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Pharmacokinetic study of intraperitoneal chemotherapy with HCPT

羟基喜树碱腹腔内给药的药代动力学研究



全 文 :羟基喜树碱腹腔内给药的药代动力学研究
叶 孟,林晓霞,潘宏铭,李 楠,楼 芳,金 伟,郑 宇,吴金民
(浙江大学 附属邵逸夫医院,浙江 杭州 310016)
[摘要] 目的:研究羟基喜树碱(HCPT)腹腔内给药的药代动力学特点。方法:比格犬6只,HCPT剂量2mg·
kg-1,溶于50mL生理盐水中,先腹腔内注入250mL生理盐水,随后用恒速泵快速注入HCPT;随后按不同时间点抽
取血液和腹腔液,各样本用高效液相色谱分析药物浓度,并用 3p87软件包计算药代动力学参数。结果:腹腔液
HCPT的AUC与外周静脉血及门静脉血AUC之间的比值分别为45∶1和37∶1,P值均小于0001;腹腔液HCPT浓度
明显高于外周静脉给药组的腹腔液浓度,峰值为604倍,AUC为21倍。P值均小于0001。结论:腹腔内给药其药
代动力学具有明显优越性,能维持腹腔液和门静脉血更高更持久的血药浓度,因而有利于化疗药物发挥更大的生
物学效应,值得临床应用。
[关键词] 羟基喜树碱;药代动力学;腹腔内化疗;色谱法
[中图分类号]R2855 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2005)20161003
[收稿日期] 2004121
[通讯作者] 潘宏铭,Tel:(0571)860900733121,Email:drl606
@hotmail.com
喜树碱(camptothecaCPT)是从我国特有的植物
喜树的树干、树皮和果实中提取的一种具有抗癌活
性的天然生物碱,自 1969年美国学者 Wal等从喜
树中分离喜树碱并首先报道了它对小鼠白血病
L1210细胞株抑制作用以来,国外已成功合成了数
个喜树碱类药物(CPTs),如拓扑替康(topotecan),伊
立替康(CPT11)及9AC等,已广泛应用于临床[1,2]。
羟基喜树碱(10HydroxycamptothecinHCPT)1978年由
上海药物研究所研制成功,在喜树碱基本环 A环上
9位的H被OH所取代而成,体内外的试验研究已
表明HCPT比CPT具有较强的抗肿瘤作用,较宽的
抗瘤谱和较低的毒性[3]。本研究旨在探讨羟基喜树
碱腹腔内给药药代动力学特点,为临床合理用药提
供科学依据。
1 材料与方法
11 动物 比格犬6只,体重(1073±182)kg,雄
性,购置于浙江大学实验动物中心。
12 药物 HCPT标准品及注射液 5mg·mL-1(批
号020502)由湖北黄石飞云制药有限公司提供。甲
醇和乙腈为色谱纯试剂,购置于美国 TEDIA公司;
醋酸铵和磷酸三铵为分析纯试剂,购置于上海生物
工程有限公司。
13 高效液相色谱仪 HPSeries1100高效液相色
谱仪。
14 给药方法 所有动物取仰卧位,由25%硫喷
妥钠1mL·kg-1腹腔麻醉后,经腹正中纵切口开腹,
游离门静脉,置入一次性中心静脉管(CVP),并置另
一CVP管于右下腹腔内,均结扎固定后关腹,再置
入另一 CVP于右侧股静脉中,结扎固定,三根 CVP
均用肝素钠封管。
HCPT剂量2mg·kg-1,溶于50mL生理盐水中,
先腹腔内注入250mL生理盐水,随后用恒速泵快速
注入HCPT。
15 HCPT血样本收集 在给药前、给药后 2,15,
30min,1,2,4,6,8,12h于各 CVP管中抽取1mL血
液和腹腔液标本分别置于肝素化试管中,并立即
2000r·min-1离心10min,取血浆-20℃保存待测。
16 HCPT浓度的测定方法 采用 HPLC荧光
法[4,5],流动相为醋酸铵(pH64)乙腈(80∶20),再
加入磷酸三乙胺使其最终浓度为5mmol·L-1;流速
08mL·min-1,柱温为室温,发射波长 550nm,激发
波长363nm,衰减20mV。
17 标准曲线制定 称取 HCPT2mg,溶于 DMSO
中,再用空白血浆分别稀释成 2ng·mL-1~1mg·
mL-1不等。取200μL样品加入200μL冷甲醇乙腈
(50∶50),混匀5min,12000r·min-1离心 10min,上
清过滤后取 20μL直接进样。以峰面积为纵坐标,
浓度为横坐标作标准曲线。
18 标本浓度测定 方法同标准曲线制定操作,根
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中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
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据峰面积由标准曲线计算血浆HCPT浓度。
19 药代动力学参数计算 应用中国药理学会
3p87软件包,计算药代动力学参数。
110 统计学处理 实验数据用珋x±s表示,用
SPSS100软件作ANOVA检验。
2 结果
21 标准曲线 按选定的色谱条件测得空白血清
和血清样本,HCPT保留时间为 10min,空白血清在
其附近没有吸收峰,将HCPT色谱峰面积为纵坐标,
相应的HCPT浓度为横坐标,HCPT血浆的标准曲线
为 Y=02537X+13768,R2=0993;HCPT腹腔液
的标准曲线为 Y=02466X+47644,R2=09962。
22 回收率和重现率 取5个不同浓度的标准液
溶于血浆中,其平均回收率为(968±47)%,日内
RSD<5%,日间 RSD<10%。因此用高效液相荧光
法测定HCPT在血浆和腹腔液中浓度的回收率、重
现率和线性范围可满足药代动力学的要求。
23 HCPT在犬体内药代动力学参数 将所测得各
时间点的 HCPT的峰面积代入标准曲线得到浓度,
并计算各时间点的平均浓度,药物浓度时间的数据
输入3p87软件。参数见表1。
腹腔液HCPT浓度在腹腔给药结束后即刻、门
静脉血HCPT浓度在给药后15min、外周血 HCPT浓
度在给药后30min时达到峰值。HCPT在腹腔液中
浓度最高,门静脉血中次之,外周静脉血中最低。腹
腔液中的峰浓度分别是门静脉血和外周静脉血的
126倍和80倍,腹腔液 HCPT的 AUC为49768mg·
L-1·h-1,外周静脉血HCPT的AUC为1119mg·L-1
·h-1,门静脉HCPT的AUC为1334mg·L-1·h-1,腹
腔液HCPT的 AUC与外周静脉血及门静脉血 AUC
之间的比值分别为45∶1和37∶1,P均小于 0001。
见表2。
表1 不同时间点HCPT含量
组别 HCPT
含量/mg·L-1
2min 15min 30min 1h 2h
腹腔液 39.9661±21.0388 28.3235±8.4264 22.3697±7.8378 14.1175±4.1441 6.2563±1.9524
门静脉血 0.08169±0.0318 0.3164±0.1425 0.2350±0.0507 0.2436±0.0856 0.1418±0.0746
外周静脉血 0.0409±0.0133 0.1861±0.0888 0.4951±0.724 0
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.2523±0.1002 0.1729±0.0674
组别 HCPT
含量/mg·L-1
4h 6h 8h 12h
腹腔液 2.0935±1.2511 0.6882±0.6769 0.2246±0.2083 0.0616±0.2931
门静脉血 0.0963±0.0554 0.0620±0.0205 0.0478±0.0154 0.0485±0.0143
外周静脉血 0.0931±0.0363 0.0533±0.0176 0.0330±0.0188 0.0312±0.0291
表2 HCPT药代动力学参数
参数 外周静脉血 门静脉血 腹腔液
Ke 0.009 0.0054 0.021
Ket1/2 122.68 150.84 41.1
Kα 0.054 0.123
Kαt1/2 13.9 6.54
Tp 46.04 29.58
AUC 1.119 1.333 49.768
3 讨论
喜树碱类药物(CPTs)包括CPT11,TPT和HCPT,
现已发现 CPTs属于拓扑异构酶(Topo1)抑制剂,
CPTs可干扰 Topo1催化的 DNA切断连接反应,形
成稳定的酶与 DNA断裂复合物,使断裂的 DNA单
链联接受阻,从而阻止 DNA复制,因此具有广谱抗
癌作用,为作用于S期的细胞周期特异性药物,国外
对CPT11和TPT已进行了较为详细的药代动力学和
药效动力学研究,现已被广泛应用于临床,主要用于
消化道肿瘤、膀胱癌、白血病等[6,7]。而 HCPT为我
国独自研究的药物,虽已用于临床[3,8],但关于本药
腹腔内给药的药代动力学特点,国内外尚未见报道。
腹腔内化疗广泛应用于临床始于 1978年[9]。
由于手术后发生腹膜种植、肝脏转移和腹腔内播散
的危险性很高,切除部位和腹膜创伤部位是肿瘤细
胞种植高发处,术后早期腹腔内化疗可使腹膜表面
与腹腔内药物充分接触,药物对腹膜表面微小转移
灶的缓解率可达 100%,而且从肿瘤细胞增殖动力
学来看,此时肿瘤负荷最小,药物除直接作用于腹腔
内游离肿瘤细胞外,同时杀伤腹腔内炎症细胞,减少
各种因子的释放,抑制其对肿瘤细胞的增殖作用,腹
腔内给药能增加局部疗效而不影响全身系统的治
疗,腹腔内化疗在胃癌、结肠癌和卵巢癌术后应用的
疗效已经得到肯定,人们对腹腔内化疗的研究也越
来越重视[1012]。
本研究结果显示,腹腔内给药后腹腔液峰值浓
度及AUC最大,分别是外周血的80倍和45倍,且浓
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度较恒定持久。腹腔内给药后门静脉血浓度峰值虽
然较低,但平均浓度超过外周血浓度,给药后1h浓
度超过外周静脉给药的门静脉血浓度,且药物消除
速度较慢,维持有效药物浓度的时间较长,因而生物
利用度较高。腹腔内给药后外周静脉血浓度峰值最
小,达到峰值浓度所需的时间最长,因此药物消除速
度最快。这样,腹腔内给药腹腔液浓度和门静脉血
浓度维持较高既有利于避免药物对全身其他脏器的
毒副作用,又不减少腹腔内、门静脉血浓度,因此腹
腔内化疗对腹腔内和经门静脉系统转移至肝脏的微
转移灶能持久提供药物浓度,有效预防胃癌、肠癌和
卵巢癌等手术后腹腔内和肝脏的转移。
4 结论
本研究表明腹腔内给药其药代动力学明显优越
性,可维持腹腔液和门静脉血更高更持久的血药浓
度,因而有利于化疗药物发挥更大的生物学效应,值
得临床应用。
[致谢]浙江大学药学院梁文权教授对本研究药动学数
据进行处理和指导。
[参考文献]
[1] AjaniJA,BakerJ,PistersPW,etal.CPT11pluscisplatininpa
tientswithadvanced,untreatedgastricorgastroesophagealjunction
carcinoma:resultsofaphaseⅡ study.Cancer,2002,94(3):641.
[2] RibragV,KoscielnyS,VantelonJM,etal.PhaseⅡ trialof
irinotecan(CPT11)inrelapsedorrefractorynonHodgkin’slym
phomas.LeukLymphoma,2003,44(9):1529.
[3] 刘 健,胥 彬.羟基喜树碱内药物在癌症联合化疗应用中
的新进展.肿瘤,1998,4:302.
[4] ZhangR,LiY,CaiQ,etal.Preclinicalpharmacologyofthenatu
ralproductanticanceragent10hydroxycamptothecin,aninhibitorof
topoisomerase.CancerChemotherPharmacol,1998,41:257.
[5] 张 力,李 苏,廖 海,等.羟基喜树碱Ⅰ期药代动力学及
人体耐受性临床研究.癌症.2001,20(12):1391.
[6] GilDelgadoMA,GuinetF,CastaingD,etal.Prospectivephase
Ⅱ trialofiriontecan,5fluorouracil,andleucovorinincombination
assalvagetherapyforadvancedcolorectalcancer.AmJClinOncol,
2001,24(1):101.
[7] LouvetC,AndreT,GamelinE,etal.AphaseⅠⅡ,doseesca
latingtrialofZD9331incombinationwithirinotecan(CPT11)inpre
viouslypretreatedmetastaticcolorectalcancerpatients.BulCancer,
2004,91(12):279.
[8] 刘 健.羟基喜树碱类药物作用机制及合并治疗中机理的研
究.中国肿瘤临床,1998,25(5):389.
[9] WitkampAJ,BreeED,GoethemARV,etal.Rationaleand
techniquesofintraoperativehyperthermicintraperitonealchemothera
py.CancerTreatRev,2001,27(6):365.
[10] GlehenO,MithieuxF,OsinskyD,etal.Surgerycombinedwith
peritonectomyproceduresandintraperitonealchemohyperthermiain
abdominalcancerswithperitonealcarcinomatosis:aphaseⅡ study.
JClinOncol,2003,21(5):799.
[11] YanoM,YasudaT,FujiwaraY,etal.Preoperativeintraperitoneal
chemotherapyforpatientswithserosainfiltratinggastriccancer.J
SurgOncol,2004,88(1):39.
[12] YonemuraY,EndouY,BandoE,etal.Efectofintraperitonealad
ministrationofdocetaxelonperitonealdisseminationofgastriccancer.
CancerLet,2004,210(2):189.
PharmacokineticstudyofintraperitonealchemotherapywithHCPT
YEMeng,LINXiaoxia,PANHongming,LINan,LOUFang,JINWei,ZHENGYu,WUJingmin
(Oncologycenter,SirRunRunShawHospital,ZhejiangUniversity,Hangzhou310016,China)
[Abstract] Objective:Tostudythepharmacokineticof10HydroxycamptothecinHCPTbyintraperitonealadministration.Method:Six
dogsweregivenHCPTbyintraperitonealperfusion:HCPT2mg·kg-1,dissolvedin300mLNS.Duringthecourseofexperiments,peritoneal
fluidsandbloodweresampledusingastandardizedprotocol.TheconcentrationofHCPTinalsampleswasdeterminedbyhighperformance
liquidchromatography(HPLC).Result:Theareaunderthecurve(AUC)ofperitonealfluidswassignificantlyhighlyascomparedtotheAUC
offemoralveinandportalvein(P<0001).Conclusion:Theseexperimentsdemonstratethatintraperitonealchemotherapyhassignificantef
fectonthepharmacokineticsofIProuteofHCPTadministration.Thismethodshouldbeamorereasonablechemotherapyforthepreventionof
recurenceandlivermetastasisofgastriccancer,coloncancerandovarycancerafterradicalresection.
[Keywords] 10hydroxycamptothecin;pharmacokinetic;intraperitonealchemotherapy;chromatography
[责任编辑 方文贤]
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