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Study on the effects of two kinds of cactus polysaccharide on erythrocyte immune function of S180 mice

2种仙人掌多糖对S180小鼠红细胞免疫功能影响的研究



全 文 :k„Œl ¬±§∏¦¨§¥¼ ²¯ ¬¨¦¤¦¬§¬±µ¤¥¥¬·¶q Μετηοδ : ׫¨ µ¤¥¥¬·¶º µ¨¨ µ¤±§²°¯ ¼ §¬√¬§¨§¬±·²tt ªµ²∏³¶}²¯ ¬¨¦¤¦¬§ªµ²∏³~¦²±·µ²¯ ªµ²∏³~·µ¨¤·° ±¨·
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[ Κεψ ωορδσ] ±¬±ª®¤¬¯¬±ª¬±­¨¦·¬²±~≥«¨ ±ª°¤¬¬±­¨¦·¬²±~²¯ ¬¨¦¤¦¬§~¤¦∏·¨ ∏¯±ª¬±­∏µ¼
≈责任编辑 方文贤 
u种仙人掌多糖对 ≥t{s小鼠红细胞免疫
功能影响的研究
季宇彬 3 o汲晨锋 o邹 翔 o高世勇
k哈尔滨商业大学 药物研究所 o黑龙江 哈尔滨 txsszyl
≈摘要  目的 }研究仙人掌多糖对 ≥t{s小鼠红细胞免疫功能的影响 ∀方法 }应用药理方法及化学试剂盒进行
测定 ∀结果 }仙人掌多糖可增加荷瘤小鼠肿瘤红细胞花环率 o提高红细胞 ≤v¥受体花环促进率 o降低红细胞 ≤v¥受体
花环抑制率 o提高红细胞表面唾液酸含量 ∀药用仙人掌多糖中剂量组及食用仙人掌多糖高剂量组效果显著k Π
s1stl ∀结论 }仙人掌多糖可以改善荷瘤小鼠红细胞免疫功能 o可能是其抗肿瘤作用的机制之一 ∀
≈关键词  仙人掌 ~多糖 ~免疫黏附 ~免疫因子 ~唾液酸
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxls|2sy|s2sw
≈收稿日期  ussw2s{2uw
≈基金项目  黑龙江省青年基金资助项目k±≤su≤wyl ~哈尔滨
市科技局攻关项目kussv„„y≤‘s|xl
≈通讯作者   3 季宇彬 oר¯ }kswxtl {w{yysst oƒ¤¬}kswxtl
{w{yysst o∞2°¤¬¯}≠…ƒ «µ¥¦∏q¨§∏q¦±
肿瘤的发生 !发展与机体免疫反应异常密切相
关 o而红细胞参与机体的多种免疫反应 o特别是天然
免疫 ∀近年来研究表明 o红细胞在抗肿瘤免疫反应中
有很多作用 ∀作为血循环中数量巨大的天然免疫细
胞类 o红细胞 ≤• t在补体系统及其他天然免疫物质协
同作用下 o对血循环中的癌细胞会发生快速天然免
疫 ∀红细胞内的多种氧化酶可与补体成分共同攻击
和杀伤癌细胞 o同时红细胞趋化因子受体可调控血循
环中的趋化因子等多种细胞因子 o对各部位的实体肿
瘤局部炎症反应也有调控作用 o红细胞作为天然免疫
细胞对适应性免疫细胞k× o…淋巴细胞l也有指导与
调控作用 o因此红细胞免疫功能的变化在肿瘤发生发
展及发病机制中具有极重要的作用 ∀研究表明药用 !
食用仙人掌多糖有抑瘤作用≈t ou  o作者就 u种多糖对
≥t{s小鼠红细胞免疫功能的影响进行了研究 ∀
1 材料
111 药物 药用仙人掌k仙人球属 Εχηινοπσισ)多
#s|y#
第 vs卷第 |期
ussx年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ |
¤¼oussx
糖 !食用仙人掌k墨西哥米邦塔 Οπυντια µιλπα „¯·¤l
多糖由哈尔滨商业大学药物研究所提供k白色粉末 o
水溶性好 o以阿拉伯糖为对照品测得含糖量分别为
wz1su h oxs1tu h l ~黄芪多糖注射液k黑龙江省生物
制药一厂 o批号 ussvsts{l ~生理盐水k哈尔滨制药六
厂 o批号 ussvsxttl ∀
112 试剂 戊二醛k上海医南药业有限公司l ~对
甲苯磺酰胺k°≥ƒlk≥¬ª°¤公司l ~蛋白定量试剂盒
k南京建成生物工程研究所l ~唾液酸试剂盒k南京建
成生物工程研究所l ~x °°²¯#pt ‘¤‹≤’v缓冲液 ~瑞
氏染液 ∀
113 仪器 离心机k北京医用离心机厂l ~低温高
速离心机k…∞≤Ž„‘o美国l ~电热恒温水浴锅k北京
长安科学仪器厂l ~zxt分光光度计k上海第三仪器
厂l ~÷≥° p x≤型生物显微镜k上海光学仪器厂l ∀
114 动物及瘤株 昆明种小鼠 o体重kus ? u1sl ªo
雄性 o由黑龙江中医药大学动物室提供 k动物质量
合格证号 }黑动字第 sststssv号l ~≥t{sk肉瘤l购自
哈尔滨医科大学附属第三医院动物研究所 ∀
2 方法
211 小鼠肿瘤模型的建立 无菌条件下取 ≥t{s腹
水癌细胞 o放入无菌容器内 o置冰块中保存 ∀另取少
量腹水 o置于加有肝素的试管中 o作为观察细胞形态
及细胞计数用 ∀癌细胞数为 |z h 以上方可使用 ∀
腹水用无菌生理盐水 tΒw稀释 o肿瘤细胞数为 x ≅
tsy#°pt o小鼠右前肢腋部皮下接种 ∀
212 分组 小鼠随机分为 |组 o每组 ts只 ∀分别
为荷瘤小鼠 n药物组 }食用仙人掌 !药用仙人掌多糖
高 !中 !低剂量组 ~荷瘤小鼠 n阳性药物组 }黄芪多糖
组 ~模型组 ~正常组 ∀
213 剂量及途径 实验组剂量为 uss otss oxs °ª#
®ªpt o黄芪多糖剂量为 tss °ª#®ªpt o阴性对照组给
相同体积的生理盐水 ∀于接种 uw «后开始腹腔注
射给药 o每日 t次 o连续 z §o于停药次日处死 ∀
214 u种仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫黏附
肿瘤细胞能力影响 取试管 o分别加 u °s1t h肝
素 o小鼠眼底取血 ov sssµ#°¬±pt离心 ts °¬±o弃上清
液 o用 tΒv比例的生理盐水洗涤 v次 o再以 tΒt比例
的生理盐水制成红细胞悬液kt ≅ ts{#°ptl待用 ∀
实验前取豚鼠新鲜血液 o于 u xss µ# °¬±pt离心 ts
°¬±o取上清 o低温存放待用 ∀无菌抽取 z §龄腹腔
肿瘤细胞 o以生理盐水洗涤 u次 o制成肿瘤细胞悬液
kt ≅ tsy#°ptl ∀取此悬液 s1t °加等体积豚鼠新
鲜血清 ovz ε 水浴 t «o洗涤离心 u次 o弃上清液 o成
为血清致敏癌细胞 o加 s1sx °红细胞悬液 ovz ε 水
浴 vs °¬±o加 s1sx h戊二醛固定 !涂片 !瑞氏染色 o肿
瘤细胞蓝色 o红细胞紫红色 o一个肿瘤细胞结合 u个
以上红细胞为肿瘤红细胞花环 ∀计数 tss个肿瘤细
胞 o计算肿瘤红细胞花环百分率 ∀
215 u种仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞膜表面唾
液酸含量的影响 在红细胞悬液中加入 x °°²¯#pt
‘¤‹≤’v缓冲溶液ktΒusl o同时加入对甲苯磺酰胺
k°≥ƒl ow ε 溶血 t «∀将所得红细胞溶液在 w ε 以
tu sss µ#°¬±pt离心 vs °¬±o弃上清液 ox °°²¯ #pt
‘¤‹≤’v缓冲液洗涤 v次 o最后悬浮在含 s1tx °²¯ #
pt‘¤≤Œ的 x °°²¯ #pt ‘¤‹≤’v缓冲液中 ∀用蛋白
试剂盒定量膜蛋白 o将样品最终稀释至 t °ª#°pt o
放置低温冰箱备用 ∀蛋白定量试剂盒定量后 o应用
唾液酸定量试剂盒于 xys ±°波长处测定 „值 ∀
216 u种仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫调节
因子活性的影响 取 v支试管 ∀第 ≠ !第  支试管
加入待测新鲜血清各 s1szx °o第 ≠管放 x{ ε 水浴
vs °¬±o第 管放置室温 o第 ≈管加 s1szx °生理盐
水 o然后每管再加入洗过 v次的正常人红细胞悬液
kt1ux ≅ tsz#°ptls1sx °混匀 o放入 vz ε 水浴 v
°¬±o加 x滴生理盐水 o混匀 o再加 u滴 s1ux h戊二醛
混匀 ∀从各试管中取出约 trv细胞悬液水平涂片 o
吹干 o加甲醛固定 o用瑞氏染液染色 o高倍镜观察 ∀
每管涂片都计数 tss个红细胞 o按各自标准 o算出花
环率 o按公式求出促进率和抑制率 ∀
• …≤2≤v¥受体花环促进率k• ƒ∞• l € kx{ ε 灭活血清组花
环率 p模型对照组花环率lr模型对照组花环率
• …≤2≤v¥受体花环抑制率k• ƒŒ• l € kx{ ε 灭活血清组花
环率 p室温血清组花环率lrx{ ε 灭活血清组花环率
217 数据处理 各组数据以 cξ ? σ 表示 o用
≥°≥≥tt1s软件处理 ∀样本比较采用方差检验 ∀
3 结果
311 u种仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫黏附
肿瘤细胞能力 !荷瘤小鼠红细胞膜表面唾液酸含量
的影响 与正常组小鼠比较 o荷瘤小鼠肿瘤红细胞
花环率及荷瘤小鼠红细胞表面唾液酸含量降低 ∀给
药后 o荷瘤小鼠肿瘤红细胞花环率明显高于模型组
kΠ s1stl o其中药用仙人掌多糖中剂量组花环率
最大kuy1uz h l o食用仙人掌多糖高剂量组花环率最
#t|y#
第 vs卷第 |期
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大kuz1yw h l o而且荷瘤小鼠红细胞表面唾液酸含量
高于模型组 o其中药用仙人掌多糖中剂量组增加显
著k Π s1stl o食用仙人掌多糖高剂量组增加显著
k Π s1st o表 tl ∀
表 t 药用 !食用仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞
免疫黏附肿瘤细胞能力 !红细胞膜表面唾液酸含量
的影响kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª#®ªpt
花环率r h Α
正常组 vx qxz ? v quu s qt{v ? s qssx
模型组 tw qtu ? u qyw s qs{z ? s qssu
黄芪多糖组 tss ux qxx ? v qssul s qs|x ? s qssv
药用仙人掌多糖组 uss uw quv ? u qy{ul s qs|| ? s qsswtl
tss uy quz ? u qvvul s qtsv ? s qssvul
xs uu q{{ ? v qssul s qs|v ? s qssu
食用仙人掌多糖组 uss uz qyw ? u qy{ul s qtsz ? s qssvul
tss ux qzt ? v qstul s qs|{ ? s qssvtl
xs uu q{z ? u q{vul s qs|u ? s qssu
注 }与模型组比较tl Π s1sx oul Π s1st k表 u同l
312 u种仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫调节
因子活性的影响 与正常组小鼠相比较 o荷瘤小鼠
红细胞 ≤v¥受体花环促进率下降 o≤v¥受体花环抑制
率升高 ∀经给药后 o这 u项指标均有改善 o≤v¥受体
花环促进率升高 o≤v¥受体花环抑制率降低 ∀其中药
用仙人掌多糖中剂量效果好k Π s1stl o食用仙人
掌多糖高剂量组效果好k Π s1st o表 ul ∀
4 讨论
红细胞的基本免疫功能是红细胞免疫黏附功
能 !促进中性粒细胞的吞噬功能和对淋巴细胞活性
的调控等 ∀红细胞在天然免疫反应中的最大作用是
识别抗原 !黏附运输抗原至巨噬细胞网状内皮系统 o
将抗原递交给巨噬细胞系统销毁 ∀其免疫功能主要
是通过 • …≤ 膜上所含 ≤v¥受体k≤• tl介导来实现 ∀
实验证实红细胞与肿瘤细胞黏附 o其原理是肿瘤细
胞可旁路激活和黏附补体 ≤v¥o而红细胞膜上的 ≤• t
能与肿瘤细胞表面的 ≤v¥相黏附 ∀ ≤• t通过免疫黏附
作用k• ≤Œ„l o使 • …≤得以发挥其携带清除免疫复合
物≈v  o识别储存抗原≈w  o促进吞噬细胞吞噬≈x 的功
能 ∀所以 ≤• t的活性降低必然会导致 • …≤对癌细胞
的调理促吞噬能力降低及循环免疫复合物清除障
碍 o由癌细胞产生的抗原物质形成的免疫复合物大
量增加 o可通过多种机制破坏宿主抗肿瘤免疫能力 o
从而使肿瘤细胞逃脱免疫系统的攻击 o癌细胞得以
生长繁殖 ∀郭峰等≈y oz 发现血清中除存在红细胞免
疫抑制因子外 o还存在着红细胞免疫黏附促进因子 ∀
在正常人血清中促进因子活性明显大于抑制因子 o
肿瘤患者抑制因子活性上升 o促进因子活性下降 o因
而认为机体内存在着红细胞免疫正负调节机制 o该
调节机制紊乱可能是某些疾病发生发展的原因 ∀刘
景田等人≈{ 已用中药多糖等对肿瘤患者的红细胞免
疫功能进行调控 o结果表明 o中药黄芪 !灵芝 !茯苓 !
当归 !天花粉等中药多糖能调节红细胞膜 ≤• t活性 o
增强红细胞免疫功能 ∀季宇彬≈| ots 还就羊栖菜多糖
对荷瘤小鼠的红细胞免疫作用进行了实验研究 o结
果表明 ≥ƒ°≥对其有促进作用 o进一步研究还表明
≥ƒ°≥不仅影响 • …≤ 膜上 ≤• t的数量 !活性 o而且影
响血清中 • …≤免疫调节因子的含量 !活性 o对 ≤• t的
调控系统有影响 ∀
表 u 药用 !食用仙人掌多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫
调节因子活性的影响kcξ ? σoν € tsl
组别
剂量
r°ª#®ªpt
• ƒ∞• • ƒŒ•
正常组 xz qxu ? { qxv uy q{| ? y quy
模型组 vu q{v ? x quu wx qxx ? tt q|v
黄芪多糖组 tss v| qtt ? x q{uul vy q|| ? | qz|ul
药用仙人掌多糖组 uss vz qvu ? { qtxtl ws q|{ ? x qwxtl
tss v{ q{s ? { q{wul v{ q|| ? z qt{ul
xs vw q{{ ? y qy| wv qxx ? { q|s
食用仙人掌多糖组 uss ws qws ? { qy{ul vz qu| ? y qwuul
tss v{ qyu ? ts qwstl v| qt{ ? y qystl
xs vx qzy ? y qtv wt q|x ? z qxt
实验结果表明 o模型组小鼠肿瘤红细胞花环率
与正常组比较明显降低 o提示荷瘤小鼠红细胞免疫
功能下降 o其机制考虑为肿瘤细胞分泌的抗原物质 o
如 ≤∞„ o„ƒ°等入血 o造成循环血液中的肿瘤抗原2
抗体2补体形成免疫复合物增高 o≤• t被消耗或被
≤Œ≤覆盖 o占位封闭 ≤• t o使 ≤v¥空位减少 o抑制其作
用而出现 • …≤2≤¤• 下降 ∀而仙人掌多糖可明显提
高荷瘤小鼠k≥t{sl肿瘤红细胞花环率 ∀其机理可能
是仙人掌多糖通过增强红细胞 ≤• t数量或提高其活
性 o消除了循环免疫复合物k≤Œ≤l o从而提高荷瘤小
鼠的红细胞免疫黏附肿瘤细胞的功能 o并表现出效
应细胞样作用 o起到一定的抗肿瘤作用 ∀仙人掌多
糖还可通过提高荷瘤小鼠红细胞 ≤• t花环促进率 o
降低花环抑制率的途径改善机体的免疫状态 o使红
细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力增强 ∀
#u|y#
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∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ |
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唾液酸是糖蛋白和糖脂糖链末端的残基 o广泛
分布在哺乳动物细胞膜表面k包括红细胞l o为细胞
表面负电荷的主要来源 o亦为胞膜受体的重要成分 o
参与细胞分化 !识别 !黏附等许多重要生理过程 o决
定着细胞膜的特征 ∀红细胞膜上的 ≤• t是红细胞发
挥免疫功能的重要物质基础 o唾液酸为其重要组份 o
其含量可影响红细胞表面电荷特性 !膜的运转过程 !
抗原决定簇的暴露 !免疫应答细胞活化 !膜表面受体
功能等因素 o唾液酸含量减少是机体免疫功能降低
的原因之一 ∀仙人掌多糖可能是通过提高红细胞膜
上唾液酸含量进而影响 ≤• t活性来达到增强机体免
疫力的效果 o这可能是仙人掌多糖抗肿瘤的作用机
制之一 ∀
≈参考文献 
≈t  汲晨锋 o邹 翔 o高世勇 o等 qv种仙人掌多糖抗肿瘤作用的
比较研究 q哈尔滨商业大学学报k自然科学版l oussw ouskul }
ttx q
≈u  汲晨锋 o邹 翔 o高世勇 o等 qv种仙人掌多糖对人肿瘤细胞
的作用 q哈尔滨商业大学学报k自然科学版l oussw ouskwl }
vzu q
≈v  ≤²µ±¤¦²©© …o ׫²°¶¨± … ° q °µ¬°¤·¨ µ¨¼·«µ²¦¼·¨ ¬°°∏±¨ ¦²°³¯ ¬¨
¦¯ ¤¨µ¬±ª °¨ ¦«¤±¬¶° q ϑ Χλιν Ινϖεστ , t|{v ozt }uvy q
≈w  Š¤µ√¨ ¼ ≥ qŒ°°∏±¬·¼ ¤±§·«¨ µ¨§2¥¯²²§¦¨¯¯ q Λανχετ , t|{u ot }uuv q
≈x  ƒ²µ¶¯¬§o‹ §¨o≥·¨±§¤«¯ ’ q∞µ¼·«µ²¦¼·¨ ±¨«¤±¦¨ °¨ ±·²©≤v¥2 °¨ §¬2
¤·¨§³«¤ª²¦¼·²¶¬¶¬± «∏°¤± ±¨ ∏·µ²³«¬¯¶ιν ϖιτρο }¤¦²°¥¬±¨ § ©¨©¨¦·²©
·«¨ µ¨¼·«µ²¦¼·¨ ¦²°³¯ °¨¨ ±·µ¨¦¨³·²µ¶≤• t ¤±§ µ¨¼·«µ²¦¼·¨ ¶¦¤√ ±¨ª¨µ¶
·²µ¨¤¦·¬√¨²¬¼ª¨ ± °¨ ·¤¥²¯¬·¨¶k• ’l q Ιµ µυνολογψ, t|{x oxx }|z q
≈y  郭 峰 o张延东 q血清对红细胞免疫黏附抑制作用的测定 q
上海免疫学杂志 ot|{z ozkvl }tvv q
≈z  郭 峰 o姚广金 o孟祥英 q血清中红细胞免疫粘附促进因子
的测定 q上海免疫学杂志 ot|{{ o{kyl }wws q
≈{  刘景田 o党小军 o张 洁 o等 q中药多糖调节红细胞膜 ≤v¥受
体活性作用的研究 q深圳中西医结合杂志 ot||| o|kxl }wx q
≈|  季宇彬 o张海滨 o刘中海 q羊栖菜多糖对荷瘤小鼠红细胞免
疫功能的影响 q中国海洋药物 ot||x otwkul }ts q
≈ts  季宇彬 o孔 琪 q羊栖菜多糖对 °v{{小鼠红细胞免疫促进作
用的机制研究 q中国海洋药物 ot||{ oyykul }tw q
Στυδψ ον τηε εφφεχτσ οφ τωο κινδσ οφ χαχτυσ πολψσαχχηαριδε
ον ερψτηροχψτειµ µ υνεφυνχτιον οφ Σt{s µιχε
Œ ≠∏2¥¬±oŒ ≤«¨ ±2©¨ ±ªo’˜ ÷¬¤±ªoŠ„’ ≥«¬2¼²±ª
( Ποστδοχταλ Ρεσεαρχη οφ τηε Ινστιτυτε οφ Ματερια Μεδιχα , Ηαρβιν Υνιϖερσιτψ οφ Χοµ µερχε , Ηαρβιν txsszy , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©·º² ®¬±§¶²© ¦¤¦·∏¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ²± µ¨¼·«µ²¦¼·¨ ¬°°∏±¨ ©∏±¦·¬²± ¬± ≥t{s °¬¦¨ q
Μετηοδ : ≤¯ ¤¶¶¬¦¤¯ ³«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ° ·¨«²§¤±§·¨¶·®¬·q Ρεσυλτ : ׫¨ ¦¤¦·∏¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¦²±·¨±·²© • …≤2≤¤• o • ƒ∞• o §¨2
¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¦²±·¨±·²© • ƒŒ• oµ¤¬¶¨§·«¨ ¦²±·¨±·²©¶¬¤¯¬¦¤¦¬§q„±§·«¨ ©¨©¨¦·²© ° §¨¬¤± §²¶¨ ªµ²∏³²© ° §¨¬¦¤¯ ¦¤¦·∏¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¤±§«¬ª«
§²¶¨ ªµ²∏³²© §¨¬¥¯¨¦¤¦·∏¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¬¶√ µ¨¼ µ¨°¤µ®¤¥¯ k¨ Π s1stl¦²°³¤µ¨§º¬·« °²§¨¯ªµ²∏³qΧονχλυσιον : ׫¨ ¦¤¦·∏¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
¬°³µ²√ §¨·«¨ µ¨¼·«µ²¦¼·¨©∏±¦·¬²± ²©·∏°²µ2°¬¦¨ oº«¬¦« °¤¼ ¥¨ ²±¨ ²©¤±·¬2·∏°²µ° ¦¨«¤±¬¶°¶q
[ Κεψ ωορδσ] ¦¤¦·∏¶~³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ~¬°°∏±¨ ¤§«¨¶¬²±~¬°°∏±¨ ©¤¦·²µ~¶¬¤¯¬¦¤¦¬§
≈责任编辑 方文贤 
5中国中药杂志6荣获中华人民共和国新闻出版署
组织的第三届国家期刊奖百种重点期刊
#v|y#
第 vs卷第 |期
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