全 文 ：正交试验设计优化甘草附子汤的提取工艺
高秋涛 o毕开顺 3
k沈阳药科大学 o辽宁 沈阳 ttsstyl
≈收稿日期 ussu2ts2tx
≈通讯作者 3 毕开顺 oר¯ }ksuwluv{wvztt2vvyv o∞2°¤¬¯}®¶¥¬
°¤¬¯1¶¼1 ±¯1¦±
甘草附子汤出自张仲景5伤寒论#辨太阳病脉证并治6 o
由甘草 w ªo附子 w ªo白术 w ªo桂枝 { ª组成 ∀主要用于风湿
及类风湿性关节炎等症 ∀其中甘草酸为甘草的主要有效成
分 o桂皮酸为桂枝的主要成分 o其含量测定方法多 o文献报道
较多≈t2w ∀甘草附子汤传统剂型为水煎剂 o为将其开发为现
代中药成方制剂 o本室作了一系列研究 ∀本研究采用 xs h乙
醇对甘草附子汤进行回流提取 o以浸膏得率 !甘草中主要成
分甘草酸的含量和桂枝中主要成分桂皮酸的含量为考察指
标 o利用正交试验设计法对甘草附子汤的提取工艺进行了优
化 ∀
1 仪器与药品
岛津 ≤ p ts高效液相色谱仪 o≥°⁄p ts紫外检测器 o
≤≤«µ²°×k色谱工作站 o≥¤µ·²µ¬∏¶
°uts≥型电子分析天平 o
ƒ±{x型旋转蒸发仪 ∀
甘草 !附子 !白术 !桂枝药材购于沈阳天益堂药店 o经沈
阳药科大学孙启时教授鉴定为正品 ∀药材粉碎后过 ws目筛
使用 ∀甘草酸对照品购于美国 ≥¬ª°¤公司 o桂皮酸对照品购
于中国药品生物制品检定所 o联苯 !甲萘酚为化学纯 o甲醇 !
乙腈为色谱纯 o其他试剂均为分析纯 ∀
2 方法与结果
211 样品溶液的制备 称取甘草 t ª!附子 t ª!白术 t ª!桂
枝 u ªo以 xs h乙醇提取 o按照 |kvwl正交表安排试验 o各因
素水平见表 t ∀过滤后旋转蒸发回收溶剂得到浸膏 o用甲醇
溶解并稀释定容于 ts °量瓶中 o即得样品溶液 ∀
表 t 提取工艺因素水平
水平
Α
溶剂量
r倍
Β
提取时间
r°¬±
Χ
提取次数
r次
t { |s t
u ts vs u
v y ys v
212 对照品溶液和内标溶液的制备 精密称取甘草酸对照
品 tu1s °ªo用甲醇定容于 ts °量瓶中 o得到对照品溶液 ∀
精密称取联苯 tx1x °ªo以甲醇定容于 ux °量瓶中 o得到内
标溶液 ∀精密称取桂皮酸对照品 ts1s °ªo用甲醇定容于 tss
°量瓶中 o得到对照品溶液 ∀精密称取甲萘酚 us1s °ªo以
甲醇定容于 ux °量瓶中 o得到内标溶液 ∀
213 样品测定 色谱条件 }大连依利特公司产 ¼³¨µ¶¬¯ ≤t{柱
kw1y °° ≅ uss °° ox Λ°l ~测定甘草酸时采用流动相 甲醇2
乙腈2水2冰醋酸kt|ΒvsΒxtΒtl o测定桂皮酸时采用流动相
甲醇2水2冰醋酸kvxΒyxΒtl ~流速 s1{ °#°¬±p t ~检测波长 uxw
±° ~柱温为室温 o进样量 ts Λ∀
精密吸取 t1s °样品溶液置 x °量瓶中 o再精密加入
s1x °萘内标储备液 o以甲醇定容至刻度 ∀微孔滤膜过滤后
使用流动相 进行分析 o色谱图见图 t o其中 ¤为甘草酸峰 o¥
为内标物萘的峰 ∀测定结果见表 u ∀
用移液管精密吸取 t1s °样品储备液置 x °量瓶中 o
再精密加入 u °甲萘酚内标储备液 o以甲醇定容至刻度 o微
孔滤膜过滤后使用流动相 进行分析 o色谱图见图 u o其中 ¦
为桂皮酸峰 o§为内标物甲萘酚的峰 ∀测定结果见表 u ∀
图 t 甘草酸的分离色谱图
¤1 甘草酸 ~¥1萘
表 u 甘草附子汤提取工艺正交试验结果
试验号
浸膏得率
r h
甘草酸含量
r°ª#ªpt
桂皮酸含量
r°ª#ªpt
t ux1tu u1w|u s1uts z
u vx1xy w1szv s1u|{ t
v vs1vx w1x|t s1vss y
w vu1u| w1wzv s1u|x v
x uz1|v w1x|y s1vvs x
y ux1|x v1vzz s1uyt s
z uy1ut w1svs s1u{s {
{ uu1|y u1w{| s1tyw y
| vs1|{ v1zyy s1vu| w
214 结果 对所得数据分别进行直观分析和方差分析 o结
果如表 u和表 v所示 ∀可以看出 o在溶剂量 !提取时间 !提取
次数 v个因素中 o最主要的影响因素为提取次数 o其次为溶
剂量 ∀经过综合分析 o优化后的最佳条件为 Αu Βv Χv o即采用
ts倍量 xs h乙醇 o提取 v次 o每次提取 ys °¬±∀
#ssut#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
图 u 桂皮酸的分离色谱图
¦1 桂皮酸 ~§1 甲萘酚
表 v 方差分析表
方差来源 离差平方和 均方 Φ Π
浸膏得率 Α t|1{t |1|sy {1yy s1sx
Β u1wzy t1uv{ t1s{ s1sx
Χ tsv1w xt1y| wx1t{ s1sx
∆ u1u{{ t1tww
甘草酸 Α s1z{{ z s1v|w v {1sv s1sx
Β s1tss y s1sxs u{ t1su s1sx
Χ w1wxt w u1uuy wx1vw s1sx
∆ s1s|{ tz s1sw| s|
桂皮酸 Α s1ssu t|v s1sst s|y t1su s1sx
Β s1ssu uzx s1sst tvz t1sy s1sx
Χ s1stz xz s1ss{ z{z {1tz s1sx
∆ s1ssu txu s1sst szy
注 }自由度均为 u
215 验证实验
为验证最佳工艺 o称取甘草 tss ª!附子 tss ª!白术 tss
ª!桂枝 uss ªo按照优化后所得最佳提取工艺进行提取 o即加
入 ts倍量 xs h乙醇提取 v次 o每次 ys °¬±o对所得浸膏称重
并进行测定 o结果表明 o浸膏得率为 vx1z h o甘草酸含量
w1ywx °ª#ªp t o桂皮酸含量 s1vwv °ª#ªp t o可知与正交表中的
最优水平一致 o说明本研究所确定的工艺合理 ∀
3 讨论
在本实验之前对甘草附子汤的提取溶剂进行了考察 o分
别选择水 !vs h乙醇 !xs h乙醇 !zs h乙醇和 |x h乙醇为提取
溶剂 o选择抗炎和镇痛两个药理指标 o采用巴豆油致小鼠耳
肿胀实验和醋酸致小鼠扭体实验进行筛选 o结果表明 o使用
xs h乙醇为提取溶剂时药效结果最好 ∀结果见表 w ∀
表 w 最佳提取溶剂的选择 h
提取溶剂 肿胀抑制率 扭体抑制率
水 ut1s yz1{
vs h乙醇 {1u vx1y
xs h乙醇 uz1x y|1y
zs h乙醇 tt1x x|1{
|x h乙醇 ts1w us1x
正交实验结果的方差分析表明 o对于浸膏得率指标 Α, Β
因素无显著影响 o选择何种水平均可 o而 Χ因素有显著影响 o
选择 Χu得率最佳 ∀同样对于甘草酸含量来说 oΑ, Β无显著
影响 oΧ因素有显著影响 o应选 Χv为好 ∀但由于甘草为方中
君药 o测定甘草酸应为重点考虑因素 o应选 Χv为好 ∀所以经
过综合分析后选择 Αu Βv Χv为最佳提取工艺 ∀本试验在正交
实验的基础上对提取工艺进行了实验考察 o可以作为甘草附
子汤工艺优化的依据 ∀
≈参考文献
≈t 曹佩雪 o梁光义 o徐必学 o等 1°≤法测定麻黄汤分煎及合煎汤
剂中甘草酸含量 1 中草药 ousst ovukttl }|{t1
≈u 刘 放 o曹 东 o黄卫平 1 °2°≤法测定甘草及其制剂中甘草
酸含量 1 浙江省医学科学院学报 ot||z o{kvl }ty1
≈v 黄晓红 o宋宗华 o毕开顺 1正交法研究苓桂术甘汤的醇提工艺 1
时珍国医国药 oussu otvkwl }t||1
≈w 杨 松 o靳宝峰 o张治国 o等 1 °2°≤ 法测定桂枝及桂枝茯苓
胶囊中桂皮醛和桂皮酸含量 1中成药 oussu ouwkyl }wut1
≈责任编辑 刘
≈收稿日期 ussv2st2us
≈通讯作者 3丁怡 oר¯ }kstslyuz|yuy| oƒ¤¬}kstslyuzzvyvs o∞2
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太子参多糖制备工艺研究
张陆军 o丁 怡 3 o陈芸芸 o王卫华 o王 伟 o邢东明 o杜力军
k清华大学 生物科学与技术系 药物药理研究室 o北京 tsss{wl
太子参又名孩儿参 o为石竹科植物 Πσευδοστελλαρια ηετερο2
πηψλλαk°¬´1l ³¤¬ ¬¨ ³¤¬ ·¨²©©°1 的干燥块根 ∀具有益气健
脾 !生精润肺之功效 o实验研究证明 o太子参多糖是其主要的
活性成分之一≈t ∀为了更好地开发利用太子参中的多糖 o为
工业生产提供理论依据 o作者对太子参多糖的制备工艺进行
了研究 o从而确定了最佳工艺 o得到了含量较高的多糖部分 ∀
1 仪器与试剂
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2 方法和结果
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第 u|卷第 tu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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