全 文 ：正交试验法优选羊栖菜多糖酶法提取工艺
张华芳 3 o金京顺 o谈荣梅 o沈 澄
k绍兴文理学院 医学院 药理教研室 o浙江 绍兴 vtusssl
≈摘要 目的 }优选羊栖菜多糖酶法的最佳提取工艺 ∀方法 }采用正交试验法进行优选 o以褐藻胶得率和羊栖
菜粗多糖含量为考察指标 o对影响羊栖菜多糖酶法提取工艺的因素进行了研究 ∀结果 }酶量和酶处理温度对羊栖菜
粗多糖提取有较大影响 ∀结论 }羊栖菜多糖酶法最佳提取工艺为酶处理 ts °¬±o酶量 tqu万 # tss ªpt o³ wqxowx
ε ∀
≈关键词 正交试验 ~羊栖菜 ~多糖 ~纤维素酶
≈中图分类号 u{w1u ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussyluu2t{ys2sv
≈收稿日期 ussx2su2us
≈基金项目 浙江省教育厅项目 kussvttvsl
≈通讯作者 3 张华芳 oר¯}ksxzxl{vwx{wvo∞2°¤¬¯}«∏¤©¤±ª¢
½«¤±ª «²·°¤¬¯1¦²°
羊栖菜 Σαργασσυµ φυσιφορµ ε k¤µ√1l ≥ ·¨¦«¨ ¯¯系
马尾藻科植物 o其干燥藻体全体入药 o称为海藻 o具
有消痰软坚 !利水消肿 !泄热化湿功效 ~作用为增强
免疫 !降血脂 !抗肿瘤等 ≈t ~主要有效成分是羊栖菜
多糖 kΣ1 φυσιφορµ ε ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¶o≥ƒ°≥l∀
传统的 ≥ƒ°≥提取方法包括水提醇沉 !碱 k或
酸 l提醇沉法等 ≈uov o但上述工艺温度高 !提取率低 !
成本高 ~酶工程技术是近几年来用于天然植物有效
成分提取的一项生物工程技术 o而国内外将酶用于
≥ƒ°≥的提取迄今未见报道 ∀本研究将纤维素酶用
于 ≥ƒ°≥的提取 o以褐藻胶得率和羊栖菜粗多糖含
量为定量指标 o先将酶法与传统方法进行比较 o并进
一步采用正交试验法对酶法提取工艺进行优选 o为
制定科学 !经济的生产工艺提供参考 ∀
1 仪器与试药
pusss分光光度计 k×≤公司 lo离心沉
淀机 k上海医用分析仪器厂 l∀
羊栖菜购自浙江省温州洞头县汇源海生物开发
有限公司 o由浙江大学药学院生药教研室郭汉身教
授鉴定为马尾藻科植物羊栖菜 Σ1φυσιφορµ ε的干燥藻
体 o于 xs ε 强风烘干 o粉碎后保存 ∀纤维素酶 k浙
江省微生物研究所 lo岩藻糖 k≥¬ª°¤公司 lo其他试
剂均为国产分析纯试剂 ∀
2 方法与结果
211 提取工艺
羊栖菜粉 ψ热水搅拌提取 k水与原料比为 txΒ
tlψ离心 ψ减压浓缩 ψ乙醇沉淀 ψ乙醇分级洗涤 ~
丙酮洗涤 ψ减压真空干燥 ψ粗多糖干品 ∀
212 测定指标的选择
褐藻胶和羊栖菜多糖为羊栖菜的主要化学成
分 o以褐藻胶得率和羊栖菜粗多糖含量作为衡量提
取效率的双重客观指标 o优选最佳工艺 o为了提高统
计分析的可靠性 o每一条件下都作了重复试验 kν
vlo测定结果取其平均值供统计分析用 ∀
213 分析方法
21311 褐藻胶的测定方法 |2氮杂芴比色法 ≈w ∀
21312 多糖的测定方法 k苯酚 2硫酸法 l 标准曲线
制备 }精密称取干燥至恒重的岩藻糖 ty1y °ª于 xs
°量瓶中 o加适量水稀释至刻度 o摇匀 ∀分别精密
吸取上述溶液 s1uos1wos1{ot1uot1wot1y °于 ts
°具塞试管中 o加入 xh 苯酚 t1s °o混匀 o迅速
加入 x1s °浓硫酸 o摇匀 ∀置 zs ε 水浴中加热 tx
°¬±o然后置冰水浴中 tx °¬±o加入蒸馏水使总体积
为 {1s °k在冰浴中进行 lo混匀后 o室温放置 wx
°¬±∀同时 u1s °蒸馏水平行操作做空白 ∀于 wzz
±°测定吸收度 ∀以吸收度 kΑ)对质量浓度 (Χ)进
行回归 , 得回归方程 Α s1suyΧ p s1swx (ρ
t1sssl∀
对照品贮备液制备 }精密称取干燥至恒重的岩
藻糖约 xs °ª于 tss °量瓶中 o加适量水使溶解 o
再加水稀释至刻度 o摇匀 ∀
样品溶液的制备 }精密称取干燥至恒重的样品
#sy{t#
第 vt卷第 uu期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ uu
²√ °¨¥¨ µoussy
约 xs °ª于 tss °量瓶中 o加适量水使溶解 o再加
水稀释至刻度 o摇匀 ∀
样品含量测定 }精密吸取 s1{ °样品溶液于 ts
°具塞试管中 o加入 xh苯酚 t1s °o混匀 o迅速加入
x1s °浓硫酸 o摇匀 ∀其余操作按 21312项 ∀
214 提取方法的比较及结果
分别选用酸水提法 k³ w1sl!中性水提法和酶
法 k搅拌提取前加催化剂 o在酸性条件下用纤维素
酶处理 l提取 ≥ƒ°≥o根据实验结果对上述 v法所提
取得到的 ≥ƒ°≥进行研究 o以褐藻胶得率和粗多糖
含量为指标 o比较方法的优劣 ∀结果见表 t∀
表 t 不同提取方法的比较
提取方法 褐藻胶得率 rh 粗多糖质量分数 rh
酸水提法 v1zt u1wv
中性水提法 w1w| u1vx
酶提法 z1vx w1xu
由表 t可知 o上述 v种提取方法中以酶法提取
的褐藻胶得率和粗多糖含量明显高于其他 u种方
法 o因此确定酶法为最佳的提取工艺 ∀
215 正交试验及结果
21511 试验设计 根据文献报道 ≈xoy 并结合实际 o
纤维素酶法提取的影响因素有酶处理时间 !酶量 !
³值和温度 o故选择 w因素作为考察因素 o并结合
生产实际 o每因素又选取 v个水平 o按 | kvw l正交
表安排试验 o因素水平见表 u∀
表 u 因素水平
水平
Α
处理时间
r°¬±
Β
酶量 r
万 # ktss ªl pt
Χ
³
⁄
温度
rε
t ts s1{ w1s wu
u us t1s w1x wx
v vs t1u x1s w{
21512 正交试验结果和分析 以褐藻胶得率 !羊栖
菜粗多糖含量为指标 o进行正交试验 o结果见表 v∀
正交试验极差分析发现 o由极差 Ρ得出影响因素
大小顺序为 ∆ Β Χ Α∀由此得出最佳提取工艺
为 Αt ΒvΧu ∆u ,即在酶法提取羊栖菜粗多糖时选择最
佳条件为 ts °¬±ot1u万 # tss ªpt o³ w1xowx ε ∀
216 验证实验
按照正交试验选择的最佳工艺条件进行 v次重
复试验 o操作方法同前 o褐藻胶平均得率和羊栖菜粗
表 v | kvw l正交试验结果
实验号 褐藻胶得率 rh 粗多糖含量 rh
t x1ws s1v{
u w1t| t1zv
v v1|s t1|z
w w1tx t1zv
x u1uv v1vs
y x1{y t1sw
z s1xv w1uy
{ w1{z s1us
| s1{| w1w|
多糖平均含量分别为 z1xvh和 w1{|h o与试验结果
吻合 ∀
3 讨论
细胞壁的主要成分是纤维素 o恰当地利用纤维
素酶处理 o可使细胞壁软化 !膨胀和崩溃 o从而可改
变细胞壁的通透性 o提高细胞内含物 k蛋白质 !淀
粉 !糖等 l的提取率 ∀于常规水提之前在催化剂 k如
±≤ u¯ o ª≤ u¯ o ±≤ u¯ l的作用下对原料进行酶预处
理 o可大大提高多糖得率 o简单易行 ≈z ∀文献 ≈v 报
道 o用水提醇沉法 !碱提醇沉法等得到的羊栖菜多糖
含量为 u1vsh左右 o而本研究用酶法提取所得的多
糖含量为 w1{|h o和一般方法相比有了很大的提
高 o提示羊栖菜多糖以酶法提取为佳 ∀
本研究表明 o用纤维素酶法提取羊栖菜多糖得
到的羊栖菜粗多糖色泽为灰白色 o质量佳 ∀由于滤
渣中还有残余的多糖 o通过增加提取次数 o尚可提高
得率 ∀
≈参考文献
≈t 国家中医药管理局中华本草编委会 1中华本草精选本 ≈ 1
上册 1上海 }上海科学技术出版社 ot||{}tx{1
≈u 过 菲 o许时婴 1羊栖菜粗多糖的提取研究 ≈ 1食品工业 o
ussuokvl}tt1
≈v 卞 俊 o吴越芳 o张吉德 o羊栖菜多糖不同提取工艺的初步比
较 ≈ 1中华航海医学与高气压医学杂志 oussuo|kvl}t{z1
≈w 纪明侯 o张燕霞 1褐藻胶 |2氮杂芴比色定量方法的研究 ≈ 1
海洋科学集刊 ot|yuot}t|y1
≈x 白海波 o王剑飞 o龙 娟 1何首乌提取工艺设计 ≈ 1中国中药
杂志 ousswou|kvl}ut|1
≈y 王 晖 o刘佳佳 1银杏黄酮的酶法提取工艺研究 ≈ 1中药材 o
ussvouyktul}{{z1
≈z 杨 莉 1酶法在中药提取制备中的应用 ≈ 1中药材 ousstow
ktl}zu1
#ty{t#
第 vt卷第 uu期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ uu
²√ °¨¥¨ µoussy
Στυδψ ον εξτραχτιον προχεσσοφ πολψσαχχηαριδε φροµ
Σαργασσυµ φυσιφορµ ε βψ ενζψµ ατιχ τρεατµ εντ
∏¤2©¤±ªo¬±ª2¶«∏±o × ²±ª2° ¬¨o ≥∞2≤«¨ ±ª
(ΣχηοολοφΜεδιχινε, Σηαοξινγ Υνιϖερσιτψ, Σηαοξινγ vtusss, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ²³·¬°¤¯ ¬¨·µ¤¦·¬²± ³µ²¦¨¶¶²©³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¶©µ²° Σ. φυσιφορµ ε ¥¼ ±¨½¼°¤·¬¦·µ¨¤·2
° ±¨·q Μετηοδ : ׫¨ ²³·¬°∏° ¬¨·µ¤¦·¬²± ¦²±§¬·¬²±¶º µ¨¨ ²¥·¤¬± §¨¥¼·«¨ ¬¨³¨ µ¬° ±¨·º¬·«·«¨ ²µ·«²ª²±¤¯ §¨ ¶¬ª±q ׫¨ ¦²±·¨±·²©³²¯¼¶¤¦2
¦«¤µ¬§¨ ¶²©Σ. φυσιφορµ ε º¤¶§¨ ·¨µ°¬± §¨¥¼ ¶³¨ ¦·µ¤³«²·²° ·¨µ¼q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¤°²∏±·²© ±¨½¼°¨¤±§·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¤©©¨¦·¨§·²2
·¤¯ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¶²©Σ. φυσιφορµ εq Χονχλυσιον: ׫¨ ²³·¬°∏° ¬¨·µ¤¦·¬²± ¦²±§¬·¬²±¶¬±¦¯∏§¨ ·«¨ ¤§§¬·¬²± ²©tqu ≅ tsw # tss ªpt ±¨2
½¼°¨¬±·² º¤·¨µ¤·³ wqxo ¤±§·«¨ ¶∏¥¶¨ ∏´¨ ±··µ¨¤·° ±¨·©²µts °¬± º«¬¯¨ ·«¨ ·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ ¬¶°¤¬±·¤¬± §¨¤·wx ε q
[ Κεψ ωορδσ] ²µ·«²ª²±¤¯ §¨ ¶¬ª±~ Σαργασσυµ φυσιφορµ ε~ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ~ ¦¨ ¯¯∏¯¤¶¨ ≈责任编辑 鲍 雷
≈收稿日期 ussy2sv2su
≈基金 项 目 江 苏 省 tvx 工 程 重 点 人 才 资 助 项 目
kyx ≤ussusyxl
≈通讯作者 3 陈红霞 oר¯}ksxttlxsv{tzso∞2°¤¬¯}¦««¬ussx
¶²«∏1¦²°
挤出滚圆法制备复方杞芪微丸的处方及工艺优化
陈红霞 t3 o贾晓斌 tou o陈 彦 u o潘国梁 u o成旭东 u
kt1江苏大学 药学院 o江苏 镇江 utusst~u1江苏省中医药研究院 o江苏 南京 utssu{l
≈摘要 目的 }应用挤出滚圆法制备中药复方杞芪微丸 o研究微丸制备的最佳处方和工艺 ∀方法 }用新型的挤
出滚圆造粒机制备复方杞芪微丸 ~采用单因素考察和正交设计筛选最优处方和工艺条件 ~考察了微丸的粉体学性
质和收率 ∀结果 }用挤出滚圆法制备的杞芪微丸圆整度好 o大小均匀 o成品收率高 ∀结论 }用国产的挤出滚圆造粒
机可以制备中药微丸 ∀该工艺简便易行 o制得的微丸质量好 o值得进一步研究 ∀
≈关键词 杞芪复方 ~挤出滚圆法 ~微丸 ~粉体学性质 ~收率
≈中图分类号 |wv ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussyluu2t{yu2sw
随着现代医药工业的发展及中药的逐步现代化
和国际化 o中药新剂型的研制开发正成为众多制药
学者的研究热点 o其中微丸的制备正引起人们的普
遍关注 ∀与其他制剂相比 o微丸具有生物利用度高
等诸多优点 ≈t ∀目前微丸以其独特的优势正成为
缓控释制剂的发展方向 ≈u o且已被公认为是较理想
的缓控释剂型之一 ≈v ∀然而受复方浸膏化学成分
复杂等诸多因素的影响 o到目前为止已成功制备的
中药微丸仍非常有限 o可见中药微丸的制药技术急
待提高 ∀
微丸的制备国内外常见的方法有层积式制丸
法 !流化床制丸法及挤出滚圆造粒法等等 o其中挤出
滚圆制丸技术是国际上制剂工业较为广泛应用的制
丸方法之一 ≈w ∀本研究即以中药复方杞芪提取物
为原料 o采用新型的挤出滚圆造粒机制备中药微丸 o
对微丸的处方和工艺进行优选 o为中药微丸的制备
提供新的技术 ∀
1 仪器与材料
挤出滚圆造粒机 k上海华东理工大学 l~ ⁄ p
{ss型智能药物溶出仪 k天津大学无线电厂 l~∂ p
u{su型紫外可见分光光度计 k尤尼柯仪器有限公
司 o上海 l∀
复方杞芪提取物 k自制 l~微晶纤维素 k ≤≤o常
熟药用辅料有限公司 l~微粉硅胶 k广州人民化工
#uy{t#
第 vt卷第 uu期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ uu
²√ °¨¥¨ µoussy