全 文 ：Τηε Εφφεχτσ οφ Βανξια Ηουπυ ∆εχοχτιονιν α Χηρονιχ
Μιλδ Στρεσσ Μοδελ οφ ∆επρεσσιον
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨ ¦·²© …¤±¬¬¤ ‹²∏³∏ ⁄¨ ¦²¦·¬²±¬± ¤¦«µ²±¬¦°¬¯§¶·µ¨¶¶°²§¨¯²©§¨ ³µ¨¶¶¬²± ¤±§¬±√ ¶¨·¬2
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©¨©¨ ¦·¬± §¬©©¨ µ¨±·º¤¼¶q
[ Κεψ ωορδσ] …¤±¬¬¤ ‹²∏³∏ ⁄¨ ¦²¦·¬²± ~¦«µ²±¬¦°¬¯§¶·µ¨¶¶²© §¨ ³µ¨¶¶¬²± ~‘Ž¦¨¯¯ ¤¦·¬√¬·¼ ~≥’⁄¤±§ ‘’≥ ¤¦·¬√¬·¼ ~ ¬¯³¬§° µ¨2
²¬¬§¤·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
麝香糖蛋白成分对中性白细胞趋化反应的抑制作用
王文杰 o钟 淼 o郭 颖 o周龙恩 o程桂芳 o朱秀媛
k中国医学科学院 中国协和医科大学 药物研究所 o北京 tsssxsl
≈摘要  目的 }观察麝香糖蛋白成分k麝香2tl对中性白细胞趋化反应的影响 ∀方法 }体内采用羧甲基纤维素
诱导大鼠腹腔内中性白细胞趋化反应模型 ∀体外采用 …²¼§¨ ±隔室法测定兔中性白细胞趋化反应 ∀以 ƒ∏µ¤2u标记
荧光法测定细胞内游离钙水平 ∀结果 }皮下注射麝香水提物 x ous o{s °ª#®ªp t o显著抑制羧甲基纤维素诱导的大鼠
腹腔中性白细胞趋化反应 o抑制率分别为 x{ qy h oyx qt h和 zv qs h ~终浓度为 t ots otss Λª#°p t麝香2t o显著抑制
© °° 诱导的兔中性白细胞的趋化反应 o抑制率分别为 xz q| h oyw qz h和 zz q{ h ~终浓度为 t ots otss Λª#°p t的
麝香2t o明显抑制刺激剂引起的中性白细胞胞内游离钙水平的升高 o抑制率分别为 ty qv h ouw qz h和 vz q{ h ∀结
论 }麝香糖蛋白成分对中性白细胞趋化反应有显著抑制作用 o是其抗炎作用机制之一 ∀
≈关键词  麝香 ~中性白细胞 ~趋化反应 ~胞内游离钙 ~炎症
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlst2ssx|2sw
≈收稿日期  usst2tt2vs
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|vzs{wul
≈通讯作者  ר¯ }kstslyvtyxt|u ƒ¤¬}kstslyvstzzxz ∞2
°¤¬¯}ºº ±¨­ƒ¬°° q¤¦q¦±
麝香是一珍贵中药材 ∀以往实验证明 }麝香水
溶性成分在多种动物模型上有抗炎作用≈t  ∀中性白
细胞是宿主防御系统的组成部分 o又是主要的炎性
细胞 ∀炎症过程中 o存在于炎症部位的细菌 !化学物
#|x#
第 u{卷第 t期
ussv年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qt
¤±±∏¤µ¼ oussv
质及内源性物质如白三烯 …w !血小板活化因子 !白
细胞介素2{ 等均可引起中性白细胞的趋化反应 o大
量中性白细胞穿出血管聚集在炎症部位 o使反应进
一步加剧 ∀故抑制中性白细胞的趋化反应可作为抗
炎药物的作用靶点 ∀本研究拟观察从麝香水提物及
其分离出的抗炎有效成分麝香2t 对大鼠中性白细胞
趋化反应的影响 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料
1 q1 q1 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 o体重 uxs ∗ vss ªo雌雄
兼用 o由中国医学科学院动物所繁育场提供 ∀大耳
白兔 o体重 u qx ∗ v ®ªo雄性 o由中国药品生物制品检
定所动物中心提供 ∀
1 q1 q2 药物和试剂 麝香由中国药材公司四川省
中药材公司提供 ∀经我所宋万志教授鉴定 o为林麝
Μοσχηυσ βερεζοϖσκιι ƒ¯¨ µ²√ 香囊分泌物 ∀研磨成粉 o
经乙醚 o乙醇提取后 o以水冷渗 o提取液冷冻干燥 o冻
干粉以水复溶 o上 ≥ °¨«¤§¨ ¬ Š2ux 柱 o蒸馏水洗脱 o
收集第一色带 o冷干备用 o称麝香2t≈u  ∀在小鼠巴豆
油耳炎症模型 Œ⁄xs约为 vs °ª#®ªp t o故体外用相应
t ∗ tss Λª# °p t浓度 ∀趋化四肽k© °°l购自
≥¬ª°¤公司 ∀葡聚糖k§¨ ¬·µ¤± ×2xssl o购自 ≥ µ¨√¤公
司 ∀淋巴细胞分离液 o上海试剂三厂生产 ∀羧甲基
纤维素钠 o北京市东环联合化工厂生产 ∀其他试剂
均为国产分析纯试剂 ∀
1 q1 q3 仪器 w{ 孔细胞趋化板及滤膜 o购自美国
‘¨ ∏µ² °µ²¥¨ 公司 ∀ ≤ ’u温孵箱 o购自 • ∞∂ ≤ ’ 公司 ∀
倒置显微镜 o重庆光学仪器厂生产 ∀低温常速离心
机 o购自 ‹ ·¨·¬¦«公司 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 羧甲基纤维素诱导的大鼠腹腔中性白细胞
趋化反应≈v  正常大鼠腹腔注射 t h 羧甲基纤维素
钠 u °ov «后拉颈椎处死 o剪开腹部皮肤 o经腹膜
注入 x °生理盐水 o按摩腹部使混匀 o剪开腹膜 o用
滴管吸取腹腔内液体约 u °o放至冰浴的试管内 o
用白细胞稀释管吸取上液 us ˏo加入放有 s qv{ °
生理盐水的试管内摇匀 o吸取此液加至白细胞计数
板 o在高倍镜下计数白细胞 ∀
1 q2 q2 兔外周血中性白细胞的制备 从兔耳中动
脉取血 ov q{ h 枸橼酸钠抗凝ktΒ|l o加入 x h 葡聚
糖至终浓度为 t h o混匀后于 vz β≤ 水浴中静置 wx
°¬±o吸取上层清液 o置于淋巴细胞分离液上 o于 wss
µ#°¬±p t离心 us °¬±o收集底层细胞 o用溶液 ´k‘¤≤¯
{uw °ªo枸橼酸钠 v{s °ªo…≥„ uxs °ªo双蒸水 tss
°l洗涤细胞 t 次 o将细胞悬浮于含 s qsx h ‘¤≤¯
的低渗盐水中 tx ¶o加入等量的含 t qzx h ‘¤≤¯和
s qux h …≥„ 的高渗盐水 o迅速混匀 ∀破除残留的红
细胞后 o用溶液 µk‹¤±®¶平衡盐溶液 tss °ot°²¯
#pt ‹∞°∞≥ ts°o‘¤‹≤ ’v vxs °ªo双蒸水 {|s
°l悬浮中性白细胞 ∀
1 q2 q3 中性白细胞趋化反应的检测≈w  取上述制
备的中性白细胞 o用溶液 µ将细胞浓度调至 v ≅ tsy#
°p t ∀将药物和 © °°用溶液 µ配成所需浓度 o
在 w{ 孔细胞趋化板下板每孔内加入 ux ˏo放上用
溶液 µ湿润的滤膜 o避免产生气泡 o滤膜上安装趋化
板上板 o上板每孔内加 xs ˏ细胞悬液 ovz ε 温箱
中孵育 u «∀取出后 o弃去上室液体 o小心取出滤膜 o
置于甲醇中 w ¶o取出后放入苏木精染液中 ts °¬±o
蒸馏水洗后 o置于盐酸溶液中 vs ¶o用蒸馏水漂洗 o
蓝染 u °¬±o用蒸馏水漂洗 o置于 zs h 乙醇中 vs ¶o
|x h 乙醇中 vs ¶o无水乙醇中 u °¬±o取出后自然干
燥 ∀在有测微尺的显微镜下计数滤膜近下室一侧单
位面积中的细胞数 ∀每孔测量 x 个视野 o取均值 ∀
1 q2 q4 大鼠中性白细胞悬液的制备≈x  大鼠在乙
醚麻醉下 o于右胸肋间注入 t h 角叉菜胶 s qu °ow
«后断头处死 o吸取胸腔渗出液 o冰浴保存 o加含
s qzx h ‘‹w≤¯的 tz °°²¯ # pt ×µ¬¶2‹≤¯缓冲液
k°‹ z qul除去混入的红细胞 ou sss µ#°¬±p t离心 x
°¬±o沉淀的中性白细胞以适当生理溶液洗涤及制成
悬液 ∀
1 q2 q5 中性白细胞内游离钙水平的测定≈y  中性
白细胞以 ‹…≥≥2…≥„ 缓冲液k‘¤≤¯ w qs ªoŽ≤¯s quu
ªo≤¤≤ u¯ s qsyz ªoª≤ u¯ s qs| ªo‹∞°∞≥ t qt ªo…≥„
s qx ªo加双蒸水至 xss °o°‹ z qwl o悬浮 o调节为
每毫升含 t ≅ tsz 个 细胞 o加入适量的药物k⁄ ≥’
 s qx h l o再加入 t °°²¯#p t ƒ∏µ¤2ur„ ° v ˏovz
ε 水浴振荡温孵 wx °¬±后 o室温放置 tx °¬±o离心
沉淀细胞 o用 ‹…≥≥2…≥„ 缓冲液洗涤细胞外残存的
ƒ∏µ¤2ur„ ° o共洗 u 次 o再将白细胞悬浮于 ‹…≥≥2
…≥„缓冲液中 ∀取负载 ƒ∏µ¤2ur„ °的细胞悬液 u qs
°o加至 ‹¬·¤¦«¬2wsts 型荧光分光光度计的比色池
中 o并使细胞保持 vz ε 恒温及悬浮状态 o测定时采
用激发波长 vws ±°k光栅 x ±°l o发射波长 xss ±°
k光栅 ts ±°l o扫描速度 tus ±°#°¬±p t o在测定静息
#sy#
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状态的荧光强度后 o再分别测定加入刺激剂kt ≅
tsp w °²¯ #pt© ° us ˏl ots h ×µ¬·²± ¬2tss us
ˏoxss °°²¯#pt ∞Š× „kv °²¯#pt ×µ¬¶调至 ³‹
{ qzltss ˏ后的荧光强度 ∀用计算机程序 °µ²ªµ¤°
©²µ≤¤u n ° ¤¨¶∏µ¨ ° ±¨·kƒ2wstsl ±∏¬± u ƒ∏µ¤Œ±§²¯ 处
理实验数据 ∀计算出静息状态和加刺激物后细胞内
钙离子浓度 ∀
1 q3 结果
1 q3 q1 麝香水提物对羧甲基纤维素诱导的大鼠腹
腔中性白细胞趋化反应的作用 大鼠 us 只 o平均分
为 w组 o给药 v组分别皮下注射麝香水提物 x ous o{s
°ª#®ªp t o对照组给予等体积生理盐水 ovs °¬±后以
羧甲基纤维素造型观察中性白细胞趋化反应 ∀结果
表明 }麝香水提物显著抑制羧甲基纤维素诱导的大
鼠腹腔中性白细胞趋化反应 o抑制率分别为
x { qy h oyx qt h ozv qs h o呈剂量依赖关系k ρ €
s q||{ wlk图 tl ∀
图 t 麝香水提物对羧甲基纤维素诱导的大鼠
腹腔中性白细胞趋化反应的抑制作用
k ξ ? σ, ν € x) 与对照组比较 3 3 : Π s .st 3 3 3 : Π s qst
1 q3 q2 麝香2t体外对 © °°诱导的兔中性白细胞
趋化反应的作用 在趋化板下孔内分别加入终浓度
为 t ots otss Λª#°p t麝香2t后 o与对照组相比 o显
著抑制 © °°诱导的兔中性白细胞的趋化反应 o抑
制率分别为 xz q| h oyw qz h和 zz q{ h ∀呈剂量依赖
关系kρu € s q|yz zlk图 ul ∀
图 u 麝香2t体外对兔中性白细胞趋化反应的抑制作用
k ξ ? σ, ν € v) 与刺激剂组比较 f : Π s .sx
与刺激剂对照组比较 3 : Π s qsx
1 q3 q3 麝香2t对中性白细胞胞内游离钙水平的影
响 中性白细胞悬液与终浓度分别为 t ots otss Λª#
°p t的麝香2t或对照溶剂温孵后 o给药组胞内游离
钙水平分别比对照组降低 ty qv h ouw qz h ovz q{ h o
表明麝香2t可明显抑制刺激剂引起的中性白细胞胞
内游离钙水平的升高k图 vl ∀
图 v 麝香2t对 © °引起大鼠中性
白细胞内游离钙水平升高的影响
k ξ ? σ, ν € x) 与对照组比较 3 : Π s .sx 3 3 : Π s qst
1 q4 讨论
实验表明 o麝香糖蛋白成分在大鼠体内模型和
兔中性白细胞体外模型上均可抑制中性白细胞的趋
化反应 o可以认为是其抗炎作用机制之一 ∀在体内
模型中 o麝香糖蛋白可能直接作用于中性白细胞 o也
可能如在前文中证明的那样 o通过激活肾上腺皮质
系统而发挥作用 ∀在体外模型中 o则基本上为直接
作用 ∀
一般情况下 o由趋化剂如趋化三肽k© °l与中
性白细胞上的受体结合 o通过细胞上 Š 蛋白的偶
联 o再激活下游的一些酶和激酶 o引发趋化反应≈z  ∀
麝香糖蛋白有可能作用于这些环节 o但从它在体内
对羧甲基纤维素所致趋化反应的抑制作用来看 o似
乎不是特异的受体拮抗作用 ∀另外 o本实验所用的
趋化四肽k© °°l比 © °多了 t个氨基酸 o二者
作用相似 ∀一些文献报道 o中性白细胞的趋化反应
与细胞内钙水平有一定关系 o认为激活细胞游走和
引起胞内游离钙变化需要细胞外钙离子的内流≈{  ∀
实验结果表明 o麝香糖蛋白可抑制 © °引起的中
性白细胞胞内游离钙水平的升高 o可能是其抑制趋
化反应的作用机制之一 ∀但同剂量下要低于对细胞
游走的抑制率 o故可能还有其他环节起作用 ∀
≈参考文献 
≈t  朱秀媛 o王文杰 o徐桂芳 o等 q麝香的药理研究 µ 麝香及其有效
成分的抗炎作用 q药学学报 ot|{{ ouvkyl }wsy q
≈u  柳雪枚 o李虹奇 o肖 宣 o等 q天然麝香抗炎蛋白质的研究 Œ
 ∏2¤2t分离纯化及其部分性质的鉴定 q动物学报 ot||u ov{
kvl }vsu q
#ty#
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¤±±∏¤µ¼ oussv
≈v  陈敏珠 q抗炎药筛选规程 q药理学进展 q北京 }人民卫生出版
社 ot|{u qt|s q
≈w  ∏±ª¨µ • Š o≤¤µ§²½¤ × „ o¬∏ƒ ≤ o ·¨¤¯ qŒ°³µ²√ §¨ • ¤³¬§°«²·²2
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·¬²± ¤±§ ≤«¤±ª¨ ¶ ¬± ≤¼·²¶²¯¬¦ ƒµ¨¨ ≤¤¯¦¬∏° ²© ‘¨ ∏·µ²³«¬¯¶q
‘¤∏±¼± ≥¦«°¬¨§¨ ¥¨µª¶„µ¦« °«¤µ°¤¦²¯ ot||y ovxvkul }tvs q
Εφφεχτσ οφ Μυσκ Γλυχοπροτειν ον Χηεµ οταξισ οφ Πολψµ ορπηονυχλεαρ
Λευκοχψτεσ ιν ϖιϖο ανδ ιν ϖιτρο
• „‘Š • ±¨2­¬¨ o ‹ ’‘Š ¬¤²o Š˜’ ≠¬±ªo ‹ ’ ˜ ²±ª2 ±¨ o ≤ ‹∞‘Š Š∏¬2©¤±ª o ‹ ˜ ÷¬∏2¼∏¤±
kŒ±¶·¬·∏·¨ ²© ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤o≤«¬±¨ ¶¨ „¦¤§¨ °¼ ²©  §¨¬¦¤¯ ≥¦¬¨±¦¨¶o≤«¬±¨ ¶¨ ° ¬¨®¬±ª ˜±¬²±  §¨¬¦¤¯ ≤²¯ ¤¯ª¨ o… ¬¨­¬±ª tsssxsl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²© ∏¶® ª¯∏¦²³µ²·¨¬± ²±¦«¨ °²·¤¬¬¶²©°²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯ ∏¨®²¦¼·¨¶k°  ‘l q
Μετηοδ : × «¨ ¦«¨ °²·¤¬¬¶²©°  ‘¬± ¤¥§²°¬±¤¯ ¦¤√¬·¼¬±µ¤·¬±§∏¦¨§¥¼¦¤µ¥²¬¼° ·¨«¼¯ ¦¨¯¯∏¯²¶¨k≤  ≤l º¤¶∏¶¨§¤¶¤± ιν ϖιϖο ¤±¬°¤¯
°²§¨¯¤±§¬± ιν ϖιτρο¬·º¤¶ √¨¤¯∏¤·¨§¥¼ …²¼§¨ ± ¦«¤°¥¨µq׫¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨≤¤u n º¤¶ ∏´¤±·¬·¤·¨§ º¬·«·«¨ ©¯∏²µ¨¶2
¦¨±·≤¤u n ¬±§¬¦¤·²µƒ∏µ¤2u qΡεσυλτ : × «¨ º¤·¨µ ¬¨·µ¤¦·²© ∏¶®¤·§²¶¨ ²©x ous o{s°ª#®ªp tk¶¦l¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¦«¨ °²·¤¬¬¶
²©°  ‘¬±µ¤·~ ∏¶®2t ¤·¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©t ) tss Λª#°p t ¦¤±¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±«¬¥¬··«¨ ¦«¨ °²·¤¬¬¶²©µ¤¥¥¬·°  ‘ ιν ϖιτρο ~  ∏¶®2
t ¤·¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©t ) tss Λª#°p t ¦¤± ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±«¬¥¬··«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¦¼·²¶²¯¬¦≤¤u n ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¬± °  ‘²©µ¤·qΧονχλυ2
σιον : °¤µ·²© ° ¦¨«¤±¬¶°¶∏±§¨µ¯¼¬±ª¤±·¬¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¤¦·¬²± ²© ∏¶®¬¶·²¬±«¬¥¬··«¨ ¦«¨ °²·¤¬¬¶²© °  ‘q
[ Κεψ ωορδ]  ∏¶®~°²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯ ∏¨®²¦¼·¨ ~¦«¨ °²·¤¬¬¶~¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨¦¤¯¦¬∏° ~¬±©¯¤°°¤·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
糖微康对糖尿病大鼠肾功能的保护作用药效学研究
林 兰 o倪 青 o刘喜明 o王兆礼 o楚晓燕
k中国中医研究院 广安门医院 o北京 tsssxvl
≈摘要  目的 }探讨糖微康对糖尿病大鼠肾功能的保护作用 ∀方法 }利用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型 o随
机分为模型组 o糖微康胶囊大 !中 !小剂量治疗组 o西药开博通 !糖适平对照组 o并设正常对照组 ∀通过一般情况 o尿
微量白蛋白 !血糖及糖耐量试验 o血清胰岛素等指标 o和病理组织形态学观察等 o评价其疗效及作用机制 ∀结果与
结论 }糖微康能降低尿白蛋白 o调节糖尿病大鼠的糖脂代谢 o改善肾脏血液流变学指标 ∀
≈关键词  糖尿病肾病 ~动物模型 ~糖微康胶囊
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlst2ssyu2sx
≈收稿日期  ussu2su2tu
≈基金项目  国家/九五0攻关课题k|y2|sy2s|2szl
≈通讯作者  倪青 ר¯ }kstsl{{sstsuv ƒ¤¬}kstslyvsvwt|x
∞2°¤¬¯}±¬´¬±ªyy| ƒ ¶²«∏q¦²°
本研究制备了糖尿病大鼠动物模型 o以具有益
气养阴 o滋补肝肾 o活血化瘀功效的糖微康胶囊为治
疗药物 o设立开博通和糖适平为西药对照组 o观察糖
微康胶囊对糖尿病大鼠肾脏结构与功能的影响 ∀
#uy#
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