全 文 ：羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的研究
季宇彬t 3 o高世勇t ou o张秀娟t
kt q哈尔滨商业大学 药物研究所 博士后科研工作站 o黑龙江 哈尔滨 txsszy ~
u q中国药科大学 生理教研室 o江苏 南京 utsss|l
≈摘要  目的 }揭示羊栖菜多糖k≥ƒ°≥l的抗肿瘤作用机制 ∀方法 }采用流式细胞仪观察羊栖菜多糖对肿瘤细
胞周期及细胞凋亡的影响 ∀采用 ƒ¯ ∏²2vr„ 探针标记 o激光共聚焦技术观测细胞内≈≤¤u n  ¬∀结果 }羊栖菜多糖可
阻滞 ≥Š≤2z|st人胃癌细胞由 ŠsrŠt期进入 ≥期 o升高细胞凋亡指数k„°’ h l ∀可使 ≥Š≤2z|st细胞内≈≤¤un  ¬先升
高然后下降 o给 ≤¤≤¯ u后 o≈≤¤un  ¬又升高 ∀结论 }羊栖菜多糖通过升高肿瘤细胞内≈≤¤un  ¬启动肿瘤细胞凋亡机制
而达到抗肿瘤的作用 o≈≤¤un  ¬升高时 ≤¤un来源于细胞内钙库释放 ∀
≈关键词  羊栖菜多糖 ~≥Š≤2z|st ~细胞凋亡 ~≈≤¤un  ¬~抗肿瘤
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsv2suwx2sv
羊栖菜 Σαργασσυµ φυσιφορµεk‹¤µ√ ql ≥¨ ·¦«¨¯俗名为
海大麦 !海茜菜 !大麦菜 !破网 !胡须泡 !海菜芽 !鹿角
尖等 o为褐藻门马尾藻科植物 o在我国北起辽东半
岛 o沿山东 !浙江 !福建 !广东浅海域均有生长 o日本
和韩国也有分布≈t  ∀羊栖菜已作为中药/海藻0替代
品长期应用 o能够软坚散结 o用于瘿瘤瘰疬 !痰饮水
肿等的治疗≈u  o民间也有用其治疗肿瘤的报道 ∀5本
草纲目6中记载 }/ , ,主治瘿瘤结气 o散颈下硬核
瘤 o痈肿 瘕 , ,疗皮间积聚暴溃 o瘤气 , ,0
研究表明羊栖菜的有效成分羊栖菜多糖k≥ƒ°≥l
对肿瘤细胞有一定的抑制作用≈v2x  o本研究则进一步
观察了其对人胃癌细胞 ≥Š≤2z|st细胞凋亡的诱导作
用及对细胞内≈≤¤u n  ¬的影响 o以揭示其抗肿瘤作用
机制 ∀
1 材料
1 q1 药品 ≥ƒ°≥ o由哈尔滨商业大学药物研究所提
供 ~羊栖菜购自哈尔滨市药材公司 o并经哈尔滨师范
大学生物系鉴定 ~x2ƒ∏o上海制药十二厂 o批号
||syst ∀
1 q2 试剂 • °Œ tyws培养基 o Š¬¥¦²产品 ~小牛血
清 oŠ¬¥¦²产品 ~ƒ¯ ∏²2vr„ 荧光探针 o美国 ²¯ ¦¨∏¯¤µ
≈收稿日期  ussv2s|2t{
≈基金项目  国家自然科学基金项目kvsuztx|{l ~教育部科技研
究重点项目kstsvxl ~黑龙江省自然科学基金项目k⁄ss2t{l ~黑龙江省
普通高等学校骨干教师创新能力资助计划资助项目kusststxl
≈通讯作者  3 季宇彬 oר¯kƒ¤¬l }kswxtl{w{yysst o∞2°¤¬¯}­¼¥ƒ
«µ¥¦∏q¨§∏q¦±
³µ²¥¨ 公司 ∀
1 q3 肿瘤细胞系 人胃癌 ≥Š≤2z|st由中国医学科
学院药物研究所提供 ∀
1 q4 主要仪器设备 超速离心机 ’°×Œ„ ÷p
tssŽo贝克曼公司 ~≤’u 培养箱 ƒ²µ° vtut o美国生命
科学集团 ~酶标仪 ∞vtt o美国 …Œ’ p ×∞Ž公司 ~流式
细胞仪 ƒ„≤≥≤¤¯¬¥∏µo美国 …⁄公司 ~≤’u恒温培养箱 o
日本三洋公司 ~超净工作台 ≥• p ≤p uƒ⁄o苏州安
泰 ~激光共聚焦系统 o德国 ¨¬¦¤公司 ∀
2 实验方法
2 q1 流式细胞仪测定羊栖菜多糖对细胞周期及细胞
凋亡的影响≈y  选择对数生长期的人胃癌 ≥Š≤2z|st
细胞 o常规消化后 ovz ε ox h ≤’u湿化培养箱内孵育
uw «o随机分为两组 o即空白对照组和给药组 o给药组
药物终浓度为 xs °#pt o对照组加入等量的培养
液 o给药后 w o{ otu ouw ow{ «各组分别取样 ot体积细
胞悬液加 |体积 zs h乙醇于 p us ε 固定 tu «o离心 o
°…≥液洗涤除尽乙醇 o离心后悬于 °Œ染液中室温染
色 vs °¬±o流式细胞仪测定 o以凋亡指数k„°’ oh l表
示细胞凋亡情况 ∀
„°’k h l €凋亡细胞数r所测细胞数 ≅ tss h
2 q2 肿瘤细胞内≈≤¤u n  ¬的测定
2 q2 q1 肿瘤细胞培养 人胃癌细胞系 ≥Š≤2z|st常
规复苏后 o培养于质量分数为 s qt的小牛血清 • °Œ
tyws培养液中 o在 vz ε ox h ≤’u 及 |x h湿度的 ≤’u
培养箱中培养 ou ∗ v §传代 t次 ∀
2 q2 q2 ≥Š≤2z|st细胞株的处理≈z  用 • °Œ2tyws培
#xwu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
养液调细胞至 v ≅ tsv#pt o接种于培养皿中 o培养 w{
«后 o弃去培养皿内旧培养液 o用 °…≥及无钙台式液
洗 u次 o然后加入 t ≅ tsp v 无钙台式液 o于 t °无
钙台式液中加入 tsp w 含 ƒ¯ ∏²2vr„ kt ª#ptl ovz
ε 避光孵育 t «o弃去上清液 o再用无钙台式液洗 t
次 o然后加入 t 无钙台式液 o以备上机检测 ∀
2 q2 q3 激光共聚焦检测 ≥ƒ°≥ 对 ≥Š≤2z|st 细胞内
≈≤¤u n  ¬的变化
2 q2 q3 q1 空白对照组≈≤¤u n  ¬的测定 将负载 ƒ¯ ∏²2
vr„ 的 ≥Š≤2z|st细胞置于载物台上 o选定观察目
标 o观察未给药细胞内荧光强度 o即≈≤¤u n  ¬水平 o时
间 yss ¶∀
2 q2 q3 q2 给药后≈≤¤u n  ¬的测定 弃上清液 o加入
tss ˏkxs °ª#ptl≥ƒ°≥ o置 ≤’u 培养箱kvz ε ox h
≤’ult °¬±o上机观察 ≥Š≤2z|st细胞内≈≤¤u n  ¬的变
化 o观察时间 xss ¶∀
2 q2 q3 q3 加入 ≤¤≤¯ u 后细胞内≈≤¤u n  ¬的变化 弃
上清液 o加入 tss ˏkts °°²¯l o观察 ≥Š≤2z|st细胞内
≈≤¤u n  ¬的变化 o观察时间 xss ¶∀实验条件 }激发激
光 w{{±° o°¬±«²¯¨xss Λ° o扫描激光强度 vs h o°×Œ
vs h o物镜 ws ≅ ∀
2 q3 数据处理 数据统计分析进行组间 τ检验 ,结
果均以 ξ ? σ表示 ∀
3 实验结果
3 q1 羊栖菜多糖对 ≥Š≤2z|st人胃癌细胞周期及细
胞凋亡的影响 结果见表 t ∀
表 t 羊栖菜多糖对 ≥Š≤2z|st
人胃癌细胞周期及细胞凋亡的影响
组别 τr« ŠsrŠt ≥ Šu n  „°’r h
空白对照组 w xy qvw wu qty t qxs t qty ? s qwy
{ ww q{x xs q{z w qu{ t qzx ? s quz
tu wu quv xy qyz t qts t qwv ? s qvu
uw x{ qzu ws qut t qsz t qxy ? s qyz
w{ yz qwz vt qtv t qwu t qxx ? s qwy
羊栖菜多糖组 w yw qtz vw qxy t quz t quv ? s qz{
{ z{ qt| us qsw t qzv t qyx ? s qzy
tu {z qzy ts qvu t q|u tu qtz ? s q{{tl
uw {v qzz tv q|z u quy us qvv ? s qy|tl
w{ {s quv t{ qwy t qvt t{ qzz ? s qy{tl
注 }与相应时间段空白对照组比 tlΠ s qst
3 q2 羊栖菜多糖对 ≥Š≤2z|st细胞内≈≤¤u n  ¬的影响
结果k图 t oul表明给药前 ≥Š≤2z|st细胞内≈≤¤u n  ¬
处于一个相对恒定的浓度 o给药后 o≈≤¤un  ¬迅速升
高然后又降低 o加入 ≤¤≤¯ u后≈≤¤u n  ¬又升高 ∀
图 t 给药前 ≥Š≤2z|st细胞内≈≤¤un  ¬含量
图 u 给药后及加入 ≤¤≤¯ u后≈≤¤u n  ¬含量
3 讨论
羊栖菜在中药中以/海藻0入药 o有多年的应用
历史 o用其治疗肿瘤的方剂也很多 o许多记载表明其
方剂对肝癌 !宫颈癌 !乳腺癌 !胃癌 !肠癌等有较好疗
效≈z  o以前我们曾对羊栖菜的体内抗肿瘤作用及免
疫功能的影响作了一些研究≈v o{  o发现其对 ≥t{s „ o
∞„≤及白血病 ytx小鼠肿瘤有较好的抑制作用 o对 y
种人胃癌细胞株均有一定的抑制作用 o而尤以对人
胃癌k≥Š≤2z|stl和直肠癌k≤’’2usxl效果最为明
显≈|  ∀
在此基础上 o本实验观察了羊栖菜多糖对人胃
癌细胞 ≥Š≤2z|st细胞周期及细胞凋亡的影响 o以试
图阐明其抗肿瘤作用的机制 ∀细胞凋亡又叫细胞程
序性死亡 o目前认为很多肿瘤的发生是由于其细胞
凋亡通路受阻而引起的 o因此诱导肿瘤细胞凋亡是
一条抗肿瘤的新靶点 ∀近年研究发现多种抗癌药物
可以引起一个共同的细胞死亡模式 ) ) ) 细胞凋亡 o
即凋亡是不同作用机制抗癌药物殊途同归的结果 o
提示各种抗癌药物通过激活一个固有基因介导的细
胞程序死亡而实现抗肿瘤作用≈{ ots  ∀通过对给药后
w o{ otu ouw ow{ «x个时间段细胞凋亡的观察 o发现羊
栖菜多糖组各时间段 ŠsrŠt 期细胞都多于阴性对照
组 o即羊栖菜多糖能够阻滞肿瘤细胞由 ŠsrŠt期进入
≥期 o我们所测的细胞凋亡指数也反应出这一特点 o
羊栖菜多糖给药 tu «后 o凋亡指数较相应时间段空
白对照组明显升高k Π s qstl ∀
因此 o通过本实验我们认为羊栖菜多糖对胃癌
细胞疗效较为突出 o通过诱导 ≥Š≤2z|st人胃癌细胞
凋亡而达到抗胃癌的作用 ∀
≤¤u n目前认为是一种重要的第二信使物质 o且
在众多的第二信使中处于枢纽地位 o其浓度的改变
#ywu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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将会引起一系列生化反应的改变 o与信号转导密切
相关 ∀而且新的观点认为肿瘤的发生不仅是细胞分
裂失控所导致细胞过度增生所致 o同时也可能是细
胞凋亡通路受阻所致 o凋亡的诱导和抑制与信号转
导通路有关 ∀而 ≤¤u n作为第二信使其功能与细胞信
号转导密切相关 o因此 ≤¤u n与凋亡密切相关 ∀
以前对羊栖菜多糖的研究发现羊栖菜具有明显
的抗肿瘤活性≈w ox o|  o本实验发现其抗肿瘤活性与细
胞凋亡有关 o可诱导 ≥Š≤2z|st人胃癌细胞凋亡 o在此
基础上 o进一步观察了 ≥ƒ°≥对 ≥Š≤2z|st人胃癌细胞
内≈≤¤u n  ¬含量的影响 o以阐明 ≥ƒ°≥诱导肿瘤细胞
凋亡与钙离子的关系 ∀本实验采用激光共聚焦技
术 o在其 ׬°¨ ¶¨µ¬¨¶程序下对给药前后 ≥Š≤2z|st人
胃癌细胞每隔 xs ¶进行 t 次扫描 o观测细胞内
≈≤¤u n  ¬的变化 o结果发现 o给药前 ≥Š≤2z|st细胞内
≈≤¤u n  ¬处于一个相对恒定的浓度 o给药后 o≈≤¤un  ¬
迅速升高然后又降低 o这表明 ≥ƒ°≥作用于 ≥Š≤2z|st
细胞后 o可引起肿瘤细胞内 ≤¤u n浓度升高 ∀细胞内
≤¤u n具有两个来源 }≠细胞外钙内流 ~ 细胞内钙库
释放 ∀由于 ≥Š≤2z|st细胞处理过程中已用无钙台式
液处理 o细胞外无 ≤¤u n o因此细胞内 ≤¤u n的升高只能
来源于细胞内钙的释放 ∀而≈≤¤u n  ¬在升高后又降
低 o则可认为≈≤¤u n  ¬升高后 o激活了细胞凋亡机制 o
随着凋亡的发生 o生物膜的一些生物学特性将发生
一些改变 o而引起细胞内 ≤¤u n外流 o从而使≈≤¤u n  ¬
在升高到一定程度后又降低 ∀这一结论也可从加入
≤¤≤¯ u后≈≤¤u n  ¬的改变得以验证 o≤¤≤¯ u加入后 o细胞
内≈ ≤¤u n  ¬又升高 o表明加入 ≤¤≤¯ u 后 o细胞外有
≤¤u n o而抑制了加 ≤¤≤¯ u前细胞内 ≤¤u n的顺浓度梯度
转运 o此时细胞外 ≤¤u n大于细胞内 ≤¤u n o而使 ≤¤u n
由细胞外流入细胞内 o进而细胞内 ≤¤u n再一次升高 o
所以以上的推断是合理的 ∀因此通过本试验我们得
出如下的结论 }≥ƒ°≥ 能通过引起肿瘤细胞内钙库
≤¤u n的释放而升高肿瘤细胞内 ≤¤u n浓度 o从而达到
诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤的作用 ∀
≈参考文献 
≈t  姜凤吾 o张玉顺 q中国海洋药物辞典 q北京 }海洋出版社 ot||v q
tv{ q
≈u  陈绍瑗 o黄卫民 o潘远红 o等 q海洋药物研究kŒŒŒl ) ) ) 羊栖菜多
糖 q兰州大学学报k自然科学版l ot||{ ovwkwl }tts q
≈v  季宇彬 o张海滨 o刘中海 q羊栖菜多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫功
能的影响 q中国海洋药物 ot||x oxwkul }ts q
≈w  季宇彬 o李文举 o谷春山 q复方海藻多糖合剂抗癌作用的实验研
究 q中国海洋药物 ot||w okvl }us q
≈x  季宇彬 o杨书良 o谷春山 q羊栖菜多糖对 ytx小鼠 °’ 含量及
Š• !Š≥‹2°÷ !≤„× 和 ≥’⁄活性的影响 q中国海洋药物杂志 o
t||w okul }us q
≈y  左联富 o齐国英 o张祥宏 o等 q流式细胞术与生物医学 q沈阳 }辽
宁科学出版社 ot||y }y{ q
≈z  季宇彬 q海洋湖沼药物药理与应用 q哈尔滨 }黑龙江科学技术
出版社 qussv q
≈{  ∞√¤±¶⁄o⁄¬√¨ ≤ q∞©©¨¦·¶²©¦¬¶³¯¤·¬±²±·«¨ ¬±§∏¦·¬²±²©¤³²³·²¶¬¶¬±
³µ²¯¬©¨µ¤·¬±ª «¨ ³¤·²°¤ ¦¨¯¯¶¤±§±²±³µ²¯¬©¨µ¤·¬±ª¬°°¤·∏µ¨ ·«¼°²¦¼·¨¶q
Χανχερ Ρεσot||v oxv }utvv q
≈|  季宇彬 o高世勇 q羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细
胞凋亡的研究 q中草药 oussv ovwkzl }vs q
≈ts  ≥®¯¤§¤±²º¶®¬„ o Ž²±²³¤q „§µ¬¤°¼¦¬± ¤±§¤§¤±²°¼¦¬± ¬±§∏¦¨ ³µ²2
ªµ¤°° §¨¦¨¯¯ §¨¤·«k¤³²³·²¶¬¶l ¬± ·∏°²µ¦¨¯¯¶q Βιοχηεµ Πηαρµαχολo
t||v owy| }vzx q
Ινφλυενχε οφ σαργασσυµ φυσιφορµε πολψσαχχηαριδε ον αποπτοσισ οφ τυµ ορ χελλσ
Œ ≠∏2¥¬±t oŠ„’ ≥«¬2¼²±ªtou o‹„‘Š ÷¬∏2­∏¤±t
(t . Ποστδοχτοραλ Προγραµ µε , τηε Ινστιτυτε οφ Ματεριαλ Μεδιχα οφ Ηαρβιν Υνιϖερσιτψ οφ Χοµ µερχε , Ηαρβιν txsszy , Χηινα ;
u . ∆ιϖισιον οφ πηψσιολογψ, Χηινα Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utsss| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¤±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¼ ²©≥¤µª¤¶¶∏° ƒ∏¶¬©²µ°¨°²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨k≥ƒ°≥l q Μετηοδ : ׫¨ ©¨©¨¦·
²± ¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨¤±§¤³²³·²¶¬¶º¤¶¶·∏§¬¨§º¬·«©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼kƒ≤ l qŒ±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ¦¤¯¦¬∏° ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ≈≤¤un  ¬º¤¶°¤µ®¨ §º¬·« ƒ¯ ∏²2vr„
¤±§° ¤¨¶∏µ¨§º¬·« ¤¯¶¨µ¶¦¤±±¨ µ¦²±©²¦¤¯ °¬¦µ²¶¦²³¨ k≥≤ l qΡεσυλτ : ≥ƒ°≥¬±«¬¥¬·¨§ŠsrŠt ¶·¤ª¨ ≥Š≤2z|st ©µ²° ±¨·¨µ¬±ª·²≥ ¶·¤ª¨ ¤±§¬±2
¦µ¨¤¶¨§ „°’ h q׫¨ ≈≤¤un  ¬¶«²º §¨¤·µ¤±¶¬¨±·µ¬¶¨ ¤±§µ¨·∏µ±·²·«¨ ²µ¬ª¬±¤¯ ¯¨ √¨¯ q׫¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¦²∏¯§¥¨ µ¤¬¶¨§¤ª¤¬± ¥¼ ¤§°¬±¬¶·¨µ¬±ª
≤¤≤¯ u q Χονχλυσιον :׫¨ ¤±·¬·∏°²µ ©¨©¨¦·²©≥ƒ°≥ ¶¨ °¨¶·² ¥¨ ¤¦¦²°³¯¬¶«¨ §·«µ²∏ª«·«¨ ¤³²³·²¶¬¶¤¶¶²¦¬¤·¨§ º¬·«·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ¬±¬±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ
¦¤¯¦¬∏° ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±qŒ±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ¶·²µ¨¶µ¨¯¨ ¤¶¨ ·«¨ ¦¤¯¦¬∏° §∏µ¬±ª¬·¶¤¦·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ≥ƒ°≥ ~≥Š≤2z|st ~¤³²³·²¶¬¶~≈≤¤un  ¬~¤±·¬2·∏°²µ¤¦·¬√¬·¬¨¶
≈责任编辑 方文贤 
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第 u|卷第 v期
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