全 文 ：宽叶缬草对高胆固醇血症大鼠肾组织内
× ƒ2Βt表达的影响
司晓芸t o贾汝汉u o黄从新u o丁国华u o刘红燕u
kt q武汉大学 中南医院 肾内科 o湖北 武汉 wvsszt ~
u q武汉大学 人民医院 肾内科 o湖北 武汉 wvssysll
≈摘要 目的 }探讨宽叶缬草对高胆固醇血症大鼠肾组织内转化生长因子 Βtk× ƒ2Βtl表达的影响及其意义 ∀
方法 }用含 w h胆固醇和 t h胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型 o观察宽叶缬草对大鼠血脂 !尿蛋白和肾功
能的影响 o以及对肾小球细胞外基质增生 !× ƒ2Βt 和 ·型胶原表达的影响 ∀结果 }宽叶缬草有降低总胆固醇 !低密
度脂蛋白 !尿蛋白和血肌酐的作用 o肾病理和免疫组化证实宽叶缬草在降脂同时 o能减轻肾小球系膜病变和细胞外
基质产生 o降低肾组织内 × ƒ2Βt和 ·型胶原表达 ∀结论 }宽叶缬草对高脂血症肾脏有保护作用 o此作用可能与其
降低肾组织内 × ƒ2Βt表达有关 ∀
≈关键词 宽叶缬草 ~高胆固醇血症 ~肾组织 ~转化生长因子 Βt
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvls|2s{wx2sx
近年来 o高脂血症对肾病的影响已日益引起人
们的重视 o但脂源性肾病的发生发展机理尚不是很
清楚 ∀肾小球硬化是各种慢性肾小球疾病走向终末
期的共同途径 o而细胞外基质k∞≤ l的病理性积聚
是肾小球疾病进展的主要特征 o是发展肾小球硬化
和晚期肾脏病的结构基础≈t ∀转化生长因子 Βt
k× ƒ2Βtl为一类多肽生长因子 o它可使 ∞≤ 过度
产生并抑制其降解 o增加细胞对 ∞≤ 的粘附 o同时
调节其他生长因子的作用 o被认为是导致肾硬化的
关键性因素之一≈u o其在脂质肾损害中的作用已在
许多研究中得到证实 ∀缬草为一类重要的中药资
源 o有研究发现缬草提取物能调节血脂及抗脂质过
氧化≈v ∀我们观察了实验性高胆固醇血症大鼠采用
宽叶缬草治疗后肾组织内 × ƒ2Βt !∂ 型胶原的表
达和 ∞≤ 改变 o旨在探讨宽叶缬草在脂质肾损害中
的可能肾保护作用及其可能机制 ∀
1 材料与方法
1 q1 动物 雄性 • ¬¶·¤µ大鼠 o体重 tzs ∗ uus ªo平
均 tu周龄k湖北省老年病研究所动物中心提供l ∀
1 q2 药品与试剂 胆固醇k武汉亚法生物技术公
司l !胆酸钠k北京化学试剂公司l !宽叶缬草提取物 }
≈收稿日期 ussu2tu2tu
≈基金项目 湖北省自然科学基金资助项目k||twul
≈通讯作者 贾汝汉 ר¯ }ksuzl{{swt|t|2utw|
采集神龙架林区的宽叶缬草 ςαλεριανα οφφιχιναλισ
q√¤µqλατιφολια ¬´ q鲜根制成的乳白色液体 o每毫
升含缬草挥发油 x °ªk湖北省老年病研究所薛存宽
教授惠赠l ∀兔抗 × ƒ2Βt多克隆抗体和鼠抗 ·型胶
原单克隆抗体k购自武汉博士德公司l !链霉菌抗生
物素蛋白2过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒k≥°
¬·购自福州迈新公司l ∀
1 q3 动物模型的制备和分组 采用完全随机的方
法将 • ¬¶·¤µ大鼠分为 v组 }高脂组 !缬草组和正常组
k均 ν {l ∀在大鼠的普通饲料中分别按 w h和 t h
的比例加入胆固醇和胆酸钠配制成高脂饲料k脂肪
含量 t| qv h l o供高脂组和缬草组大鼠自由进食 o正
常组大鼠进食普通饲料 ∀缬草组大鼠在进食高脂饲
料同时 o每日给予宽叶缬草提取物k缬草挥发油剂量
ux °ª#®ªp t#§p tl加生理盐水至 u °灌胃 o高脂组
和正常组大鼠每日给予等量生理盐水灌胃 ∀试验全
过程为 ty周 ∀
1 q4 观察指标与方法
1 q4 q1 血清生化指标 !肾功能和尿蛋白测定 血清
脂质 }总胆固醇k× ≤l !甘油三脂k× l !低密度脂蛋
白k⁄l和高密度脂蛋白k⁄l }采用
¨ ¦®°¤±自
动生化分析仪检测 ~血肌酐k≥¦µl !尿素氮k
l }采
用
¨ ¦®°¤±自动生化分析仪测定 ~uw «尿蛋白定量
k°∞l }代谢笼收集大鼠 uw «尿液 o采用磺基水杨
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酸法检测 ∀
1 q4 q2 肾脏病理学观察 用 t h 戊巴比妥钠kvs
°ª#®ªp tl腹腔内注射麻醉大鼠 o取下右肾 o称重后
置ts h 中性福尔马林中固定 o石蜡包埋 ∀光镜检
查 }切片厚 v Λ° o行过碘酸雪夫氏反应k°≥l染色 o
采用 °≥2tsss高清晰度医学彩色病理图像分析
系统 o每张标本高倍镜下顺序观察皮质部分 ts个肾
小球 o测定肾小球面积kl !系膜基质面积k l o两者
之比为系膜基质指数k rl ∀免疫组织化学k≥°l
法 }切片常规脱蜡至水 ov h过氧化氢封闭内源性过
氧化物酶 o磷酸盐缓冲液k°
≥l冲洗 os qtux h胰蛋
白酶消化 us °¬±o正常非免疫血清封闭后 o依次加入
一抗 !二抗及链霉菌抗生物素蛋白2过氧化酶液孵
育 o⁄
显色 o脱水 !透明 !封片 ∀每组染色均以
°
≥代替一抗作为阴性对照 ∀肾小球免疫组化结果
采用 °≥2tsss高清晰度医学彩色病理图像分析
系统行半定量分析 o每份标本测 ts个肾小球 o用积
分吸光度k⁄l表示阳性物质的相对含量 ∀肾小管
间质显色结果判断采用半定量法 o连续观察 xs 个
wss倍视野 o根据染色强弱 !染色范围分为 s ot ou ov
级 o计数视野内积分 o取均值 ∀
1 q5 统计学处理 运用 ≥°≥≥ts qs ©²µ • ¬±§²º¶统
计软件分析处理计量资料 o结果以均数 ? 标准差表
示 o以 Π s qsx为有统计学差异 ∀
2 结果
2 q1 宽叶缬草对血脂 !尿蛋白和肾功能的影响 高
脂组大鼠血清总胆固醇及低密度脂蛋白浓度显著高
于缬草组和正常组k Π s qstl o缬草组大鼠血清总
胆固醇及低密度脂蛋白浓度高于正常组k Π
s qstl ∀甘油三脂和高密度脂蛋白 v组间差异不显
著k Π s qsx o表 tl ∀高脂组大鼠血肌酐和尿蛋白较
缬草组和正常组明显增高k Π s qstl o缬草组大鼠
尿蛋白高于正常组k Π s qsxl ∀血尿素氮高脂组较
缬草组和正常组有所升高 o但 v组间无统计学差异
k表 ul ∀
表 t v组大鼠血脂结果比较k ξ ? σ, ν {l
组别 × ≤r°°²¯#p t
× r
°°²¯#p t
⁄r
°°²¯#p t
⁄r
°°²¯#p t
高脂组 x qt{ ? t qsyul s q{| ? s quy s qwt ? s qsy t q|| ? s qxzul
缬草组 u q{| ? s qv|u owl s q|w ? s qux s qwy ? s qtw s q|z ? s qs|u owl
正常组 t qst ? s qu{ s qyz ? s qvt s qwv ? s qtv s qvu ? s qsz
注 }与正常组比较 tl Π s .sx u) Π s .st 与高脂组比较
v) Π s .sx w) Π s qstk表 u ov同l
表 u v组大鼠尿蛋白和肾功能结果比较k ξ ? σ, ν {l
组别 °∞r°ª#uw«p t ≥¦µrΛ°²¯#p t
r°°²¯#p t
高脂组 ut q|w ? v qssul yz q{t ? tu q{vul y q{w ? t qu|
缬草组 tt qvt ? u qvwt owl xs qxy ? ts qytvl y qwy ? t qu{
正常组 y q{x ? u q|{ ww qy{ ? { qs{ y qvs ? s qys
2 q2 肾脏病理改变
2 q2 q1 光镜 正常组大鼠肾小球未见异常改变k图
tl ∀高脂组大鼠多数肾小球呈系膜基质中重度增
多 o基底膜中重度不规则增厚 o肾小球局部可有空泡
形成 o偶见肾小球局灶节段性硬化k图 ul ∀缬草组
大鼠肾小球系膜基质增多明显减轻k图 vl o肾小球
系膜基质指数明显低于高脂组k表 vl ∀
图 t 正常组大鼠肾小球结构正常k°≥染色 ≅ wssl
图 u 高脂组大鼠肾小球系膜基质和基底膜明显增生
k°≥染色 ≅ wssl
图 v 缬草组大鼠肾小球系膜基质和基底膜轻度增生
k°≥染色 ≅ wssl
2 q2 q2 × ƒ2Βt !·型胶原表达 × ƒ2Βt 蛋白表达
主要分布在肾小管上皮细胞胞质 o在正常大鼠中表
达很少k图 wl o高脂组大鼠肾小管中表达显著增加 o
且在肾小球中也有较强表达k图 xl o而缬草组大鼠
肾小球和肾小管内 × ƒ2Βt表达均明显下降k图 yl ∀
正常大鼠肾小球系膜区和小管基底膜处有时可见 ·
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型胶原表达k图 zl o在高脂组 ·型胶原的表达明显
增强 o以系膜区多见k图 {l o而缬草组大鼠肾组织内
·型胶原表达较高脂组显著减少k图 |l ∀v组大鼠
病理和免疫组化结果见表 v ∀
表 v v组大鼠病理学和免疫组化结果比较k ξ ? σ, ν {l
组别 r
× ƒ2Βt
肾小球 肾小管间质
·型胶原
肾小球 肾小管间质
高脂组 s qwz ? s qsyul u qwx ? s qtyul u qss ? s qtvul w qwt ? s qvuul u qty ? s quvul
缬草组 s qvw ? s qsxt owl t qy| ? s qsxu owl t qs{ ? s qutu owl u qzw ? s quxu owl s q|| ? s qu{u owl
正常组 s quy ? s qsy s qxy ? s qsw s qv| ? s qt{ t qzv ? s qvw s qvx ? s qtz
图 w 正常组大鼠肾组织 × ƒ2Βt蛋白表达k≥°法 ≅ ussl
图 x 高脂组大鼠肾组织 × ƒ2Βt蛋白表达k≥°法 ≅ ussl
图 y 缬草组大鼠肾组织 × ƒ2Βt蛋白表达k≥°法 ≅ ussl
图 z 正常组大鼠肾组织 ·型胶原表达k≥°法 ≅ wssl
图 { 高脂组大鼠肾组织 ·型胶原表达k≥°法 ≅ wssl
图 | 缬草组大鼠肾组织 ·型胶原表达k≥°法 ≅ wssl
3 讨论
临床研究和动物实验均证实高脂血症可引起肾
脏损害 o但其机制尚未完全阐明 o可能涉及肾小球内
脂质沉积 !系膜细胞和球内浸润的巨噬细胞对低密
度脂蛋白的过量吞噬 !细胞因子和活性氧分子释放 !
系膜细胞增殖和细胞外基质积聚等 o从而最终导致
肾小球肥大和硬化 ∀ × ƒ2Βt 为一类多肽生长因子 o
机体大部分细胞均能合成 ∀研究发现 × ƒ2Βt 具有
多种生物活性≈w o它可通过自分泌和旁分泌方式刺
激单核巨噬细胞 !成纤维细胞和肾小管上皮细胞合
成 ·型胶原及蛋白聚糖 ~通过抑制胶原酶 !丝氨酸蛋
白激酶和纤溶酶原激活物k°l的活性及增强纤溶
酶原激活抑制物k°l和金属蛋白酶组织抑制物
k× °l的活性 o抑制细胞外基质蛋白降解 ~通过增
加整合素及其它基质蛋白膜受体表达 o促进靶细胞
∞≤ 表达 ~× ƒ2Βt 还能调节血小板源性生长因子
k°⁄ƒl !成纤维细胞生长因子kƒƒl等的作用 o共
同加速纤维化进程 o从而被认为是导致肾硬化的关
键性因素之一 ∀ ≠²¬≈x 等给予培养的系膜细胞脂
蛋白刺激 w{ «后即有 × ƒ2Βt 表达明显增加 o且其
表达随脂蛋白浓度增加而增高 ~∞§§¼ ≈y 在高胆
固醇饮食大鼠喂养 w周时也发现小管间质 × ƒ2Βt
蛋白表达显著上调 ∀这些研究提示 × ƒ2Βt 参与了
高脂血症所致肾损害发生发展的发病机制 ∀在我们
的研究中 o大鼠接受高脂饮食 ty周后在血清总胆固
醇及低密度脂蛋白增加同时 o出现尿蛋白和血肌酐
明显增高 o免疫组化提示 × ƒ2Βt 蛋白和 ∞≤ 成分
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·型胶原表达上调 o病理学检查发现系膜基质和基
质指数明显增加 o进一步证实高脂可导致肾损伤 o而
× ƒ2Βt在肾损伤的病程中起重要作用 ∀
宽叶缬草为一种多年生野生草本植物 o属败酱
科缬草属 o性平味辛 o其根和根状茎可入药 o具有镇
静安神 !解痉止痛的功效≈z o近年来有研究发现缬草
提取物尚能扩张血管 !调节血脂及抗脂质过氧化≈v o
但有关宽叶缬草在肾脏中的作用尚少见报道 ∀我们
的实验发现 o高胆固醇血症大鼠接受宽叶缬草治疗
ty周后 o总胆固醇和低密度脂蛋白较高脂组明显下
降 o在血脂下降同时 o尿蛋白和血肌酐也较高脂组明
显降低 o证实宽叶缬草对高脂引起的肾损伤具有保
护作用 ∀进一步的病理学检查发现肾小球系膜基质
和基质指数较高脂组大鼠显著减轻 o细胞外基质成
分·型胶原表达下调 o与此同时 o肾组织内 × ƒ2Βt
表达减少 ∀因此 o我们认为 o宽叶缬草肾保护作用的
机制之一可能是在有效降脂的基础上 o抑制了肾组
织内 × ƒ2Βt的表达 o从而使细胞外基质产生减少 o
延缓了肾小球硬化的进程 ∀本研究中宽叶缬草对
× ƒ2Βt表达的下调并未达正常水平 o可能表明宽叶
缬草尚通过其他机制同时参与对高脂诱导肾损伤的
保护作用 ∀
总之 o脂质代谢异常可导致肾脏疾病的进行性
发展 o积极防治高脂血症对防治或延缓肾脏疾病进
行性恶化具有实际意义 ∀缬草为一类重要的中药资
源 o其在降脂和肾脏保护中的作用值得我们进一步
研究 ∀
≈参考文献
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≈v 杨桂元 o王 玮 q宽叶缬草治疗冠心病的临床研究 q中国中西
医结合杂志 ot||w o| }xws q
≈w 孙铭柱 o徐 曼 o邹万忠 q肾小管间质纤维化中转化生长因子
Βt的表达特征 q中华肾脏病杂志 ousss ox }u|t q
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¶¨µ∏° ¦µ¨¤·¬±¬±¨ q¬ª«·°¬¦µ²¶¦²³¼ ¤±§¬°°∏±²«¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ¶·¤¬± µ¨√ ¤¨¯ §¨·«¤·¬± ·«¨ ¶¤°¨·¬°¨²© ²¯º¬±ª¶¨µ∏° ¬¯³¬§o ¶¨¤±ª¬¤¯
°¤·µ¬¬¬±§¨ ¬ º¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ µ¨§∏¦¨§o¤¦¦²°³¤±¬¨§¥¼ §¨¦µ¨¤¶¨§ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© × ƒ2Βt ¤±§·¼³¨ ∂ ¦²¯ ¤¯ª¨ ± qΧονχλυσιον : ∂ «¤¶
·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨ ¦·²± ¬¯³¬§2¬±§∏¦¨§±¨ ³«µ²³¤·«¼ o¤±§·«¨ ¬±«¬¥¬·¬²± ²© × ƒ2Βt ¬¨³µ¨¶¶¬²± °¬ª«·¥¨ ·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²© ∂ ²± µ¨±¤¯
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[ Κεψ ωορδσ] ςαλεριανα οφφιχιναλισ √¤µq λατιφολια ; §¬¨·¤µ¼2¬±§∏¦¨§ «¼³¨µ¦«²¯ ¶¨·¨µ²¯¨°¬¤~µ¨±¤¯ ²µª¤±¬½¤·¬²± ~·µ¤±¶©²µ°¬±ª
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≈责任编辑 方文贤
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