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Study on anti-tumor effect of medicinal fungi Phellinus igniariusextracts

药用真菌桑黄菌丝体多糖抗肿瘤作用的研究



全 文 :药用真菌桑黄菌丝体多糖抗肿瘤作用的研究
杨 全 tou3 o胡旭光 t o王 琦 v o王文全 u
kt1广东药学院 中药学院 o广东 广州 xtsssy~ u1北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu~
v1吉林农业大学 中药材学院 o吉林 长春 tvstt{l
≈摘要   目的 }研究桑黄菌丝体多糖对小鼠 ≥t{s实体瘤 !腹水瘤的生长抑制作用和对荷瘤小鼠免疫调节作
用 ∀方法 }将昆明种小鼠接种 ≥t{s实体瘤或腹水瘤后随机分组 o饲喂不同剂量 ktssoussowss °ª# ®ªpt # §pt l的桑
黄菌丝体多糖 o以饲喂生理盐水和环磷酰胺为空白对照组和阳性对照组 ∀检测受试药物对小鼠 ≥t{s实体瘤生长
的抑制作用以及对荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响 o计算腹水型荷瘤小鼠的存活时间 ∀结果 }饲喂桑黄菌丝
体多糖的荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著增加 ~v个剂量的桑黄菌丝体多糖对 ≥t{s实体瘤的抑瘤率分别为
vt1{{h owy1uxh oxv1tvh ~并且可以显著延长腹水型荷瘤小鼠的存活时间 ∀结论 }桑黄菌丝体多糖具有较强的抗
肿瘤作用和免疫调节活性 ∀
≈关键词   桑黄 ~菌丝体多糖 ~抗肿瘤 ~免疫调节
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylus2tztv2sv
≈收稿日期   ussy2su2tt
≈通讯作者   3 杨全 o ר¯} kstsl{wzv{w|{o kstsl{wzv{yw{o
∞2°¤¬¯} ¼¤±ª´ ∏¤±zus{ƒ √¬³qtyvq¦²°
桑黄 k火木层孔菌或针层孔菌 lΠηελλινυσ ιγνιαρ2
ιυσk1 ¬¨ ƒµ1l ± ∏¨ 属¯于多孔菌科 o木层孔菌 k针层
孔菌 l属真菌 ≈t  ∀其药用最早记载于 5本草纲目 6o
5药性论 6中称桑臣 !桑耳 o5酋阳杂俎 6中称胡孙眼 ∀
主要寄生于杨 !柳 !白桦 !栎 !桑 !榉树等阔叶树的树
干上 o造成心材白腐 ∀子实体入药 o味微苦 o能利五
脏 o排毒 o止血 ∀其化学成分复杂 o除 k子实体 l多糖
外 o其主要的化学成分还有黄酮及其衍生物 !香豆素
类 !甾醇类 !氨基酸等化合物 ≈uov  o其子实体的水提
物具有抗大鼠肝纤维化与抗脂质过氧化 !抗肿瘤 !增
强人外周血单个核细胞产生 Χ2干扰素 !抗突变 !提
高免疫力等活性 ≈w2y  ∀是目前国际公认的抗肿瘤最
好的大型真菌之一 o无任何毒性作用 o是一种极具开
发价值的珍贵药用真菌 ≈z  ∀本研究对菌丝体多糖
的抗肿瘤活性进行了研究 o为进一步开发利用桑黄
奠定基础 ∀
1 材料与方法
111 材料
11111 菌丝体 桑黄子实体由吉林农业大学中药
材学院王琦教授鉴定并馈赠 ∀本实验室分离菌种 o
利用液体发酵技术获得菌丝体 oys ε 烘干 o经组织
搅碎机处理后过 ys目筛得菌丝体干粉 ∀
11112 多糖 菌丝体干粉利用优化的菌丝体多糖
提取工艺进行提取 ≈{  ∀将提取液浓缩为原体积的
trxo用 v倍体积 |xh乙醇 w ε 沉淀过夜 ox sss µ#
°¬±pt离心 ts °¬±o收集沉淀 o再用乙醚 !丙酮 !无水
乙醇分别洗涤 u次后真空干燥得桑黄菌丝体多糖 ∀
11113 试验动物 昆明种小鼠 okus ? ul ªoy周龄 o
雄性 o广东省实验动物中心提供 o合格证号 sxstwxu~
≥t{s肿瘤种鼠由中山大学实验动物中心提供 ∀
112 方法
11211 菌丝体多糖对 ≥t{s移植性实体瘤的抑制作
用 取昆明种小鼠 xs只 o按移植性肿瘤研究法 ≈| 接
种 ≥t{s实体型 k在无菌操作下取瘤块 o称重 o用玻
璃组织匀浆器研磨 o磨匀后放入无菌容器内 o加生理
盐水稀释成 tΒv的细胞悬液 o容器置冰块上 o用空针
抽吸 o每次抽吸前将细胞混匀 o每只小鼠右前肢腋窝
皮下接种 s1u °lo接种后 uw «称鼠重 o并随机分
为 x组 o即低 !中 !高剂量组 !空白对照组 !阳性对照
组 ∀空白组给予同体积的生理盐水 o阳性组给予用
无菌生理盐水稀释的环磷酰铵 o接种 uw «后灌胃给
药 o灌胃体积为 s1su °# ªpt o每日 t次 o连续 { §o
停药后次日处死荷瘤小鼠称重 o并分离瘤块称重 ∀
11212 菌丝体多糖对 ≥t{s腹水瘤的抑制作用和对
小鼠存活期的影响 取昆明种小鼠 ws只 o按移植性
肿瘤研究法接种 ≥t{s腹水型 k在无菌操作下取瘤
#vtzt#
第 vt卷第 us期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ us
’¦·²¥¨ µoussy
块 o称重 o用玻璃组织匀浆器研磨 o磨匀后放入无菌
容器内 o加生理盐水稀释成 tΒ v的细胞悬液 o容器
置冰块上 o用空针抽吸 o每次抽吸前将细胞混匀 o每
只小鼠腹腔接种 s1u °lo接种并随机分为 w组 o即
低 !中 !高剂量组 !空白组 k给予同体积的生理盐
水 l∀接种 uw «后灌胃给药 o灌胃体积为 s1su °
# ªpt o每日 t次 ∀给药 x日后取少量腹水涂片 o改
良苯酚 2品红染色 o二甲苯透明后树胶封片 o每只鼠
显微镜下随机计数 t sss个细胞中处于分裂中期的
细胞数 o计算有丝分裂指数 ∀小鼠继续喂药 x §后
停止给药 o以接种肿瘤之日算起 o记录死亡时间 o计
算生命延长率 ≈ts  ∀
11213 组织处理 无菌取肿瘤组织 !脾脏 !胸腺 o去
血污称重 o计算抑瘤率和各脏器指数 o比较多糖对免
疫器官的影响 ∀
抑瘤率 kh l € k对照组平均瘤重 p实验组平均瘤重 l r
对照组平均瘤重 ≅ tssh
脾脏指数 k°ª# ªpt l €脾重 r体重
胸腺指数 k°ª# ªpt l €胸腺重 r体重
11214 统计学处理 利用 ≥°≥≥ tu1s软件进行数
据分析 kτ检验 lo分析组间差异 ∀实验数据用 cξ ? σ
表示 ∀
2 结果
211 对 ≥t{s移植性实体瘤的抑制作用
菌丝体多糖对 ≥t{s的抑制率分别为 vt1{{h o
wy1uxh oxv1tvh o且呈现剂量效应关系 o高剂量下
能显著抑制肿瘤细胞的生长 ∀与生理盐水组相比 o
实验组的 v个剂量组均有显著抑制 ≥t{s的肿瘤生
长作用 o并且桑黄多糖对小鼠的体重的增加没有明
显的抑制作用 ∀环磷酰胺虽然抑瘤效果最好 o抑瘤
率达到 yx1yvh o但是其对小鼠的增长有明显的抑
制作用 k表 tl∀
表 t 桑黄菌丝体多糖对 ≥t{s移植性实体瘤的抑制作用 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
小鼠体重 rª
给药前 给药后
瘤重

抑瘤率
rh
生理盐水 p t|qz| ? tqus uzqts ? uquv tqys ? sqyu sqss
环磷酰胺 us t|q{u ? tqvw uuq{t ? tqv|ul sqxx ? sqtyul yxqyv
多糖 tss t|q{| ? tqvs uyq|| ? uqss tqs| ? sqvsul vtq{{
uss t|q{{ ? tqv{ uzqus ? tq|y sq{y ? sqv{ul wyqux
wss t|q|t ? tqwt uzqvx ? uqst sqzx ? squtul xvqtv
注 }与生理盐水组比较 tl Π  sqsxoul Π  sqstk表 uov同 l
212 对荷瘤鼠免疫器官的影响
环磷酰胺的抑瘤率虽然最高 o但对小鼠的胸腺
和脾脏等免疫器官抑制作用较大 o环磷酰胺在抗肿
瘤的同时对机体的免疫能力有很大的破坏 o而本实
验中的多糖在发挥抗肿瘤作用的同时 o小鼠机体的
胸腺指数和脾脏指数均有不同程度的提高 o即小鼠
的免疫力同时得到了提高 k表 ul∀
表 u 桑黄菌丝体多糖对荷瘤鼠免疫
器官的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
胸腺指数
r°ª# ªpt
脾脏指数
r°ª# ªpt
生理盐水 p uqzy ? sqyy yqsx ? tqsw
环磷酰胺 us tqxv ? sqvvtl wqsw ? sqzytl
多糖 tss wqst ? sq{yul tsqux ? sqzxul
uss wqs| ? sqzvul tsqxv ? sqysul
wss vq|z ? sqx{tl {qvx ? sqxxtl
213 对 ≥t{s腹水瘤的抑制作用和对小鼠存活期的
影响
中 !高剂量的多糖能够明显的降低 ≥t{s腹水瘤
细胞的分裂指数 o延长荷瘤小鼠的存活期 k表 vl∀
表 v 对 ≥t{s腹水瘤和小鼠存活期的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
有丝分裂指数
rh
生存时间

生命延长率
rh
生理盐水 p twqut ? vquz t{qu{ ? tqyx
多糖 tss twqt{ ? vqzs t{q|t ? uqtx vqwx
uss tsqz| ? vqxytl utqtv ? vqsvtl txqx|
wss {q{| ? tq|vul uuqz{ ? tqv|ul uwqyu
3 讨论
在肿瘤的临床治疗中 o化疗药物在发挥效用的
同时 o对机体的免疫力有较大的破坏 o这是化疗药物
的最大弊端之所在 ∀而可以通过增强机体的免疫功
能而发挥其抗肿瘤作用的天然多糖 o作为代替或部
分代替化疗药物的新药资源则备受关注 ∀本实验结
果表明 o与荷瘤小鼠对照组相比 o桑黄菌丝体多糖灌
胃给药 o能够显著增加荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏
指数 o降低 ≥t{s腹水瘤细胞的分裂指数 o并能够延
长荷瘤小鼠的存活期 ∀实验结果初步说明增强免疫
功能是桑黄菌丝体多糖抗肿瘤的可能途径之一 ∀
进一步的研究工作一方面为菌丝多糖的分离和
纯化 o进而为广泛深入的利用桑黄菌丝体多糖以及
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第 vt卷第 us期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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研究多糖的构效关系提供实践与理论依据 ~另一方
面 o从分子水平探索桑黄多糖的抗肿瘤作用机制 o找
出作用的靶分子 o以便更大限度的利用桑黄菌丝体
资源 o缓解因子实体资源匮乏而难以满足市场需求
的现状 ∀
≈参考文献  
≈t  卯晓岚 q中国经济真菌 ≈  q北京 }科学出版社 ot||{}xvxq
≈u  陈体强 o吴锦忠 o纪建英 o等 q桑黄栽培子实体成分分析及
其显微形态观察 ≈ q菌物研究 o ussxo vktl }vsq
≈v  莫顺燕 o杨永春 o石建功 o等 q桑黄黄酮 „与 …的分离与合
成 ≈ q化学学报 o ussvo ytkzl }ttytq
≈w  张万国 o胡晋红 o蔡 溱 o等 q桑黄抗大鼠肝纤维化与抗脂
质过氧化 ≈ q中成药 o ussuo uwkwl }u{tq
≈x  温 克 o陈 劲 o李 红 o等 q桑黄等四种抗癌药物抗癌活
性比较 ≈ q吉林大学学报 k医学版 lo ussuo ukvl }uwzq
≈y  张万国 o胡晋红 o蔡 溱 o等 q桑黄增强人外周血单个核细
胞产生 Χ2干扰素的研究 ≈ q基层中药杂志 o ussuo v} {xq
≈z  周存山 o马海乐 q桑黄及其药理作用研究进展 ≈ 1食用菌 o
ussxo kul }xsq
≈{  杨 全 o严寒静 o李艳辉 o等 1药用真菌桑黄菌丝体多糖提取
工艺的研究 ≈ 1广东药学院学报 oussxoy}y|z1
≈|  徐叔云 o卞如濂 o陈 修 q药理实验方法 ≈  1v版 q北京 }人
民卫生出版社 o ussu}tzx{q
≈ts  陈 群 o刘天骄 q银杏叶多糖的抗肿瘤和免疫调节作用 ≈ q
中药药理与临床 o ussvo t|kxl }t{q
Στυδψ ον αντι2τυµ ορ εφφεχτ οφ µ εδιχιναλφυνγιΠηελλινυσ ιγνιαριυσεξτραχτσ
≠„‘Š ±∏¤±tou o ‹ ˜ ÷∏2ª∏¤±ªt o • „‘±¬v o • „‘Š • ±¨2´ ∏¤±u
(t. ΣχηοολοφΧηινεσε Μεδιχινε, Γυανγδονγ Παρµ αχευτιχαλΥνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtsssy, Χηινα;
u. Σχηοολοφ Πηαρµ αχψ, Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Βειϕινγ tsstsu, Χηινα;
v. Χολλεγε οφ Χηινεσε ΤραδιτιοναλΜεδιχινε, ϑιλιν Αγριχυλτυρε Υνιϖερσιτψ, Χηανγχηυν tvstt{, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ·«¨ ¬±«¬¥¬·¬±ª ©¨©¨¦·²©° §¨¬¦¬±¤¯ ©∏±ª¬Πηελλινυσ ιγνιαριυσ ¬¨·µ¤¦·¶²± ≥t{s ·∏°²µ¤±§·«¨ ¬°2
°∏±²µ¨ª∏¯¤·¬²± ©¨©¨¦·²± ·«¨ ≥t{s2¬±§∏¦¨§·∏°²µ°¬¦¨q Μετηοδ : ≥t{s °¬¦¨ º µ¨¨ ²µ¤¯ ¼¯ ª¬√ ±¨ tsso usso wss °ª# ®ªpt §²¶¤ª¨ ²©Π.
ιγνιαριυσ ¬¨·µ¤¦·¶o ·«¨ ± ·«¨ ¬±«¬¥¬·¬²± ªµ²º ©¨©¨¦·o ¶³¯¨¨ ± ¬±§¨ ¬o ¤±§·«¼°¨¬±§¨ ¬º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§q Ρ εσυλτ:  §¬¦¬±¤¯ ©∏±ª¬Π. ιγνιαριυσ
¬¨·µ¤¦·¶¦¤± ¬±¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¶³¯¨¨ ± ¬±§¨ ¬¤±§·«¼°¨¬±§¨ ¬¤±§·«¨ ¬±«¬¥¬·¬±ª·∏°²µµ¤·¨ º¤¶vtq{{h o wyquxh o xvqtvh o µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q
„ ¶¯²o ° §¨¬¦¬±¤¯ ©∏±ª¬Π. ιγνιαριυσ ¬¨·µ¤¦·¶¦¤± ³µ²¯²±ª ¬¯©¨ ¬± °¬¦¨q Χονχλυσιον} ׫¨ ° §¨¬¦¬±¤¯ ©∏±ª¬Π. ιγνιαριυσ ¬¨·µ¤¦·¶¶«²º ²¥√¬2
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[ Κεψ ωορδσ] ° §¨¬¦¬±¤¯ ©∏±ª¬Πηελλινυσ ιγνιαριυσ ¬¨·µ¤¦·¶~ ≥t{s~ ¤±·¬2·∏°²µ ©¨©¨¦·~ ¬°°∏±²µ¨ª∏¯¤·¬²± ©¨©¨¦·
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussy2sv2tz
≈通讯作者   3 陈智伟 o∞2°¤¬¯}½¨ µ²¦«¨ ±|{ƒ tyv1¦²°
毛细管电泳法研究板蓝根水提物抗流感
病毒的作用机制
陈智伟 t3 o吴灵威 t o刘树滔 t o蔡春平 u o饶平凡 t o柯李晶 t
kt1福州大学 生物工程研究所 o福建 福州 vxsssu~
u1福建省出入境检验检疫局 技术中心 o福建 福州 vxssstl
≈摘要   目的 }探讨板蓝根水提物抑制 ‹t‘t型流感病毒细胞结合活力的机制 ∀方法 }显微镜检判定板蓝根
#xtzt#
第 vt卷第 us期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ us
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