全 文 ：苯乙烯型大孔吸附树脂预处理的质量评价方法研究
邓 亮 o叶利明 3 o侯世祥 o陈 钢 o陈 聪
k四川大学 华西药学院 o四川 成都 ytsswtl
≈摘要 目的 }建立大口径毛细管柱气相色谱对苯乙烯型大孔吸附树脂预处理方法及合格标准进行控制的方
法 ∀方法 }用大口径毛细管柱气相色谱检测自制模型树脂预处理过程中无水乙醇洗脱液的残留溶剂k二甲苯 !二乙
苯 !苯乙烯 !二乙烯苯 !正癸烷l含量 o以检测不到残留溶剂为预处理合格指标 ∀将此方法与文献介绍方法对比 ∀结
果 }自制模型树脂用大口径毛细管柱气相色谱控制预处理方法及合格标准需要用无水乙醇洗树脂柱 tt次 o用 /加
数倍水于过柱乙醇溶液中不显浑浊0控制需要洗柱 v次 o用/至 uss ∗ wss ±°无紫外吸收峰0控制需要洗柱 us次以
上 ∀结论 }用大口径毛细管柱气相色谱对苯乙烯型大孔吸附树脂预处理方法及合格标准进行控制切实可行 ∀
≈关键词 大口径毛细管柱 ~气相色谱 ~大孔吸附树脂 ~预处理
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswltt2tsvz2sw
≈收稿日期 ussv2s{2ux
≈通讯作者 3叶利明 oר¯ }ksu{l{xxsuvsx o∞2°¤¬¯}§µ¼¨ ¬¯°¬± ¶²2
«∏1¦²°
大孔吸附树脂近年来广泛应用于天然产物的分
离 o特别是在中药有效成分的提取分离上取得了良
好的效果≈t ou ∀但由于应用时间较短 o其应用性能
和分离条件还在不断探索中 o有关的技术规范也正
在研究待定中 ∀市售的大孔吸附树脂大部分为苯乙
烯骨架型大孔吸附树脂 o它是一种具有空穴结构的
交联共聚体 o未完全反应的单体 !交联剂 !致孔剂 !分
散剂及原料本身不纯引入的各种杂质易残留于空穴
结构中≈v ow ∀因此市售大孔吸附树脂在使用前必须
经过预处理 ∀大孔吸附树脂的预处理一般采用先用
乙醇或甲醇洗脱吸附性杂质 o用水冲洗至流出液 ³
中性 o再用 x h盐酸溶液 !u h氢氧化钠溶液洗脱非
吸附性杂质 o再用水冲洗至流出液 ³中性≈t ou ∀预
处理合格的标准为/加数倍水于过柱乙醇溶液中不
显浑浊0或 / 至 uss ∗ wss ±° 无紫外吸收峰0≈w ox ∀
usst年 o国家药品审评中心组织召开了/大孔吸附
树脂分离纯化技术专题讨论会0 ∀会议上提出了大
孔吸附树脂预处理的技术要求 }使用前应进行预处
理 o应提供预处理的具体方法与目的 o建立处理合格
与否的检测方法与评价指标 ∀
本实验针对上述情况 o用大口径毛细管柱气相
色谱对大孔吸附树脂的预处理方法及合格标准进行
研究 ∀
1 实验材料与检测条件
111 仪器与试剂 美国惠普公司 °x{|s型气相色
谱仪 oƒ⁄检测器 ~ussu ≤ ⁄¤·¤ ≥·¤·¬²±o°≤ ~≥¤µ·²µ¬∏¶
ktrts万ltztu型分析天平 ~日本岛津 ∂ ) uust ~美
国惠普公司 °y{|srx|zv 型 ≤2≥ 仪 ∀其他常用
玻璃仪器 ∀二乙苯 !二乙烯苯为工业用试剂 o其余试
剂为分析纯 ∀
112 检测条件 ° ) x色谱柱ks1xv °° ≅ vs ° o
u1yx Λ°l o保护柱为空心未涂层石英毛细管柱ks1xv
°° ≅ t °l ~ƒ⁄检测器 ~进样器温度 uys ε o二阶程
序升温kws ε o保持 ts °¬±后 o以 x ε #°¬±pt升至 {s
ε o保持 ts °¬±o再以 vx ε #°¬±pt升至 uys ε o保持
x °¬±l ~检测器温度 uys ε ~载气k l¨uv °#°¬±pt o
空气 utx °#°¬±pt o氢气 ts °#°¬±pt ~不分流进样 o
进样量 t Λ∀
2 实验
211 选择 x种残留溶剂 根据苯乙烯骨架型大孔
吸附树脂残留溶剂的来源 o使用前用无水乙醇进行
预处理 ∀本实验选择了苯乙烯 !二乙烯苯 !正癸烷 !
二乙苯 !二甲苯 x种残留溶剂为无水乙醇洗脱液中
的检测对象 ∀
212 自制模型树脂 市售苯乙烯骨架型大孔吸附
树脂价格不同 o其残留溶剂含量差别较大 o而且这些
树脂上市前已经过一定的预处理 o因此不具有代表
性 ∀本实验按照苯乙烯骨架型大孔吸附树脂的一般
制作工艺 o完成后不经任何预处理 o密封保存 o待用 ∀
213 模型树脂的预处理 称取自制模型树脂 t ªo
#zvst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
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∂²¯1u| o¶¶∏¨ tt
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置于洁净的树脂柱内 o每次分别加入无水乙醇 ts
°o数次洗脱 o流速为 u
∂#°¬±ptks1v °#°¬±pt o
∂
为树脂床体积l o依次用容量瓶接取洗脱液 o摇匀待
测 ∀
214 对照品溶液制备 精密称取二甲苯 !二乙苯 !
苯乙烯 !二乙烯苯 !正癸烷对照品适量 o置 ux °容
量瓶中 o加无水乙醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o制成
每 t °含二甲苯 t1ss °ª!二乙苯 t1st °ª!苯乙烯
t1st °ª!二乙烯苯 t1s{ °ª!正癸烷 t1su °ª的对照
品储备液 ∀取对照品储备液适量 o稀释成每 t °含
二甲苯 y1ss Λª!二乙苯 y1sw Λª!苯乙烯 y1sw Λª!二
乙烯苯 y1wy Λª!正癸烷 y1tu Λª的对照品溶液 ∀
215 标准曲线制备 分别配制一系列不同浓度的
二甲苯 !二乙苯 !苯乙烯 !二乙烯苯 !正癸烷无水乙醇
溶液 o按本实验色谱条件进行 ≤2ƒ⁄测定 o将峰面
积对进样量进行线性回归 o结果 x种残留溶剂在一
定浓度范围内线性关系良好 o见表 t ∀
表 t x种残留溶剂的回归方程和线性范围
化合物名称 回归方程 ρ
线性范围
rΛª#°pt
二甲苯 Ψ (uwy1zt Ξ n s1uwl ≅ tsy s1||| s s1xs ∗ tss1ss
二乙苯 Ψ (t utz1zw Ξ p s1xvl ≅ tsx s1||| w s1xs ∗ tss1ss
苯乙烯 Ψ (t |u{1yu Ξ n s1xtl ≅ tsx s1||| | s1xs ∗ tss1ss
二乙烯苯 Ψ (t twx1zv Ξ p s1uxl ≅ tsx s1||| | t1s{ ∗ ts{1ss
正癸烷 Ψ (t u{{1ux Ξ p s1yyl ≅ tsx s1||| s t1su ∗ tsu1ss
注 }溶媒均为无水乙醇
216 最低检测限测定 5中国药典6usss年版对药
物中残留溶剂的限量作了明确的规定≈y o以质量分
数计 o一般要求 s1st h o对苯等毒性较大的有机溶
剂限量规定更为严格 o要求 s1sss u h ∀在本实验
的色谱条件下 o以信噪比 ≥r v计 o二乙烯苯 !正
癸烷最低检测限为 s1xs Λª#°ptks1sss sx h l o二甲
苯 !二乙苯 !苯乙烯最低检测限为 s1us Λª# °pt
ks1sss su h l ∀
217 洗脱液中残留溶剂含量测定法 吸取对照品
溶液 t Λ注入气相色谱仪 o按本实验色谱条件 o测
定二甲苯 !二乙苯 !苯乙烯 !二乙烯苯 !正癸烷的峰面
积 o对照品色谱图见图 t ∀
吸取洗脱液样品 t Λ注入气相色谱仪 o同上操
作 o按外标法计算样品中各个残留溶剂的含量 ∀样
品色谱图见图 u ∀
3 实验结果
311 自制模型树脂预处理≤法控制结果 将自
图 t 对照品的色谱图
¤1 溶剂 ~t1甲苯 ~u1 苯乙烯 ~v1 正癸烷 ~w1二乙苯 ~x1二乙烯苯
图 u 样品k第 v次洗脱液l
¤1 溶剂 ~t1二甲苯 ~u1苯乙烯 ~v1 正癸烷 ~w1 二乙苯
制模型树脂的洗脱液分别吸取 t Λ注入气相色谱
仪 o测得二甲苯 !二乙苯 !苯乙烯 !二乙烯苯 !正癸烷
的含量 o分别以洗脱次数对各残留溶剂的浓度作图 o
结果见图 v ∗ z ∀
从以上结果可以看出 o第 t次与第 u次洗脱液
中的残留溶剂量相差最大 o以后相邻两次洗脱液中
残留溶剂的量的差值逐渐减小 o二甲苯洗脱至第 x
次以后已检测不到 o苯乙烯洗脱至第 ts次以后已检
测不到 o正癸烷洗脱至第 z次以后已检测不到 o二乙
苯洗脱至第 y次以后已检测不到 o二乙烯苯洗脱至
第 u次以后已检测不到 o所有被检测的残留溶剂洗
脱至 tt次时基本趋近于 s ∀
312 自制模型树脂预处理 ∂ 法控制结果 参照
文献所提供的预处理合格标准/至 uss ∗ wss ±°无
紫外吸收峰0≈w o将收集的洗脱液从第 ts次开始 o在
波长 uss ∗ wss ±°作紫外扫描 o与空白图谱k空白无
水乙醇溶液l相比较 o结果洗脱液图谱从第 ts次到
第 tw次紫外吸收逐渐减小 o从 tw次至 us次变化甚
微 o但与空白图谱相比仍然有少量紫外吸收 ∀
313 模型树脂预处理/加数倍水于过柱乙醇溶液中
不显浑浊0控制结果 参照文献所提供的预处理合
#{vst#
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∂²¯1u| o¶¶∏¨ tt
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图 v 二甲苯浓度随洗脱次数变化的趋势
¤1洗脱全程 ~¥1第 u次洗脱以后的放大图
图 w 苯乙烯浓度随洗脱次数变化的趋势
¤q洗脱全程 ~¥1 第 u次洗脱以后的放大图
图 x 正癸烷浓度随洗脱次数变化的趋势
¤1洗脱全程 ~¥1第 u次洗脱以后的放大图
格标准 / 加数倍水于过柱乙醇溶液中不显浑
浊0≈w ox o将收集的洗脱液每一次取 t °于干净锥
形瓶中 o加 ts °去离子水稀释 o混匀 o观察是否浑
浊 ∀结果洗脱液第 t ou次浑浊 o其余均澄清 ∀
314 v种控制预处理方法的比较 对于本实验中
的自制模型树脂 o用所建立的 ≤ 法来控制其预处
理程度 o需要用 ts °无水乙醇以 u
∂#°¬±pt的流
速反复洗柱tt次 ~用∂来控制其预处理程度 o需
图 y 二乙苯浓度随洗脱次数变化的趋势
¤1洗脱全程 ~¥1第 u次洗脱以后的放大图
图 z 二乙烯苯浓度随洗脱次数变化的趋势图
要用 ts °无水乙醇以 u
∂#°¬±pt的流速反复洗柱
us次以上 ~用/加数倍水于过柱乙醇溶液中不显浑
浊0来控制其预处理程度 o需要用 ts °无水乙醇以
u
∂#°¬±pt的流速反复洗柱 v次 ∀通过比较 o发现
用/加数倍水于过柱乙醇溶液中不显浑浊0来控制其
预处理程度 o未能使树脂中的残留溶剂通过预处理
得到有效的去除 ∀用 ∂ 法控制其预处理程度 o虽
然较为安全可靠 o但不能定性反映具体待测残留物
质 o以及该待测残留物质的准确含量 o且在实际运用
中对于大量的大孔吸附树脂的预处理费用太高 ∀用
≤法来控制其预处理程度结果界于前两者之间 o既
有效的去除了大孔吸附树脂中的残留溶剂 o又节约
了大孔吸附树脂预处理的费用 ∀
4 讨论
411 本实验中检测的 x种残留溶剂之一正癸烷经
以下实验确定 ∀选取市售最常见的 x种苯乙烯骨架
型大孔吸附树脂k来自 x个不同厂家l o分别称取 t ª
于具塞试管中 o精密加入 ts °无水乙醇溶液 o超声
提取 ys °¬±kus °¬± ≅ vl o取上清液过滤 o续滤液离
心 o待测 ∀分别吸取 t Λ样品 o用 ≤2≥分析≈检测
条件 }° ) x色谱柱ks1ux °° ≅ vs ° os1ux Λ°l ~进
样器温度 uys ε o二阶程序升温kws ε o保持 v °¬±
后 o以 v ε #°¬±pt升至 tss ε o再以 ux ε #°¬±pt升
至 uys ε l ~检测器温度 uys ε ~载气k l¨s1{ °#
°¬±pt ~∞zs ∂¨ ∀结果正癸烷为 x个样品共有的烷
#|vst#
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烃类峰 ∀
412 为了证明本实验设计的预处理方法能保证过
柱后的中药提取液中残留溶剂量达到药典的标准 o
做了以下实验 ∀称取 t ª自制模型树脂装柱后 o经
无水乙醇溶液洗柱 tt次 o用水冲洗至流出液 ³ 中
性 o再用 x h盐酸溶液 !u h氢氧化钠溶液洗脱非吸
附性杂质 o再用水冲洗至流出液 ³ 中性 ∀将经过
上述预处理的树脂柱 o上栀子水提液 o用适量水洗脱
后 o弃去水洗液 o再用适量 zs h乙醇洗脱 o收集该洗
脱液 o待测 ∀吸取 t Λ样品 o用该实验所建立气相
色谱法进行分析 o在该色谱条件下未检测到残留溶
剂 ∀说明经本实验设计的预处理方法及合格标准切
实可靠 ∀
413 市售的苯乙烯骨架型大孔吸附树脂使用前 o通
常都必须进行预处理 ∀若所用树脂配有说明书 o可
根据说明书提供的方法对树脂进行预处理 o建议以
本实验建立的大口径毛细管柱气相色谱在洗脱液中
检测不到残留溶剂为合格标准 ∀若未配备说明书 o
则建议先用适量乙醇洗脱吸附性杂质 o用水冲洗至
流出液 ³中性 o再用 x h盐酸溶液 !u h氢氧化钠溶
液洗脱非吸附性杂质 o再用水冲洗至流出液 ³ 中
性 o预处理合格标准建议仍然以本实验建立的大口
径毛细管柱气相色谱在洗脱液中检测不到残留溶
剂 ∀
414 从本实验的各个残留溶剂浓度随洗脱次数变
化的趋势图可以看出 o二乙烯苯在所检测的残留溶
剂中最易洗脱 o而苯乙烯最难洗脱 o故可以通过控制
苯乙烯的残留量同时控制了其他残留溶剂的量 o即
只要苯乙烯在树脂中的残留量达到合格标准 o其他
的残留溶剂也可达到合格标准 ∀
415 本实验建立的用大口径毛细管柱气相色谱控
制预处理方法及合格标准经实验证明是切实可行
的 o与文献报道的预处理合格标准/加数倍水于过柱
乙醇溶液中不显浑浊0或/至 uss ∗ wss ±°无紫外吸
收峰0相比 o更加科学 !严谨 ∀
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Στυδψ ον θυαλιτψ εϖαλυατιον µετηοδσ οφ πρετρεατµεντ φορ
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·¬° ¶¨º¤·¨µ¬±·«¨ ¤¯¦²¦²¯ ¨¯∏·¬²± º¬¯¯ ±²·¥¨ ·∏µ¥¬§0 ·²¦²±·µ²¯ ·«¨ ³µ¨·µ¨¤·° ±¨·o·«¨ µ¨¶¬±¶±¨ §¨·² ¥¨ ¨¯∏©¨ v ·¬° ¶¨º¬·«¤±«¼§µ²∏¶¤¯¦²¦²¯1
• «¨ ± ∏¶¬±ª /·«¨ ¨¯∏·¬²± «¤√¨±² ∂ ¤¥¶²µ³·¬²± ¥¨·º¨¨ ±·«¨ º¤√¨¯ ±¨ª·«uss ∗ wss±°0 ·²¦²±·µ²¯ ·«¨ ³µ¨·µ¨¤·° ±¨·o·«¨ µ¨¶¬±¶±¨ §¨·² ¥¨ ¨¯∏·¨
²√ µ¨us ·¬° ¶¨º¬·«¤±«¼§µ²∏¶¤¯¦²¦²¯1 Χονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯¨¤±§©¨ ¤¶¬¥¯ 1¨
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≈责任编辑 袁桂京
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