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Preliminary study on hematopoietic constituents of SI-WU-TANG

四物汤促进造血功能成分的初步研究



全 文 :四物汤促进造血功能成分的初步研究
梁乾德 o路晓钦 o马增春 o谭洪玲 o马百平 o高 月 o王升启 3
k军事医学科学院 放射医学研究所 o北京 tss{xsl
≈摘要  目的 }初步探讨四物汤补血作用的物质基础 ∀方法 }四物汤部位分离采用醇沉和萃取法 ∀用辐射小
鼠血虚证模型考察活性 ∀结果 }首先将四物汤分离为 „ o…o≤ v个部位 o活性研究表明部位 …和部位 ≤ 具有提高模
型小鼠外周血白细胞数的作用 ∀进而将部位 …和部位 ≤分别分离为部位 …t o…u o…v 和部位 ≤t o≤u o≤v o活性研究表
明部位 ≤u o≤v 和 …v 具有提高模型小鼠外周血白细胞数的作用 ∀进一步考察部位 ≤t o≤u o≤v o…和芍药苷对模型小
鼠骨髓造血祖细胞的影响 o结果表明部位 ≤u o≤v o…和芍药苷具有促进模型小鼠骨髓造血祖细胞增殖的作用 ∀结
论 }四物汤部位 ≤u o≤v o…和芍药苷与其促进造血功能的作用有关 ∀
≈关键词  四物汤 ~造血功能 ~成分 ~部位 ~芍药苷
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsy2sxwy2sw
方剂药效物质基础是中药现代研究的关键问题
之一≈t ou  ∀四物汤是补血经典方剂 o多项现代研究显
示其具有促进机体造血功能的作用 o但其物质基础
尚不清楚≈v  o以探讨四物汤补血活性成分为目的的
研究亦未见报道 ∀为了探讨四物汤补血作用的物质
基础 o作者以一定剂量的辐射损伤小鼠为血虚证动
物模型 o将四物汤分离为多个提取部位 o一方面考察
不同部位的活性强弱 o另一方面运用色谱 !质谱等分
析手段 o考察部位的化学成分特点 o将两方面信息综
合 o从中分析四物汤可能的补血活性成分 ∀有关提
取部位化学成分考察的研究将另文报道 o现报道部
分活性考察的结果 ∀
1 材料和方法
1 q1 实验材料
四物汤各药材饮片购于北京同仁堂药店 o经军
事医学科学院马百平副研究员鉴定为玄参科植物地
黄 Ρεηµαννια γλυτινοσᏬ¥²¶¦«qo伞形科植物当归 Αν2
γελιχα σινενσισk’¯¬√ ql ⁄¬¨ ¶¯o川芎 Λιγυστιχυµ χηυανξιονγ
‹²µ·qo毛茛科芍药 Παεονιαλαχτιφλορα °¤¯¯q的根及根茎
加工而成 ∀无水乙醇 !醋酸乙酯 !正丁醇为国产分析
纯 ∀芍药苷购自中国药品生物制品检定所 ∀
≈收稿日期  ussv2ts2uw
≈基金项目  国家自然科学基金项目kvsuztytz ovsszs|tvl ~军
队/十五0重点项目kstst|l ~北京市 / 二四八0重大创新工程项目
k‹stsutsuusttvl
≈通讯作者  3王升启 oר¯ }kstslyy|vuutt oƒ¤¬}kstslyy|vuutt o
∞2°¤¬¯}¶´ º¤±ªƒ ±¬¦q¥°¬q¤¦q¦±
1 q2 实验动物
≤xz…ry小鼠 o二级 o雌性 oy ∗ {周龄 o体重
kus ? ul ªo由军事医学科学院实验动物中心提供 ∀
1 q3 主要仪器
≥¼¶°¨ ¬p {us自动血球计数仪 o日本 ~±× p v型 Χ
剂量辐射检测控制仪 o军事医学科学院 ~‘¤³¦² p
xwts ≤’u 培养箱 o美国 ~¤¥²©∏ª¨ wss• 型低温离心
机 o德国 ~׊p tyŠ台式高速离心机 o国产 ~≤× p 
pŒ洁净工作台 o国产 ~≤²¬¦显微镜 o国产 ∀
1 q4 实验方法
1 q4 q1 辐射血虚证模型小鼠外周血白细胞检测
小鼠常规饲养数天适应环境后 o按体重随机分组 o
经ys≤²Χ射线全身 t次照射 o剂量为 v qx Š¼o照射距
离 w ° o制备血虚证动物模型 ∀小鼠造模后立即灌胃
给予受试药物 o给药剂量k以相当于四物汤生药用量
表示l为 ts ª#®ªpt#§pt o每只 s qu °o每天 t 次 o连
续 z §∀模型对照组灌胃给予同体积生理盐水 ∀小
鼠造模及给药后第 s ov ox oz ots otv §o每只实验小
鼠尾静脉取血 us ˏo用自动血球计数仪检测外周血
白细胞 ∀
1 q4 q2 辐射血虚模型小鼠骨髓造血祖细胞集落培
养 模型制备及给药方法均与 1 q4 q1 相同 ∀正常组
小鼠不照射 o与模型组一样灌胃给予生理盐水 ∀造
模及给药后第 { 天 o每组活杀 v 只小鼠 o按文献≈w 
方法进行集落培养 o检测粒系k≤ƒ˜2Šl !红系k≤ƒ˜2
∞o…ƒ˜2∞l !混合系k≤ƒ˜2°¬¬l造血祖细胞 ∀
1 q4 q3 统计处理方法 各组实验数据以 ξ ? σ表
#ywx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
示 o两组间的显著性差异用 τ检验进行分析 ∀
1 q4 q4 四物汤 „ o…o≤ 提取部位的制备及其对模型
小鼠外周血白细胞的影响 制备四物汤水煎液k熟
地黄 !当归 !白芍 !川芎的用量比例为 txΒtsΒtsΒyl ∀
将四物汤水煎液在低于 ys ε 下浓缩至约为原体积
的 trx ∗ try o然后在不断搅拌下 o滴加乙醇至乙醇浓
度为 us h o离心得沉淀k部位 „l o上清液继续加乙醇
至乙醇浓度为 {s h o离心得沉淀k部位 …l o上清液浓
缩得部位 ≤ ∀另外制备四物汤水煎液的浓缩液 o浓
度为每 t °浓缩液含 t ª四物汤生药 o用于四物汤
组给药 ∀将四物汤水煎浓缩液 o部位 „ o…o≤ 的水溶
液k浓度为每 t °含由 t ª四物汤生药获得的提取
部位l o作为受试药物考察其对辐射小鼠外周血白细
胞的影响 ∀
1 q4 q5 四物汤 …t o…u o…v o≤t o≤u o≤v 提取部位的制
备及其对辐射小鼠外周血白细胞的影响 制备四物
汤水煎液并浓缩k方法同 1 q4 q4l o在不断搅拌下 o滴
加乙醇至乙醇浓度为 us h o离心并弃去沉淀 o上清液
继续加乙醇至乙醇浓度为 ws h o离心得沉淀k部位
…tl o上清液继续加乙醇至乙醇浓度为 ys h o离心得
沉淀k部位 …ul o上清液继续加乙醇至乙醇浓度为
{s h o离心得沉淀k部位 …vl o上清液浓缩至无乙醇
味 o加适量水稀释 o依次以醋酸乙酯和正丁醇萃取 o
各萃取 v次 o萃取液浓缩干分别得到醋酸乙酯部位
k部位 ≤tl和正丁醇部位k部位 ≤ul o余下的药液浓缩
得部位 ≤v ∀另外制备四物汤水煎液的浓缩液 o浓度
为每 t °浓缩液含 t ª四物汤生药 o用于四物汤组
给药 ∀将四物汤水煎浓缩液 o部位 …t o…u o…v o≤t o
≤u o≤v的水溶液k浓度为每 t °含由 t ª四物汤生
药获得的提取部位l o作为受试药物考察其对辐射小
鼠外周血白细胞的影响 ∀
1 q4 q6 四物汤 ≤t o≤u o≤v o…提取部位和芍药苷对辐
射小鼠骨髓造血祖细胞的影响 制备四物汤水煎液
的浓缩液 o浓度为每 t °浓缩液含 t ª四物汤生药 o
用于四物汤组给药 ∀将四物汤水煎浓缩液 o部位
≤t o≤u o≤v和 …的水溶液k每 t °含由 t ª四物汤生
药获得的提取部位l o芍药苷水溶液k浓度为 s qyz ª#
ptl作为受试药物考察其对辐射小鼠骨髓造血祖细
胞的影响 ∀
2 实验结果
2 q1 四物汤 „ o…o≤ 提取部位对模型小鼠外周血白
细胞的影响
表 t结果表明 o小鼠经辐射后外周血白细胞数
显著降低 o然后随时间呈缓慢回升的趋势 ∀四物汤
具有提高血虚小鼠外周血白细胞数的作用 o其第 x
天和第 ts天的统计值高于模型组k Π s qsxl ~部位
…和部位 ≤ 也具有活性 o部位 … 在第 x 天和第 ts
天 o部位 ≤ 在第 z天和第 ts天的统计值高于模型组
kΠ s qsxl ~部位 „ 活性不显著 ∀基于此结果 o将部
位 …和部位 ≤ 分别进一步分离为部位 …t o…u o…v 和
部位 ≤t o≤u o≤v o考察活性 ∀
2 q2 四物汤部位 …t o…u o…v o≤t o≤u o≤v对模型小鼠
表 t 四物汤和部位 „ o…o≤ 对模型小鼠外周血白细胞数的影响k ξ ? σ, ν € tsl
组别
不同时间白细胞计数r ≅ ts|#pt
第 s天 第 v天 第 x天 第 z天 第 ts天 第 tv天
模型组 tv qx ? x qs t q{ ? s qu u qw ? t qs v q| ? t qs v qu ? s qx v qy ? t qt
四物汤组 tv qw ? t qz t qz ? s qv v qx ? t qstl w qw ? u qs w qv ? t qvtl w qu ? s qx
部位 „ 组 tx qt ? v q| t qy ? s qu u q| ? t qv x qu ? t q{ v qx ? s q| v qx ? s qu
部位 …组 tx qw ? u q| u qs ? s qw v qv ? s q|tl w qs ? t qy w qx ? t q{tl w qx ? t qv
部位 ≤ 组 tw qs ? t q| t qz ? s qv v qt ? t qs x qy ? t qxtl w qu ? s q|tl v q{ ? s qy
注 }与模型组相比 tl°  s qsxk表 u ov同l
外周血白细胞数的影响 表 u结果表明 o四物汤具
有提高血虚小鼠外周血白细胞数的作用 o在第 x oz o
ts otv天的统计值高于模型组k Π  s qsxl ~部位 …v
在第 v天和第 x天 o部位 ≤u在第 x oz otv天 !部位 ≤v
在第 x oz otv 天的统计值高于模型组k Π s qsxl ~其
他提取部位活性不显著 ∀
2 q3 四物汤部位 ≤t o≤u o≤v o…和芍药苷对模型小鼠
骨髓造血祖细胞的影响
表 v 结果表明 o小鼠经辐射后骨髓 ≤ƒ˜2Š o
≤ƒ˜2∞o…ƒ˜2∞o≤ƒ˜2°¬¬各系祖细胞集落数均显著降
低k Π s qsxl ∀四物汤对模型小鼠骨髓上述各系祖
细胞集落数均有升高作用k Π s qsxl ∀部位 ≤u 对
≤ƒ˜2Š 和 ≤ƒ˜2°¬¬o部位 ≤v对 ≤ƒ˜2Š 的集落数有
升高作用k Π s qsxl ∀部位 …和芍药苷对 w 个细胞
系集落数均有升高作用k Π s qsxl ∀而部位 ≤t除了
对 ≤ƒ˜2°¬¬集落数有所升高外 o对 ≤ƒ˜2Š 集落数
#zwx#
第 u|卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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却有降低作用k Π s qsxl ∀因此 o骨髓造血祖细胞检
测的结果与外周血白细胞检测的结果均显示部位
≤u o≤v的作用优于部位 ≤t ∀此外还可以看出部位 …
和芍药苷均具有促进造血祖细胞增殖的作用 ∀
表 u 四物汤和部位 …t o…u o…v o≤t o≤u o≤v 对模型小鼠外周血白细胞数的影响k ξ ? σ, ν € tsl
组别
不同时间白细胞计数r ≅ ts|#pt
第 s天 第 v天 第 x天 第 z天 第 ts天 第 tv天
模型组 tw qu ? v qs t qv ? s qu u qu ? s qv w qx ? s qy v q| ? s q{ v qz ? s q{
四物汤组 tw qy ? u qx t qw ? s qw u q{ ? s qwtl y qw ? t qvtl x qu ? t qxtl w qz ? t qutl
部位 …t组 tx qy ? u qy t qt ? s qv u qy ? s q{ w qy ? t qx v qz ? t qt w qt ? t qs
部位 …u组 tv qw ? u qt t qt ? s qu u qw ? s qy x qs ? s q| w qw ? t qu w qt ? t qt
部位 …v组 tw qz ? t q| t q{ ? s qwtl u qy ? s qxtl w qv ? s q{ v q| ? s q{ v q{ ? t qw
部位 ≤t组 tv qx ? v qt t qv ? s qv u qv ? s qx x qu ? t qs v qz ? t qu w qv ? t qt
部位 ≤u组 tx qy ? v q| t qx ? s qw u qx ? s qwtl x qx ? t qutl v qz ? t q{ x qt ? t qttl
部位 ≤v组 tv q| ? t qy t qv ? s qu v qs ? s qwtl x qz ? t qwtl w qw ? t qv w qz ? t qttl
表 v 四物汤 !部位 ≤t o≤u o≤v o…和芍药苷对模型小鼠造血祖细胞的影响k ξ ? σ, ν € vl
组别
小鼠造血祖细胞集落数r ≅ tsx…≤ p t
≤ƒ˜2Š ≤ƒ˜2∞ …ƒ˜2∞ ≤ƒ˜2°¬¬
正常组 {w qu ? x qxtl wx q{ ? { q|tl v| q{ ? { qstl vs qs ? { qztl
模型组 vw q{ ? v q| tv qx ? w qu tt qv ? u qu x qs ? t q{
四物汤组 yt qv ? z qttl uv q{ ? x qttl wz qs ? ts qutl tu qx ? u qxtl
部位 ≤t 组 tu qy ? w qstl | qv ? u q{ ts qv ? u qy { qs ? s q{tl
部位 ≤u 组 wy qx ? w q{tl t{ qx ? w qs tx qs ? v qz tv qv ? w qstl
部位 ≤v 组 wv qu ? u qytl ty qx ? w qu tw qx ? u qt x qx ? t qz
部位 …组 ww qw ? z qutl uz qx ? tu qttl vz qx ? tv qxtl vw qs ? tw q|tl
芍药苷组 yw qs ? ts qxtl uz qx ? { qutl uu qs ? x qwtl vv qv ? z qxtl
3 讨论和结论
3 q1 中药方剂的化学组成非常复杂 o探讨方剂药效
物质基础是中药现代研究的一个难点和关键 o目前
有多种研究思路在尝试和探索之中≈u ox oy  ∀以探讨四
物汤补血有效成分为目的的研究目前尚未见报道 ∀
我们的思路是将色谱 !质谱等分析技术运用于方剂
药效物质基础的研究 o即在对方剂不同提取部位进
行活性考察的同时 o对不同部位的化学成分也进行
考察 o从活性差异和成分差异的相互关系中探讨可
能的药效成分 ∀本研究即是在四物汤研究中尝试这
一思路 ∀
3 q2 对四物汤 „ o…o≤ 提取部位的活性考察表明 o四
物汤能提高模型小鼠外周血白细胞数 o部位 …和 ≤
与该作用的关系较为密切 ∀部位 „ 是 us h 醇沉物 o
应含有分子量较大的物质 o如多糖 !黏液质 !蛋白质
等 o部位 …是经 us h 醇沉后继续进行 {s h 醇沉的
沉淀物 o应含有寡糖等物质 o部位 ≤ 是 {s h 醇沉上
清液浓缩物 o应含有多种小分子物质 ∀这些提示 o四
物汤活性与其中寡糖和多种小分子物质的关系应作
为进一步研究的重点 ∀
3 q3 对四物汤 …t o…u o…v o≤t o≤u o≤v 提取部位的活
性考察表明 o部位 ≤u o≤v o…v与四物汤提高模型小鼠
外周血白细胞数作用的关系较为密切 ∀其中部位
≤u o≤v的作用更为突出 o第 x oz otv 天的统计值均高
于模型组 o部位 …v仅第 v和第 x天的统计值高于模
型组 ∀作者用色谱 !质谱方法对部位 ≤t o≤u o≤v化学
成分考察的结果表明 }部位 ≤t中含有种类丰富的成
分 o包括阿魏酸 !芍药苷等 o并且应含有藁本内酯 o而
糖类物质极少 ~部位 ≤u的成分以芍药苷 !单糖 !二糖
为主 ~部位 ≤v 的成分以单糖和二糖为主 ∀可以看
出 o活性部位 ≤u和 ≤v均含有单糖和二糖 o活性不显
著的部位 ≤t含糖极少 o因此单糖和二糖是否为活性
物质值得进一步研究 ~活性部位 ≤u 中还含有芍药
苷 o但活性不显著的部位 ≤t 中也含有芍药苷 o芍药
苷是否为活性物质也需要进一步研究 ∀
3 q4 四物汤 ≤t o≤u o≤v提取部位对骨髓造血祖细胞
的影响进一步表明部位 ≤u 和 ≤v 的作用优于部位
≤t o使部位 ≤u和 ≤v 为四物汤促进造血功能活性部
位的结论进一步得到支持 ∀作为活性部位 ≤u 主要
成分之一的芍药苷显示了促进模型小鼠骨髓造血祖
细胞增殖的作用 o初步表明芍药苷为四物汤促进造
血功能的活性成分之一 ∀此外部位 …也有促进模型
小鼠骨髓造血祖细胞增殖的作用 o提示部位 …也是
四物汤促进造血功能的活性部位 ∀
#{wx#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
≈参考文献 
≈t  肖培根 o肖小河 qut世纪与中药现代化 q中国中药杂志 ousss o
uxkul }yz q
≈u  徐 青 o肖红斌 o梁鑫淼 q中药复方药效物质基础的研究方法
与技术 q世界科学技术#中药现代化 ousst ovkwl }ux q
≈v  梁乾德 o王升启 o高 月 q四物汤基础研究进展 q天津中医药 o
ussv ouskxl }{v q
≈w  刘秀珍 q造血祖细胞培养技术实验手册 q北京 }北京出版社 o
t||v qux q
≈x  王升启 q试论/中药基因组学0与中药化学组学 q世界科学技术
#中药现代化 ousss ouktl }u{ q
≈y  杨 奎 o郭 力 o周明眉 o等 q中药复方组合化学研究方法初
探 q中药药理与临床 ot||{ otwkvl }wu q
Πρελιµιναρψστυδψ ον ηεµατοποιετιχ χονστιτυεντσ οφ ΣΙ2 ΩΥ2ΤΑΝΓ
Œ„‘Š ±¬¤±2§¨ o˜ ÷¬¤²2 ¬´± o  „  ±¨ª2¦«∏±oׄ‘‹²±ª2¯¬±ªo „ …¤¬2³¬±ªoŠ„’ ≠∏¨ o • „‘Š ≥«¨ ±ª2 ¬´
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¤¶°²§¨¯ ²©¥¯²²§§¨©¬¦¬¨±¦¼q Ρεσυλτ : „·©¬µ¶·≥Œ2 • ˜2ׄ‘Š º¤¶¶¨³¤µ¤·¨§¬±·²·«µ¨¨©µ¤¦·¬²±¶o©µ¤¦·¬²± „ o … ¤±§ ≤ q „¦·¬√¬·¼ ¶·∏§¼ ¶«²º §¨
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·²µ¦¨¯¯ ¬± ¥²±¨ °¤µµ²º ²©µ¤§¬¤·¨§ °¬¦¨ q Χονχλυσιον : ƒµ¤¦·¬²± ≤u o ≤v o… ¤±§³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± ¤µ¨ µ¨¶³²±¶¬¥¯¨©²µ«¨ °¤·²³²¬¨·¬¦¤¦·¬√¬·¼ ²©≥Œ2
• ˜2ׄ‘Šq
[ Κεψ ωορδσ] ≥Œ2 • ˜2ׄ‘Š ~«¨ °¤·²³²¬¨·¬¦~¦²±¶·¬·∏¨±·~©µ¤¦·¬²±~³¤¨ ²±¬©¯²µ¬±
≈责任编辑 方文贤 
骨碎补提取液对实验性牙槽骨吸收疗效的研究
陈莉丽t o唐 琪t o严 杰u 3
kt q浙江大学 医学院 附属第二医院 口腔科 o浙江 杭州 vtsss| ~
u q浙江大学 医学院 病原生物学教研室 o浙江 杭州 vtsssyl
≈摘要  目的 }建立实验性大鼠牙槽骨吸收模型 o了解中药骨碎补k⁄ƒ≥l对大鼠牙槽骨吸收的疗效 ∀方法 }采
用 ≥⁄大鼠局部注射大肠杆菌内毒素k∞2°≥l建立牙槽骨吸收模型 ∀制备 ⁄ƒ≥ 水相提取液 ∀建模大鼠用 ⁄ƒ≥ 水提
液每天灌胃 t 次 o分别用药 ts ous ovs §∀采用血清碱性磷酸酶k„°l活性 !钙离子k≤¤u n l和骨钙素k’≤l浓度测定 o
以及牙体2牙周联合标本骨密度k…⁄l !抗酒石酸酸性磷酸酶kו „°l染色破骨细胞计数 !‹∞染色组织病理学检查 o
评价 ⁄ƒ≥ 水提液治疗实验性牙槽骨吸收的疗效 ∀结果 }与相应阴性对照组比较 o用药 ts §大鼠的实验牙位骨密度
显著升高k Π s qsxl o牙周破骨细胞消失k Π s qsxl o‹²º¶«¬³陷窝明显减少 o大多出现根分叉区有成骨细胞附着的
新生未钙化骨样基质 o且第 us ovs天检查结果与第 ts天相似 ∀用药 ts ∗ vs §大鼠的血清标本中 „°活性 !≤¤un和
’≤ 浓度与对照组比较均无显著性差异k Ё s qsxl ∀结论 }⁄ƒ≥ 水提液对大鼠实验性牙槽骨吸收有明确的疗效 o能
抑制骨质吸收 !促进骨质再生 ∀血清 „°活性 !≤¤un和 ’≤ 浓度不能作为观察动物模型中牙槽骨吸收及再生的有效
指标 ∀
≈收稿日期  ussv2ts2uv
≈基金项目  浙江省科技厅资助项目k||ttsvttxl
≈通讯作者  3严杰 oר¯ }ksxztl{zutzv{x oƒ¤¬}ksxztl{zutzsww o∞2°¤¬¯}¼¤±¦«¨ ±ƒ °¤¬¯q«½q½­q¦±
#|wx#
第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw