全 文 :Εφφεχτσ οφ οξψσοπηοριδινε ον Γ λυ ανδ Γ ΑΒΑ ιµ µ υνο2ρεαχτιον ποσιτιϖε
νευρονσ ιν χορτεξ ανδ ηιπποχαµ πυσ οφ ρατσ
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(∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχολογψ, Νινγξια ΜεδιχαλΧολλεγε, Ψινχηυαν zxsssw, Χηινα )
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·²©²¬¼¶²³«²µ¬§¬±¨k≥ l ²± ª¯∏·¤°¤·¨ k ∏¯l ¤±§ª¤°°¤¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§k2
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[ Κεψ ωορδσ] ²¬¼¶²³«²µ¬§¬± ~¨ ª¯∏·¤°¤·¨~ ª¤°°¤¤°¬±²¥∏·¼µ¬¦¤¦¬§~ ¦¨±·µ¤¯ ± µ¨√²∏¶¶¼¶·¨°~ µ¤·¶
≈责任编辑 刘
≈收稿日期 ussy2su2s|
≈通讯作者 3 杨欣 oר¯}ksxztl{t{{|vsso∞2°¤¬¯} «½¬¼¤±ª
tyv1¦²°
巴戟天水提物对人精子膜功能氧化损伤的保护作用
杨 欣 3 o张永华 o丁彩飞 o颜志中 o杜 静
k浙江省中西医结合医院 o浙江 杭州 vtsssvl
≈摘要 目的 }观察巴戟天水提物对人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用 o探讨巴戟天治疗弱精子症男
性不育的作用机制 ∀方法 }采用 ° µ¨¦²¯ 梯¯度离心法优选具有正常功能的精子悬液分为正常组 o模型组 o阳性药对照
组 k维生素 ≤组 l和巴戟天水提物小 !中 !大剂量组 o应用次黄嘌呤 2黄嘌呤氧化酶 k ÷ 2÷ l体系产生活性氧 k ≥lo
在有氧环境下 o ≥!不同剂量 ks1tuxos1uxos1x ª# °pt l的巴戟天水提物与精子悬液共同孵育后 o检测精子膜脂
质过氧化损伤程度 o通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能 o并与已知的抗氧化剂维生素 ≤对照 ∀结果 }巴戟天水
提物小 !中 !大剂量组 ks1tuxos1uxos1x ª# °pt l在相同的条件下均可提高精子悬液 ≥⁄活力 o降低 ⁄含量 o对
≥所致精子膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用 o对精子膜功能具有一定的保护作用 ∀其中 s1tux ª#
°pt的巴戟天水提物组与维生素 ≤组 ks1ux °ª# °pt l无明显差别 os1uxos1x ª# °pt的巴戟天水提物组明显优
于维生素 ≤组 kΠ s1stoΠ s1sstl∀且巴戟天水提物的作用呈剂量依赖性 o大剂量 ks1x ª# °pt l时对精子膜功
能的保护作用最显著 ∀结论 }巴戟天水提物对人精子膜的脂质过氧化损伤具有明显的干预作用 o对精子膜结构和
功能具有明显的保护作用 ∀
≈关键词 巴戟天 ~活性氧 ~精子 ~脂质过氧化作用
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylt|2tytw2sw
活性氧类 k ¤¨¦·¬√¨²¬¼ª¨ ± ¶³¨ ¦¬¨¶o ≥l的过氧
化损伤作用对人精子功能的影响已被关注 ∀中药巴
戟天具有补肾阳 !强筋骨 !祛风湿功效 ≈t o是临床治
疗男性不育的常用药物 ∀临床观察和实验研究表
明 o巴戟天水提取物能显著改善精子运动功能 ∀本
实验采用体外培养精子模型 o在有氧环境下 o观察巴
戟天水提物对 ≥所致人精子膜结构和功能氧化
#wtyt#
第 vt卷第 t|期
ussy年 ts月
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ t|
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损伤的干预作用及其对精子功能的保护作用 o为巴
戟天治疗弱精子症男性不育提供实验依据 ∀维生素
≤是一种水溶性的 ≥高效清除剂 o还具有还原剂
的性质 o在细胞内外起着重要的清除氧自由基和抗
脂质过氧化作用 ∀因此本实验以其为阳性对照药 ∀
1 材料和方法
111 仪器与试剂
• ≠ p |sss伟力彩色精子质量检测系统 k配
有恒温装置 o北京伟力新世纪科技发展有限公司 lo
utx≤tt加热型冷冻高速台式离心机 k≥¬ª°¤公
司 loƒ p vttt水套式二氧化碳细胞培养箱
k美国热电公司 lo°zxvs紫外 2可见分光光度计
k安捷伦科技上海分析仪器有限公司 l∀
° µ¨¦²¯¯液 k ≥¬ª°¤公司 o批号 °z{u{lo ts ≅
∞¤µ¯¨ χ¶液 k≥¬ª°¤公司 o批号 ∞zxtslot ≅ ∞¤µ¯¨ χ¶液
k≥¬ª°¤公司 o批号 ∞z{{vlo次黄嘌呤 k÷ o≥¬ª°¤公
司 o批号 ÷ 2t{{ulo黄嘌呤氧化酶 k÷o≥¬ª°¤公司 o
批号 ÷ 2t{zxl∀|sh和 wxh ° µ¨¦²¯ 液¯的制备参见文
献 ≈u ∀低渗膨胀液 }柠檬酸钠 s1zvx ªo果糖 t1vxt
ªo双蒸水 tss °k渗透压 txs °²¶°²¯ # ®ªpt o离子
强度 s1txl∀伊红 ≠溶液 }伊红 ≠ s1x ªo溶于等渗
生理盐水 tss °中 ∀
112 正常精子模型制备
ux ∗ vx岁的健康且有生育能力的自愿供精者
tx名 o禁欲 v ∗ x §o手淫留取精液于无菌容器 o经计
算机辅助精子分析 k¦²°³∏·¨µ2¤¬§¨ § ¶³¨ µ° ¤±¤¯¼¶¬¶o
≤≥l系统常规分析 o精子密度 ys ≅ tsy个 r°o¤
级精子 uxh o¤n ¥级精子 xsh o正常形态精子
ysh o•
≤ t ≅ tsy个 r°∀采用 ° µ¨¦²¯ 梯¯度离
心法制备具有正常生理功能的精子悬液 ∀具体操
作 ≈u }在 tw °离心管中先加入 u °|sh ° µ¨¦²¯ o¯
在其上层轻缓加入 u °wxh ° µ¨¦²¯ o¯然后在 wxh
° µ¨¦²¯ 的¯上层轻缓加入 u °已液化的精液 ~vss ≅ γ
离心 us °¬±~吸去精液层和 wxh ° µ¨¦²¯ 层¯ o将 |sh
° µ¨¦²¯ 层¯与 w °的 ∞¤µ¯¨ χ¶液混匀 ovss ≅ γ离心 ts
°¬±~弃上清 o沉淀用适量 ∞¤µ¯¨ χ¶混悬 o并调精子数
为 us ≅ tsy个 r°∀
113 药物来源及制备
巴戟天购自浙江医药股份有限公司 o经本院杜
静主任药师鉴定确认为茜草科植物巴戟天 Μορινδα
οφφιχιναλισ²º1的干燥根 ∀
由本院制剂室完成 ∀取巴戟天若干克加 ts倍
量双蒸水浸泡 vs °¬±o文火煮 vs °¬±o滤布过滤 o滤
渣再加 x倍量水同上法再处理 u次 o各煮沸 vs和 tx
°¬±o合并 v次滤液 o用聚乙烯微孔滤管在减压下过
滤 o除去煎出液中的悬浮粒子 o滤液于 zs ∗ {s ε 水
浴中浓缩至 s1x ª# °pt k每 t °药液相当于 s1x
ª生药量 lo冷藏保存备用 ∀
114 方法
11411 分组
将精子悬液分为 y组 }正常组为 °
≥缓冲液
k³ z1wl~模型组为 ÷ 2÷ k÷终浓度为 t °°²¯
# pt o÷ 为 xs °# °pt l~阳性药对照组为维生
素 ≤k终浓度为 s1ux °ª# °pt l n ÷ 2÷ k终浓度
同模型组 l~巴戟天小 !中 !大剂量组为巴戟天水提
物 k终浓度分别为 s1tuxos1uxos1x ª# °pt l n
÷ 2÷ k终浓度同模型组 l~各组样本置 vz ε oxh
≤u培养箱中孵育 t ∗ u «∀
11412 总超氧化物歧化酶 k×2≥⁄l活力测定 精
子悬液孵育 u «o按试剂盒说明书操作 o用 zxvs紫
外 2可见分光光度计测定 ∀波长 xxs ±°处比色 o结
果以每毫升酶单位表示 ∀ ≥⁄活力单位为抑制反
应 xsh 的 ≥⁄量 ∀ ≥⁄活力 k # °pt l
kΑ对照 p Α样品 l ΑΑ对照 Α xsh ≅样品稀释倍数 ∀
11413 丙二醛 k ⁄l含量测定 精子悬液孵育 u
«o按试剂盒说明书操作 o用 zxvs紫外 2可见分光光
度计测定 ∀波长 xvu ±°处比色 ∀精子膜脂质过氧
化损伤的程度以 ⁄的产量来表示 k±°²¯ rts{个精
子 l∀ ⁄量 k±°²¯ rts{个精子 l kΑ样品 p Α空白 ) Α
(Α标准 p Α空白 l ≅ 对照品浓度 kts ±°²¯# °pt l ≅ 样
品稀释倍数 ∀
11414 精子低渗膨胀试验 ≈v 精子悬液孵育 vs
°¬±o取待检标本 s1t °o加 vz ε 预温的低渗膨胀
液 s1{x °o混匀 o置 vz ε 水浴 vs °¬±~再加入伊红
≠溶液 s1sx °o混匀 ~室温放置 u °¬±后取 x ∗ ts
Λ于载玻片上 o盖上盖玻片 o高倍镜下计数 uss个
精子中 ¥2ª型精子百分率 ∀
11415 精子存活率 精子悬液孵育 tovoy «后分
别取 x Λ与等量的 s1xh伊红 ≠溶液混匀 o于 uu
ε 温育 u °¬±o然后加盖玻片 o在高倍镜下观察 o活精
子不着色 o死精子被染成红色 ∀
115 统计学处理
结果用 cξ ? σ表示 o采用 ≥°≥≥ tu1s统计软件包
进行方差齐性检验和单因素方差分析 ∀
#xtyt#
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2 结果
211 ×2≥⁄活力 ! ⁄含量测定
精子悬液孵育 u «后 o模型组的 ×2≥⁄活力显
著低于正常组 kΠ s1sstlo ⁄量显著高于正常
组 kΠ s1sstl~维生素 ≤组和巴戟天水提物小 !中 !
大剂量组的 ×2≥⁄活力明显高于正常组和模型组
kΠ均 s1sstlo ⁄量显著低于模型组 kΠ均
s1sstl∀对 ≥⁄活力和 ⁄量的影响 os1tux ª#
°pt的巴戟天水提物组与维生素 ≤组 ks1ux °ª#
°pt l之间无明显差异 ~s1uxo s1x ª# °pt的巴戟
天水提物组显著优于维生素 ≤组 kΠ s1stoΠ
s1sstlk表 tl∀
表 t 各组 ×2≥⁄活力 ! ⁄含量 kcξ ? σ, ν txl
组别
剂量
r°ª# °pt
≥⁄活力
r# °pt
⁄
r±°²¯ rts{个精子
正常 p ttqyu ? tqzu uwqsv ? tq{t
模型 p zq|s ? tqzwtl wyqzu ? uqsutl
维生素 ≤ squx usqwx ? tq{ztoul vtqv| ? uqxwtoul
巴戟天 tux utqtw ? tq|xtoul vuqzz ? uqtstoul
uxs uvquw ? tq|{touovl uxq|y ? tq|xtouovl
xss uxq{z ? uqtttouovl uwq{z ? uqv|uovl
注 }与正常组比较 tl Π sqsst~与模型组比较 ul Π sqsst~与维
生素 ≤组比较 vl Π sqsst
212 对精子尾部低渗膨胀试验的影响
模型组的精子总膨胀率 k¥2ª型 oh l和 ª型精
子膨胀率 kh l显著低于正常组 kΠ均 s1sstl~对
精子总膨胀率的影响 o巴戟天水提物小 !中 !大剂量
组与 ∂ ¬·≤组相比无显著性差异 o甚至已接近正常者
水平 ~对 ª型精子膨胀率的影响 os1tux ª# °pt巴
戟天水提物组与维生素 ≤组 ks1ux °ª# °pt l相比
无显著性差异 o但 s1ux和 s1x ª# °pt巴戟天水提
物组显著优于维生素 ≤组 kΠ s1sstlk表 ul∀
表 u 各组精子尾部低渗膨胀试验 kcξ ? σ, ν txl
组别
剂量
r°ª# °pt
总膨胀率
rh
ª型精子膨胀率
rh
正常 p zsq|v ? tsquu u|qxv ? vqsz
模型 p utqvv ? xqz{tl vqvv ? tq{stl
维生素 ≤ squx yyq|v ? |qxxtl t{qyz ? uqv{tl
巴戟天 tux y|qwz ? {q{wtl usquz ? uqustl
uxs zvqyv ? tsq|xtoul uwqws ? uqtxtowl
xss zxq|v ? ttqu|tovl uxqsz ? tq|wtowl
注 }与正常组比较 tl Π sqsst~与维生素 ≤组比较 ul Π sqsx~
vl Π sqst~wl Π sqsst
213 对精子存活率的影响
精子悬液孵育 t «后各组的精子活率明显降
低 o维生素 ≤组和巴戟天水提物小 !中 !大剂量组的
精子存活率显著低于与正常组 kΠ均 s1sstlo但高
于模型组 kΠ均 s1sstl~tov和 y «的精子活率 o
s1tux ª# °pt巴戟天水提物组与维生素 ≤组无明
显差异 os1ux和 s1x ª# °pt巴戟天水提物组的精
子活率显著高于维生素 ≤ 组 kΠ s1st或 Π
s1sstl~y «后精子存活率进一步降低 o维生素 ≤
组 os1tuxos1ux ª# °pt巴戟天水提物组的精子存
活率显著低于正常组 kΠ s1st或 Π s1sstlos1x
ª# °pt巴戟天水提物组的精子活率保持在较高水
平 o与正常组相比无显著差异 k表 vl∀
3 讨论
表 v 各组 tovoy «精子存活率 kcξ ? σ, ν txl h
组别 剂量 r°ª# °pt t « v « y «
正常 p xsqvv ? wqvz v{qyz ? uq|w uyqsz ? xqxt
模型 p usqys ? uqy|tl tuqws ? uq{xtl xq{s ? tq{utl
维生素 ≤ squx v{qxv ? uqyutl u{qyz ? vq{xtl t{q|v ? vqtztl
巴戟天 tux v|q{z ? uqwutl u|qws ? uq|utl t|qtv ? uqwutl
uxs wuqws ? uqvutovl vuqus ? vq|xtoul uuqwz ? vqw{toul
xss wxquz ? vqzxtovl vwqys ? vqwutovl uxqzv ? vqzxtovl
注 }与正常组比较 tl Π sqsst~与维生素 ≤组比较 ul Π s. st, v) Π sqsst
精子膜不仅是精子活动力 !精子新陈代谢的基
础 o也是引起顶体反应 k¤¦µ²¶²°¨µ¨¤¦·¬²±o l和完
成与受精过程有关活动的基础 ∀精子膜富含多聚不
饱和脂肪酸 o在有氧条件下极不稳定 o易发生精子膜
脂质过氧化 k ¬¯³¬§³¨ µ²¬¬§¤·¬²±o° lo使膜的液态
性 !流动性及通透性发生改变 o造成精子膜的损伤 !
断裂 !甚至细胞死亡 ∀而精子膜的结构与其活动功
能有着密切的关系 ≈w ∀
本实验观察离体正常人精子通过 ≥的过氧
化作用 o研究了巴戟天水提物对人精子膜结构和功
能氧化损伤的保护作用 ∀结果显示 o在 ≥的作用
下人精子膜结构和功能明显损伤 o精子悬液中 ×2
≥⁄活力显著降低 o ⁄含量显著增高 o精子膨胀
率 k总膨胀率 !ª型精子膨胀率 l明显降低 o精子存活
#ytyt#
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率显著下降 o与正常组相比差异极显著 kΠ
s1sstl∀巴戟天水提物小 !中 !大剂量组 ks1tuxo
s1uxos1x ª# °pt l在相同的条件下均可提高精子
悬液 ≥⁄活力 o降低 ⁄含量 o对 ≥所致精子
膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用 o对精子
膜功能具有一定的保护作用 ∀巴戟天水提物的作用
呈剂量依赖性 o大剂量 ks1x ª# °pt l时对精子膜
功能的保护作用最显著 ∀
研究表明 ≈x o精子膜脂质过氧化程度增强是精
子活力下降的一个重要原因 ∀ ⁄作为 °反应
的最终产物之一 o其含量可从一定程度上反映精子
膜 °损伤情况 ∀精子膜 °可能造成精子膜结
构和膜功能损伤 o是精子运动功能下降的主要原因
之一 ∀巴戟天具有抗氧自由基活性 o对羟自由基及
超氧阴离子自由基均有良好的清除作用 ≈y ∀巴戟
天水提物对精子膜功能的保护作用可能与抗氧化损
伤作用有关 ∀
本实验结果表明 o适量的巴戟天水提物能显著
提高精子悬液 ≥⁄活力 o降低 ⁄含量 o抑制精子
膜脂质过氧化反应 o对精子膜结构和功能具有明显
的保护作用 o这可能是巴戟天治疗弱精子症男性不
育的作用机制之一 ∀
≈致谢 本课题得到杭州市科技发展计划项目
kusswwvv±txl的资助 ∀
≈参考文献
≈t 江苏新医学院 q中药大辞典 ≈ q上海 }上海人民出版社 o
t||z}xsztq
≈u 杨 欣 o丁彩飞 o张永华 o等 q菟丝子水提物对人精子顶体和
超微结构的保护作用 ≈ q中国中药杂志 o ussyo vtkxl}wuu
≈v 黄宇烽 q男性病实验诊断手册 ≈ q南京 }东南大学出版社 o
t||v}xtq
≈w ⁄∏µ∏o ²µ¶«¨ §¬ o ≥¦«∏©©± µ¨o ·¨¤¯q ≤µ¼²³µ¨¶¨µ√¤·¬²±2·«¤2
º¬±ª ²© ©µ¤¦·¬²±¤·¨§ «∏°¤± ¶³¨ µ°¤·²½²¤ ¤±§ ³¯¤¶°¤ ° °¨¥µ¤±¨
·µ¤±¶¯²¦¤·¬²± ²© ³«²¶³«¤·¬§¼¯ ¶¨µ¬±¨≈ q ƒ µ¨·¬¯ ≥·¨µ¬¯o usstozx
kul}uyvq
≈x ∞±ª¨ ¯ ≥o ≥¦«µ¨¬± µ¨×o ° ·¨½²¯§· q ¬³¬§ ³¨ µ²¬¬§¤·¬²± ¬± «∏°¤±
¶³¨ µ°¤·²½²¤¤±§ °¤¬±·¨±¤±¦¨ ²© ³µ²ªµ¨¶¶¬√¨ ¶³¨ µ° °²·¬¯¬·¼≈ q
±§µ²¯²ª¬¤o t|||ovtktl}tzq
≈y 李斐菲 o吴拥军 o屈凌波 o等 q中药巴戟天抗自由基活性的研
究 ≈ q光谱实验室 o ussxo uukvl}xxvq
Εξτραχτ φροµ Μορινδαε οφφιχιναλισαγαινστ οξιδατιϖε ινϕυρψ οφ φυνχτιον
το ηυµ αν σπερµ µ εµ βρανε
≠ ÷¬±o ≠²±ª2«∏¤o ⁄ ≤¤¬2©¨¬o ≠ «¬2½«²±ªo ⁄ ¬±ª
(Ζηεϕιανγ Προϖινχε Χοοπερατιον οφΧηινεσε ανδ Ωεστερν Μεδιχινε Ηοσπιταλ, Ηανγζηου vtsssv, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ¬±·¨µ√ ±¨·¬²± ²©Μορινδαε οφφιχιναλισ ¬¨·µ¤¦·¬± «∏°¤± ¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤± o¨ ¤±§·² ¶·∏§¼ ·«¨
·µ¨¤·° ±¨·²©°¤¯¨¬±©¨µ·¬¯¬·¼ ¤±§¤¶·«¨ ±²²¶³¨ µ°¬¤¥¼ Μ. οφφιχιναλισ1Μετηοδ : ײ ¶¨¯¨ ¦·¶³¨ µ° º¬·« ±²µ°¤¯ ³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ©∏±¦·¬²± ∏¶¬±ª
·«¨ ° µ¨¦²¯¯ªµ¤§¬¨±·¦¨±·µ¬©∏ª¤·¬²± ©²µ·«¨ ±²µ°¤¯ ¶³¨ µ° °²§¨ q¯ ׫¨ ± ¶¨³¤µ¤·¬±ª·«¨ ¶³¨ µ° ¶∏¶³¨ ±¶¬²± ¬±·²·«¨ ±²µ°¤¯o °²§¨ o¯ ¤±§¦²±2
·µ²¯ ªµ²∏³k∂ ¬·¤°¬± ≤ ªµ²∏³lo ¤±§·«¨ ¤¯µª¨ o ° §¨¬∏° ¤±§¶°¤¯¯§²¶¨ ²©Μ. οφφιχιναλισq ׫¨ ≥ º¤¶°¤§¨ ©µ²° «¼³²¬¤±·«¬± 2¨¬¤±½¬±¨
¬¤±½¬±¨k ÷ 2÷ lo ¤±§ ≥o §¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶ksqtuxo squxo sqx °ª# °pt l ²©·«¨ ¬¨·µ¤¦·º µ¨¨ «¤·¦«¨ §º¬·«¶³¨ µ° ¬± ·«¨
²¬¼ª¨ ± ±¨√¬µ²±° ±¨·o ·«¨ ¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤±¨¬³¬§³¨ µ²¬¬§¨ ¬±∏µ¼ º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §o ¤±§·«¨ ©∏±¦·¬²± ²©¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤±¨º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼
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¤±§ ¤¯µª¨ ¬¨·µ¤¦·¶²© q ²©©¬¦¬±¤¯¬¶ksqtuxo squxo sqx ª# °pt l¬°³µ²√ §¨≥⁄ √¬·¤¯¬·¼ ²©¶³¨ µ° ¶∏¶³¨ ±¶¬²±o µ¨§∏¦¨§·«¨ ¦²±·¨±·²©
⁄o ¬±·¨µ√ ±¨ §¨¬± ·«¨ ¬±∏µ¼ ²©¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤±¨¥¼ ≥ ·²¶²°¨ ¬¨·¨±·¤±§³µ²·¨¦·¨§¶²°¨©∏±¦·¬²± ²©¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤± q¨ ׫¨ s1tux
°ª# °pt ¬¨·µ¤¦·«¤§±² ²¥√¬²∏¶§¬©©¨µ¨±¦¨ kΠ s1sxl º¬·« ∂ ¬·¤°¬± ≤ ¬± ¬·o ¥∏··«¨ ksquxosqx °ª# °pt l ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©·«¨
¬¨·µ¤¦·¬¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¥¨ ·¨µ·«¤± ¦²±·µ²¯ ∂ ¬·¤°¬±2≤ kΠ s. st, Π sqsstlq ƒ∏µ·«¨ µ°²µ¨o ·«¨ µ¨ º¤¶¤§¨ ³¨ ±§¨ ±¦¨ ²± ·«¨ §²¶¤ª¨ o ·«¨
¤¯µª¨ §²¶¨ ksqx °ª# °pt l ²©Μ. οφφιχιναλισ ¶¨³¨ ¦¬¤¯ ¼¯ ³µ²·¨¦·¨§·«¨ ©∏±¦·¬²± ²©¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤± q¨ Χονχλυσιον: ׫¨ ¬¨·µ¤¦·©µ²° Μ.
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¤±§©∏±¦·¬²± ²©¶³¨ µ° ° °¨¥µ¤± o¨ ·«¤·¬¶²±¨²©·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶©²µ·µ¨¤·¬±ª°¤¯ .¨ ¶¬±©¨µ·¬¯¬·¼ ¤±§¤¶·«¨ ±²²¶³¨ µ°¬¤º¬·«Μ. οφφιχιναλισ1
[ Κεψ ωορδσ] Μορινδαε οφφιχιναλισ~ ¤¦·¬√¨²¬¼ª¨ ±~ ¶³¨ µ°~ ¬¯³¬± ³¨ µ²¬¬§¤·¬²±
≈责任编辑 刘
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