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The modulation of pilose antler extract (PAE) on the prolifera tion of rat osteogenic cells UMR-106

鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用



全 文 :Προτεχτιϖε εφφεχτ οφ ΑΣΣ ον µψοχαρδιαλισχηεµια2ρεπερφυσιον ινϕυρψιν ρατσ
≥˜Œ ⁄¤2¼∏¤±t o ±˜ ≥«¤²2¦«∏±t o ≠˜ ÷¬¤²2©¨ ±ªt o≤‹∞‘≠¤±2³¬±ªu o  „ ÷¬±ª2¼∏¤±u
kt q ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχολογψo Σχηοολ οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσo ϑιλιν Υνιϖερσιτψo Χηανγχηυν tvssut o Χηινα~
u q ∆επαρτµεντ οφ Νατυερ Μεδιχιναλ Χηεµιστρψo Σχηοολ οφ Χηεµιχαλ Σχιενχεσo ϑιλιν Υνιϖερσιτψo Χηανγχηυν tvssut o Χηιναl
≈ Αβστραχτ  Οβϕεχτιϖε}ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²©„¦¤±·«²³¤±¤¬¶¨±·¬¦²¶∏¶¶¤³²±¬±¶k„≥≥l ²± °¼²¦¤µ§¬¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²±
¬±­∏µ¼¬±µ¤·¶q Μετηοδ }׫¨ °¼²¦¤µ§¬¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²± °²§¨¯ º¤¶¬±§∏¦¨§¥¼ vs °¬± ¯¨©·¤±·¨µ¬²µ§¨¶¦¨±§¬±ª¦²µ²±¤µ¼ ²¦¦∏¯∏¶¬²± ¤±§
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≈责任编辑 方文贤 
鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞
增殖的调节作用
陈晓超t o柯李晶t o陈躬瑞t o刘树滔t o霍玉书u o饶平凡t 3
kt q福州大学 生物工程研究所 o福建 福州 vxsssu ~
u q美国德州大学 胜安东尼奥健康科学中心 o德州 z{uu| p v|ss o美国l
≈摘要  目的 }观察鹿茸粗提液k°„∞l对大鼠成骨肉瘤细胞系 ˜ •2tsy增殖的影响 o从而为研究鹿茸强筋健
骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据 ∀方法 }通过 ≥ ³¨«¤¦µ¼¯ ≥2uss‹• 凝胶过滤
色谱对 °„∞进行初级分离 o用 ×× 法检测不同分离组分对 ˜ •2tsy 细胞增殖的影响 ∀结果 }发现 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥2
uss‹• 凝胶过滤色谱第 u峰 °u次组分 o当其蛋白质浓度高于 s q|zu °ª#pt并低于 |z qu °ª#pt时 o对 ˜ •2tsy细胞
增殖活性的影响表现为抑制 ~若浓度达到 |z qu °ª#pt后则会促进细胞的增殖 o且增殖效应随蛋白质浓度的增加而
明显上升 ∀当样品蛋白质浓度达到 | qzu ª#pt时 o相应的细胞增殖率为 wzz q|u h o接近 °„∞的增殖水平kw|| qyu h l ∀
经 ≥⁄≥2°„Š∞电泳分析第 u峰分子量集中于 x| ®⁄¤左右 ∀此外 o发现第 v !第 w和第 x峰对 ˜ •2tsy细胞增殖有显
著的抑制作用 ∀结论 }鹿茸蛋白中含有多种双向调控 ˜ •2tsy细胞增殖的生物活性因子 o既有剂量双向效应 o也有
与分子量相关的不同调控蛋白 o这对中药的双向调节作用提供研究线索 ∀
≈关键词  鹿茸粗提液k°„∞l ~˜ •2tsy细胞 ~细胞增殖 ~ ××法
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlst2sszw2sw
鹿茸取自梅花鹿 Χερϖυσ νιππον × °¨°¬±¦®或马鹿
≈收稿日期  ussv2sy2uz
≈通讯作者  3 饶平凡 oר¯ }ksx|tlz{|vytu oƒ¤¬}ksx|tlvzvuwyu o
∞2°¤¬¯}³©µ¤²ƒ©½∏q¨§∏q¦±
ΧqΕλαοηυσ尚未骨化的幼角 ∀ 5本草纲目6中记载 }
鹿茸/生精补髓 o养血益阳 o强筋健骨0≈t  ∀药理研究
表明 o具有增强机体免疫 !抗衰老 !加速创伤愈合 !促
进骨质修补等功能 o它能在短期内迅速生长发育成
具有成骨 !造血 !神经与表皮生长 !生毛与血管发育
#wz#
第 u|卷第 t期
ussw年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼oussw
的综合器官 o说明鹿茸在骨化之前贮存有大量的生
长因子≈u  ∀近年来 o国内外学者相继在鹿茸中发现各
种细胞生长因子 o诸如新西兰 ≥∏·¬¨   等≈v 发现的
具调节软骨组织生长的胰岛素样生长因子kŒŠƒl o霍
玉书等≈w 分离到具刺激神经纤维生长活性的神经生
长因子k‘Šƒl o江润祥等分离到的使上皮细胞增生的
表皮生长因子k∞Šƒl以及周秋丽等分离得到具促进
成骨 !软骨细胞增殖的鹿茸多肽k°„°l等≈x oy  ∀可见
从鹿茸中分离促成骨肉瘤细胞增殖或分化的生物活
性物质 o有其临床实践及生物学理论基础 ∀
成骨细胞是骨组织中的重要细胞 o其增殖与分
化是骨形成 !发育 !修复的关键 o在此过程中多种生
长因子都可影响成骨细胞的增殖与分化≈z  ∀ ˜ •2
tsy是来源于 Ραττυσ νορϖεθιχυσ大鼠成骨肉瘤细胞系 o
能够在一定程度上模拟正常成骨细胞的生理活性 o
是研究骨科疾病公认的体外模型≈{  ∀通过 ××比色
法分析 °„∞不同的分离组分对大鼠成骨肉瘤细胞
˜ •2tsy增殖的影响 o可以为研究鹿茸强筋健骨的分
子生物学机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活
性成分提供实验依据 ∀
1 材料
1 .1 药品与试剂 鹿茸二杆茸冻干粉由美国德州大
学胜安东尼奥健康科学中心霍玉书教授提供 ~⁄∞
培养基 o‹∞°∞≥ o胎牛血清kƒ…≥l均为美国 ‹¼¦¯²±¨ 公
司产品 ~ ×× 为 „ • ∞≥≤’ 公司产品 o临用前
现配 ~⁄≥’ k二甲基亚砜 l为 Š¬¥¦²公司产品 ~
s qux h胰蛋白酶为 „∞• ≥≤’公司产品 ~标准蛋白为
…Œ ƒ µ¨°¨ ±·¤¶公司产品 ~
1 .2 仪器 美国 ׫¨µ°² ƒ²µ°¤公司 tu{x型超净工
作台 o美国 ׫¨µ°² ƒ²µ°¤公司 vttt型二氧化碳培养
箱 o美国 …∞≤Ž„‘公司 p uxŒ型低温冷冻高速离心
机 o国营华东电子管厂 ⁄Šxsvt型酶联免疫检测仪 o
瑞典 °«¤µ°¤¦¬¤公司 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥ p uss‹• 柱填料 o日本
„×ׄ公司 „∞p yxss电泳系统 ∀
2 实验方法
2 .1 °„∞的制备 取二杆茸冻干粉 tx ª溶于 tss
°去离子水 o于 w ε 下抽提过夜 ∀所得抽提样品在
tu sss µ#°¬±pt ow ε 低温下离心 tx °¬±o收集上清液
于 p us ε 下保存待用 ∀
2 .2 °„∞的分子筛凝胶过滤色谱 将 v °°„∞加
样到 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥ p uss‹• kt qy ¦° ≅ xs ¦°l凝胶过滤层
析柱上 o平衡缓冲液为 ³‹ y qz os qsx °²¯#pt磷酸盐
缓冲液k含 s qu °²¯ #pt ‘¤≤¯ l o流速 s qw °#°¬±pt ∀
洗脱过程用蛋白质检测仪检测 o波长 u{s ±° o收集各
分离组分 ∀
2 .3 细胞系及培养条件 ˜ •2tsy大鼠成骨肉瘤细
胞系k„×≤≤ ≤• 2tyytl购自台湾国家卫生研究院细
胞库 ∀ ˜ •2tsy细胞培养于含 ts h胎牛血清kƒ…≥l
的 ⁄∞ 培养基中 ovz ε ox h ≤’u 培养 o每周更换培
养基 u ∗ v次 o用 s qux h胰蛋白酶2s qu h ∞⁄ׄ工作液
消化分散细胞 o进行传代或接种培养 ∀
2 .4 体外促细胞增殖活性的测定≈| ots  细胞按 x ≅
tsz#pt接种于 |y孔板 o每孔 uss ˏo每组设 w个平
行孔 ∀培养 uw «后 o弃去培养基 o每孔加入无血清培
养基 uss ˏo培养 uw «k此步为细胞饥饿同步化培
养l ∀弃掉培养基 o加入 t{s ˏ血清培养基和 us ˏ
鹿茸样品或不同蛋白含量的分离组分 o以 °…≥缓冲
液作为对照 o培养 w{ «∀培养结束后 o移去培养基 o每
孔加入 xs ˏ××kt ª#ptl ovz ε 孵育 v «~移去 ××
溶液 o每孔加入 txs ˏ二甲基亚砜k⁄≥’l o微量振
荡仪振荡 ts °¬±o待沉淀完全溶解后 o用酶联免疫检
测仪测 Αx|s值 ∀细胞增殖率计算公式如下所示 o并定
义细胞增殖率为样品活力的衡量标准 ∀
细胞增殖率 € ≈k Αx|s实验组 p Αx|s对照组lΠ Αx|s对照组  ≅ tss h ∀
2 .5 蛋白质浓度的测定 按 ²ºµ¼法≈tt 测定蛋白质
的浓度 o以牛血清白蛋白为标准蛋白 ∀
2 .6 ≥⁄≥2°„Š∞电泳 参照 ¤¨ °°¯¬方法≈tu 进行电
泳 ∀采用不连续胶系统 ow h浓缩胶和 tx h分离胶 o
用考马斯亮蓝法染色 ∀标准相对分子质量蛋白
k¤µ®¨µ…Œ公司出品l为 Β2半乳糖苷酶ktty ®⁄¤l o牛
血清白蛋白kyy qu ®⁄¤l o鸡卵清蛋白kwx ®⁄¤l o乳酸脱
氢酶kvx ®⁄¤l o限制性内切酶 …¶³|{ Œkux ®⁄¤l oΒ2乳球
蛋白kt{ qw ®⁄¤l o溶菌酶ktw qw ®⁄¤l ∀
2 .7 统计学分析 用 ∞¬¦¨ u¯ssu软件对所有的实验
数据进行单尾 τ检验 o对 °„∞各组分影响 ˜ •2tsy
细胞增殖的结果进行配对检验 ∀
3 结果
3 .1 鹿茸粗提液k°„∞l的 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥ p uss‹• 凝胶
过滤色谱 取 v °°„∞样品 o用 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥ p uss‹•
凝胶过滤柱kt qy ¦° ≅ xs ¦°l色谱 o³‹y qz os qsx °²¯#
pt磷酸盐缓冲液k含 s qu °²¯#pt ‘¤≤¯ l洗脱 o共获得
x个洗脱峰k图 tl ∀收集各洗脱峰 o浓缩 !透析 o再经
s quu Λ°无菌滤膜过滤除菌 ∀所得样品经 ×× 法检
测其对 ˜ •2tsy细胞增殖的影响 ∀
#xz#
第 u|卷第 t期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼oussw
图 t 鹿茸粗提液k°„∞l的 ≥ ³¨«¤¦µ¼¯ ≥2uss‹• 凝胶色谱图
样品 qv °°„∞~≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥2uss‹• 凝胶过滤色谱柱kt qy ¦° ≅ xs ¦°l ~
缓冲液 s qsx °²¯#ptk³‹ y qzl磷酸盐缓冲液k含 s qu °²¯#pt ‘¤≤¯ l ~流
速 s qw °#°¬±pt ~检测波长 u{s ±°
3 .2 °„∞各分离组分对 ˜ •2tsy细胞增殖的影响
将 °„∞经 ≥2uss分离的各组分加入细胞培养体系 o
经 ×× 法检测 o°t o°u对 ˜ •2tsy细胞增殖都有显
著的促进作用k Π s qsxl o其促增殖活性分别为 z| q
sy h和 vwu qwx h ~而峰 v ow和峰 x对 ˜ •2tsy细胞增
殖则具有高度显著的抑制作用k Π s qst o表 tl ∀可
以判断鹿茸中促进 ˜ •2tsy细胞增殖的活性物质主
要集中于 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥2uss‹• 色谱中第 u峰 °u o而抑
制细胞增殖的活性因子则分布与 °v o°w和 °x ∀经
≥⁄≥2°„Š∞分析 o°u分子量较为集中 o在 x| ®⁄¤有明
显分布k图 ul ∀
图 u °„∞各分离组分 ≥⁄≥2°„Š∞电泳结果
 q蛋白质标准品 ~t q°„∞样品 ~u q≥¨ ³«¤¦µ¼¯ ≥2uss‹• 色谱第 u峰 °u
表 t ××法测定 °„∞各分离组分
对 ˜ •2tsy细胞增殖的影响 k ξ ? σo ν € wl
样品
蛋白含量
rª#pt
吸光值
增殖率
r h
抑制率
r h
对照组 s qtvv ? s qstx
°„∞ tvu q|vv s qz|x ? s qsvt w|| qyuul
°t s qw|t s quv{ ? s qsv{ z| qsytl
°u s q|zu s qx{y ? s qswx vwu qwxul
°v s qv{z s qswx ? s qst| yy quvul
°w s qu|w s qsvs ? s qss{ zz qxxul
°x s qtwy s qs{| ? s qss{ vv qutul
注 }与对照组比较 tl Π s qsx o ul Π s qst
3 . 3 不同浓度 °u对 ˜ •2tsy细胞增殖的影响 经
²ºµ¼法测定 o收集所得 ≥2uss凝胶过滤色谱第 u峰
°u的蛋白质含量为 |zu °ª#pt ∀对其进行浓缩与稀
释 o可获得线性浓度梯度的 x个样品 o用 ××法分别
考察它们对 ˜ •2tsy细胞增殖的影响k图 vl ∀
图 v 不同浓度的 ≥2uss
第 u峰对 ˜ •2tsy细胞增殖的影响
与对照组相比 3 Π s qsx o3 3 Π s qst
结果显示 o当蛋白质浓度高于 s q|zu °ª#pt并低
于 |z qu °ª#pt时 o°u样品表现为抑制细胞的增殖 ~
当达到或高于 |z qu °ª#pt则转变为促进细胞的增
殖 o且促增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升 ∀
°u浓缩 ts倍样品k| qzu ª#ptl与对照组差异高度显
著k Π s qstl o其细胞增殖率达 wzz q|u h o接近鹿茸
粗提液样品的增殖率 w|| qyu h ∀若将 °u样品稀释
ts倍k|z qu °ª#ptl o则促增殖活性降低至 yu qy h o
与对照组差异的显著水平也随之降低ks qst  Π
s qsxl ∀当样品稀释倍数达到 tss时k| qzu °ª#ptl o
促增殖效应消失 o转而表现为对细胞增殖的抑制 o其
抑制率达 |x qwv h k Π s qsxl ∀进一步稀释 ts倍后
ks q|zu °ª#ptl o°u样品对细胞的影响完全消失 o恢
复到与空白对照组相近的水平 ∀
4 讨论
早在 t||u年 …¤§等从鼠科动物愈合的骨髓组织
中分离 !纯化得到能够促进成骨肉瘤细胞增殖的成
骨生长肽 k ’Š°l o由 tw 个氨基酸组成≈tv  ∀随后
Šµ¨ ±¨¥¨µª等同样从人血清中纯化得到序列与前者
完全一致的成骨生长肽≈tw  ∀ ‘≤…Œ蛋白质数据库检
索结果显示 o来源于人体或鼠科动物的成骨生长肽
’Š° o均为 u®⁄¤以下分子量的短肽 o而其他哺乳动物
来源的 ’Š°还未见报道≈tx oty  ∀
本实验将鹿茸粗提液 k °„∞l经过 ≥¨ ³«¤¦µ¼¯
≥2uss‹• 凝胶过滤初级分离 o发现其 °u组分能够高
度显著地促进 ˜ •2tsy细胞的增殖 ∀其分子量主要
集中在 x|®⁄¤o这与已知成骨生长肽的分子量水平差
异明显 o由于本项试验所使用的分离方法尚未能将
该成分分离与纯化 o因此不能排除为多个分子的聚
合 ∀量效关系的研究发现 }当蛋白质浓度高于 s q|zu
°ª#pt并低于 |z qu °ª#pt时 o°u样品对 ˜ •2tsy细
胞增殖具有抑制作用 ~浓度达到 |z qu °ª#pt o则由抑
制转为促进作用 o并且效应会随着蛋白质浓度的增
#yz#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ t
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加而明显上升 ∀若 °u 蛋白质浓度增加至 | qzu ª#
pt o其促细胞增殖活性可相应提高到接近 °„∞原样
的水平 ∀这一结果与 Šµ¨ ±¨¥¨µª等报道的 ’Š°对成
骨肉瘤细胞增殖表现为低浓度抑制 o达到某一临界
值后则为促进的结论相符≈tu  ∀对该活性因子进一步
的分离纯化尚在研究中 o其具体的理化性质还有待
深入研究 ∀综上所述 o鹿茸中确实含有调节成骨肉
瘤细胞 ˜ •2tsy增殖的一组生物活性因子 o该组因
子的分子量分布于 tw ∗ ys®⁄¤范围 o远大于目前已知
的成骨肉瘤细胞生长因子 o它可能参与了鹿茸的骨
质生长与骨化过程的调控 !为鹿茸的临床促进骨质
生长 o骨化及治疗骨质疏松等作用的深入研究提供
分子生物学机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的活性
因子提供了实验依据 ∀
≈参考文献 
≈t  江苏新医学院 q中药大辞典 q上海 }科学技术出版社 ot|{y quuvu q
≈u  杨璐璐 o迟 程 o秦 非 o等 q鹿茸的化学成分与药理作用 q云南
中医学院学报 ot||x ot{kwl }t| q
≈v  ≥∏·¬¨   oŠ¯ ∏¦®°¤± ° ⁄o…∏·¯¨µ‹ oετ αλqŒ±¶∏¯¬±2¯¬®¨ ªµ²º·«©¤¦·²µt
kŒŠƒ2tl ¤±·¯¨µ2¶·¬°∏¯¤·¬±ª «²µ°²±¨ q Ενδοχρινολογψot|{x ottykul }
{wy q
≈w  ‹˜’ ≠∏2¶«∏o‹˜’ ‹²±ªo∂¬µª¬¯ • ≥ oετ αλq׫¨ §¬©©¨µ¨±·¬¤¯ ¬¨³µ¨¶¶¬²±
²©‘Šƒ≥2¯¬®¨ ¶∏¥¶·¤±¦¨ ©µ²° ©µ¨¶« ³¬¯²¶¨ ¤±¯·¨µ²© ¦¨µ√∏¶±¬³³²± ·¨°2
°¬±¦®qΒιοµεδ Σχι Ινστρυµ ot||z ovv }xwt q
≈x  江润祥 q鹿茸表皮生长因子 q动物学报 ot|{z ovvkwl }vst q
≈y  ‹’˜ ±¬∏2¬oŠ˜’ ≠¬±ª2¬¨ o• „‘Š ¬2∏¤±oετ αλq∂¨¯√¨ ·¤±·¯¨µ
³²¯¼³¨ ³·¬§¨¶³µ²°²·¨§³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©¦«²±§µ²¦¼·¨¶¤±§²¶·¨²¥¯¤¶·³µ¨2
¦∏µ¶²µ¶¤±©µ¤¦·∏µ¨ «¨ ¤¯¬±ªqΑχτα Πηαρµαχολ Σιν ot||t ouskvl }uz| q
≈z  …¤±¨ µ­¨¨ ≤ q„± „2t ¦²±¶¨±¶∏¶¶¨ ∏´¨±¦¨ ¥¬±§¶¤± ²¶·¨²¥¯¤¶·2¶³¨¦¬©¬¦
¦²°³¯ ¬¨ ¤±§·µ¤±¶¦µ¬³·¬²±¤¯ ¼¯ ¤¦·¬√¤·¨¶·«¨ ²¶·¨²¦¯¤¦¬± ª¨ ±¨ q Προχ Νατλ
Αχαδ Σχι ot||y o|vktsl }w|y{ q
≈{  „·®¬±¶⁄ o • ¤¯¯¨µ° ≤ o ¤µ·¬± × q•¤·²¶·¨²ª¨ ±¬¦¶¤µ¦²°¤¦¨¯¯¶}°²§2
∏¯¤·¬²± ²© «²µ°²±¨ ¶·¬°∏¯¤·¨§¦¼¦¯¬¦ „° ³µ²§∏¦·¬²± ¥¼ ³µ²¶·¤ª¯¤±§¬±
¤±·¤ª²±¬¶·¶¤±§ ¥¬²¶¼±·«¨¶¬¶¬±«¬¥¬·²µ¶qΧλιν Εξπ Πηαρµαχολ Πηψσιο o
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≈|  • ∏¶¨¯¯ ≤ „ o∂¬±§¨ ²¯√ q’³·¬°¬½¤·¬²±¤±§¦²°³¤µ¬¶²±²©·«¨ ×× ¤¶2
¶¤¼ ¤±§·«¨ v‹2ק• ¤¶¶¤¼©²µ·«¨ §¨·¨¦·¬²±²©Œ2u¬± ‹¨¯³¨µ× ¦¨¯¯ ³µ¨2
¦∏µ¶²µ¤¶¶¤¼¶qϑ Ιµ µυνολ Μετηοδσot||{ outzkt2ul }tyx q
≈ts  ²¶°¤±± × q•¤³¬§¦²¯²µ¬° ·¨µ¬¦¤¶¶¤¼ ©²µ¦¨¯¯∏¯¤µªµ²º·«¤±§¶∏µ√¬¤¯ }
¤³³¯¬¦¤·¬²±·² ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ¤±§¦¼·²·²¬¬¦¬·¼ ¤¶¶¤¼¶qϑ Ιµ µυνολ Μετη o
t|{v oyx }xx q
≈tt  张龙翔 o张庭芳 o李令媛 q生化实验方法与技术 o第 u版 q北京 }
高等教育出版社 ot||z qvtw q
≈tu  ¤¨ °°¯¬˜ Žq≤¯ ¤¨√¤ª¨ ²©¶·µ∏¦·∏µ¤¯ ³µ²·¨¬±¶§∏µ¬±ª·«¨ ¤¶¶¨ °¥¯¼ ²©·«¨
«¨ ¤§²©¥¤¦·¨µ¬²³«¤ª¨ ×w qΝατυρε ot|zs ouuzkux|l }y{s q
≈tv  …¤§ŒoŠ¤½¬·⁄o≤«²µ¨√  o¨·¤¯ q‹¬¶·²±¨ ‹w2µ¨ ¤¯·¨§²¶·¨²ª¨ ±¬¦ªµ²º·«
³¨ ³·¬§¨ k’Š°l }¤ ±²√¨ ¯ ¦¬µ¦∏¯¤·¬±ª¶·¬°∏¯¤·²µ²© ²¶·¨²¥¯¤¶·¬¦¤¦·¬√¬·¼q
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第 u|卷第 t期
ussw年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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