全 文 ：2015 年总第 47 卷第 10 期
胃癌是临床上常见的消化道恶性肿瘤之一，在
我国发病率呈上升趋势。 每年世界范围内近 100万
人被诊断为胃癌，70 万人死于胃癌[1]，致死率高于其
他临床常见的恶性肿瘤，排在我国恶性肿瘤和致死
因素的第四位[2]。猫人参是猕猴桃科植物对萼猕猴桃
（Actinidia valvata）或大籽猕猴桃（A. macrosperma）
的干燥根及粗茎，其中对萼猕猴桃产自安徽、浙江、
湖北、湖南等省份，福建省建宁等地亦有分布，大籽
猕猴桃产于广东、湖北、江西、浙江、江苏、安徽等省
份 [3]。 在民间，猫人参用于治疗深部脓肿、骨髓炎、
风湿痹痛、疮疡肿毒等常见外科疾病。 现代医学临
床主要用其治疗消化道肿瘤、 原发性肝癌以及肺
癌 [4]。 既往研究表明，单味猫人参注射液对肝癌、白
血病及结肠癌细胞株有一定的抑制作用，从猫人参
中提取分离而来的葸醌类和皂苷类的复合物均被
证实有抗肿瘤活性，能够抑制小鼠皮下移植瘤的生
长。 本实验通过猫人参醇提取物作用于 SGC-7901
细胞，探讨其抗癌作用和机制。
1 实验材料
1.1 药物与试剂 RPMI-1640 培养基 （Gibco 公
司），胎牛血清 FBS 及胰酶蛋白（HyClone 公司），人
胃癌细胞株 SGC-7901 （中科院上海细胞库），CCK8
（Gibco 公司），细胞计数 CCK8 试剂盒（碧云天生物
科技有限公司），磷酸盐缓冲液 PBS（北京中衫金桥
生物技术有限公司）。 猫人参醇提取物参考张亚妮
等[5]的提取方法，由江苏省医药公司提供。
1.2 仪器 酶标仪（美国，Thermo Scientific Multi-
skan FC），二氧化碳培养箱（美国，Thermo Fisher），
倒置相差显微镜 （德国， 徕卡 DM500/DM750 显微
镜），96孔培养板 （美国 Corning公司），Mill-Q 型超
纯水机（美国 Millipore 公司）。
2 实验方法
2.1 猫人参醇提取物的备制 取猫人参药材粗粉
20kg（本研究所使用的猫人参产自江苏省，选用大籽
猕猴桃干燥根及根茎部分）， 购自江苏省药物研究
所，经江苏省药物研究所鉴定，符合《江苏省中药饮
片炮制规范》。 猫人参粗粉用 8 倍体积 80%乙醇作
为提取溶剂回流提取 3 次，每次 1h，合并提取液，滤
过得醇提取液，减压回收溶剂得浸膏。将浸膏冷冻干
燥呈粉末，精密称取干燥粉末，用培养基制成 10mg/mL
母液，过 0.22μm微孔滤器过滤除菌，4℃备用。
2.2 细胞培养 人胃癌细胞株 SGC-7901 在含
10%的胎牛血清 1640、100U/mL 青霉素和 100U/mL
链霉素的培养液中生长， 并置于 37℃、5%CO2相对
饱和湿度的孵育箱中培养，细胞呈贴壁生长，取对
数生长期的细胞进行实验。
2.3 CCK8法检测肿瘤细胞存活率 选取对数生长
期 SGC-7901 细胞， 用 0.25%胰蛋白酶消化制成单
细胞悬液后，将细胞密度调整为 5×104 个/mL，每孔
接种 100μL 细胞悬液于 96 孔板中， 置于 37℃、5%
摘 要 目的：探讨猫人参醇提取物对胃癌 SGC-7901 细胞增殖的影响及其作用机制。 方法：制备猫人参醇提取物。
以人胃癌细胞系 SGC-7901 细胞株为研究对象，将不同浓度的猫人参醇提取物作用于 SGC-7901 细胞，通过 CCK8 法检
测猫人参醇提取物对胃癌细胞增殖的影响。 采用 DAPI荧光染色， 观察经 100mg/mL 猫人参醇提取物处理后 SGC-7901
细胞形态学的变化。 结果：CCK8 实验结果显示，与阴性对照组比较，经猫人参醇提取物 100、200mg/mL 作用 12、24、48h
后，SGC-7901 细胞存活率显著降低（P＜0.05）。 经过 100mg/ml 猫人参醇提取物处理 24h 后 SGC-7901 细胞贴壁疏松，密
度变低，细胞变扁长，形状不规则，经过 DAPI 染色后可见细胞核边缘残缺，染色质聚集，并伴有细胞核固缩或断裂现象
及出现凋亡小体。 结论：猫人参醇提取物对胃癌细胞 7901 增殖具有抑制作用，是具有治疗前景的抗肿瘤药物。
关键词 猫人参 植物提取物 胃癌 SGC-7901 细胞增殖 病理学
中图分类号 R282.710.5 文献标志码 A 文章编号 1672-397X（2015）10-0077-03
猫人参醇提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响
曾 志 1，2 王 霞 2 张 丹 2 魏睦新 1，2
（1.南京医科大学第一附属医院，江苏南京 210029； 2.南京医科大学中西医结合研究所，江苏南京 210029）
基金项目：江苏省中医药局资助项目（YB2015163，LZ13247）
实 验 研 究
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CO2孵育箱中过夜，至细胞完全贴壁，分别加入猫人
参醇提取物稀释液，浓度分别为 50、100、200mg/mL，
每组设 5 个复孔， 对照组加入相同体积培养基，置
于 37℃、5%CO2 饱和湿度下的培养箱内继续培养
12、24、48h[6]。终止培养前 1h，每孔加入 100μL CCK8
溶液，混匀，在细胞培养箱继续孵育 1h 后，弃上清，
加入 PBS，室温低速震荡 10min，待结晶物溶解后，
以酶标免疫测定仪测定波长 490nm 处的吸光度
（A），计算细胞存活率。
肿瘤细胞存活率（%）=（A 实验组/A 空白对照组）×100%
2.4 DAPI 染色观测肿瘤细胞核的形态学变化 将
对数期 SGC-7901 细胞接种于 6 孔板中，培养过夜，
待细胞贴壁生长良好， 加入终浓度为 100mg/mL 的
猫人参醇提取物， 对照组用等体积的 PBS 代替，
37℃、5%CO2培养 24h 后收集细胞， 等预冷的 PBS
洗涤后重悬于固定液中 30min， 之后将悬液低速离
心，收集沉淀，用同样缓冲溶液洗涤 2 次后将细胞
悬液滴在载玻片上， 用 2g/mL 的 DAPI 避光染色
15min，荧光显微镜下观察细胞核的形态学变化。
2.5 统计学方法 所有数据用 3 次独立实验的平
均值表示，应用 SPSS13.0 统计软件进行分析，实验
数据用（x±s）表示，计数资料采用 χ2检验，计量资料
组间比较采用方差分析。 组间两两比较采用单因素
方差分析（one-way ANOVA），以 P＜0.05 表示差异
有统计学意义。
3 实验结果
3.1 不同浓度猫人参醇提取物作用不同时间对肿
瘤细胞生存率的影响 见表 1。 100、200mg/mL 猫人
参醇提取物作用 12、24、48h后，肿瘤细胞 SGC-7901
存活率明显低于 PBS对照组 （P＜0.05），50mg/mL 猫
人参醇提取物降低肿瘤细胞存活率的效果不明显，
提示猫人参醇提取物对 SGC-7901 存在浓度—效应
关系。 随着作用时间的延长，猫人参醇提取物对肿
瘤细胞 SGC-7901增殖的抑制作用越强。
表 1 猫人参醇提取物对肿瘤细胞 SGC-7901 存活率的影响 %
作用时间（h）
48h12h 24h
88.41 87.54 86.37
51.11*60.89* 55.12*
44.64* 42.10* 37.18*
92.33 91.21 89.92
组别 样本数
猫人参醇提取物 50mg/mL 组 5
猫人参醇提取物 100mg/mL 组 5
猫人参醇提取物 200mg/mL 组 5
PBS 对照组 5
注：* 与 PBS 对照组比较，P＜0.05。
3.2 猫人参醇提取物对肿瘤细胞形态学的影响
由图 1 可见，对照组细胞生长旺盛，贴壁情况较好，
处于正常对数生长阶段； 而经过 100mg/mL 猫人参
醇提取物处理 24h 后细胞形态发生了较大变化，贴
壁疏松，密度变低，细胞变扁长，形状不规则。由图 2
可见， 经 DAPI 染色后，100mg/mL 猫人参醇提取物
处理 24h 后肿瘤细胞核边缘残缺， 染色质聚集，并
伴有细胞核固缩或断裂现象及出现凋亡小体，为细
胞凋亡的典型特征；对照组细胞的细胞核近似椭圆
形，边缘较清晰，染色均匀。
A 对照组 B 猫人参醇提取物处理组
图 1 各组 SGC-7901 细胞（×100）
A 对照组 B 猫人参醇提取物处理组
图 2 DAPI荧光染色后各组 SGC-7901 细胞形态（×200）
4 讨论
中医药对于肿瘤的治疗有其独特的优势，如减
轻放化疗毒副反应、治疗并发症等。 猫人参作为民
间及民族常用中药，文献报道其有一定的抗肿瘤作
用[7]。 浙江大学对猫人参有效成分研究发现，其中富
含人体所需的各种无机元素，根茎部位含有丰富的
氨基酸，特别是一些具有特殊生理活性的氨基酸含
量较高，猫人参乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部分得
24-三羟基-12 烯-齐墩果烷、 积雪草酸、 儿茶素、
isotachioside、表儿茶素、熊果酸、胡萝卜苷、β-谷甾
醇等有效成分。 文献报道从猫人参中提取的单体化
合物科罗索酸（CRA）在体外对人结肠癌细胞 HCT-8、
K-562 白血病细胞、人宫颈腺癌 Hela 细胞、人胃癌
细胞 SNU-601等具有明显抑制作用，能诱导细胞周
期阻滞，导致细胞凋亡[8-9]。
本研究采用人胃癌 SGC-7901 细胞为实验细胞
株进行体外实验，观察了猫人参醇提取物对其增殖
的抑制作用以及对其形态学的改变。 结果显示，猫
人参醇提取物对 SGC-7901 细胞的增殖有较明显的
抑制作用，且作用程度与浓度、作用时间相关。 DAPI
荧光检测到 SGC-7901 细胞在猫人参醇提取物的作
用下，形态学发生明显变化，出现细胞凋亡的典型
（下转第 82页）
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特征。 下一步拟从细胞凋亡角度进一步阐明胃癌中
医理论本质，揭示猫人参醇提取物对胃癌的作用机
制及有效靶点。
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第一作者：曾志（1989—），女，硕士研究生，中医
内科学专业中西医结合消化方向。
通讯作者：魏睦新，医学博士，教授，主任医师，
博士研究生导师。 weimuxin@njmu.edu.cn
收稿日期：2015-07-01
编辑：吴 宁
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第一作者：张怡洁（1991—），女，硕士研究生，中
医内科学专业。
通讯作者：赵毅，本科学历，教授，硕士生导师。
tuinazhao@163.com
收稿日期：2015-04-14
编辑：王沁凯 吕慰秋
（上接第 78页）
综 述
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