全 文 ：清肺饮对流感病毒 r° r{rvwkttl
感染小白鼠血凝素抗体 !神经氨酸酶抗体的影响
王成祥t 3 o王惠芳u o沈杏生u o姜良铎t o杜怀棠t
kt q北京中医药大学 东直门医院 o北京 tsszss ~u q解放军药物化学研究所 o北京 tssxwwl
清肺饮是本院治疗急性病毒性下呼吸道感染的有效院
内制剂 o为了对其作用机制进行探讨 o笔者设计了系列试验 o
本试验主要从清肺饮对机体特异性抗病毒免疫的影响方面
进行探讨 ∀
1 材料
1 q1 病毒株
流感病毒 r° r{rvwkttl购于中国预防医学科学院
病毒所国家流感中心 ∀经鸡胚传两代后 op zs ε 冰箱保存 o
试验时测血凝滴度为 tΒyws ∀
1 q2 动物
昆明种小白鼠 o封闭群一级 o雄雌各半 o体重 t{ ∗ us ªo
由北京医科大学实验动物中心提供 o饲养室温度 t{ ∗ uw ε o
湿度 ws h ∗ zs h ∀
1 q3 药物
清肺饮k由炙麻黄 !炒杏仁 !黄芩 !虎杖 !连翘 !僵蚕等 tu
味中药组成 o采用水煮醇提法制备 o生药含量 t tzs ª#ptl由
北京中医药大学东直门医院药剂室提供 ∀病毒唑k利巴韦林
片l浙江 o浙北制药厂生产 ∀规格 }每片含 s qt ª∀
1 q4 仪器及设备
超级恒温器 ≤≥ p xst型 o重庆试验设备厂 ~|y孔 ∂ 型血
凝板 ~s qsx °加样器 o吸头若干 ~×p ≤ 台式高速冷冻离心
机 o调整温度为 w ε ∀日立 p vws型 ∂ p ∂≥分光光度计 o
日本 ∀
2 方法
造模及血清制备 o血凝抑制滴度测定 o神经氨酸酶抑制
滴度测定 o采用 5医学病毒学基础及实验技术6提供的技
术≈t ∀
2 q1 造模
病毒感染模型 }选择没有自然抗体的小鼠轻度乙醚麻醉
后 o将 tΒyws血凝滴度的流感病毒液以 tspw稀释 o每只取 s qsx
°滴鼻 ∀正常对照模型 }在乙醚轻度麻醉下 o每只小鼠鼻内
滴生理盐水 s qsx °∀造模后 o各组动物隔离喂养 ∀
2 q2 分组
≈收稿日期 ussv2s{2us
≈通讯作者 3 王成祥 oר¯ }kstsl{wstvuwv o∞2°¤¬¯}• ¤±ªyst
√¬³q≥¬±¤q¦²°
2 q2 q1 清肺饮治疗组 tu只 o病毒感染模型小鼠造模后 o将
清肺饮 { qv ª#®ªp tk相当于成人 t日剂量l稀释后 o取 s qv °
#§pt o灌胃 o每日 t次 ∀
2 q2 q2 病毒唑对照组 tu只 o病毒感染模型小鼠造模后 o将
病毒唑 wu qxx °ª#®ªp tk相当于成人 t日剂量l稀释后 os qv °
#§pt o灌胃 o每日 t次 ∀
2 q2 q3 模型对照组 tu只 o病毒感染模型小鼠造模后 o取生
理盐水k≥ls qv °o灌胃 o每日 t次 ∀
2 q2 q4 正常对照组 tu只 o正常对照模型小鼠 o生理盐水 s qv
°o灌胃 o每日 t次 ∀
2 q3 血清制备与处理
2 q3 q1 制备上述动物于 z §后取 y只 o摘眼球取血 o分离血
清 ∀另一半继续灌胃至 tw §o然后取血 o分离血清 ∀
2 q3 q2 血清处理 ≠去除非特异性抑制素 }每 s qsux °血
清 o加用去离子水新配制的 s qst °²¯#pt高碘酸钾溶液 s qsx
°o置室温 tx °¬±o再加 ts h的葡萄糖生理盐水 s qsux °恒
温器中xy ε 加热vs °¬± ∀ 去除非特异性凝集素 }加入
s qsux °原倍鸡红细胞 o置 vz ε vs °¬±o离心除去鸡红细
胞 ∀
处理后的血清用生理盐水作 tΒx稀释 o然后用磷酸盐缓
冲液连续 u倍稀释 o成 tΒts ∗ tΒt u{s ∀
2 q4 检测方法
2 q4 q1 抗体检测 采用 试验 o按下公式计算血凝抑
制滴度 ∀血凝抑制滴度为完全抑制病毒凝集红细胞的血清
最高稀释度的倒数 o以血凝抑制滴度表示血凝素抗体的效
价 ∀
血凝抑制效价 Αn ≈k αn β p wlrw ≅ k Β p Αl
kΑq为完全抑制血凝的血清最高稀释度 ~ Β q为出现血
凝的最低稀释度 ~ αq为完全抑制血凝的血清最高稀释度的
血凝抑制程度 o以 w表示 ~ β q为出现血凝的血清最低稀释度
的血凝抑制程度 o以 s ot ou ov表示l
2 q4 q2 神经氨酸酶抗体检测 采用神经氨酸酶抑制试验 ∀
吸取不同稀释度血清各 s qt °o加 t单位酶原 s qt °放在
室温作用 vs °¬±o加底物 s qt °o放在 vz ε 水浴中作用 u ∗ v
«o然后按神经氨酸酶试验测各稀释度神经氨酸酶活性 ∀以
抑制 t单位酶原 xs h酶活力的血清稀释度为神经氨酸酶抑
制滴度 o以该滴度的倒数 o表示神经氨酸酶抗体的浓度 ∀
#t|t#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ u
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼oussw
3 结果
3 q1 清肺饮对流感病毒感染小鼠血凝抗体滴度的影响 o见
表 t ∀
表 t 各组感染小鼠血清
血凝素抗体滴度k¯ ±Ξlk ξ ? σ, ν yl
组别
剂量
r°ª#®ªpt
z § tw §
清肺饮组 { vss x qtzz ? s qu{{tl x qz{y ? s quvvtl
病毒唑组 wu qxx u q{yu ? s qxwz w qsw{ ? s qwzw
病毒对照组 ≥ w qt|z ? s qxsx w q|y{ ? s qvvw
正常对照组 ≥ p p
注 }清肺饮组与病毒唑组 o病毒组比较 tl Π s qstk表 u同l
试验时以血凝素 !红细胞 !各组血清对照无血凝抑制及
神经氨酸酶抑制现象 o说明经过处理的血清已除去非特异性
血凝抑制素及血清凝集素 ∀
3 q2 清肺饮对流感病毒感染小鼠血清神经氨酸酶抗体滴度
的影响 o见表 u ∀
表 u 各组感染小鼠
血清神经氨酸酶抗体滴度k¯ ±Ξlk ξ ? σ, ν yl
组别
剂量
r°ª#®ªpt
z § tw §
清肺饮组 { vss w q|tu ? s qwv|tl x q|{{ ? s qvt{tl
病毒唑组 wu qxx v qxzw ? s qxuv w qyx| ? s qv{s
病毒对照组 ≥ v qy{| ? s qyus w q{z| ? s qw{v
正常对照组 ≥ p p
4 讨论
4 q1 血凝素抗体 !神经氨酸酶抗体可影响流感病毒感染复
制过程中的某些环节吸附与释放是流感病毒感染复制的两
个重要过程 o吸附是通过血凝素kl而完成的 o释放是通过
神经氨酸酶kl而完成的 ∀因此影响 和 的活性就
可以影响吸附与释放过程 o从而达到阻止流感病毒的感染与
复制的目的 ∀为此 o笔者曾设计试验观察清肺饮原药及血药
对流感病毒 r° r{rvwkttl和 的影响 o发现没有明
显作用 ∀所以就设计试验进一步观察清肺饮对两种抗原产
生抗体的影响 ∀
与 位于流感病毒的表面 o具有抗原作用 o感染机
体后 o产生相应的抗体 o抗体的增加可以与抗原结合 o从而影
响抗原的活性 o起到阻止感染复制过程的目的 ∀近年来还发
现 o流感病毒血凝素的单克隆抗体作用于病毒颗粒后 o可引
起病毒表面蛋白构型的改变 o这不仅影响病毒吸附穿入细
胞 o而且可影响病毒穿入细胞后的复制步骤 o导致病毒颗粒
中的 转录酶活性丧失 ∀另外抗体与病毒中和形成免疫
复合物 o易被巨噬细胞吞噬而清除 ∀由于抗体的分子量大 o
不能通过细胞膜 o对细胞内的病毒不能直接中和 o但它可与
⁄≤≤k抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用l的效应细胞 细
胞协同作用 o破坏病毒感染的靶细胞 ∀因此设计本试验 o
观察清肺饮对 o产生抗体是否有促进作用 ∀
从试验结果看 }清肺饮可提高流感病毒 r° r{rvw
kttl感染小白鼠血凝素抗体及神经氨酸酶抗体水平 o从而
证实了清肺饮提高特异性抗病毒免疫作用是清肺饮治疗流
感有效的作用机制之一 ∀抗体的产生必须有同种抗原存在 o
本试验在有清肺饮参与的情况下 o特异性抗体产生增多 o这
说明清肺饮或其代谢物中可能含有类似免疫佐剂样成分 o而
目前可用于人体的免疫佐剂非常少 o因此清肺饮的这一作
用 o对进一步开发中药免疫佐剂新药有重要意义 ∀
≈参考文献
≈t 黄祯祥 o洪 涛 o刘崇柏 q医学病毒学基础及实验技术 q北京 }
科学出版社 ot||s qyzv oy{s q
≈责任编辑 古云侠
对我院复方丹参注射液的配伍应用分析
刘 翎t 3 o金 雪u o张爱琴t o白玉国t
kt q首都医科大学 附属北京安贞医院 o北京 tsssu| ~u q首都医科大学 o北京 tsssxwl
复方丹参注射液是由丹参提取物与降香提取物配制而
成 o具有活血化瘀 !降气止痛之功效 o有扩张冠状动脉 !增加
血流量 !耐缺氧 !增强心肌收缩力 !减慢心率 !改善心脏功能 !
抑制凝血 !促进组织修复 !降低血脂和血黏度及清除自由基
等作用 ∀临床除用于治疗冠心病 !心绞痛 !急性心肌梗死及
≈收稿日期 ussu2tu2sw
≈通讯作者 3刘翎 oר¯ }kstsl{wuzw|uz
传导阻滞外 o还用于脑血栓形成的后遗症 !脑血管意外 !颈椎
病 !心肌炎 !肺心病 !保护肝损伤及治疗慢性肝炎 !糖尿病 !流
行性出血热 !肾脏疾病等 ∀随着临床应用的日趋广泛 o临床
操作配制复方丹参注射液时常有混浊现象出现 o影响了临床
应用并由此引发了药物不良反应 ∀
笔者整理总结了本院 ussu年 t月至 y月的处方用药情
况 o并对含有复方丹参注射液的处方进行统计 !分析 o以期了
解本院对复方丹参注射液配伍的临床应用的合理性 !安全
#u|t#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ u
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