全 文 ：肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及
转化生长因子 Βt表达的影响
王亚利t o赵玉庸u 3 o陈志强t o许庆友u o徐华洲v o李彤中t o侯仙明t
kt1 河北医科大学 中医学院 o河北 石家庄 sxss|t ~
u1 河北医科大学 中西医结合学院 o河北 石家庄 sxss|t ~
v1 河北医科大学 基础医学部 o河北 石家庄 sxss|tl
≈摘要  目的 } 探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子 Βt
k׊ƒ2Βtl表达的调节作用 ∀方法 }以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础 o采用酶联免疫吸附试
验检测细胞外基质中纤维连接蛋白kƒ‘l !·型胶原k≤²¯ ·l的含量 ~采用逆转录2多聚酶链反应k• ×2°≤• l检测 ׊ƒ2Βt
°• ‘„的表达 ∀结果 }细胞外基质 ƒ‘o≤²¯ ·的含量与 ׊ƒ2Βt °• ‘„的表达呈正相关关系 o肾络通对二者均有抑制作
用 ∀结论 }肾络通能够减少细胞外基质的积聚 o抑制 ׊ƒ2Βt的分泌与表达 o从而进一步明确了其防治多种肾小球疾
病 o延缓肾小球硬化的作用机制 ∀
≈关键词  系膜细胞 ~肾络通 ~缬沙坦 ~转化生长因子 ~纤维连接蛋白 ~·型胶原
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsv2sust2sv
≈收稿日期  ussw2ts2uz
≈基金项目   河北省科学技术研究与发展计划项目
ksvuzyt|y⁄2z{l
≈通讯作者  3 赵玉庸 oר¯ }ksvttlyuyxuzu o∞2°¤¬¯}⁄≠v{t{ ƒ
tyv1¦²°
肾小球细胞外基质的积聚与多种肾小球疾病的
进展密切相关 o是肾小球硬化的主要特征之一 ∀研
究证实 o免疫介导和非免疫介导的动物肾小球疾病
模型及人类多种肾小球疾病 o转化生长因子 Βtk׊ƒ2
Βtl表达增加与细胞外基质k∞≤l沉积增加相一致 o
׊ƒ2Βt是肾小球硬化的主要介质≈t  ∀通过实验观察
肾络通药物血清对离体培养的系膜细胞k≤¶l分泌
∞≤ 及 ׊ƒ2Βt °• ‘„的影响 o旨在阐明其肾保护作
用的可能机制 ∀
1 材料与方法
111 药物血清制备 肾络通药材购于石家庄市乐
仁堂药店 ∀黄芪为豆科植物膜荚黄芪 Αστραγαλυσ
µεµβραναχευσ kƒ¬¶¦«1l …ª¨ 1的干燥根 ~丹参为唇形科
植物丹参 Σαλϖια µιλτιορρηιζα …¤ª1 的干燥根及根茎 ~
川芎为伞形科植物川芎 Λιγυστιχυµ χηυανξιονγ ‹²µ·1
的干燥根茎 ~大黄为蓼科植物药用大黄 Ρηευµ οφφιχι2
ναλε …¤¬¯¯1的干燥根及根茎 ~地龙为钜蚓科动物栉盲
环毛蚓 Πηερετιµα πεχτινιφερα ¬¦«¤¨ ¶¯¨±1的干燥体 ~僵
蚕为蚕娥科昆虫家蚕 Βοµβψξ µορι 1 w ∗ x龄的幼虫
感染白僵菌 Βεαυϖερια βασσιαναk…¤¯¶1l ∂∏¬¯¯¤±·而致
死的干燥体 ~乌梢蛇为游蛇科动物乌梢蛇 Ζαοχψσ
δηυµναδεσk≤¤±·²µl 的干燥体k均由河北医科大学中
医学院中药系郑玉光副教授鉴定l ∀药物水煎 !过
滤 !浓缩至每毫升药液含生药 u1x ªo置于 w ε 冰箱
保存待用 ∀≥⁄大鼠 ty只 o体重 t{s ∗ uus ªo雌雄兼
用 o由河北医科大学动物实验中心提供 o随机分为空
白血清组 !肾络通血清组 ∀肾络通血清组大鼠每日
u次灌胃 o每次 v °o连续 v §o末次给药 t «后无菌
股动脉取血 o充分凝血后分离血清 o灭活处理后用
s1uu Λ°微孔滤膜过滤 op us ε 冰箱保存备用 ∀空
白组大鼠灌服同等剂量蒸馏水 o与肾络通血清组同
时采血 o分离血清备用 ∀
112 系膜细胞的培养及鉴定 ≥⁄大鼠 y只 o体重
tws ∗ tys ªo雌雄兼用 o由河北医科大学动物实验中
心提供 o无菌取肾 o肾皮质剪成碎屑 o依次通过 {s o
tws ouus目筛网 o收集肾小球 ot ª#pt ·型胶原酶消
化 tx °¬±o接种于培养瓶 ∀培养液为含 us h ƒ≤¶等
成分的 • °Œ2tywsk均为 ≥¬ª°¤公司产品l ∀当 ≤¶
长至 {s h融合时 o消化传代 ∀亚培养的系膜细胞生
长很快 ou ∗ w §布满瓶底 o可冻存备用 ∀经形态学 !
免疫组化鉴定为 ≤¶o取 x ∗ y代细胞为实验所用 ∀
#tsu#
第 vs卷第 v期
ussx年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ v
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼oussx
113 细胞外基质检测
11311 分组与培养 ≤¶以 t ≅ tswr孔接种于 |y
孔板内 ouw «后换成含 t h胎牛血清的培养液孵育
uw «o使细胞同步于静止期 o弃上清 ~|y孔板列从左
至右依次分为正常对照组 !„±ª µ组 !∂¤¯¶¤µ·¤±组
k∂¤¯¶¤µ·¤± tsp z °²¯ #ptl !肾络通低 !中 !高剂量组
kt1ux h ou1x h ox h肾络通血清 o不足 x h者用正常
大鼠血清补齐l ∀前 v组分别加入 x h正常鼠血清 ~
除正常对照组外 o其余各组均加入 „±ªµtsp y °²¯#
pt o以含 t h ƒ≤¶• °Œ2tyws液为培养底物 o每组设
{个复孔 ovz ε ox h ≤’u 条件下孵育 w{ «收集上
清 ∀
11312 ƒ‘o≤²¯ ·含量测定 按 ∞Œ≥„试剂盒k上海
朗卡生物工程公司l说明书操作 ∀
114 ׊ƒ2Βt °• ‘„检测
11411 细胞总 • ‘„的提取 ≤¶培养于 zx °培
养瓶中 o约 t ≅ tsz时 o改用含 t h胎牛血清的培养液
中同步化 uw «∀按上述方法分组给药 ov瓶作为 t
组 ∀各组细胞经磷酸盐缓冲液洗涤后 o加 ×µ¬½²¯ • ‘„
提取液k美国 ¬©¨ × ¦¨«±²¯²ª¬¨¶公司l提取细胞总
• ‘„ ∀总 • ‘„ 提取后 o经检测纯度极高 !完整无降
解 o根据 „uys值计算总 • ‘„的浓度 ∀
11412 引物准备 引物由上海中生生物工程公司
合成 o׊ƒ2Βt °• ‘„上游引物序列为 x2≤×× ≤„Š ≤×≤
≤„≤ „Š„ Š„„ Š„„ ×≤Š ≤2v o下游引物序列为 x2
≤„≤ Š„≤ ≤„× Š≤≤ ŠŠ„ ≤„„ ≤׊ ≤×≤ ≤2v o扩增基
因片断长度为 v|y ¥³∀Β2¤¦·¬±上游引物序列为 x2
Š≤≤ „׊ ׄ≤ Š×„ Š≤≤ „×≤ ≤„2v o下游为 x2Š„„
≤≤Š ≤×≤ „×× Š≤≤ Š„× „Š2v o扩增基因片断长度为
vzx ¥³∀
11413 • ×2°≤• • ≤°仪为 Š¨ ±¨ ¤°³ |yss型 ∀ °≤•
体系组成 }上下游引物各 u ˏo¦⁄‘„ u ˏoפ´ 酶 !去
离子水等共计 ty ˏo总反应体积为 us ˏ∀反应条
件为 ≠ ¦⁄‘„的合成和预变性 }wu ε owx °¬±o|w ε ox
°¬±~ °≤• 扩增 }|w ε owx ¶oxv ε owx ¶ozu ε owx ¶
共 vx个循环 ~≈循环完毕后 zu ε 延伸 x °¬±∀ °≤•
产物的定量 }取 tx ˏ°≤• 产物进行 u h琼脂糖凝胶
电泳 vs °¬±o紫外灯下照相 o用图象分析处理系统
k˜∂°公司l进行灰度扫描 ∀并以 Β2¤¦·¬±校正作相
对量分析 o数值以两者之积分吸光度的比值表示 ∀
115 统计学方法 数据采用 ≥°≥≥tu1s ©²µº¬±§²º¶
统计分析软件进行处理 ∀计量资料所有数据以 cξ ?
σ表示 o多个样本均数的比较用方差分析 o多样本均
数间的比较用 θ检验进行统计学处理 ∀有关指标
作多元性相关分析 ∀
2 结果
211 肾络通对 ƒ‘及 ≤²¯ ·含量的影响 肾络通药
物血清与 ∂¤¯¶¤µ·¤±均能显著降低 „±ª µ所诱导的
∞≤ 中 ƒ‘o≤²¯ ·的含量 o但前者高剂量组优于后
者 ∀肾络通各剂量组体现出一定的的浓度依赖性
k表 tl ∀
表 t 各实验组细胞培养液上清中 ƒ‘及 ≤²¯ ·
的含量kcξ ? σ, ν € {l
组别
剂量
r°²¯#pt
ƒ‘
r±ª#°pt
≤²¯ ·
r±ª#°pt
正常对照 2 zt1ux ? u1uuul uu1{s ? v1s|ul
„±ª µ tsp y {w1ws ? w1uu vs1ws ? u1x|
∂¤¯¶¤µ·¤± tsp z yv1{z ? v1{|t oul us1tu ? t1yuul
肾络通 t1ux h ys1zw ? u1{|t oul t|1zx ? t1xsul
u1x h x|1uz ? v1vvt oul tx1|w ? t1xst ou ov owl
x h xv1|w ? u1uwt ou ov owl ts1xw ? t1vyt ou ov owl
注 }与正常对照组相比tl Π s1st ~与 „±ª µ组相比ul Π s1st ~与
∂¤¯¶¤µ·¤±组相比vl Π s1st ~肾络通各剂量组相比wl Π s1st
212 肾络通对 ׊ƒ2Βt °• ‘„的影响 • ×2°≤• 半定
量分析显示 o肾络通与 ∂¤¯¶¤µ·¤±均能显著抑制 „±ª
ŒŒ诱导的 ׊ƒ2Βt °• ‘„的上调 o前者中 !高剂量组优
于后者 ∀肾络通各剂量组呈明显剂量依赖关系
k Π s1stlk表 u o图 tl ∀
表 u 各实验组系膜细胞 ׊ƒ2Βt °• ‘„与
Β2¤¦·¬± °• ‘„灰度扫描比值kcξ ? σ, ν € vl
组别 剂量r°²¯#pt 比值
正常对照 2 s1uv ? s1tvvl
„±ª µ tsp y s1vx ? s1tt
∂¤¯¶¤µ·¤± tsp z s1vs ? s1tvu ovl
肾络通 t1ux h s1u| ? s1s{u ovl
u1x h s1ux ? s1szv owl
x h s1t| ? s1tst ov owl
注 }与正常对照组比tl Π s1sx oul Π s1st ~与 „±ªŒŒ组比vl Π 
s1st ~与 ∂¤¯¶¤µ·¤±组比wl Π s1st
图 t 肾络通及 ∂¤¯¶¤µ·¤±对 „±ªŒŒ刺激系膜
细胞 ׊ƒ2Βt °• ‘„表达的影响
#usu#
第 vs卷第 v期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ v
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213 相关性分析 各组 ׊ƒ2Βt °• ‘„ 表达水平和
ƒ‘ o≤²¯ ·含量进行相关性分析 o结果显示与 ׊ƒ2Βt
°• ‘„与 ƒ‘kρ € s1yy oΠ  s1stl o≤²¯ ·kρ € s1zz ,
Π s1stl均呈显著正相关 ∀
3 讨论
„±ªŒŒ为系膜细胞外基质合成的强诱导剂 o主
要通过诱导 ׊ƒ2Βt 表达 o导致 ≤¶增殖肥大 o促使
∞≤ 合成 !沉积 o从而使肾脏病向纤维化进展≈u  ∀
本实验以 „±ª µ作用于细胞培养体系 o∞≤ 中 ƒ‘o
≤²¯ ·合成均增加 o׊ƒ2Βt °• ‘„呈高表达 o二者呈正
相关关系 ∀在多种人类肾小球增生性或非增生性肾
炎中 o׊ƒ2Βt °• ‘„和细胞外基质成分变化情况 o与
上述实验结果一致≈v ow  ∀因此 o通过减少细胞外基
质的积聚 o抑制 ׊ƒ2Βt 的分泌与表达 o可有效地防
治多种肾小球疾病 o延缓肾小球硬化 ∀
肾络通系经验方 o临床治疗多种肾脏病每获良
效≈x  ∀本实验证实 o肾络通对 ∞≤ 中 ƒ‘o≤²¯ ·合成
均具明显的降低作用 o可下调 ≤¶×Šƒ2Βt °• ‘„ 的
高表达 o并呈现出一定的量效关系 ~肾络通作用的重
要靶细胞为 ≤¶o重要靶位蛋白为 ׊ƒ2Βt ∀阻滞
„±ªŒŒ的损伤作用 o减轻 ∞≤ 的积聚可能是肾络通
治疗多种肾小球疾病及延缓肾小球硬化的主要作用
机制之一 o起到甚至超过 „±ªŒŒ受体拮抗剂 ∂¤¯¶¤µ2
·¤±的治疗作用 ∀
总之 o本实验结果表明 o∞≤ 的扩增与 ׊ƒ2Βt
呈正相关关系 o肾络通对二者均呈明显抑制作用 o进
而为益气活血 !化瘀通络中药治疗多种肾小球疾病
奠定了分子生物学基础 ∀至于肾络通的作用途径 o
应在能否拮抗 „±ªŒŒ受体方面进一步深入研究 ∀
≈参考文献 
≈t  刘国元 1 ׊ƒ2Βt与肾小球硬化关系的研究 1 国外医学#泌尿系
统分册 oussu ouukyl }vyt1
≈u  丁 炜 o李惊子 o王海燕 1 转化生长因子 Β与肾小球疾病进展
关系 1 国外医学#泌尿系统分册 ot||z otzkyl }uzv1
≈v  Š²∏° ±¨²¶ ⁄ ≥ o ׶¤°¤±§¤¶ „ ≤ o ’¯ §µ²¼§ ≥ oετ αλ1 ×µ¤±¶©²µ°¬±ª
ªµ²º·«©¤¦·²µ2¥¨·¤ktl ¤±§°¼²©¬¥µ²¥¯¤¶·¶}¤³²·¨±·¬¤¯ ³¤·«º¤¼·²º¤µ§¶
µ¨±¤¯ ¶¦¤µµ¬±ª¬± «∏°¤± ª¯²°¨ µ∏¯2¤µ§¬¶¨¤¶¨1 Νεπηρον ousst o{zkvl }
uws1
≈w  ≥·²®¨ ¶ …o ‹∏§®¬±¶Žo¤«¤µ¬¤ ∂ oετ αλ1 ˜³2µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© ¬¨·µ¤2
¦¨¯¯∏¯¤µ°¤·µ¬¬³µ²·2 ²¨ª¯¼¦¤±¶¤±§¦²¯ ¤¯ª¨ ± ·¼³¨ Œ¬± «∏°¤± ¦µ¨¶¦¨±·¬¦
ª¯²° µ¨∏¯²±¨ ³«µ¬·¬¶1 ΚιδνεψΙντ ousst ox|kul }xvu1
≈x  赵玉庸 o陈志强 o于春泉 o等 1 肾络通治疗系膜增生性肾小球肾
炎的临床观察 1 中国中西医结合杂志 oussu ovuktul }|s|1
Εφφεχτ οφ Σηενλυοτονγ ον σεχρετιον οφ ΕΧΜ ανδ εξπρεσσιον
οφ ΤΓΦ2Βt ιν ρατσ µεσανγιαλ χελλσ οφ ρατσ
• „‘Š ≠¤2¯¬t o‹„’ ≠∏2¼²±ªu o≤‹∞‘«¬2 ¬´¤±ªt o ÷˜ ±¬±ª2¼²∏u o ÷˜ ‹∏¤2½«²∏v oŒ ײ±ª2½«²±ªt o ‹’˜ ÷¬¤±2°¬±ªt
(t1 Τρεδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε χολλεγε , Ηεβει Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, σηιϕιαζηυανγ sxss|t , Χηινα ;
u1 Χολλεγε οφ Τρεδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε Ιντεγρατεδ ωιτη Ωεστερν Μεδιχινε , Ηεβει Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηιϕιαζηυανγ sxss|t , Χηινα ;
v1 Βασιχ Μεδιχαλ Χολλεγε , Ηεβει Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηιϕιαζηυανγ sxss|t , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨¦·²©≥«¨ ±¯∏²·²±ª²±·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©·µ¤±¶©²µ°¬±ªªµ²º·«©¤¦·²µ2Βtk׊ƒ2Βtl ¤±§ ¬¨·µ¤2
¦¨¯¯∏¯¤µ°¤·µ¬¬k∞≤ l ¬± „±ªŒŒ2¬±§∏¦¨§ ≤¶1 Μετηοδ : ƒ¬¥µ²±¨ ¦·¬±kƒ‘l ¤±§¦²¯ ¤¯ª¨ ±·¼³¨ · k≤²¯ ·l ²© ¬¨·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ°¤·µ¬¬º µ¨¨ §¨·¨¦·¨§
¥¼ ±¨½¼° 2¨¯¬±®¨ §¬°°∏±²¶²µ¥¨ ±·¤¶¶¤¼~·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©×Šƒ2Βt °• ‘„ º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ¶¨ °¬2 ∏´¤±·¬·¤·¬√¨µ¨√ µ¨¶¨ ·µ¤±¶¦µ¬³·¬²±2³²¯¼ ° µ¨¤¶¨
¦«¤¬± µ¨¤¦·¬²±1 Ρεσυλτ : „ ³²¶¬·¬√¨¦²µµ¨ ¤¯·¬²± ¥·º¨¨ ± ׊ƒ2Βt ¤±§∞≤  º µ¨¨ ©²∏±§¬±·«¨ ³µ¨¶¨±·¶·∏§¼1 ƒ‘o≤²¯ · ¤±§×Šƒ2Βt °• ‘„ º µ¨¨
¬±«¬¥¬·¨§¥¼ ≥«¨ ±¯∏²·²±ª¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼1 Χονχλυσιον : ≥«¨ ±¯∏²·²±ª¦¤± §¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¤¦¦∏°∏¯¤·¬²± ²©∞≤  ¤±§¬±«¬¥¬··«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©×Šƒ2Βt o
¶∏ªª¨¶·¬±ª©∏µ·«¨µ·«¤·¶«¨ ±¯∏²·²±ª¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·²³µ¨√ ±¨·¤±§·µ¨¤·√¤µ¬²∏¶ª¯²° µ¨∏¯¤µ§¬¶¨¤¶¨¶¤±§§¨ ¤¯¼ ª¯²° µ¨∏¯¤µ¶¦¯ µ¨²¶¬¶1
[ Κεψ ωορδσ] ≤¶~≥«¨ ±¯∏²·²±ª~√¤¯¶¤µ·¤±~׊ƒ2Βt ~ƒ‘~≤²¯ ·
≈责任编辑 方文贤 
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第 vs卷第 v期
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