全 文 ：高效液相色谱法测定何首乌中二苯乙烯甙的
含量及其稳定性考察
张纯 杨少麟 袁海龙 郭澄 邵元福
k第二军医大学长征医院 上海 ussssvl
摘要 目的 }建立测定何首乌及其制剂中二苯乙烯甙含量的高效液相色谱法 o同时考察二苯乙烯甙
的稳定性 ∀方法 }二苯乙烯甙测定以 ∞¦²±²¶³«¨ µ¨ ≤{ xΛ°kuxs°° ≅ w qy°°l为固定相 o甲醇2水kvsΒzsl为
流动相 o紫外检测波长为 vts±° ∀稳定性考察采用高温实验和酸解实验 ∀结果 }进样量在 u quw ≅ ts p u ∗
t qtu ≅ ts p tΛª范围内线性关系良好 oρ s .|||{ ,加样回收率为 || .|y % , ΡΣ∆ 为 t .xw %(ν yl ∀结论 }
本法灵敏 !准确 !快速 ~二苯乙烯甙在水溶液中较稳定 o但高温k{s ε l对其有一定影响 o在酸性溶液中很
不稳定 ∀
关键词 何首乌 二苯乙烯甙 含量测定 稳定性试验
何首乌系蓼科植物何首乌之块根 ∀二苯乙
烯甙是何首乌的有效成分之一 o具有明显的降
低胆固醇的作用≈t 和保肝作用≈u ∀文献报
道≈v ∗ z 用薄层扫描法 !高效液相色谱法 !紫外分
光光度法 !酶化学发光法等测定二苯乙烯甙的
含量 o但均以结构上与二苯乙烯式相似的白藜
芦醇甙作为对照品 o对测定结果有一定的误差 ∀
本文则以二苯乙烯甙为对照品 o用高效液相色
谱法测定何首乌及其制剂中二苯乙烯甙的含
量 ∀同时 o通过高温试验 !酸解试验 o考察了何
首乌中二苯乙烯甙的稳定性 o为何首乌的合理
炮制及开发提供依据 ∀
1 仪器与试药
≥°{{ss高效液相色谱仪 o∂2usss检测仪 o
≥°wwss积分仪k美国光谱物理公司l ~∂2uws紫
外分光光度计k上海第三分析仪器厂l ∀
二苯乙烯甙对照品k中国科学院上海药物
研究所肖凯博士提供 o含量 || q|x h l ∀生何首
乌药材k购自安徽亳州药材交易市场 o经郭澄副
主任药师鉴定为何首乌 Πολψγονυµ µυλτιφλορυµ
׫∏±¥q之块根l ~制何首乌按5中国药典6t||x
年版一部 o炖法炮制 ~养血生发胶囊k天津市第
五制药厂 o批号 |vsvswl ~首乌喘息灵胶囊k江苏
省泰兴市制药厂 o批号 |wtsttl ~优生宝胶囊k扬
州市中药厂提供样品 o批号 |zszs{l ~甲醇为色
谱纯 o氯仿为分析纯 ∀
2 方法与结果
2 q1 含量测定
2 q1 q1 检测波长的设定 精密称取二苯乙烯
甙对照品 u q{s°ª于 ts°¯ 容量瓶中 o加甲醇至
刻度 o配成浓度为 s qu{°ªr°¯ 的溶液 ∀以甲醇
为空白 o在波长 uss ∗ zss±°范围内扫描得到吸
收光谱 o在 vts±°处有最大吸收 o故选择 vts±°
作为二苯乙烯甙含量测定的检测波长 ∀
2 q1 q2 色谱条件 色谱柱为 ∞¦²±²¶³«¨ µ¨ ≤t{
xΛ°kuxs°° ≅ w qy°°l o流动相为甲醇2水kvsΒ
zsl o流速 s q{°¯ r°¬± o室温 o检测波长 vts±° ∀
二苯乙烯甙对照品及何首乌样品图谱见图 t ∀
图 t 二苯乙烯甙对照品及样品色谱图
q对照品
q样品 t q二苯乙烯甙
2 q1 q3 标准曲线 分别精密量取对照品溶液
s qw os q{ ot qu ot qy ou qs°¯ 于 xs°¯ 容量瓶中 o加
甲醇至刻度为对照品溶液 otsΛ¯ 进样 o测定二苯
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乙烯甙的峰面积 o以进样量k Ξ)对色谱峰面积
(Ψ)绘制标准曲线 ,回归方程为 Ψ y .uu ≅
ts| Ξ p vyyx .x , ρ s q|||{ ∀进样量在 u quw ≅
tsp u ∗ t qtu ≅ tsp tΛª线性关系良好 ∀
2 q1 q4 精密度试验 取二苯乙烯甙对照品溶
液 tsΛ¯ o连续进样 x次 o测得色谱峰面积的 ΡΣ∆
为 s qvs h ∀
2 q1 q5 回收率试验 精密称取生何首乌粗粉
适量数份 o分别加入二苯乙烯甙对照品 o按样品
测定方法测定 o求得加样回收率 o结果见表 t ∀
表 t 二苯乙烯甙加样回收率结果
样品量 加入量 测出量 回收率 ξ ΡΣ∆
s qtvvt s qtwss s qtwst tss qs{
s qvsux s qu{ss s quzxw |{ qvy || q|y t qxw
s qwwzz s qwuss s qwuys tst qww
注 }ν v
2 q1 q6 样品测定
何首乌药材的含量测定 精密称取生 !制
何首乌粗粉各 tªo氯仿 tss°¯ 索氏提取 u«o残
渣 tss°¯ 甲醇回流 u次k每次 u«l o提取液合并
至 uxs°¯ 容量瓶中 o加甲醇至刻度 o过 s qwxΛ°
的纤维素膜 o取续滤液 tsΛ¯ 进样 o测定峰面积 o
用外标法计算样品中二苯乙烯甙的含量 ∀测得
生何首乌和制何首乌药材中二苯乙烯甙的含量
分别为 s qtut h os qtty h oν x ∀
何首乌制剂的含量测定 分别精密称取养
血生发胶囊 !首乌喘息灵胶囊 !优生宝胶囊的内
容物各 s qwªo按样品测定方法处理 o测得其含量
依次为 s qszw h os qw{x h os qt{v h ∀
2 q2 二苯乙烯甙的稳定性考察
2 q2 q1 二苯乙烯甙样品的制备 精密称取生
何首乌粗粉 vªo氯仿 txs°¯ 索氏提取 u«o残渣
用 txs°¯ 甲醇回流 u次 o每次 u«o甲醇提取液合
并至 xss°¯ 容量瓶中 o加甲醇至刻度 o测定其含
量为 z quv°ªr°¯ ∀
2 q2 q2 高温试验 精取样品制备液 ts°¯ o挥
去甲醇 o水定容于 ts°¯ 容量瓶中 o密封 o分别置
于 ws oys o{s ε 水浴中 o并在第 s ot ov ox ots天分
别测定其含量 ∀结果在第 ts天 ows oys o{s ε 条
件下其含量分别下降到原来的 |x qzs h o
|t qxw h o{| q{{ h o说明二苯乙烯甙在水溶液
中有较好的稳定性 o但高温对其仍有影响 ∀
2 q2 q3 酸解试验 精取上述备用液 ts°¯ o挥
去甲醇 o用 w h硫酸溶液溶解并定容于 ts°¯ 容
量瓶中 o分别置于室温和 ys o{s ε 水浴中 o并在
s ot ou ow o{ otu«分别测定其含量 ∀在室温下 o
tu«后二苯乙烯甙含量下降到原来的 vt qyz h ~
ys ε otu«后已检测不到 ~{s ε ow«后已检测不
到 ∀其降解产物为二苯乙烯甙甙元 o进一步降
解为酚类化合物 ∀说明二苯乙烯甙在酸性溶液
中很不稳定 ∀
3 讨论与小结
3 q1 本实验所测得的何首乌中二苯乙烯甙含
量与文献报道≈x ∗ z 有较大出入 ∀原因之一在于
文献中没有用二苯乙烯甙作对照品 o而是用结
构上与二苯乙烯甙相似的白藜芦醇甙作对照
品 o这样就使文献中的二苯乙烯甙含量比实际
二苯乙烯甙含量偏高 ∀因为相同浓度的二苯乙
烯甙在 vts±°处的吸收高于白藜芦醇甙 o而且
在色谱分析中 o被测物结构上的差异会使分离
效果不一致 o给定量带来误差 ∀
3 q2 在样品处理过程中 o先用氯仿提取 o可以
去除游离蒽醌等脂溶性成分 o有利于样品中二
苯乙烯甙的测定 o因为在该色谱条件下 o游离蒽
醌等脂溶性成分在 ≤t{柱上保留时间长于二苯
乙烯甙的保留时间 o出峰慢 o大大延长分析周
期 o而且加重柱的污染程度 ∀
3 q3 曾有报道≈{ 用酸解法作为何首乌片制剂
提取工艺 o其目的是为了将何首乌中结合蒽醌
水解为游离蒽醌 o但并未考察二苯乙烯甙的情
况 o由于二苯乙烯甙在酸性溶液中很不稳定 o因
此用酸解法作为何首乌制剂的提取工艺显然是
不妥的 ∀
3 q4 有人≈y 曾用紫外分光光度法考察过何首
乌中二苯乙烯甙的稳定性 o但所得的结论值得
商榷 ∀由于二苯乙烯甙水解后变为甙元等成
分 o其降解物在 vts±°处吸收不仅不下降 o而且
吸收度会随加热时间成线性增加 o用分光光度
法难以评估 o因此 o考察二苯乙烯甙的稳定性 o
宜采用高效液相色谱法作为测量手段 ∀
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4 参考文献
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t||{2sz2st收稿
#|xv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期