全 文 ：[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε :ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·²©¦∏¯·¬√¤·¬²±·¨¦«±¬´∏¨¶²±·«¨ ©¯²º µ¨¼¬¨ §¯©¯¤√²±²¬§¦²±·¨±·¬± ≤«µ¼¶¤±·«¨ °∏° ©¯²º µ¨ªµ²º±
¬± ¥¨¨¬1 Μετηοδ : ≥·∏§¬¨§²± ©¯²º µ¨¶¼¬¨ §¯¤±§·«µ¨¨©¤¦·²µ¶k·µ¤±¶³¯¤±·¬±ª§¤·¨ ¤±§³¯¤±·§¨±¶¬·¼ ¤±§©¨µ·¬¯¬½¨ µ ∏´¤±·¬·¼l º µ¨¨ ¬¨¤°¬±¨ §¬±
©¬¨ §¯ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤·w·µ¨¤·° ±¨·¶¯¨ √¨¯¶1 Ρεσυλτ ανδ Χονχλυσιον : ׫¨ ¥¨¶·µ¨¶∏¯·¶º µ¨¨ ²¥·¤¬±¨ §¤·©²¯ ²¯º¬±ª¦²±§¬·¬²±¶}§¬¤°°²±¬∏° ³«²¶³«¤·¨
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[ Κεψ ωορδσ] ≤«µ¼¶¤±·«¨ °∏° ©¯²º µ¨k±¬∏l ~©¯²º µ¨¼¬¨ §¯~©¤√²±²¬§¦²±·¨±·~¦∏¯·¬√¤·¬²±·¨¦«±¬´∏¨
≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussx2sz2sx
≈通讯作者 3 朱恩圆 o ר¯ }ksutl xtvuuxsy oƒ¤¬} ksutl
xtvuuxt| o∞2°¤¬¯}º¬½¨ ¼ tyv q¦²° ~3卢艳花 o∞2°¤¬¯} ∏¯¼¤±«∏¤ ¦¨∏¶·q
§¨∏q¦±
蜂胶 °≤指纹图谱及质量控制
朱恩圆t 3 o窦玉玲u o魏东芝u o王峥涛t o卢艳花u 3
kt q上海中医药大学 中药研究所 o上海 ustusv ~
u q华东理工大学 生物反应器国家重点实验室 鲁华生物技术研究所 o上海 ussuvzl
≈摘要 目的 }研究蜂胶 °≤指纹图谱 o对蜂胶进行质量控制 ∀方法 }采用 °2°≤测定 ∀结果 }不同来源的
蜂胶所含黄酮类成分之间的相似性较大 o其差异较小 ∀结论 }可以采用 °≤ 指纹图谱 o对市场上蜂胶的品种和蜂
胶保健品的真伪进行鉴别 ∀
≈关键词 蜂胶 ~黄酮 ~°≤指纹图谱 ~质量控制
≈中图分类号 u{u1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlt{2twuv2sv
蜂胶是蜜蜂采集植物树脂并混入上颚腺分泌物
和蜂蜡而成的芳香固体物 ∀蜂胶的化学成分复杂 o
迄今发现已有上百种之多 o其主要化学成分为黄酮
类 !酚类 ∀现代药理研究表明 o其功效成分主要是黄
酮类化合物 o研究显示具有抗菌 !抗病毒 !抗肿瘤 !抗
氧化 !消炎镇痛 !防腐保鲜等多种功效 o能增加机体
免疫力 o促进组织再生≈t2v ∀目前蜂胶已越来越广泛
地应用于医药 !食品 !化妆品等领域 o主要品种有纯
蜂胶 !蜂胶粉等等 ∀但市场上的蜂胶及其产品缺乏
统一的质量控制标准 o曾有文献报道测定了蜂胶中
的黄酮类成分 o包括有良姜素 !高良姜素 !芦丁 !杨梅
酮 !桑色素 !槲皮索 !山柰素 !芹菜素 !柯因和松鼠素
等≈w2y ∀作者也曾经报道了不同产地蜂胶总黄酮含
量测定方法及含量上的区别≈z o但仅通过总黄酮的
含量来控制蜂胶的质量还远远不够 o因此 o作者继续
研究了不同产地蜂胶的 °≤ 指纹图谱 o以期通过
°≤指纹图谱来全面 !有效地控制蜂胶质量 o对市
场上蜂胶及其保健品进行鉴别 ∀
1 仪器与材料
蜂胶由上海舜夏生物科技有限公司提供 o主要
来自河南 !浙江和福建 ∀槲皮素对照品k自制 o经高
效液相色谱分析 o纯度 ∴|{ h l o乙腈 !甲醇均为色谱
纯k≥¬ª°¤公司l o水为超纯水 o其余试剂为分析纯 ∀
岛津 ≤ p ts×√³液相色谱仪k包括 ≤ p ts× 色谱
泵 !≥°⁄p ts√³紫外检测器 !混合器 !≤¯ ¤¶¶p √³色谱
工作站l ~超纯水制备仪k°公司l ~电子分析天平
k∞××∞ ∞ussl ∀
2 方法
2 q1 色谱条件
色谱柱 }ª¬¯¨ ±·
÷ ∞¦¯¬³¶¨ ÷⁄
≤t{ kw qy
°° ≅ txs °° ov qx Λ°l ~流动相 }乙腈2甲醇k|Βtl o
流动相
}us °°²¯#pt的醋酸铵溶液k用醋酸调 ³
至 v qxl o梯度洗脱 o流速 s q{ °#°¬±pt o检测波长
vys ±° o柱温 vs ε ∀梯度程序为 }s ∗ ts °¬±o从 tv h
线性梯度至 tz h ~ts ∗ xs °¬±o线性梯度至 zs h
~xs ∗ ys °¬±o线性梯度至 tss h ∀每次运行结束
后以初始流动相平衡色谱柱 us °¬±o以保证出峰情
#vuwt#
第 vs卷第 t{期
ussx年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≥¨ ³·¨°¥¨µoussx
况稳定 ∀样品和对照品的色谱图见图 t ou ∀
图 t 蜂胶的 °≤图谱
图 u 槲皮素对照品的 °≤图谱
2 q2 溶液的制备
供试品溶液的制备 }精密称取蜂胶 s qx ªo置 ux
°小烧杯中 o分别用 tx °甲醇超声 u次k每次 vs
°¬±l o过滤 o残渣用甲醇洗涤 u次 o过滤 o合并滤液 o
置 xs °量瓶中 o加甲醇稀释至刻度 o摇匀 ∀
对照品溶液的制备 }精确称取槲皮素 ts °ªo置
xs °量瓶中 o加甲醇使之溶解并稀释至刻度 o配成
s qu °ª#°pt的溶液 ∀
2 q3 方法学考察
为了考察分析方法的可靠性 o以槲皮素的峰为
内参比峰 o其色谱峰k¶l的保留时间和峰面积为 ¯o计
算其他各峰的相对保留时间和相对峰面积比值 ∀
2 q3 q1 精密度试验 取同一份供试品溶液 o连续进
样 x次 o检测指纹图谱 o考察各主要色谱峰与内参比
峰相对保留时间和相对峰面积的一致性 o结果表明
各主要色谱峰保留时间的 ≥⁄均在 t qs h以内 o相
对峰面积的 ≥⁄均在 t qx h以内 ∀
2 q3 q2 稳定性试验 取同一份供试品溶液 o分别在
s ow o{ otu ouw «进行检测 ∀结果表明 o各主要色谱峰
相对保留时间无明显变化 o ≥⁄均在 t qw h以内 ~相
对峰面积也变异较小 o ≥⁄均在 u h以内 ∀
2 q3 q3 重复性试验 取同一批号的供试品 x份 o按
供试品溶液的制备方法 o分别制成供试品溶液进行
分析 ∀结果表明 o各主要色谱峰相对保留时间较稳
定 o相对保留时间的 ≥⁄均在 t qt h以内 ~相对峰面
积也变异较小 o ≥⁄均在 u qx h以内 ∀
3 结果
3 q1 测定方法
分别精密量取对照品溶液和各供试品溶液 ts
Λo注入液相色谱仪 o记录 xs °¬±图谱即得 ∀以槲皮
素的色谱峰k¶l的保留时间和峰面积为 t o计算其他
各峰的相对保留时间和相对峰面积比值 ∀
3 q2 不同来源蜂胶指纹图谱比较
按供试品溶液的制备方法操作 o分别取各批药
材制成供试品溶液 o取 ts Λ进样 ∀同前条件测定
图谱 o见图 v ∀对不同产地的蜂胶指纹图谱比较选
出 ts个稳定的且具有代表的峰作为共有峰 o见图 t ∀
各样品的指纹图谱较为相似 o但各共有蜂面积的比
值有明显不同 ∀
图 v z个蜂胶样品指纹图谱
t q浙江2t ~u q浙江2u ~v q福建 ~w q河南2t ~x q河南2u ~y q河南2v ~z q河南2w
4 讨论与结论
4 q1 本研究采用 °2°≤ 梯度洗脱的方法对蜂胶
总黄酮进行研究 o参考了相关文献的色谱条件≈x o对
其黄酮成分的分离取得了良好的效果 ∀在对 z批不
同来源的蜂胶药材进行色谱分析的基础上建立了蜂
胶的指纹图谱 ∀
4 q2 蜂胶中黄酮类化合物主要包括黄烷酮 !黄酮
醇类 !双氢黄酮类 o世界各地蜂胶样品中分离出来的
黄酮类化合物已有 zs多种 ∀其中黄烷酮主要有白
杨素 !杨芽黄素 !芹菜素 !刺槐素 !木犀草素 !柳穿鱼
素 !蜜橘黄素 !福橘黄素等 ~黄酮醇类主要包括槲皮
素 !芦丁 !山柰素 !鼠李素 !良姜素 !高良姜素等 ~双氢
黄酮类主要有乔松素 !樱花素 !柚皮素等 ∀本实验采
用甲醇超声溶解能够较好地提取黄酮类成分 o绝大
多数色谱峰的紫外吸收均显示为黄酮类成分的特征
吸收 o与文献报道的色谱图基本相似 ots个共有峰
相对保留时间符合程度较好 o所测图谱能够反映出
蜂胶的指纹特征 ∀
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第 vs卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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4 q3 不同产地的蜂胶指纹图谱有明显不同 o峰数与
相对峰面积相差较大 o提示蜂胶用保健品应在固定
产地的前提下 o才能保证品质的一致性 ∀
4 q4 蜂胶是含有树脂状物的粘性物质 o不溶于水 o
易溶于甲醇 !乙醇和甘油等有机溶剂 ∀经过反复筛
选本文选定溶解性高 !无干扰的甲醇为溶剂 ∀为克
服蜂胶的黏性 !样品处理时需冷冻粉碎 ~在用甲醇溶
解提取后 o需要过滤 o除去不溶性杂质 ∀
≈参考文献
≈t 郭 伽 o周立东 q蜂胶的化学成分研究进展 q中国养蜂 ousss oxt
kul }tz q
≈u 叶陆星 o胡福良 q蜂胶中黄酮类化合物的生物学活性 q养蜂科
技 oussu okul }| q
≈v 顾 青 o张燕萍 o钟立人 q蜂胶中有效成分提取工艺研究 q浙江
农业学报 ousst otvkvl }tyt q
≈w 宋爱清 o刘 杰 q °≤法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量 q中
国养蜂 ousst oxukvl }ts q
≈x 赵玉娟 q高效液相色谱法测定蜂胶中黄酮成分 q现代仪器 o
usss ow }uu q
≈y ≠ ¬2«∏o ≠∏¨2°¬±ªo
µ∏¦¨ ⁄. µ¦¼q±∏¤±·¬·¤·¬√¨ «¬ª«2³¨µ2
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∞∏¦¤¯¼³·∏¶«²±¨ ¼¶q ϑ Αγριχ Φοοδ Χηεµ oussw oxu }uts q
≈z 朱恩圆 o卢艳花 o邹彦平 o等 q蜂胶有效成分的含量测定及质量
控制 q中成药 oussx ouzkzl }|z q
Στυδψ ον ΗΠΛΧ φινγερπριντ ανδ θυαλιτψ χοντρολ οφ Προπολισ
∞±2¼∏¤±t o⁄ ≠∏2¯¬±ªu o • ∞ ⁄²±ª2½«¬u o • «¨ ±ª2·¤²t o ≠¤±2«∏¤u
(t . Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα , Σηανγηαι Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Σηανγηαι ustusv , Χηινα ;
u . Στατε Κεψ Λαβορατορψ οφ Βιορεαχτορ Ενγινεερινγ , Νεω Ωορλδ Ινστιτυτε οφ Βιοτεχηνολογψ,
Εαστ Χηινα Υνιϖερσιτψ οφ Σχιενχε ανδ Τεχηνολογψ, Σηανγηαι ussuvz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼ ²± °≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·²© °µ²³²¯¬¶¤±§·²¦²±·µ²¯ ¬·. ¶ ∏´¤¯¬·¼q Μετηοδ : ׫¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦©¬±ª¨µ2
³µ¬±·¶²©¶¨√ ±¨ ¶¤°³¯ ¶¨©µ²° §¬©©¨µ¨±·³µ²§∏¦¬±ª¤µ¨¤¶º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ °2°≤ q Ρεσυλτ : ׫¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤°¶²© °µ²³²¯¬¶©µ²° §¬©©¨µ¨±·
³µ²§∏¦¬±ª¤µ¨¤¶º µ¨¨ √ µ¨¼ ¶¬°¬¯¤µqΧονχλυσιον : ׫¨ ∏´¤¯¬·¼ ²©°µ²³²¯¬¶¦¤± ¥¨ ¦²±·µ²¯¯¨ §¥¼ §¨·¨µ°¬±¤·¬²±·«¨ °≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·q
[ Κεψ ωορδσ] °µ²³²¯¬¶~©¯¤√²±²¬§¶~ °≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·~ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussw2tu2ts
≈基金项目 国家/十五0科技攻关项目kusst
zstsul
≈通讯作者 3屠鹏飞 oר¯ }kstsl{u{suzxs o∞2°¤¬¯}³¨ ±ª©¨¬·∏ ¥°∏q¨§∏q¦±
°⁄系列大孔吸附树脂预处理方法研究
贾存勤t ou o李阳春u o屠鹏飞t 3 o张洪全t
kt1 北京大学 药学院 o北京 tsss{v ~u1 甘肃农业大学 草业学院 o甘肃 兰州 zvssxsl
≈摘要 目的 }建立 °⁄系列大孔吸附树脂的预处理方法 ∀方法 }采用气相色谱法k≤l和紫外分光光度法比
较了 u h ¤对 °⁄系列大孔吸附树脂预处理的影响 ∀结果 }树脂先用 u h ¤浸泡后再用乙醇洗脱 o对有机残
留物的洗脱效果较好 ∀结论 }°⁄系列树脂预处理方法为 }树脂经 u h ¤ 浸泡洗脱后 o在 ys ε o用乙醇浸泡 !洗
脱 o洗脱流速为 u
∂#«p t o乙醇用量为 v ∗ w倍柱体积 o洗脱液的紫外吸收值为 s1u ∗ s1x ∀预处理的树脂经 ≤ 检
测 o苯未检出 o其他有机残留物均低于 ts °ª#pt o达到药用要求 ∀
≈关键词 气相色谱法 ~°⁄系列大孔吸附树脂 ~预处理 ~甲苯 ~萘
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第 vs卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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