
为多糖和酚酸类等 ∀现代药理实验表明 o它们具有
多种生理活性 o主要是杀菌抗病毒 !抗炎 !抗肿瘤 !保
肝以及免疫调节等作用 ≈v2y  ∀为阐明新疆紫草的药
理活性 o在以往研究的基础上 o用新疆紫草的不同提
取物 k脂溶性提取物 „∞2´ !水溶性提取物 „∞2
µ l对 ∆2氨基半乳糖 (∆2Š¤¯‘l所致小鼠急性肝损
伤模型进行了研究 o以探明其保肝作用 o旨在为新疆
紫草的进一步开发研究提供实验依据 ∀
1 材料
111 药品与试剂
新疆紫草 k简称 „∞o新疆参茸药业有限责任公
司 o批号 ussws{t|l将其干燥根粉碎 o经提取分离得
到脂溶性提取物 k„∞2´ l和水溶性提取物 k„∞2
µ l~临用前用 s1xh羧甲基纤维素钠配制成所需浓
度的混悬液 ∀联苯双酯滴丸 kt1x °ªr丸 o北京协和
制药厂 o批号 swswsts|o临用前用 s1xh 羧甲基纤
维素钠配制成所需浓度的混悬液 l∀ ∆2Š¤¯‘k重庆
医科大学生物医学工程研究所 o批号 sxsvuyo临用
前配成 tsh ∆2Š¤¯‘生理盐水溶液 o用 t °²¯# pt
的氢氧化钠调 ³‹至 z1s左右 l~超氧化物歧化酶
k≥’⁄l!谷胱甘肽过氧化物酶 kŠ≥‹ 2°¬l和丙二醛
k ⁄„l试剂盒 k南京建成生物工程研究所 l∀
112 动物
昆明种小鼠 o普通级 o雌雄各半 o体重 kt{ ? ul
ªo由新疆医科大学实验动物中心提供 o动物合格证
号新医动字 ≥≠ ÷Žk新 lussv2ssst∀
113 仪器
• ‹ p{yt旋涡混合器 k上海环球物化仪器厂 lo
⁄x pu„低速离心机 k北京医用离心机厂 lo⁄≠{| pt
型电动玻璃匀浆机 k宁波新芝生物科技股份有限公
司 lo „∞• ’≥∞×型全自动生化分析仪 k美国雅培公
司 lozut型分光光度计 k上海第三分析仪器厂 l∀
2 方法
211 动物分组与处理
取 {s只昆明种小鼠 o按体重 !性别随机分成 {
组 o每组 ts只 ∀即正常对照组 o模型组 o溶剂对照组 o
阳性对照组 k即联苯双酯组 os1u ª# ®ªpt lo„∞2´低剂
量组 ks1w ª# ®ªpt lo„∞2´高剂量组 ks1{ ª# ®ªpt lo
„∞2µ低剂量组 ku ª# ®ªpt l和 „∞2µ高剂量组 kw ª#
®ªpt l∀正常组和模型组给予生理盐水 o溶剂组给予
s1xh羧甲基纤维素钠 ∀以上各组均灌胃给药 o每天 t
次 o连续 z §o灌胃容积为 us °# ®ªpt ∀
212 动物模型的建立 ≈z 
第 y天给药后 t «o除正常组外 o每鼠均 ¬³tsh
∆2Š¤¯‘生理盐水溶液 t sss °ª# ®ªpt o正常组腹腔
注射等容积的生理盐水 ∀随即禁食不禁水 ot| «后
称重 o采集血和肝脏 !脾脏标本 o作相关检测 ∀
213 检查项目及方法
21311 肝脏 !脾脏系数的检测 小鼠取血后立即断
颈椎处死 o剖腹取肝脏 !脾脏 o用 w ε 生理盐水冲洗 o
滤纸吸干 o称重 o计算肝脏 !脾脏系数 ∀
脏器系数 kh l €脏器重 kªl r体重 kªl ≅ tssh
21312 生化指标的检测 实验结束时 o每鼠摘眼球
取血 ov xss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o分离血清 o用全自
动生化分析仪检测血清 „×o„≥×的活性 ~取肝右叶
相同部位的一小块肝组织 o以 w ε 生理盐水制成
tsh 肝匀浆 ou sss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o取上清液
按试剂盒说明书测定肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬的活性及
 ⁄„的含量 ∀
21313 肝脏病理组织学检查 取每只小鼠肝左叶
相同部位的一小块肝组织 o用 tsh甲醛溶液固定 o
石蜡包埋切片 o‹∞染色 o光镜下观察肝脏病理组织
学改变 ∀
214 统计学处理
结果以 cξ ? σ表示 o各项指标组间比较采用单因
素方差分析 o检验水准 Α € s1sxo应用 ≥° v1s软
件进行分析处理 ∀
3 结果
311 对肝脏 !脾脏系数的影响
与正常组比较 o∆2Š¤¯‘肝损伤模型组小鼠肝
脏 !脾脏系数虽有增加 o但其差异无统计学意义 ∀与
模型组比较 o„∞各剂量组对肝脏 !脾脏系数均无明
显影响 k表 tl∀
表 t „∞对小鼠肝脏 !脾脏系数的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量 r ª# ®ªpt 肝脏系数 rh 脾脏系数 rh
正常 p wqwy ? squs sqyx ? sqtw
模型 p xqvw ? sq{z sqzs ? sqt|
溶剂 p xqv| ? sqxv sq{v ? squy
阳性 squ xqyy ? sqwy sqzw ? squw
„∞2´ sqw xqxy ? sq|| sqz| ? sqxv
sq{ xquy ? sqyu sqyy ? squy
„∞2µ uqs xqus ? sqw{ sqzu ? squv
wqs xqvu ? tqut sqzu ? sqvy
312 对血清 „×o„≥×活性的影响
#zwyt#
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与正常组比较 o∆2Š¤¯‘肝损伤模型组小鼠血清
„×o„≥×活性显著升高 kΠ s1stlo说明造模成功 ∀
与模型组比较 o溶剂 ks1xh 羧甲基纤维素钠 l对照
组并不能改变这种情况 ~„∞2´ 高 !低剂量组均可明
显降低小鼠血清 „×o„≥×的活性 o其差异具有统计
学意义 kΠ  s1sx或 Π s1stl~„∞2µ高 !低剂量组
均可明显降低小鼠血清 „×o„≥×的活性 o其差异具
有统计学意义 kΠ s1sxlk表 ul∀
表 u „∞对小鼠血清 „×o„≥×活性的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量 rª# ®ªpt „× r ˜# pt „≥× r ˜# pt
正常 p v{qxs ? tuqzz ts|qvs ? u{qyw
模型 p tuyqss ? w|qvttl t|uqus ? xxq|ttl
溶剂 p ttvqxs ? wxqy{ t{vqus ? xzqyx
阳性 squ wyqus ? txqzuul tvsqzs ? vuqw{vl
„∞2´ sqw zuqvs ? vwqxyul twwqxs ? uuqusvl
sq{ yuq{s ? uvqy{ul tvxqxs ? u{q{|vl
„∞2µ uqs {zq{s ? vyq|tvl txtq{s ? wuqvy
wqs zxq{s ? vzqwuvl tvwqys ? vyqs|vl
注 }与正常组比较 tl Π  sqst~与模型组比较 ul Π  sqsxovl Π 
sqstk表 v同 l
313 对肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°÷活性和  ⁄„含量的
影响
与正常组比较 o∆2Š¤¯‘肝损伤模型组小鼠肝组
织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬活性显著降低 kΠ  s1stlo ⁄„含
量显著增加 kΠ  s1stl∀与模型组比较 o„∞2´ 高 !
低剂量组均能使肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬活性显著升
高 ! ⁄„含量显著降低 kΠ  s1sx或 Π  s1stl~
„∞2µ低剂量组能使肝组织 Š≥‹ 2°¬活性显著升高
kΠ  s1sxlo而对肝组织其他指标影响均不明显 ~
„∞2µ高剂量组能使肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬活性显著
升高 ! ⁄„含量显著降低 kΠ s1sxlk表 vl∀
表 v „∞对小鼠肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬活性和  ⁄„
含量的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
≥’⁄
r˜# °ªpt
Š≥‹ p °÷
r˜# °ªpt
 ⁄„
r°²¯# °ªpt
正常 p |xqy{ ? txqwy tzwqv{ ? vtq|| tq|w ? sqxx
模型 p x|q|s ? txq|vtl |wqzt ? uzq{ztl yqs| ? tqwvtl
溶剂 p yvqwv ? ttq|s |tq|t ? uwqs{ yqvu ? tquz
阳性 squ {uqvs ? u{qz| tyzq{w ? vtqwzvl vq|| ? tqyxul
„∞2´ sqw {xq|z ? t{qxsul tvuqtw ? wuqxvul wqw{ ? tqyyul
sq{ |sqx| ? t|qxuul txtqvx ? wtqvyvl vqws ? tqtuvl
„∞2µ uqs zzqzu ? utq{t tvzqwu ? vyqtsul xqsu ? tqww
wqs {zq|| ? usqzwul twtq|{ ? vwqtvul wqws ? tqzwul
314 肝脏病理组织学检查
正常对照组小鼠肝组织结构正常 o部分肝细胞
轻度水肿及再生 o并伴有间质炎性细胞浸润 ∀模型
组肝细胞水肿明显并可见肝细胞脂肪变性 o同时伴
有肝细胞再生 o未见间质炎性细胞浸润 ∀溶剂组肝
细胞水肿 !脂肪变性及肝细胞点状坏死尤为显著 o而
肝细胞再生程度不明显 ∀阳性对照组除有肝细胞再
生和核分裂外 o也可见轻度肝细胞水肿 !点状坏死 !
脂肪变性及间质炎性细胞浸润 ∀用药组肝细胞再生
明显 o特别是 „∞2´ 和 „∞2µ大剂量组 o肝细胞依
然存在有一定程度的水肿 !脂肪变性及点状坏死 o其
程度与阳性对照组相当 ∀除 „∞2´ 小剂量组外 o其
余各组均可见间质炎性细胞浸润 ∀结果提示 o„∞2
´和 „∞2µ对肝细胞有保护作用 ∀肝脏对损伤做
出的保护反应是通过促进肝细胞再生 !修复完成的 o
肝细胞再生修复是一渐进性过程 o再生修复过程可
能与间质炎性细胞浸润有某种相关性 ∀
4 讨论
本实验结果表明 o∆2Š¤¯‘可使小鼠血清 „×o
„≥×的活性显著升高 o抗氧化酶 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬活性
降低 o脂质过氧化物  ⁄„含量增加 o表明 ∆2Š¤¯‘
引起肝损伤的机制与抗脂质过氧化有关 ∀对 ∆2
Š¤¯‘引起的肝损伤动物模型 o„∞2´ o„∞2µ均可
明显降低小鼠血清 „×o„≥×的活性 ~„∞2´ 高 !低
剂量组均能使肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬活性显著升高 !
 ⁄„含量显著降低 ~„∞2µ低剂量组能使肝组织
Š≥‹ 2°¬活性显著升高 o而对肝组织其他指标影响均
不明显 ~„∞2µ高剂量组能使肝组织 ≥’⁄oŠ≥‹ 2°¬
活性显著升高 ! ⁄„含量显著降低 ∀提示新疆紫草
可能通过清除自由基 !保护细胞膜和抗脂质过氧化
而发挥肝细胞保护作用 ∀
新疆紫草 u种提取物均可不同程度地改善 ∆2
Š¤¯‘所致小鼠肝脏病理性损伤 o提示对肝细胞有一
定保护作用 ∀
从新疆紫草中所得到的 u种不同提取物对 ∆2
Š¤¯‘所致的肝损伤具有保护作用 o能显著地抑制 ∆2
Š¤¯‘肝损伤小鼠 „×o„≥×o ⁄„的升高以及 ≥’⁄o
Š≥‹ 2°¬的降低 o减轻肝脏受损程度 o从而表明 „∞
具有保护肝脏的作用 ∀
≈参考文献  
≈t  阴 健 q中药现代研究与临床应用 ≈   q北京 }学苑出版社 o
t||v}ywvq
≈u  黄志纾 o张 敏 o马 林 o等 q紫草的化学成分及其药理活性
研究概况 ≈ q天然产物研究与开发 ousssotuktl}zvq
≈v  卢贺起 o丁家欣 o魏雅川 q紫草的实验研究进展 ≈ q中国中
医药杂志 ot||{oxktl}usq
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中 国 中 药 杂 志
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≈w  张慧桢 o廖矛川 o郭济贤 q中药紫草的化学成分和药理学研
究进展 ≈ q天然产物研究与开发 oussuotwktl}zwq
≈x  葛 锋 o王晓东 o王玉春 q药用紫草的研究进展 ≈ q中草药 o
ussvovwk|l}附 yq
≈y  张玉萌 q紫草多糖的研究概况 ≈  q中国新药杂志 ousswov
kwl}xwq
≈z  徐叔云 o卞如濂 o陈 修 q药理实验方法学 ≈   1v版 q北京 }
人民卫生出版社 oussu}tvwyq
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussx2ts2ts
≈基金项目   国家自然科学基金资助项目 kvsvztz|sl~广东省
自然科学基金资助项目 kvtuvul
≈通讯作者   3 周大桥 oר¯} kszxxl{vz|zzu|o∞2°¤¬¯} ½§´ §²¦2
·²µƒ ¶¬±¤q¦²°
复方叶下珠对人 ‹ ³¨Š u1u1tx细胞移植裸鼠
‹…¬„ª表达的影响
周大桥 t3 o童光东 t o贺劲松 t o魏春山 u o ƒ ¬¨·¨¯¶²±  ¤µ®v o吕 屏 v
kt1广州中医药大学 深圳附属医院 肝病科 o广东 深圳 xt{svv~
u1广东增城市人民医院 感染科 o广东 增城 xttvss~
v1׫²°¤¶¨©©¨µ¶²± ˜±¬√ µ¨¶¬·¼o ˜≥„l
中药复方叶下珠是深圳市中医院肝病中心结合
乙型肝炎所致肝癌和癌前病变患者临床特点 o通过
辨证论治 !精心设计并显示有较好临床疗效的经验
方 ∀本研究选择 …¤¯¥r¦2±∏小鼠人肝癌细胞 k‹ ³¨Š
u1u1txl移植瘤模型 o以复方叶下珠进行处理 o研究
造模前后裸鼠的形态学 !‹…¬„ª表达等相关指标 o
试图从在体动物角度 o为复方叶下珠的肝癌防治作
用提供试验依据 ∀
1 材料
111 接种细胞
液氮冻存人肝癌 ‹ ³¨Š u1u1tx细胞株 o购自解
放军 wx{医院全军传染病中心肝病研究所 ∀
112 器材
低速离心机 k北京医用离心机厂 l!梅特勒电子
天平 „Štvxk梅特勒 2托利多仪器上海有限公司 l!
透射电子显微镜 k日本日立 yssoײ®¼²l!± • ¬±显微
图像分析软件 k德国 ¨¬¦¤公司 l等 ∀
113 试剂
⁄ ∞ oŠwt{等 k广州英韦创津生物科技有限
公司 l∀胎牛血清 k杭州四季青生物工程材料有限
公司 l∀谷氨酰胺 kuss °°²¯ # pt l!胰蛋白酶 !⁄2
‹¤±®χ¶液 !s1t °°²¯ # pt磷酸 °…≥缓冲液 k°…≥l
k³‹ z1u ∗ z1wl等 k武汉博士德生物工程有限公
司 l∀兔抗人 ‹…¬„ª多克隆抗体血清由 ƒ ¬¨·¨¯¶²±
 ¤µ®教授赠送 ∀ „…≤ 2®¬·来自 ∂ ¦¨·²µ公司的试剂
盒 o正常山羊血清 o生物素标记的羊抗兔抗体 k¥¬²·¬2
±¼¯ ¤·¨§ª²¤·¤±·¬2µ¤¥¥¬·l!过氧化物酶标记的链霉卵
白素 k¶·µ¨³·¤√¬§¬± ³¨ µ²¬¬§¤¶¨l!多聚赖氨酸 k³²¯¼2Λ2
¼¶¬± l¨和二氨基联苯胺 k⁄„…l显色试剂盒 k黄 lo购
自北京中杉金桥生物技术有限公司 ∀
114 药物
复方叶下珠颗粒剂 k≤°l是本院肝癌防治临床
观察的基础方 o由叶下珠 !山慈菇 !莪术 !半枝莲 !黄
芪 x种单药颗粒 k广东一方制药有限公司提供 l组
成 o具有健脾护肝 !解毒消瘀 !平衡阴阳的功效 o临床
观察有较好的防治肝癌作用 ≈t  ∀用药前以双蒸水
溶解 !配制成含生药 t1s ª# °pt的复方叶下珠药
液 ∀药液当天配制 !灌胃后 o余液 w ε 冰箱保存 o约
w ∗ z §配液 t次 ∀环磷酰胺 k≤×÷ l针剂 k江苏恒瑞
医药股份有限公司提供 o批号 svtut|utlo以双蒸水
定容至 t1s °ª# °pt的稀释液 o用后置 w ε 冰箱保
存 ot周配液 t次 ∀
115 动物
裸鼠 k…¤¯¥r¦2±∏小鼠 lws只 ow周龄 o雄性 o体
重 t| ∗ uu ªo由中山大学肿瘤防治中心提供 o动物合
格证号 ussv„sv{∀单只单笼分装 !编号 o裸鼠专用
#|wyt#
第 vt卷第 t|期
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