全 文 ：人参皂苷 Ｒｈ２对食管癌细胞 Ｅｃａ１０９细胞周期的影响
李 丽，齐凤英，刘俊茹，左连富
（河北医科大学，河北 石家庄 ０５００１７）
［摘要］ 目的：探讨人参皂苷 Ｒｈ２（ｇｉｎｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２，ＧＳＲｈ２）对人食管癌细胞 Ｅｃａ１０９生长抑制及细胞周期的影
响。方法：应用ＭＴＴ法测定ＧＳＲｈ２对细胞的生长抑制作用，ＨＥ染色后光镜观察细胞形态变化，应用免疫细胞化学
和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞周期调控因子 ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ２），ｐ２１ＷＡＦ１基因蛋白表达，采用半定量
ＲＴＰＣＲ检测基因ｍＲＮＡ表达。结果：ＧＳＲｈ２对Ｅｃａ１０９细胞生长有抑制作用，并呈剂量、时间依赖性。２０μｇ·ｍＬ
－１
ＧＳＲｈ２作用１ｄ后细胞达到半数抑制，作用３ｄ的Ｅｃａ１０９细胞较对照细胞数目明显减少，细胞形态向正常细胞方
向逆转。细胞周期分析显示，随着ＧＳＲｈ２药物剂量的增加，Ｇ０／Ｇ１期细胞数逐渐增加，Ｓ和 Ｇ２／Ｍ期细胞数逐渐减
少，１０μｇ·ｍＬ
－１和２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２处理组和对照组比较有显著性差异。２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２处理细胞后，随着作
用时间延长，ｃｙｃｌｉｎＥ和ＣＤＫ２蛋白及其ｍＲＮＡ表达水平逐渐增高，而ｐ２１ＷＡＦ１蛋白及其ｍＲＮＡ表达水平逐渐降低。结
论：ＧＳＲｈ２可以将人食管癌细胞Ｅｃａ１０９阻滞于Ｇ０／Ｇ１期，诱导肿瘤细胞分化，并且通过影响细胞周期调控因子 ｃｙ
ｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１基因的表达抑制食管癌细胞的增殖。
［关键词］ 人参皂苷Ｒｈ２；食管癌；细胞周期；ｃｙｃｌｉｎＥ；ＣＤＫ２；ｐ２１ＷＡＦ１
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００５）２０１６１７０５
［收稿日期］ ２００５０１１０
［基金项目］ 河北省自然科学基金（３０１３５４）
［通讯作者］ 齐凤英，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６５７３４，Ｅｍａｉｌ：ｘｗｄｗ３０＠
ｈｏｔｍａｉｌｃｏｍ
人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ）为五加科草本植物的根，
是我国传统的名贵药材，具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐
射等多种生物学效应。研究证明人参抗肿瘤的活性
成分主要是人参皂苷［１］，通过对各种人参皂苷抗肿
瘤作用的比较发现，人参皂苷Ｒｈ２（ＧＳＲｈ２）抑制癌细
胞增殖作用的能力最强。细胞周期调控的紊乱是肿
瘤细胞异常增殖的重要前提，本研究通过体外培养
食管癌细胞 Ｅｃａ１０９，观察 ＧＳＲｈ２对其细胞周期及
细胞周期调控因子 ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２和 ｐ２１ＷＡＦ１基因表
达的影响，以探讨其抗癌的可能机制。
１ 材料和方法
１１ 材料
人食管癌细胞株 Ｅｃａ１０９由第四军医大学实验
中心提供，本实验室传代培养。ＧＳＲｈ２购自吉林大
学基础医学院有机化学教研室。ＲＰＭＩ１６４０培养基
（Ｇｉｂｃｏ公司），胎牛血清（天津灏洋生物公司）。ｃｙ
ｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１鼠抗人单克隆抗体（北京中山
生物技术有限公司）。ＥＣＬ增强化学发光试剂（Ｓａｎｔａ
Ｃｒｕｚ公司），聚偏二氟乙烯膜（ＰＶＤＦ，Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司）。
Ｔｒｉｚｏｌ试剂（Ｇｉｂｃｏ公司）。ＲＴＰＣＲ试剂（Ｐｒｏｍｅｇａ公
司）。
１２ 细胞培养
Ｅｃａ１０９细胞用含 １０％胎牛血清的 ＲＰＭＩ１６４０
培养基（含１００Ｕ·ｍＬ－１青霉素和０１ｍｇ·ｍＬ－１链霉
素），于３７℃，５％ＣＯ２恒温培养箱中培养，细胞呈单
层生长，达 ８０％左右融合时传代，细胞消化采用
０２５％的胰酶和００２％ＥＤＴＡ混合消化液。
１３ ＭＴＴ法
取对数生长期的 Ｅｃａ１０９细胞，用 ０２５％ 的胰
酶和００２％ＥＤＴＡ混合消化液消化，用含 １０％小牛
血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基配成单个细胞悬液，调整
细胞含量为１×１０４·ｍＬ－１后加于９６孔板，每孔体积
２００μＬ，每排 ６复孔。加盖，在 ３７℃，５％ ＣＯ２恒温
培养箱中培养２４ｈ，更换培养液，第２排加入０１％
溶剂，从第３排起各排加 ＧＳＲｈ２，终含量依次为４０，
２０，１０，５，２５μｇ·ｍＬ
－１，继续培养，分别于加药后２４，
４８，７２ｈ进行 ＭＴＴ测定：每孔加入 ５ｍｇ·ｍＬ－１ＭＴＴ
溶液２０μＬ，孵育４ｈ后，弃去培养液，每孔加入 ２００
μＬ二甲基亚砜，振荡１０ｍｉｎ后用酶联免检测仪（波
长４９０ｎｍ）测定各孔吸光度值。
１４ 细胞形态观察
·７１６１·
第３０卷第２０期
２００５年１０月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２０
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００５
６孔板中放置盖玻片，培养细胞爬片生长。分
别用５，１０，２０，４０μｇ·ｍＬ
－１的ＧＳＲｈ２处理细胞１，２，３
ｄ，与相应的对照细胞均经 ９５％乙醇原位固定，ＨＥ
染色，光镜下观察细胞形态变化。
１５ 流式细胞仪检测细胞周期
将ＧＳＲｈ２共设立０，５，１０，２０，４０μｇ·ｍＬ
－１５个药
物组和２４，４８，７２ｈ３个药物作用时间组，用１∶１的胰酶
和ＥＤＴＡ混合消化液消化细胞制成细胞悬液，１０００ｒ·
ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，生理盐水清洗，调整每份样品的细
胞数为１×１０６·ｍＬ－１，７０％冷乙醇固定过夜。采用碘
化丙啶（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）一步插入性 ＤＮＡ荧光染
色方法。每份样品中加入１ｍＬ染液（ＰＩ５０μｇ·ｍＬ
－１，
ＲＮＡ酶１０μｇ·ｍＬ
－１及１％ ＴｒｉｔｏｎＸ１００），于４℃染色
３０ｍｉｎ后上机检测，分析细胞周期。
１６ 免疫细胞化学检测基因蛋白表达
取对数生长期的细胞，用混合消化液消化，制成
单细胞悬液，接种于预先放置了盖玻片的６孔板中，
２４ｈ后更换培养液，分组加入不同含量的 ＧＳＲｈ２，
继续培养２４，４８，７２ｈ。取出盖玻片，用００１ｍｏｌ·Ｌ－１
ＰＢＳ（ｐＨ７４）洗 ２次后，冷丙酮固定 １０ｍｉｎ。３％
Ｈ２Ｏ２去除内源性过氧化物酶，５％羊血清封闭非特
异性抗原，加入小鼠抗人 ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２和 ｐ２１ＷＡＦ１单
克隆抗体（应用剂量为 １∶５０），４℃过夜；加入二抗，
室温３０ｍｉｎ；加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲合
素；ＤＡＢ反应显色；苏木素复染，中性树胶封片，光
镜观察阳性信号。
１７ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测基因蛋白表达
接种１０ｍＬ（１×１０６·ｍＬ－１）生长良好的 Ｅｃａ１０９
细胞于培养瓶中，ＲＰＭＩ１６４０培养基培养过夜，次日
给予终含量为 ２０μｇ·ｍＬ
－１的 ＧＳＲｈ２，继续培养 ２４，
４８，７２ｈ，弃去培养基，０１ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ（ｐＨ７４）冲
洗，加入２００μＬＲＩＰＡ细胞裂解液（１％ＳＤＳ，１％Ｔｒｉ
ｔｏｎＸ１００，５％脱氧胆酸钠，１００ｍｇ·Ｌ－１苯甲基磺酰
氟等），细胞刮子收集细胞，冰浴 ３０ｍｉｎ，１２０００ｒ·
ｍｉｎ－１，４℃离心２０ｍｉｎ，吸取上清液，Ｌｏｗｒｙ法测定蛋
白浓度。１２％十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电
泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）后转移至 ＰＶＤＦ膜。５％ 脱脂奶粉封
闭ＰＶＤＦ膜２ｈ，加入 ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１一抗（１∶
２００稀释），４℃过夜。洗膜后加辣根过氧化物酶标
记的二抗（１∶５０００稀释），３７℃孵育１５ｈ，洗膜后加
ＥＣＬ（增强化学发光）试剂，将ＰＶＤＦ膜放入Ｘ光片暗
盒，压片，显影，定影。应用 ＬａｂＷｏｒｋｓ４５分析软件
对Ｗｅｓｔｅｒｎ条带进行定量分析，以βａｃｔｉｎ作为内对
照，确定杂交条带的相对吸光度值。
１８ 半定量ＲＴＰＣＲ检测基因ｍＲＮＡ的表达
接种１０ｍＬ（１×１０６·ｍＬ－１）生长良好的 Ｅｃａ１０９
细胞于培养瓶中，ＲＰＭＩ１６４０培养基培养过夜，次日
给予终含量为 ２０μｇ·ｍＬ
－１的 ＧＳＲｈ２，继续培养 ２４，
４８，７２ｈ，弃去培养基，冷０１ｍｏｌ·Ｌ－１的ＴＢＳ冲洗，以
Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取总ＲＮＡ，用紫外分光光度计测定其纯
度（Ａ２６０／Ａ２８０≥１８）并定量，在 １％琼脂糖凝胶上电
泳验证 ＲＮＡ完整性。在逆转录酶（ＡＭＶ）催化下合
成ｃＤＮＡ，以适量ｃＤＮＡ为模板在 ＴａｑＤＮＡ聚合酶催
化下进行 ＰＣＲ扩增。扩增体积 ２５μＬ，所用引物均
由上海生工生物公司合成（见表 １），以管家基因磷
酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）扩增产量为内参照。扩增
条件为：９５℃ ５ｍｉｎ，９５℃ １ｍｉｎ，相应温度退火 １
ｍｉｎ，７２℃１ｍｉｎ进行３０个循环，７２℃延伸１０ｍｉｎ。
将ＰＣＲ产物在２％琼脂糖凝胶中电泳，置于凝胶图
像分析系统（ＵＶＰ公司，美国）进行吸光度扫描，应用
ＬａｂＷｏｒｋｓ４５分析软件进行定量分析，用目的基因
的吸光度值与管家基因 ＧＡＰＤＨ吸光度的比值代表
目的基因的相对表达含量。
１９ 统计学处理
应用ＳＰＳＳ１１０统计软件，与对照组比较采用 ｔ
检验，Ｐ＜００５具有统计学意义。
表１ ＰＣＲ扩增所用引物
基因 引物序列 退火温度／℃ 产物长度／ｂｐ
ｃｙｃｌｉｎＥ ｓｅｎｓｅ ５’ＡＴＡＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＧＡＣＡＧ３’ ５５ ３０１
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ５ＴＧＣＣＡＴＣＣＡＣＡＧＡＡＡＴＡＣＴＴ３’
ＣＤＫ２ ｓｅｎｓｅ ５’ＧＣＴＴＴＣＴＧＣＣＡＴＴＣＴＣＡＴＣＧ３’ ５２８ ３１７
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ５’ＧＴＣＣＣＣＡＧＡＧＴＣＣＧＡＡＡＧＡＴ３’
Ｃｐ２１ＷＡＦ１ ｓｅｎｓｅ ５’ＣＡＧＧＧＧＡＣＡＧＣＡＧＡＧＧＡＡＧＡ３’ ５８ ３３５
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ５’ＧＧＧＣＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＴＧＴＡＣ３’
ＧＡＰＤＨ ｓｅｎｓｅ ５’ＡＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴＣＧＴＡＴＴＧ３’ ５２ ４１４
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ５’ＴＧＡＴＣＴＴＧＡＧＧＣＴＧＴＴＧＴＣ３’
·８１６１·
第３０卷第２０期
２００５年１０月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２０
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００５
２ 结果
２１ ＭＴＴ法测定细胞生长抑制（图１）
ＭＴＴ法测定反映活细胞量。结果显示 ＧＳＲｈ２
对Ｅｃａ１０９细胞生长有抑制作用，并呈剂量、时间依
赖性，高剂量组的抑制作用随着时间的积累要大于
低剂量组，溶剂对药物作用没有明显影响。提示
１０，２０，４０μｇ·ｍＬ
－１为有效药物剂量，但 ４０μｇ·ｍＬ
－１
时已经发生细胞毒作用。按照细胞生长抑制率计算
公式：
生长抑制率（％）＝（１－实验组 Ａ／对照组 Ａ）×１００％
ＧＳＲｈ２对细胞生长的半数抑制剂量（ＩＣ５０）为
１９３μｇ·ｍＬ
－１，故选取２０μｇ·ｍＬ
－１（ＩＣ５０的近似值）分
别处理细胞１，２，３ｄ，进行相关检测。
图１ ＧＳＲｈ２对Ｅｃａ１０９细胞的生长抑制作用
２２ ＧＳＲｈ２对细胞形态影响
经５，１０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２处理后，与不加药的对
照组比较，细胞形态变化不明显。２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳ
Ｒｈ２处理３ｄ的Ｅｃａ１０９细胞较对照细胞数目明显减
少，细胞成片生长的趋势减弱，互相分散，细胞分裂
相明显减少。部分细胞由原来的多角形转变为长梭
形，细胞轮廓变得清晰，细胞核变小，核仁数目减少，
染色质凝集，胞质浓缩，核质比例降低。而经４０μｇ·
ｍＬ－１处理的细胞出现坏死，细胞轮廓消失，核崩解。
２３ ＧＳＲｈ２作用后细胞周期变化
ＧＳＲｈ２处理２４ｈ后收集细胞，用流式细胞仪检
测各期细胞数。随着药物剂量的增加，Ｅｃａ１０９细胞
在细胞周期中的分布发生了明显的变化。Ｇ０／Ｇ１期
细胞数逐渐增加，Ｓ和Ｇ２／Ｍ期细胞数逐渐减少。但
５μｇ·ｍＬ
－１剂量组与对照组无显著性差异，１０，２０μｇ·
ｍＬ－１剂量组与对照组比较差异具有统计学意义
（Ｐ＜００１和 Ｐ＜００５）。
２４ 免疫细胞化学检测结果
２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２对 Ｅｃａ１０９细胞分别作用
２４，４８，７２ｈ后，观察细胞周期调控因子ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２
和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白表达情况，和不加药对照组进行比
较。结果显示，ｃｙｃｌｉｎＥ和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白阳性表达物质
主要位于细胞核，胞质轻度着色；ＣＤＫ２蛋白阳性物
质主要位于细胞质，少数有核着色。随着药物作用
时间的延长，蛋白表达变化渐趋明显，尤其在药物作
用７２ｈ后，ｃｙｃｌｉｎＥ和ＣＤＫ２蛋白表达水平明显降低，
而ｐ２１ＷＡＦ１蛋白表达水平有所增高。
表２ ＧＳＲｈ２对Ｅｃａ１０９细胞周期的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别
剂量
／μｇ·ｍＬ
－１
Ｇ０／Ｇ１
／％
Ｓ
／％
Ｇ２／Ｍ
／％
对照组 ４０７０±０９０ ３６４８±０７１ ２２８２±１４２
ＧＳＲｈ２ ５ ４２２７±０７７ ３６１３±０３２ ２１５７±１０２
１０ ４５３５±０８２１） ３５５０±０４１２） １９１５±１１５１）
２０ ５４３２±１２９１） ３２１８±０４８１） １３６７±１３９１）
注：与对照组比１）Ｐ＜００１，２）Ｐ＜００５
２５ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测基因蛋白表达（图２）
２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２对 Ｅｃａ１０９细胞分别作用
２４，４８，７２ｈ后，检测 ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１蛋白表达
情况，与不加药的对照组进行比较。结果显示，药物
作用 ２４ｈ后蛋白表达发生明显变化，ｃｙｃｌｉｎＥ和
ＣＤＫ２蛋白表达水平降低（ｃｙｃｌｉｎＥ变化更为明显），
ｐ２１ＷＡＦ１蛋白表达水平增高，而且随着药物作用时间
的延长，有明显的时效关系。
图２ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２处理细胞
后ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１蛋白表达
２６ ＲＴＰＣＲ检测基因ｍＲＮＡ表达（图３）
２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２处理Ｅｃａ１０９细胞２４，４８，７２
ｈ后，分别检测 ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１基因 ｍＲＮＡ的
表达情况，与不加药的对照组进行比较。结果显示，
药物作用 ２４ｈ后 ｍＲＮＡ表达发生了明显变化，ｃｙ
ｃｌｉｎＥ和ＣＤＫ２ｍＲＮＡ表达水平皆降低，ｐ２１ＷＡＦ１ｍＲＮＡ
·９１６１·
第３０卷第２０期
２００５年１０月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２０
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００５
图３ 半定量ＲＴＰＣＲ检测２０μｇ·ｍＬ
－１
ＧＳＲｈ２处理后ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１ｍＲＮＡ表达
水平增高。药物作用４８ｈ和２４ｈ差别不显著，但作
用７２ｈ后，ｍＲＮＡ表达又进一步发生了变化。
３ 讨论
ＧＳＲｈ２是由人参中提取的天然活性成分，属于
二醇组皂苷。各国学者先后通过多种体内外实验证
实，ＧＳＲｈ２可以通过改变细胞周期的时相性分布，
诱导细胞分化或凋亡，从而抑制多种肿瘤细胞的增
殖与生长［２８］，是一种有应用前景的癌细胞分化诱导
剂。ＧＳＲｈ２在食管癌细胞中的研究还未见报道，本
研究通过体外培养食管癌细胞 Ｅｃａ１０９，观察了 ＧＳ
Ｒｈ２对其细胞周期的影响，以及细胞周期调控因子
ｃｙｃｌｉｎＥ、ＣＤＫ２和ｐ２１ＷＡＦ１基因表达水平的变化，以探
讨其抗癌的可能机制。
本研究结果显示，ＧＳＲｈ２能够抑制食管癌细胞
Ｅｃａ１０９的增殖，并且有时间和剂量依赖性。２０μｇ·
ｍＬ－１ＧＳＲｈ２作用１ｄ时，细胞的生长抑制率可以达
到５０％；作用３ｄ后，食管癌细胞生长方式和形态变
化开始明显，癌细胞的恶性表型发生逆转。４０μｇ·
ｍＬ－１ＧＳＲｈ２处理后，发生了明显的细胞毒作用，作
用３ｄ后导致细胞死亡。说明 ２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２
对食管癌细胞Ｅｃａ１０９具有诱导分化作用。
ＧＳＲｈ２影响 Ｅｃａ１０９细胞周期时相性分布，随
着药物剂量的增加，Ｇ０／Ｇ１期细胞数逐渐增加，Ｓ和
Ｇ２／Ｍ期细胞数逐渐减少。说明 ＧＳＲｈ２可以使食管
癌细胞阻滞在Ｇ０／Ｇ１期，不再增殖而进行 ＤＮＡ修复
和细胞分化，通过阻止受损细胞进入 Ｓ期进行 ＤＮＡ
的合成而抑制癌细胞的过度增殖，诱导其分化。
Ｇ１期检查点正负向调控基因的功能异常是肿
瘤细胞发生异常增殖的机制之一。ｃｙｃｌｉｎＥ是细胞Ｇ１
期到Ｓ期转换过程中基本的和广泛的调节因子［９］，
当细胞受到生长信号的刺激时，ｃｙｃｌｉｎＥ表达上调，
与ＣＤＫ２（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ２）结合形成活化的
ｃｙｃｌｉｎＥＣＤＫ２复合体，导致 ｐＲｂ（视网膜母细胞瘤基
因蛋白）磷酸化，释放出重要的核转录因子 Ｅ２Ｆ，从
而引起一系列与 Ｓ期有关的靶分子的表达，促使细
胞完成 ＤＮＡ复制，促进细胞增殖。ｐ２１ＷＡＦ１是 ＣＫＩｓ
（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）中的 Ｃｉｐ／Ｋｉｐ家族
成员之一，在正常细胞中，能与ｃｙｃｌｉｎ／ＣＤＫ复合物结
合并抑制其活性。ｐ２１ＷＡＦ１基因表达降低或失活可以
促使细胞发生转化。本研究表明 ＧＳＲｈ２将细胞阻
滞于Ｇ０／Ｇ１期的同时，还可以影响细胞周期调控因
子的表达，使 Ｇ０／Ｇ１期正调控基因 ｃｙｃｌｉｎＥ和 ＣＤＫ２
表达减少，负调控基因 ｐ２１ＷＡＦ１表达增加，从而抑制
食管癌细胞增殖，诱导其分化。ＧＳＲｈ２可以将 Ｅｃａ
１０９细胞阻滞于 Ｇ０／Ｇ１期，诱导细胞分化，并且影响
细胞周期调控因子的表达，这是其抗肿瘤的可能机
制之一。
［参考文献］
［１］ ＹｕｎＴＫ，ＬｅｅＹＳ，ＬｅｅＹＨ，ｅｔａｌＡｎｔｉｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｅｆｅｃｔｏｆＰａｎａｘ
ｇｉｎｓｅｎｇＣＡｍｅｙｅｒａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓＪＫｏｒｅａｎ
ＭｅｄＳｃｉ，２００１，１６（ｓｕｐｐｌ）：Ｓ６
［２］ ＺｅｎｇＸＬ，ＴｕＺＧＩｎｖｉｔｒｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｙｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ
Ｒｈ２ｉｎＳＭＭＣ７７２１ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｉｎｅＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ，
２００３，９３（６）：２７５
［３］ ＫｉｍＹＳ，ＫｉｍＤＳ，ＫｉｍＳＩＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２ａｎｄＲｈ３ｉｎｄｕｃｅｄｉｆｅｒ
ｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＨＬ６０ｃｅｌｓｉｎｔｏｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ：ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ
ＣｉｓｏｆｏｒｍｓｄｕｒｉｎｇｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｙｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２ＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌ
Ｂｉｏｌ，１９９８，３０（３）：３２７
［４］ ＺｈｕＪＨ，ＴａｋｅｓｈｉｔａＴ，ＫｉｔａｇａｗａＩ，ｅｔａｌＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｏｆｓｉｓｔｅｒｃｈｒｏｍａｔｉｄｅｘｃｈａｎｇｅｓｂｙｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２
ｉｎｈｕｍａｎｂｌｏｏｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９５，５５（６）：１２２１
［５］ ＰａｒｋＪＡ，ＬｅｅＫＹ，ＯｈＹＪ，ｅｔａｌＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ３ｐｒｏｔｅａｓｅ
ｖｉａａＢｃｌ２ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅｐａｔｈｗａｙｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２
ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓＣａｎｃｅｒＬｅｔ，１９９７，１２１（１）：７３
［６］ ＮａｋａｔａＨ，ＫｉｋｕｃｈｉＹ，ＴｏｄｅＴ，ｅｔａｌＳｈｉｎｏｍｉｙａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆ
ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２ｏｎｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅｂｅａｒｉｎｇｈｕｍａｎｏｖａｒｉａｎ
ｃａｎｃｅｒｃｅｌｓＪＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９８，８９（７）：７３３
［７］ 夏丽娟，韩 锐 人参皂甙Ｒｈ２体外对小鼠黑色素瘤细胞的分
化诱导作用 药学学报，１９９６，３１（１０）：７４２
·０２６１·
第３０卷第２０期
２００５年１０月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２０
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００５
［８］ ＬｅｅＫＹ，ＰａｒｋＪＡ，ＣｈｕｎｇＥ，ｅｔａｌＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２ｂｌｏｃｋｓｔｈｅｃｅｌ
ｃｙｃｌｅｏｆＳＫＨＥＰ１ｃｅｌｓａｔｔｈｅＧ１／Ｓｂｏｕｎｄａｒｙｂｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｄｕｃｉｎｇ
ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ２７ｋｉｐ１ＣａｎｃｅｒＬｅｔ，１９９６，１１０（１２）：１９３
［９］ ＦａｒｌｅｙＪ，ＳｍｉｔｈＬＭ，ＤａｒｃｙＫＭ，ｅｔａｌＣｙｃｌｉｎＥｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓａｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔｐｒｅｄｉｃｔｏｒｏｆｓｕｒｖｉｖａｌｉｎａｄｖａｎｃｅｄ，ｓｕｂｏｐｔｉｍａｌｙｄｅｂｕｌｋｅｄｏｖａｒｉ
ａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃａｎｃｅｒｓ：ＡｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃｏｎｃｏｌｏｇｙｇｒｏｕｐｓｔｕｄｙＣａｎｃｅｒＲｅｓ，
２００３，６３（６）：１２３５
ＥｆｅｃｔｓｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２（ＧＳＲｈ２）ｏｎｃｅｌｃｙｃｌｅｏｆ
Ｅｃａ１０９ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｉｎｅ
ＬＩＬｉ，ＱＩＦｅｎｇｙｉｎｇ，ＬＩＵＪｕｎｒｕ，ＺＵＯＬｉａｎｆｕ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２（ＧＳＲｈ２）ｏｎｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｎｄｃｅｌｃｙｃｌｅｏｆＥｃａ１０９
ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｉｎｅｉｎｃｕｌｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆＧＳＲｈ２ｏｎｃｅｌｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙＣｅｌｃｙｃｌｅｗａｓ
ａｎａｌｙｚｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）ＣｅｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙａｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｆｔｅｒＨＥｓｔａｉｎｉｎｇＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｃｙｃｌｅ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２，ｐ２１ＷＡＦ１）ｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＴｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙ
ｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴＰＣＲＲｅｓｕｌｔ：ＧＳＲｈ２ｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＥｃａ１０９ｃｅｌｓｉｎｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒｓＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ
ｗａｓａｂｏｕｔ５０％ａｆｔｅｒ１ｄａｙｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２ｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅｍａｔｕｒｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｒｅ
ｖｅｒｓｉｏｎＷｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｄｏｓｅｏｆＧＳＲｈ２ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｃｅｌｎｕｍｂｅｒｏｆＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｅｒｅａｓｉｔｄｅｃｒｅａｓｅｄａｔＳａｎｄＧ２／Ｍｐｈａｓｅ
Ｔｈｅｒｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎ１０，２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２ｇｒｏｕｐｓａｎｄｔｈｅｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｕｔＧＳＲｈ２ｔｒｅａｔｅｍｅｎｔＡｆｔｅｒｔｒｅａｔ
ｉｎｇｃｅｌｓｂｙ２０μｇ·ｍＬ
－１ＧＳＲｈ２ｆｏｒ１，２，３ｄａｙｓｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｙ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｏｔｈｃｙｃｌｉｎＥａｎｄＣＤＫ２ｒｅｄｕｃｅｄ，ｗｈｉｌｅｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ２１ＷＡＦ１ｅｎｈａｎｃｅｄｇｒａｄｕａｌｙＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＧＳＲｈ２ｃｏｕｌｄａｒｅｓｔＥｃａ１０９ｃｅｌｓａｔＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅａｎｄｉｎｄｕｃｅｃｅｌｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｔｅｎｄ
ｉｎｇｔｏｎｏｒｍａｌＦｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ＧＳＲｈ２ｈａｄａｎｅｆｅｃｔｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｃｙｃｌｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ（ｃｙｃｌｉｎＥ，ＣＤＫ２ａｎｄｐ２１ＷＡＦ１）ｔｏｉｎｈｉｂｉｔＥｃａ１０９
ｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｈ２；Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｃｅｌｃｙｃｌｅ；ｃｙｃｌｉｎＥ；ＣＤＫ２；ｐ２１ＷＡＦ１
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００５０２２２
［通讯作者］ 郑树，Ｔｅｌ：（０５７１）８７２１４４０４，Ｆａｘ：（０５７１）８７２１４４０４，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｅｎｇｓｈｕ＠ｚｊｕｅｄｕｃｎ
康莱特注射液对肺癌 Ａ５４９细胞环氧化酶
作用的研究
董庆华，钟 献，郑 树
（浙江大学 医学院 附属第二医院 肿瘤研究所，浙江 杭州 ３１０００９）
［摘要］ 目的：研究康莱特注射液对 ＩＬ１β刺激后 Ａ５４９肺癌细胞环氧化酶（ＣＯＸ）表达的抑制作用。方法：用
ＲＴＰＣＲ方法检测１００～３００μＬ·ｍＬ
－１不同含量康莱特注射液作用前后 Ａ５４９肺癌细胞 ＣＯＸ１，ＣＯＸ２ｍＲＮＡ表达变
化，同时用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＯＸ２蛋白表达变化。结果：Ａ５４９细胞在康莱特注射液作用前后 ＣＯＸ１的 ｍＲＮＡ表达
无明显变化，但ＣＯＸ２的ｍＲＮＡ和蛋白表达随着药物作用浓度增加而逐渐降低。结论：康莱特注射液能选择性抑
制Ａ５４９肺癌细胞ＣＯＸ２表达。
［关键词］ 康莱特注射液；环氧化酶；肺癌
·１２６１·
第３０卷第２０期
２００５年１０月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２０
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００５