全 文 ：三七皂甙单体 • ªt对
心肌细胞膜钙离子通道的影响 3
张斌 k广东省佛山市中医院 Œ≤ ˜ 佛山市 xu{sssl
金士翱 k同济医科大学附属同济医院 武汉 wvssvsl
况铣 k昆明医学院第一附属医院 Œ≤ ˜ 昆明 yxssvul
姚伟星 夏国谨 江明性 k同济医科大学基础医学院心血管药理研究室 武汉 wvssvsl
摘要 目的 }探讨 • ªt对豚鼠心肌细胞膜 2型电压依赖性钙通道的影响 ∀方法 }采用标准全细胞膜
片钳技术 ∀结果 }在保持电位 p ws°∂ o细胞去极化至 n ws°∂ o刺激频率 s qx‹½o时程 txs°¶条件下 • ªt
tsΛ°²¯#p t和 vsΛ°²¯#p t对 …¤¼ Ž{yww和 ‘¬©¨ §¬³¬±¨ 敏感的钙内向电流均无明显影响k Ё s .sx , ν €
xl ∀结论 }• ªt对 2型钙通道无抑制作用 ∀
关键词 三七皂甙 • ªt 膜片钳 钙通道
三七皂甙单体 • ªt是由三七总甙k°‘≥l分
离纯化得到的单体成分 o其分子式为 • ªt }
≤wu‹zu ’tw ‹u ’ ∀近年研究发现 °‘≥具有扩张
血管 o降低血压 o抗实验性心律失常 o对抗钙离
子 !去甲肾上腺素诱发的离体血管条收缩作用 ∀
为了阐明 °‘≥单体 • ªt 在离子通道水平的药
理机制 o本实验采用标准全细胞记录的膜片钳
技术研究该单体对豚鼠心肌细胞膜钙电流的影
响 o为临床开发应用三七药物提供更为详尽的
药理机制 ∀
1 材料和方法
1 q1 分离细胞 豚鼠 ouxs ∗ vssªo雌雄不拘 o
肝素 t qv°ª#tssªp t抗凝 o巴比妥钠 xs°ª#®ªp t
麻醉 o进行气管插管 o人工呼吸 o主动脉根部插
管 o迅速取下心脏 o在 vz qs ε 恒温条件下进行
¤±ª¨ ±§²©©灌流 o分别用含钙 s qu°°²¯ #p t和
无钙台氏液灌流 v ∗ x°¬±o用 s qx h ¦²¯ ¤¯ª¨ ±¤¶¨
Œos qux h蛋白酶的无钙台氏液灌流消化心脏 o
剪碎心室部分 o轻轻振荡 o使细胞分离 o倾出上
清液 o即得到实验用细胞 ∀
1 q2 电极制备 玻璃毛坯k≤≤2tz o中国科学院
上海脑生理研究所或日本产硝子管l o拉制成电
阻为 u ∗ w  8 的电极 ∀临用时充入电极内液 o
插入连有 „ª2„ª≤¯丝的探头连接管k‹²¯ §¨µl内
备用 ∀
1 q3 仪器设备 细胞膜电流记录系统包括
°≤2ŒŒ型膜片钳放大器 o°≤2Œ型数据采集板及
相应的 °≤≤2Œ型软件系统k华中理工大学生物
物理研究所研制l及 Œ…2v{y微机 ∀
1 q4 电流记录 采用全细胞记录方式≈t  o通过
设置实验参数 o以适应钙电流记录的实验条件
误差 o待确定各系统已进入实验状态后 o应用三
维液压操纵仪 k ‘¤µ¬¶«¬ª¨ ²vsv 型 o日本生
产l o使电极尖端接近细胞表面 o当封接电阻为
u ∗ tsŠ8 o吸破细胞膜 o调节电容和电阻补偿 o
以减少钳位误差和记录电流信号失真 o刺激信
号输出和电流信号记录通过 „r⁄和 ⁄r„ 数据
转换装置 o电流信号经截止频率 t‹½的四解贝
赛尔低通滤波 o采样频率 s qx‹½o所有实验结果
存于计算机硬盘供实验后分析 ∀
1 q5 电极内液成分k °°²¯ #ptl ≤¶≤¯ tus o
Ž≤¯tus o≤¤≤ u¯ ut o∞Š× „ tt o‹∞°≥ ts o ª„×°
x o用 ≤¶’ ‹ 调 ³‹ 至 z qv ∀
1 q6 药品 ≤²¯ ¤¯ª¨ ±¤¶¨ ×¼³¨ Œo°µ²·¨¤¶¨ 均为
≥¬ª°¤公司产品 o…¤¼® {yww为德国 …¤¼¨ µ药厂
赠 ∀三七皂甙单体 • ªt为昆明医学院植物化学
研究所提供 o纯度 |{ h ∀
3云南省卫生厅中医中药管理处研究基金资助项目
‘²q|xsssz
#wuy# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期
1 q7 数据分析 实验波形由计算机直接打印 o
实验数据以 ξ ? σ表示 o采用 τ检验进行统计学
分析 ∀
2 结果
2 q1 采用单个刺激 o保持电位 p ws°∂ o心肌去
极化至 n ws°∂ o刺激频率 s qx‹½o时程 txs°¶o
引出钙电流 o图 t ∀
图 t 正常心肌细胞膜钙电流
细胞由 p ws°∂ 去极化至 n ws°∂ o
刺激频率 s qx‹½o时程 txs°¶
2 q2 观察 v ∗ x°¬±o钙电流无衰减时加药 ∀为
证实在该条件下所引电流为钙电流 o在试验中
加入 …¤¼® {yww xΛ°²¯#pt o结果示电流峰值加
大 o当给 ‘¬©¨ §¬³¬±¨ tsΛ°²¯#pt o则峰值较大幅
度减小 ∀图 u ∀
图 u …¤¼ ®{yww xΛ°²¯#p tk„l和 ±¬©¨ §¬³¬±¨
tsΛ°²¯#p tk…l对钙电流的影响 ≤ q对照
2 q3 在 w 例对照组中 ox °¬±时钙电流减少
ku qu ? s qzl h ous°¬±时减少k| qz ? u qxl h ∀
2 q4 同样条件下 o• ªt tsΛ°²¯#pt和 vsΛ°²¯#
pt未见电流减少k Ё s qsx oν € xl ∀图 v ∀
3 讨论
有作者应用电压钳技术证实 • ªt对心肌细
胞膜钙电流的速度无明显影响≈u  o初步说明
图 v • ªt tsΛ°²¯#p tk„l和
vsΛ°²¯#p tk…l对钙电流峰值的影响
• ªt无钙通道抑制使用 ∀但由于电压钳技术是
应用多细胞标本 o其细胞联结成一个机能合胞
体 o所以在一个细胞内记录到的膜电位 o势必受
到其他细胞电特性的影响 o且在具有复杂解剖
学结构的多细胞标本上进行膜电位固定也较困
难 o存在时间空间钳制较差等问题 o结果难免出
现较大的实验误差 ∀膜片钳技术则在电压钳技
术的基础上 o通过单一心肌细胞制备技术 o得到
细胞表面高度清洁 !活性良好的心肌细胞 o使膜
电位固定在一定水平 o从而观察流过通道的电
流 o使膜离子通道的研究达到细胞分子水
平≈t ov  ∀本实验条件稳定 o通过在电极内加入
≤¶n o以阻断 Ž电流 o保持电压 p ws°∂ 以阻断
‘¤n电流 o×2型钙通道失活≈w ox  ∀应用 2钙通
道激动剂 …¤¼Ž{yww o内向电流峰值增大 o而拮
抗剂 ‘¬©¨ §¬³¬±¨ 使其减小 o证明所记录信号为
2型钙电流≈y oz  ∀
本实验条件下 o钙电流在 x ∗ us°¬±内较为
稳定 o在对照组细胞吸破后 us°¬±内 o减少的钙
电流小于 ts h o因而在此期间加入 °‘≥2• ªt可
观察其对钙通道的阻滞效应 ∀结果提示 o• 对
2钙通道无阻滞作用 ∀有作者证实 • ªt 可抑制
心脏乳头肌收缩力≈u  o可能为抑制胞内钙释放
而发挥作用 o详尽机制尚待进一步研究 ∀
4 参考文献
t ‹¤°¬¯¯ ’ ° o¤µ·¼ „ o‘¨ «¨ µ∞ ·¨¤¯ qŒ°³µ²√ §¨ °¤·¦«p ¦¯¤°³
× ¦¨«±¬´∏¨ ©²µ‹¬ª« • ¶¨²¯∏·¬²± ≤∏µµ¨±·• ¦¨²µ§¬±ª©µ²° ≤¨¯ ¶¯
¤±§ ≤¨¯¯p ©µ¨¨ ¨°¥µ¨±¨ °¤·¦«q°©¯∏ª¨µ„µ¦«ot|{t ov|t }{x
u 熊志刚 o孙家俊 1 三七皂甙 • ªt和 • ªt对心肌动作电位及
#xuy# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期
慢内向电流的影响 1 中国药理学报 ot|{| ots }xus
v …¨ ¤± … ° q≤ ¤¯¶¶¨¶²© ≤¤n n ≤«¤±±¨ ¶¯¬± ∂ µ¨·¨¥µ¨·¨ ≤¨¯ ¶¯q„±±∏
• √¨ ³«¼¶¬¯ot|{| oxt }vyz
w …¨ ¤± … ° q× º² Ž¬±§¶²© ≤¤¯¬∏° ≤«¤±±¨ ¶¯¬± ≤¤±¬±¨ „·µ¬¤¯
≤¨¯ ¶¯q⁄¬©©¨ µ¨±¦¨¶¬± Ž¬±¨ ·¬¦¶o≥¨¯ ¦¨·¬√¬·¼ o¤±§°«¤µ°¤¦²¯²ª¼ q
Š ±¨ °«¼¶¬²¯ ot|{y o{y }t
x ÷∏ ÷ o…¨ ¶·°  qŒ±¦µ¨¤¶¨ ¬± ×2·¼³¨ ≤∏∏µµ¨±·¶¬± „µ·µ¬¤¯  ¼2
²¦¼·¨¶©µ²° „§∏¯·µ¤¼ º¬·« Šµ²·« ‹²µ°²± ≥ ¦¨µ¨·¬±ª ×∏°²µ¶q
°µ²¦‘¤·¯ „¦¤§≥¦¬˜≥„ ot||s o{z }wyxx
y ¬·µ¤ • o ²µ¤§  q× º² ×¼³¨¶²© ≤¤n n ≤«¤±±¨ ¯¬± Š∏¬±¨ ¤
°¬ª ∂ ±¨·µ¬¦∏¯¤µ  ¼²¦¼·¨¶q°µ²¦ ‘¤·¯ „¦¤§ ≥¦¬ ˜≥„ ot|{y o
{v }xvws
z …¨ ¯¯¶…o ¨¯ ¦¨²·≤ ⁄o‹ ¶¨¦«¨ ¯¨ µo ·¨¤¯ q0 • ∏±§²º±0 ²©·«¨
≤¤n n ≤∏µµ¨±·⁄∏µ¬±ª • «²¯ 2¨¦¨¯¯ }·«¨ • ²¯¨²© °«²¶³«²µ¼¯ ¤·¬²±
¤±§Œ±·µ²¦¨¯¯∏¯¤µ≤¤¯¦¬∏° q°©¯∏ª¨µ„µ¦«ot|{{ owtt }vxu
t||{2sz2st收稿
天麻促智冲剂对/肝郁型血瘀0大鼠血液流变学
及脑缺血再灌小鼠学习记忆障碍的影响 3
杜贵友 赵雍 王秀荣 崔海峰 曹春雨 付建华
k中国中医研究院中药研究所 北京 tsszssl
摘要 目的 }观察天麻促智冲剂对/肝郁型血瘀0大鼠血液流变学及脑缺血再灌小鼠学习记忆障碍
的影响 ∀方法 }采用/激怒0加皮下注射肾上腺素及冰浴法 o造成大鼠/肝郁型血瘀0 ~并用反复结扎小鼠
双侧颈动脉再灌法 o造成小鼠学习记忆障碍 o每天给/血瘀0大鼠和学习记忆障碍小鼠灌胃天麻促智冲剂
k分别为 z qz otx qwª#®ªp tlt次 o连续 tw§∀结果 }天麻促智冲剂可明显降低/血瘀0大鼠的血浆粘度 o全血
粘度和还原粘度 o并能改善脑缺血再灌小鼠潜在学习记忆能力和水迷宫记忆获得及再现能力 ∀结论 }研
究表明 o该方剂可明显改善/血瘀0大鼠血液流变学及脑缺血再灌小鼠学习记忆障碍的作用 ∀
关键词 天麻促智冲剂 血液流变学 脑缺血 学习记忆
天麻促智冲剂是由天麻 !钩藤 !首乌藤 !杜
仲 !益母草等组成 ∀对心脑血管及药物所致动
物学习记忆障碍有明显的改善作用≈t ou  o并具
有抗氧化作用≈v  o对血管性肝阳上亢型老年痴
呆症也有一定的治疗作用≈w  o为了证明这种作
用 o观察了该方剂对/肝郁型血瘀0大鼠血液流
变学及脑缺血再灌小鼠学习记忆障碍的影响 ∀
1 材料和方法
1 q1 药品及动物 天麻促智冲剂由我所剂型
室提供 o将药物倒入乳钵内研细 o加蒸馏水配成
ts h的浓度备用 ∀ • ¬¶·¤µ大鼠及昆明种小鼠均
购自北京医科大学动物饲养场 o合格证号为 }医
动字 st2vsxy 及 st2vsw| o体重 }大鼠 t{s ∗
utsªo小鼠 uz ∗ u|ªo均为‘性 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 对/肝郁型血瘀0大鼠血液流变学的影
响≈x ∗ z  选用健康大鼠 ys只 o随机分为 x组 o
每组 tu只 o其中脑复康组为阳性药 o各组灌胃
给药 tw§o每天 t次 ∀于给药第 tv天 o除空白对
照组外 o各组大鼠每 u只为一组 o夹大鼠尾尖刺
激激怒 o每天刺激 w次 o于刺激第 u天下午给各
处理组大鼠皮下注射 t次 s qt h 肾上腺素
s qu °¯ r只 o于注射 v«后将大鼠置冰水中浸泡
x°¬±ot{«后腹主动脉取血测定血液流变学 ∀
采用日产 Ž‹2tus„ 高速自动血球压积求红细
胞压积 o血浆粘度计测定血浆粘度 ∀
1 q2 q2 对脑缺血再灌小鼠学习记忆障碍的影
响≈{ o|  将 zx 只小鼠随机分为 x 组 o每组 tx
只 o分别灌胃 z§后 o给各组腹腔注射 s qt h阿托
品 us°ª#®ªp tx°¬±后 o在 us h 乌拉坦 t qsª#
®ªp t麻醉下 o仰卧固定于手术台上 o颈部正中切
开 o分离左右颈总动脉 o用微型动脉夹将
3 国家新药基金资助课题 ‘²q|y|stsxzt
#yuy# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期