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Effects of MSF on melanocyte adhesion and migration in vitro

补骨脂对体外黑素细胞黏附和迁移的作用



全 文 :Εφφεχτ οφ οστεοπραχτιχ τοταλφλαϖονε ον βονε µινεραλ δενσιτψ ανδ
βονε ηιστοµ ορπηοµετρψιν οϖαριεχτοµιζεδ ρατσ
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( Χηινα Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·²©²¶·¨²³µ¤¦·¬¦·²·¤¯ ©¯¤√²±¨ ²± ¥²±¨ «¬¶·²°²µ³«²° ·¨µ¼ ²©²¶·¨²³²µ²¶¬¶°²§¨¯¬±µ¤·«º¬·«²2
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[ Κεψ ωορδσ] ²¶·¨²³µ¤¦·¬¦·²·¤¯ ©¯¤√²±¨ ~²¶·¨²³²µ²¶¬¶~¥²±¨ «¬¶·²°²µ³«²° ·¨µ¼
≈责任编辑 方文贤 
补骨脂对体外黑素细胞黏附和迁移的作用
牟宽厚t 3 o张宪旗u o余 兵v o周爱民u o冯 捷u
kt q西安交通大学 第一医院 皮肤科 o陕西 西安 ztssyt ~
u q西安交通大学 第二医院 皮肤科 o陕西 西安 ztsssw ~v q西安交通大学 法医系 o陕西 西安 ztssytl
≈摘要  目的 }研究补骨脂对黑素细胞黏附和迁移的影响 ∀方法 }用补骨脂处理黑素细胞 o检测其黏附于牛血
清纤维结合素和通过微孔滤膜的细胞数量并与生姜和未经药物处理的黑素细胞比较 ∀结果 }补骨脂可显著促进黑
素细胞黏附于牛血清纤维结合素和通过微孔滤膜并呈剂量依赖关系 o但当补骨脂浓度超过 s qu °ª#pt时这种作用
未见增加 ∀补骨脂浓度在 s qst °ª#pt时 o黑素细胞黏附并无显著增加 o但对迁移的影响已可见统计学差异 k Π
s qstl ∀生姜则不具有这样的作用 ∀结论 }在体外 o补骨脂能明显促进黑素细胞的黏附和迁移 o这至少可以部分解释
应用补骨脂治疗白癜风是有效的 ∀
≈关键词  黑素细胞 ~补骨脂 ~生姜 ~黏附 ~迁移
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsw2svwy2sw
白癜风的病因到目前尚未研究清楚 o新的理论
认为其属于免疫性疾病≈t  o皮肤黑素细胞的破坏造
成局部色素脱失 o正常情况下黑素细胞产生黑素体 o
≈收稿日期  ussv2ts2uv
≈基金项目  国家自然科学基金资助课题kvsussuwzl
≈通讯作者  3牟宽厚 oר¯ }ksu|l{xwxuvtv o ∞2°¤¬¯} °²∏®∏¤±«²∏
ƒ¶²«∏q¦²°
它们是一些可以通过树突传递的小囊泡 ∀与其他自
体免疫病不同的是 o在毛囊中存在许多不被自身抗
体破坏的前体黑素细胞≈u  ∀到目前为止 o刺激毛囊
前体黑素细胞增殖和向病灶迁移是一种重要的治疗
思路≈v  ∀通过对近年来治疗白癜风的中药进行文献
研究 o发现补骨脂常被选用 o同时民间常用生姜外用
治疗此种疾病也有一定效果 o为此作者采用微孔滤
膜法研究了补骨脂及生姜对黑素细胞黏附和迁移的
#ywv#
第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ w
„³µ¬¯oussw
影响 ∀
1 材料
1 q1 标本 取正常成年男性包皮环切术后之包皮
k年龄  uu岁l os qt h 胰酶室温消化过夜 o弃去真
皮 o将表皮再用 s qt h 胰酶 vz ε 消化 ts °¬±∀加入
含牛血清的 ⁄∞2ƒtu终止消化 o吸管轻轻吹打使
细胞分散 o过 {s 目滤网 o离心沉淀细胞kt sss µ#
ts¶ptl ∀
1 q2 主要试剂及仪器 补骨脂 !生姜购自西安中药
集团 o⁄∞2ƒtu培养基k≥¬ª°¤l o佛波酯k°„ o≥¬ª2
°¤l o霍乱毒素k≤× o≥¬ª°¤l o胰酶 o牛血清纤维连接素
及牛血清白蛋白k≥¬ª°¤o≥·²∏¬¶o’ o˜≥„l ouw孔培
养板及 uw孔显微趋化滤膜板k≤„ o˜≥„l ∀
2 方法
2 q1 黑素细胞培养 参照文献≈w 进行 o向上述离
心沉淀细胞中加入黑素细胞生长液 o轻轻吹打使细
胞分散成为悬液 o接种于培养瓶中 o每 v §换培养液
t次 o共培养 | §即可获得纯化的黑素细胞并用硫酸
亚铁染色鉴定 ∀
2 q2 中药提取物制备 取补骨脂和生姜生药粉碎 o
各取 ts ª用 |s h乙醇常温下浸泡 ts §o每天振摇数
次 o滤过除渣 o收集提取液置沸水浴中 o待乙醇挥发
完后 o用二甲基亚砜溶解稠膏状提取物 o调整浓度至
t ®ª#pt op us ε 低温保存备用 ∀
2 q3 细胞黏附测定 参照文献≈x 进行 o用 s qx °
含有 ts Λª纤维连接素的 ⁄∞ 处理 uw孔培养板 u
«o同时用 ts Λª牛血清白蛋白处理另外 u块板作为
对照 ∀孵育结束后 o每个孔用磷酸盐缓冲液冲洗 ~每
孔加入含有 u ≅ tsw个黑素细胞的悬液 uss ˏo同时
各观察孔中分别加入补骨脂和生姜 o它们的终浓度
均为 }ts oxs otss otxs ouss °ª#pt ∀药物组和生姜及
空白对照组共同培养 uw «o然后用磷酸盐缓冲液冲
洗掉未粘贴的细胞 o已经黏附的细胞用胰酶消化法
获取 o每组浓度下观察 w孔 o并重复 v次 ∀计数黏附
的细胞数 ∀
2 q4 微孔滤膜法测定细胞迁移 参照文献≈y 进
行 o用含有 ts Λª牛血清白蛋白的 s qx °⁄∞ 包
被 { Λ°微孔滤膜 u «o然后将其放置在特有的小室
上 o滤膜即将其分为上下两室 ∀向其上方加入 {ss
ˏ无血清培养基 o其中含有 u ≅ tsx活的黑素细胞 o
于其下方加入各浓度下的药物各 uss ˏo同时设空
白对照 o共同孵育 w «o取出滤膜并用 °…≥液漂洗 v
次 o机械刮除停留在表面未迁移的黑素细胞 o显微镜
下ktss ≅ l计数发生迁移细胞数k即黏附于膜下方的
细胞数l o每组浓度下测定 w孔 o每孔测定 v次 o取均
值作统计学分析 ∀
2 q5 数据处理 所得数据用kξ ? σl表示 o结果采用
¶·∏§¨±·进行统计学检验 ∀
3 结果
3 q1 培养细胞硫酸亚铁染色鉴定 染色情况如图 t
所见 ∀
图 t 黑素细胞的色素颗粒被染成墨绿色 kts ≅ tsl
3 q2 黑素细胞在纤维连接素上的黏附 每个浓度
下取得 tukw ≅ vl组数据 o并用k ξ ? σl标示 o结果显
示补骨脂浓度越高 o细胞黏附能力越强 k Π s qstl o
而对生姜而言 o各浓度下均未见有显著的细胞黏附
促进作用k Ё s qsxl o药物浓度为 ts °ª#pt时 o补
骨脂不具有细胞黏附促进作用k Ё s qsxl o需要说明
的是补骨脂浓度为 uss °ª#pt时 o促黏附作用并未
见更进一步增加k§与 ¨相比lk Ё s qsxl ∀
表 t 药物对黑素细胞黏附及迁移的影响
药物浓度
r°ª#pt
细胞黏附数r h
补骨脂组 生姜组
细胞迁移数r h
补骨脂组 生姜组
s uv ? t tsy ? tu
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ussk l¨ zs ? tt uu ? w vuz ? uv tx{ ? tv
3 q3 黑素细胞迁移观察 表 t显示与对照相比 o每
组浓度下补骨脂均可增加黑素细胞的迁移k Π 
s qstl o和药物促细胞黏附作用不同的是 }ts °ª#pt
下黑素细胞的迁移也有显著增加 o补骨脂浓度为 uss
°ª#pt时 o促黏附作用并未见更进一步增加k§与 ¨
相比l k Π  s qsxl ∀而生姜则不同 o较低浓度
下 kxs °ª#ptl即可增加黑素细胞的迁移k Π 
s qstl o但浓度再增加 o却不能提升这种作用 o药物
浓度为 tss otxs ouss °ª#pt时 o与 xs °ª#pt相比无
#zwv#
第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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„³µ¬¯oussw
显著差异k Π  s qsxl ~若与 xs °ª#pt的补骨脂相
比 o其促黑素细胞迁移作用仍然较差k Π s qstl ∀
4 讨论
白癜风是一种自体免疫性疾病 o直到目前为止 o
刺激毛囊前体黑素细胞增殖和向病灶迁移是重要和
唯一的治疗思路 ∀学者们已经研究了与黑素细胞迁
移和黏附有关的多种细胞因子 o如整合素 ΑxΒt 可以
促进黑素细胞在纤维连接素上的黏附≈z  o白三烯 ≤w
和 ׊ƒ2„¯ ³«¤也具有促黑素细胞黏附和迁移的作
用≈{ 等等 ∀但由于一些尚未解决的原因使得他们到
目前为止尚不能应用于临床 o因此 o目前临床仍广泛
应用甲氧补骨脂素治疗白癜风 o它也正是中药补骨
脂的主要成分 o经过内用和外敷治疗可显著促进白
癜风皮损的恢复≈|  o组织学显示皮肤基底层出现较
多的黑素颗粒 o白斑消失 ∀这究竟是因为黑素细胞
数目增加还是黑素合成增加目前仍不清楚 ∀新近的
研究发现补骨脂素溶液可以刺激黑素合成≈ts  o据此
作者推断补骨脂还可以通过其他途径影响黑素细
胞 o因此作者研究了离体情况下中药补骨脂对黑素
细胞的作用 o并与民间常用的生姜作比较 o结果显示
补骨脂可以刺激黑素细胞的黏附和迁移 o且呈剂量
依赖关系 o但当补骨脂浓度为 ts °ª#pt o黑素细胞
的黏附并未增加 o这种现象告诉我们虽然补骨脂也
可以增加黑素细胞的黏附 o但在体外它更易促进黑
素细胞迁移 ∀而生姜无黑素细胞黏附促进作用 o同
时还观察到在其浓度高于 xs °ª#pt时 o它可促进黑
素细胞迁移 o但与同浓度下补骨脂比较作用较弱且
无剂量依赖关系 ∀在临床实践中 o作者也发现高浓
度比低浓度补骨脂更有效 o但由于其具有刺激性 o因
此临床外用治疗浓度不能过高k  s qy °ª#°ªptl ∀
传统的白癜风多是补骨脂治疗 s qx «后进行紫外线
照射k°˜∂ „l o但本实验证实这并不绝对必要 o这就
使白癜风治疗更易为患者接受 o冬季太阳光线弱并
不影响治疗的进行 o这样也避免了因紫外线照射过
度造成的皮肤色素沉着 ∀在以往民间治疗白癜风也
选用生姜外搽并有少数患者取得了一定效果 o但因
多数属于联合用药 o究竟是否属于生姜的单一作用
仍需进一步观察 o或许是生姜的其他药理作用如抗
氧化等体内作用的结果≈tt  ∀生姜与补骨脂联合治
疗白癜风将是本研究室下一步的研究目标 ∀由于本
实验室采用酒精萃取的方法提取补骨脂的有效成分
进行体外研究 o除了补骨脂素外可能还有其他次要
成分参与了体内药理过程 o这需要以后的实验来证
实 ∀
≈参考文献 
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·¬²±o§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²± ¤±§ °¬ªµ¤·¬²± ²© °¨ ¤¯±²¦¼·¨ ³µ¨¦∏µ¶²µ¶q ∆εϖελοπ2
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¤¦¬§²± °¨ ¤¯±²¦¼·¨ ¤§«¨¶¬²± ¤±§ °²·¬¯¬·¼q ∆ερµατολογψ, t||v ot{y
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Α2≥‹ ²± °¬ªµ¤·¬²± ²© «∏°¤± °²±²¦¼·¨¶ ιν ϖιτρο . Νευροπεπτιδεσ ,
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≈z  ‘¨¬·°¤±±  o „¯ ¬¨¤±§¨µ  o …µ¬±¦®°¤±± o ετ αλq „·¤¦«°¨ ±·¤±§
¦«¨ °²·¤¬¬¶²© °¨¯¤±²¦¼·¨¶¤©·¨µ∏¯·µ¤√¬²¯ ·¨¬µµ¤§¬¤·¬²± ιν ϖιτρο . Βριτιση
ϑ ∆ερµατολ, t||| otwt }z|w q
≈{  ²µ¨¯¯¬Š oŽ¬±¦¤±±²±o≠²«±o ετ αλq¨∏®²·µ¬¨±¨ ≤w ¤±§×Šƒ2
Α¤µ¨ ¶·¬°∏¯¤·²µ¶²©«∏°¤± °¨ ¤¯±²¦¼·¨ °¬ªµ¤·¬²± ιν ϖιτρο . ϑ Ινϖεστ ∆ερ2
µατολ, t||t o|{kvl }u|s q
≈|  ≥∏ª¤ ≠ o…∏·ŽŒoפ®¬°²·² • o ετ αλ. ≥∏¦¦¨¶¶©∏¯ ·µ¨¤·° ±¨·²©√¬·¬¯¬ª²
º¬·«°˜∂ „2³¬ª°¨ ±·¨§¤∏·²¯²ª²∏¶ ³¨¬§¨µ°¤¯ ªµ¤©·¬±ªq Ιντ ϑ ∆ερµατολ,
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≈ts  Ž¤² ≤ ‹ o≠∏‹ ≥ q≤²°³¤µ¬¶²± ²©·«¨ ©¨©¨¦·²©{2° ·¨«²¬¼³¶²µ¤¯ ±¨ k{2
 ’°l ³¯∏¶˜∂ „ k°˜∂ „l ²± «∏°¤± °¨¯¤±²¦¼·¨¶¬± √¬·¬¯¬ª² √∏¯ª¤µ¬¶
¤±§ ιν ϖιτρο . ϑ Ινϖεστ ∆ερµατολ, t||u o|{kxl }zvw q
≈tt  刘 宁 o霍贵成 o张 玲 o等 q生姜对高血脂大鼠脂质过氧化
作用的研究 q卫生研究 oussv ovuktl }uu q
Εφφεχτσ οφ ΜΣΦ ον µελανοχψτε αδηεσιον ανδ µιγρατιον ιν ϖιτρο
 ’˜ Ž∏¤±2«²∏t o‹„‘Š ÷¬¤±2 ¬´u o ≠˜ …¬±ªv o‹’˜ „¬2°¬±ªu oƒ∞‘Š ¬¨u
(t . ∆επαρτµεντ οφ ∆ερµατολογψ, Φιρστ Ηοσπιταλ οφ Ξι. αν ϑιαοτονγ Υνιϖερσιτψ, Ξι. αν ztssyt , Χηινα ;
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第 u|卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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u . ∆επαρτµεντ οφ ∆ερµατολογψ, Σεχονδ Ηοσπιταλ οφ Ξι. αν ϑιαοτονγ Υνιϖερσιτψ, Ξι. αν ztsssw , Χηινα ;
v . Ινστιτυτε οφ Φορενσιχ Μεδιχινε , Ξι. αν ztssyt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¤¯¼·¨¤≥¦∏µ©³¨ ¤©µ∏¬·k≥ƒl ²± °¨¯¤±²¦¼·¨ ¤§«¨¶¬²± ¤±§°¬ªµ¤·¬²±q Μετηοδ : ‹∏°¤± ³¨¬2
§¨µ°¤¯ °¨¯¤±²¦¼·¨¶ º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§ º¬·« ≥ƒ ¤±§ Š¬±ª¨µµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ o·«¨ ± ¤§«¨¶¬²± ·² ¥²√¬±¨ ¶¨µ∏° ©¬¥µ²±¨ ¦·¬±2¦²¤·¨§ ¦∏¯·∏µ¨ §¬¶«¨¶ º¤¶
¦«¨¦®¨ §q≤²±·µ²¯ ¤±§·µ¨¤·¨§¦¨¯¯¶º µ¨¨ ¤¯¶² ¬¨¤°¬±¨ §©²µ°¬ªµ¤·¬²±¬±·² °¬¦µ²³²µ¨ ©¬¯·¨µ¶¦²¤·¨§º¬·«·«¨ ¶¤°¨³µ²·¨¬±qΡεσυλτ : ≤²°³¤µ¨§º¬·«
¦²±·µ²¯ o ≥ƒ ·µ¨¤·¨§°¨¯¤±²¦¼·¨¶º µ¨¨ ²¥√¬²∏¶¯¼ ¤¨¶¬¨µ·²¤§«¨µ¨ ·²·«¨ §¬¶«¨¶¤±§°²√¨¬±·²·«¨ ©¬¯·¨µ¶¬±¤§²¶¨2§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µq • «¨ ±·«¨
§²¶¨ ²© ≥ƒ º¤¶uss °ª#pt o¬·¦²∏¯§±²·µ¨¬±¦µ¨¤¶¨ °¨¯¤±²¦¼·¨ ¤§«¨¶¬²± ¤±§°¬ªµ¤·¬²±q„·ts °ª#pt o∏±§¨µ √¨ µ¨¼ ²·«¨µ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²©
≥ƒ o·«¨µ¨ º¤¶±² °¤µ®¨ §§¬©©¨µ¨±¦¨ ¤°²±ª ≥ƒ2·µ¨¤·¨§o Š¬±ª¨µ2·µ¨¤·¨§¤±§∏±·µ¨¤·¨§ °¨¯¤±²¦¼·¨¶k Π s qsxl º«¨ ± ¤§«¨¶¬²± ·¨¶·º µ¨¨
¶·∏§¬¨§q…∏··² °¬ªµ¤·¬²±o √¨ ±¨ ¤·ts °ª#pt ≥ƒ o·«¨µ¨ º¤¶²¥√¬²∏¶¬±¦µ¨¤¶¨§ °¬ªµ¤·¬²± ¦²°³¤µ¨§ º¬·« ≥ƒ2∏±·µ¨¤·¨§²µŠ¬±ª¨µ2·µ¨¤·¨§
°¨¯¤±²¦¼·¨¶k Π s qstl qΧονχλυσιον : ≥ƒ «¤¶ ©¨©¨¦·²± °¨¯¤±²¦¼·¨ ¤§«¨¶¬²±¤±§°¬ªµ¤·¬²±oº«¬¦«¦¤± ¬¨³¯¤¬±o¬± ³¤µ·o·«¨ ¦¤³¤¦¬·¼ ²© ≥ƒ
·² °²§∏¯¤·¨ °¨¯¤±²¦¼·¨©∏±¦·¬²±¬± √¬·¬¯¬ª²¯¨ ¶¬²±¶q
[ Κεψ ωορδσ] °¨¯¤±²¦¼·¨ ~ ¤¯¼·¨¤≥¦∏µ©³¨ ¤©µ∏¬·~Š¬±ª¨µ~¤§«¨¶¬²±~ °¬ªµ¤·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
鹅去氧胆酸的平喘及抗炎作用机理研究
李培锋 3 o关 红 o赵红霞 o斯 琴
k内蒙古农业大学 动物科学与医学学院 o内蒙古 呼和浩特 ostsst{l
≈摘要  目的 }研究鹅去氧胆酸k≤⁄≤„l的平喘及抗炎作用机理 ∀方法 }采用硝酸还原酶法 o分析 ≤⁄≤„对大鼠
血清和气管组织中 ‘’含量的影响 ~采用竞争性蛋白质结合分析法 o分析 ≤⁄≤„对大白鼠气管组织中的 ¦„°含量
的影响 ~采用紫外分光光度法 o分析 ≤⁄≤„对小鼠气管和肺组织中的 °Š∞u 含量 ∀结果 }≤⁄≤„能极显著地降低大鼠
血清和气管组织中的 ‘’含量的影响 ~能极显著地提高大白鼠气管组织中的 ¦„°含量 ~能显著地降低小鼠气管和
肺组织中的 °Š∞u含量 ∀结论 }≤⁄≤„的平喘及抗炎作用机理与其提高气管组织中的 ¦„°含量及降低体内 ‘’ 和
°Š∞u含量有关 ∀
≈关键词  鹅去氧胆酸 ~平喘 ~抗炎 ~作用机理 ~环磷酸腺苷 ~一氧化氮 ~前列腺素 ∞u
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsw2svw|2sw
鹅去氧胆酸k¦«¨ ±²§¨²¬¼¦«²¯¬±¨ ¤¦¬§o≤⁄≤„l o是
多种动物胆汁均含有的初级胆汁酸 o也是鸡胆汁的
主要有效成分之一 o其化学成分为 vΑozΑ2二羟基2xΒ
胆烷酸 ∀具有利胆 !降低胆固醇的分泌 !溶解胆固醇
结石等功能 ∀临床上主要用于治疗胆固醇型胆结石
等≈t ∗ v  ∀而在传统医学上鸡胆汁多用于治疗呼系统
疾病 o如百日咳 !气管炎 !肺炎 !喘息 !咳嗽等≈w ox  ∀作
者曾证明 ≤⁄≤„具有显著地平喘和抗炎作用 ∀为了
进一步了解 ≤⁄≤„ 的平喘及抗炎作用机理 o作者
≈收稿日期  ussv2s|2t{
≈基金项目  国家自然科学基金资助kv|yyss{wl
≈通讯作者   3 李培锋 o ר¯ }kswztl wvs|tzy o ƒ¤¬}kswztl
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探讨了 ≤⁄≤„ 对动物血清 !气管和肺组织中 ‘’ o
¦„°和 °Š∞u含量的影响 ∀
1 材料
1 q1 药品与试剂 ≤⁄≤„ o由本课题组从鸡胆汁中
提取 o纯度为 || qv h ~鹅去氧胆酸标准品 o由美国
≥¬ª°¤公司提供 o批号 s{wy2|xst ~氨茶碱注射液 o北
京制药厂提供 o批号 zyswsytx ~地塞米松磷酸钠注射
液 o北京制药厂 o批号 sususuu ~¦„°测定试剂盒 o中
国医学科学院基础医学研究所药理研究室提供 ~‘’
测定试剂盒 o南京建成生物工程研究所提供 ∀前列
腺素 ∞u由 ≥¬ª°¤化学公司提供 o批号 zt‹vz|x ∀
1 q2 动物 清洁级纯昆明种小鼠 o体重kus ? ul ªo
雌雄各半 ~清洁级 •¬¶·¤µ大鼠 o体重kuss ? usl ªo雌
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第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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