全 文 ：冬虫夏草中核苷类成分的
毛细管区带电泳定量分析研究
侯晓蓉 o栾连军 o程翼宇 3
k浙江大学 药学院 中药科学与工程学系 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要 目的 }建立冬虫夏草中核苷类成分k腺苷 !鸟苷 !尿苷和次黄嘌呤核苷l的毛细管电泳定量分析方法 o
研究青海产天然冬虫夏草和人工发酵虫草菌粉的核苷类成分差异 ∀方法 }采用 s1sux °²¯#pt硼砂缓冲液 o³ |1x o
工作电压为 us ®∂ o毛细管温度 ux ε o波长检测 uys ±° o对 w种核苷定量分析 ∀结果 }用毛细管区带电泳法定量分析
冬虫夏草及人工发酵虫草菌粉中的腺苷 !尿苷 !鸟苷和次黄嘌呤核苷 o平均加样回收率分别为 |{1| h o|x1t h o
|z1{ h和 |{1{ h o ≥⁄分别为 s1w h ot1z h ot1v h和 x1s h ∀在天然冬虫夏草中未检测到腺苷 o而在人工发酵虫草菌
粉中未检测到次黄嘌呤 ∀结论 }本研究方法可满意地用于腺苷 !尿苷 !鸟苷和次黄嘌呤核苷的定量分析 ∀青海产地
道药材冬虫夏草核苷类成分组成与人工发酵虫草菌粉有明显差异 ∀
≈关键词 冬虫夏草 ~腺苷 ~尿苷 ~鸟苷 ~次黄嘌呤核苷 ~毛细管区带电泳
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsy2swwz2sv
≈收稿日期 ussw2st2ux
≈通讯作者 3 程翼宇 oר¯ }ksxztl{z|xttv{ o∞2°¤¬¯}¦«¨ ±ª¼¼
½∏1 §¨∏1¦±
冬虫夏草是珍贵的药材 o对生长环境要求严
格 o主产于四川 ! 青海 ! 西藏 ! 云南 ! 贵州等地海
拔w sss ∗ x sss °的高山甸中≈t o核苷类物质为其主
要活性成分之一 o具有舒张血管 o降低血压 o减慢心
律 o抑制血小板凝聚等多种生理活性 ∀冬虫夏草中
的核苷类物质主要有虫草素 !腺苷 !鸟苷 !尿苷 !次黄
嘌呤核苷 !腺嘌呤等等≈u o含量较低 o现已建立了薄
层色谱法≈v o高效液相色谱法≈w 和高效毛细管电泳
法≈x 等多种定量分析方法 ∀但是 o同时测定腺苷 !鸟
苷 !尿苷和次黄嘌呤核苷等 w种核苷类成分的仪器
分析方法目前尚未见报道 ∀
青海是我国冬虫夏草的主要产地 o而百令胶囊
是从青海天然冬虫夏草分离出来的菌种k中华束丝
孢真菌l经人工培养液低温发酵生产的一种虫草替
代品≈v o发酵条件模仿青海产区的自然生长条件 o它
与青海产天然冬虫夏草的化学组成间似乎应有良好
对应关系 o但对此的相关研究报道甚为鲜见 ∀
≥«¤²2³¬±ª等≈x 曾研究了百令胶囊等 w种人工发酵虫
草菌粉产品和青海等 w个省份产冬虫夏草在腺苷 o
鸟苷和尿苷含量上的差异 o发现前者这 v种核苷的
含量均高于后者 ∀然而 o模拟产区自然生长条件人
工发酵生产的虫草菌粉与天然虫草在核苷类成分方
面的其他差异至今不甚明了 ∀本研究建立了可同时
测定腺苷 !鸟苷 !尿苷和次黄嘌呤核苷等核苷类成分
的高效毛细管电泳分析方法 o并进而研究百令胶囊
和青海产地道药材冬虫夏草在核苷类成分上的差
异 ∀研究结果表明 o二者在其化学组成及成分含量
上均有较明显差异 ∀
1 仪器和试剂
高效毛细管电泳仪为 ª¬¯¨ ±·公司 °v⁄毛细管
电泳系统 o采用二极管阵列检测器 ~数据采集 o分析
和处理使用 ≤«¨ °¶·¤·¬²±工作站 ∀毛细管柱为 ª¬¯¨ ±·
未涂层融硅毛细管柱 o其内径 xs Λ° o长度为 xs ¦°
k有效长度 wu ¦°l ∀
所用试剂及氢氧化钠 !盐酸 !磷酸盐 !硼砂等均
为分析纯 ∀对照品腺苷 !尿苷 !鸟苷 !次黄嘌呤核苷
均购自美国 ≥¬ª°¤公司 o纯度为 || h ∀药材由青海
省药品检验所鉴定及提供 o来自青海 y个不同州县 o
均符合 usss年版5中国药典6规定 ∀百令胶囊来自
杭州中美华东制药股份有限公司 o生产批号 sutst| ∀
2 实验方法
211 样品和对照品的制备 将冬虫夏草粉碎后 o过
ys目筛 o精密称取 s1uss ªo加水 o超声 us °¬±后定容
至 ts °o离心取上清液供试 ~精密称取百令胶囊
s1xss ªo加水 o超声 us °¬±后定容至 ux °o离心取
#zww#
第 vs卷第 y期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ y
¤µ¦«oussx
上清液供试 ∀
根据实验需要配制标准品溶液 o精密称取腺苷 !
鸟苷 !尿苷和次黄嘌呤核苷 o用水溶解后定容供试 ∀
212 电泳条件 电泳缓冲液使用 s1sux °²¯#pt硼
砂 o³ |1x o工作电压 us ®∂ o毛细管温度 ux ε o采用
压力进样方式 ox1s ≅ tsv °¤ous ¶进样 o检测波长 uys
±°∀每次进样前依次用 t °²¯#pt ¤ o水 o缓冲液
清洗毛细管各 w °¬±∀得到的样品和对照品谱图见
图 t ∀
图 t 天然冬虫夏草 o人工发酵虫草菌粉和
对照品的高效毛细管电泳图谱
¤1腺苷 ~¥1 鸟苷 ~¦1 尿苷 ~§1次黄嘌呤核苷
1 天然冬虫夏草 ~
1 对照品 ~≤1 人工发酵虫草菌粉
213 标准曲线 配制 x个不同浓度的腺苷标准液 }
z{1s o{u1| otts1x otyx1{ ovvt1x °ª#pt o每个连续进
样 v次 o取平均值 o得到标准曲线 Ψ t1uxt u Ξ n
w1ttz w oΡu s1||| s o线性范围 z{1s ∗ vvt1x °ª#
pt ~x个不同浓度的鸟苷标准液 }tz1s ouu1z ovw1s o
tvy1s ousw1s °ª#pt o每个连续进样 v次 o取平均值 o
得到标准曲线 Ψ t1ssu w Ξ p u1|vy v oΡu s1||| x o
线性范围 tz ∗ usw °ª#pt ~x个不同浓度的尿苷标
准液 }tt1w otx1t ouu1z owx1w o|s1{ °ª#pt o每个连续
进样 v次 o取平均值 o得到标准曲线 Ψ t1s{z x Ξ p
t1zxu z oΡu s1||| u o线性范围 tt1w ∗ |s1{ °ª#
pt ~x个不同浓度的次黄嘌呤核苷标准液 }y1u o{1v o
ts1v otv1w otx1x °ª#pt o每个连续进样 v次 o取平均
值 o得到标准曲线 Ψ u1s|{ v Ξ n u1wsz | oΡu
s1||| u o线性范围 y1u ∗ tx1x °ª#pt ∀
214 精密度试验 对同一人工发酵虫草菌粉样本
和同一天然冬虫夏草样本 o分别连续进样 x次 o进行
精密度试验 o计算腺苷 !次黄嘌呤核苷 !鸟苷和尿苷
对应峰的峰面积 ≥⁄ 值 o分别为 t1| h ou1{ h o
u1| h ov1t h ∀可见 o精密度的 ≥⁄值都在 v1t h以
下 ∀
215 稳定性试验 对同一人工发酵虫草菌粉样本
和同一天然冬虫夏草样本 o每间隔 x «进样 t次 o进
样 x次 o考察稳定性 o得到腺苷 !鸟苷 !尿苷和次黄嘌
呤核苷对应峰的峰面积 ≥⁄分别为 u1t h ou1t h o
z1w h ox1v h ∀可见 o稳定性的 ≥⁄值都在 z1w h以
下 o样品至少在 uw «内稳定 ∀
216 加样回收率 精密称取天然冬虫夏草粉
s1tss s ªo加入次黄嘌呤核苷 xs Λªo鸟苷 u{s Λªo尿
苷 vss Λªo超声 us °¬±后用水定容至 ts °o离心 o取
上清液进样 ∀精密称取人工发酵虫草菌粉 s1uxs y
ªo加入腺苷 {xu Λªo超声 us °¬±后用水定容至 ux
°o离心 o取上清液进样 ∀均平行制备 x份 ∀按照
上述分析方法测定 o得到 x份样品的平均加样回收
率腺苷为 |{1| h o鸟苷为 |z1{ h o尿苷为 |x1t h o次
黄嘌呤核苷为 |{1{ h k见表 tl ∀
表 t 腺苷 !尿苷 !鸟苷和次黄嘌呤核苷回收率
对照品
测定值
r˪
回收率
r h
平均回收率
r h
≥⁄
r h
腺苷 t zsv1x ||1w |{1| s1w
t zss1y ||1s
t y|w1{ |{1v
t zsu1x ||1u
t y|{1y |{1{
尿苷 x{{1y |u1u |x1t t1z
ysv1s |z1s
x|{1y |x1x
yss1x |y1u
x|x1w |w1x
鸟苷 xxs1y |x1| |z1{ t1v
xx{1v |{1z
xys1t ||1v
xxv1v |y1|
xxz1w |{1w
次黄嘌呤核苷 tst1x tsv1s |{1{ x1s
|z1{ |x1y
tsv1t tsy1u
|{1s |y1s
|y1z |v1w
注 }样品中含腺苷 {xz Λªo加入量为 {xu Λª~含尿苷 vtu Λªo加入
量为 vss Λª~含鸟苷 u{u Λªo加入量为 u{s Λª~含次黄嘌呤核苷 xs Λªo
加入量为 xs Λª
217 样品测定 样品含量测定结果见表 u ∀
表 u 样品含量 Λª#°ªp t
样品 鸟苷 尿苷 次黄嘌呤核苷 腺苷
果洛州达日县天然虫草 u1{u v1tu s1xs p
黄南州同仁县天然虫草 u1{v v1uy s1uz p
海南州兴海县天然虫草 v1tx v1{v s1vx p
海北州门源县天然虫草 v1vv v1y| s1vv p
玉树州曲麻莱县天然虫草 v1xt v1yu s1u{ p
果洛州玛沁县天然虫草 u1{| v1wt s1vu p
百令胶囊 v1yu u1|w p v1wu
#{ww#
第 vs卷第 y期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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不同产地天然冬虫夏草和百令胶囊核苷类成分
含量比较见图 u ∀
图 u 不同产地天然冬虫夏草和
百令胶囊核苷类成分含量比较
1 尿苷 ~1鸟苷 ~1次黄嘌呤核苷 ~ 1腺苷
3 结果与讨论
311 本实验选用 ³ |1x作为硼砂缓冲液体系的 ³
值 o较现有文献报道方法更为稳定 o并得到较高的精
密度 ∀
312 冬虫夏草中核苷类物质的含量很低≈u ∀从本
实验的分析测试中可以看出 o鸟苷含量最高的玉树
州的冬虫夏草 o每毫克含鸟苷 v1xt Λª~尿苷含量最
高的兴海县 o每毫克含尿苷为 v1{v Λª~次黄嘌呤核
苷含量最高的达日县 o每毫克含次黄嘌呤核苷仅为
s1xs Λªo但均不含腺苷 ∀百令胶囊中鸟苷的含量为
v1yu Λª#°ªpt o尿苷的含量为 u1|w Λª#°ªpt o腺苷的
含量为 v1wu Λª#°ªpt o却不含次黄嘌呤核苷 ∀
313 本实验分析样品来自于青海产冬虫夏草最主
要的 y个州县产区 o它们在核苷类成分含量上虽有
一定的差异 o但不明显 ∀从图 u中可以看出 o人工发
酵虫草菌粉与青海产天然冬虫夏草在核苷成分及含
量上存在明显差异 }腺苷和次黄嘌呤核苷是两者的
特征性差异成分 o前者在天然冬虫夏草中未被检出 o
而后者则未在百令胶囊中测到 ~人工发酵虫草菌粉
中的鸟苷含量均相对较高 o而尿苷的含量则较低 ∀
314 文献≈x 研究表明青海省玉树州的冬虫夏草不
含腺苷 !鸟苷和尿苷 o但本研究的分析结果却证明玉
树产冬虫夏草含有尿苷和鸟苷 ∀
≈参考文献
≈t 罗玉秀 1 冬虫夏草的研究现状 1 青海大学学报 oussv outkul }
v{1
≈u 卢玉兰 o翁开敏 1 冬虫夏草的药理作用研究 1中国药师 oussv oy
kyl }vzt1
≈v 王新华 o傅智宏 o白 霜 1 百令胶囊中腺苷的含量测定 1 中国
现代应用药学 ot||z otwkyl }vv1
≈w 夏文娟 o曾晓英 o袁海龙 o等 1 不同产地冬虫夏草腺苷含量的测
定 1 中国中药杂志 ousst ouyk{l }xws1
≈x ≥«¤²2³¬±ªo°¬±ªo⁄ ׬±¤× ÷ o ετ αλ1 ⁄¨ ·¨°¬±¤·¬²±²©±∏¦¯ 2¨
²¶¬§¨¶¬± ±¤·∏µ¤¯ Χορδψχεπσσινενσι󤱧¦∏¯·∏µ¨§ Χορδψχεπσ µψχελια ¥¼
¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶1 Ελεχτροπηορεσισousst ouu }tww1
Θυαντιτατιϖε αναλψσισ οφ τηε νυχλεοσιδεσιν Χορδψχεπσσινενσισ
ωιτη χαπιλλαρψ ζονε ελεχτροπηορεσισ
÷¬¤²2µ²±ªo¬¤±2∏±o≤∞ ≠¬2¼∏
( ∆επαρτµεντ οφ Χηινεσε Μεδιχινε Σχιενχε ανδ Ενγινεερινγ , Χολλεγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχε ,
Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼¶¬¶ ° ·¨«²§©²µ¤±¤¯¼½¬±ª·«¨ ±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶¬± Χορδψχεπσ σινενσισ º¬·«¦¤³¬¯¯¤µ¼
¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶o¤±§¦²°³¤µ¨ ·«¨ §¬©©¨µ¨±¦¨ ¥¨·º¨¨ ± ±¤·∏µ¤¯ ¤±§·«¨ ¦∏¯·∏µ¨§ Χ1 µψχελια1 Μετηοδ : ≤¤³¬¯¯¤µ¼ ½²±¨ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶° ·¨«²§º¤¶
°¨³¯²¼¨ §·² ∏´¤±·¬·¤·¨·«¨ ¤§¨±²¶¬±¨ o∏µ¬§¬±¨ oª∏¤±²¶¬±¨ ¤±§¬±²¶¬±¨ ¬± Χ1 σινενσισoº¬·«s1ux °ª#pt ¥²µ¬¦¤¦¬§2¶²§¬∏° «¼§µ²¬¬§¨ ¥∏©©¨µo
³ |1x1 ׫¨ º²µ®¬±ª√²¯·¤ª¨ º¤¶us ®∂ o·«¨ ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ º¤¶ux ε o¤±§·«¨ §¨·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·« º¤¶uys ±°1 Ρεσυλτ : •¬·«·«¨ ¦¤³¬¯¯¤µ¼
½²±¨ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶° ·¨«²§o·«¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ²©·«¨ ¤¥²√¨w ±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶º¤¶|{1| h o|x1t h o|z1{ h ¤±§|{1{ h µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ oº¬·«·«¨
≥⁄s1w h ot1z h ot1v h ¤±§x1s h 1 ׫¨ µ¨ º¤¶±²¤§¨±²¶¬±¨ ¬± ±¤·∏µ¤¯ Χ1 σινενσι󤱧±²¬±²¶¬±¨ ¬±·«¨ ¦∏¯·∏µ¨§ Χ1 µψχελια §¨·¨¦·¨§1
Χονχλυσιον : ׫¬¶° ·¨«²§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·² §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ¤§¨ ±²¶¬±¨ o∏µ¬§¬±¨ oª∏¤±²¶¬±¨ ¤±§¬±²¶¬±¨ ¬± Χ1 σινενσισ1 ׫¨ ±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶¬± Χ1
σινενσισ ³µ²§∏¦¨§©µ²° ±¬±ª«¤¬³µ²√¬±¦¨ ¤±§¦∏¯·∏µ¨§ Χ1 µψχελια ¤µ¨ ²¥√¬²∏¶¯¼ §¬©©¨µ¨±·1
[ Κεψ ωορδσ] Χορδψχεπσσινενσισ~¤§¨ ±²¶¬±¨ ~∏µ¬§¬±¨ ~ª∏¤±²¶¬±¨ ~¬±²¶¬±¨ ~¦¤³¬¯¯¤µ¼ ½²±¨ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶
≈责任编辑 李 禾
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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