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≈v  肖永庆 o刘静明 o屠呦呦 q冬虫夏草化学成分的研究 ´ q中药通
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≈w  陈晓梅 o杨峻山 o郭顺星 q石斛小菇中的甾醇类化合物 q药学学
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[ Κεψ ωορδσ] Γλιοχλαδιυ µ ~¦¨µ¤°¬§¨ ~¨³¬§¬²¬¼¨ µª²¶·¤
≈责任编辑 徐美珍 
赤芝孢子粉破壁前后多糖释放能力比较研究
鲍幸峰 o方积年
k中国科学院 上海药物研究所 o上海 usssvtl
≈摘要  目的 }探讨一种较准确测定中草药中水溶性多糖的分析方法 ∀方法 }改良苯酚2硫酸法测定多糖释放
能力 ∀结果 }vz ε !沸水浴及水煮条件下 o破壁比未破壁孢子的多糖释放能力分别强 tt{ qw h o{z qx h和 y| qy h ~多
糖含量的测定 ΡΣ∆  t qv h ∀结论 }该法适用于中草药或保健品的多糖含量测定 ∀
≈关键词  赤芝孢子粉 ~多糖 ~破壁 ~改良的苯酚2硫酸法
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukusstlsx2svuy2sv
赤灵芝k简称赤芝l传统的药用部位仅限于其子
实体 ∀近年来 o随着人工栽培和孢子破壁技术的发
展 o使得孢子作为赤芝的又一药用部位逐渐为人们
所认识 o尤其是破壁赤芝孢子的免疫调节抗肿瘤≈t  o
降血糖≈u 及拮抗磷酸肌酸激酶在肌肉中的下降和血
液中的上升 o能减轻动物后肢肌细胞的变性和坏
≈收稿日期  usss2st2ux
死≈v 等重要生理活性作用的发现 o引起人们的广泛
关注 ∀目前 o市场上有许多赤芝孢子类保健食品 o但
发展成药品或进入临床的却未见报道 ∀由于受收集
与破壁难题的制约 o对其化学成分的研究报道较
少≈w ∗ y  ∀我们对其免疫调节及抗肿瘤活性的有效成
分研究表明 o无论体内还是体外试验 o破壁赤芝孢子
的水提粗多糖均有很好的免疫调节作用 ~同时多糖
作为一种非特异性的广谱免疫调节剂是许多中草药
#yuv#
第 uy卷第 x期
usst年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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类保健品的主要有效成分 o产品中水溶性多糖的测
控对保证其质量非常重要 ∀本文用改良的苯酚2硫
酸法比较测定不同温度的水提条件下 o破壁前后赤
芝孢子粉的水溶性多糖释放能力 ~并以此为例 o报道
一种较准确测定中草药中水溶性多糖含量的分析方
法 ∀
1 仪器与材料
破壁与未破壁赤芝孢子粉k上海绿谷集团生产
并提供l o…Œ’2• „⁄ tvvs型高效液相仪 o˜ ·¯µ¤«¼§µ²2
ª¨ ׯ  tsss型高效分子排阻色谱柱k • ¤·¨µ¶出品l o
≥«¬°¤§½∏2|„ 气相色谱仪 ox h ’ ∂ uuxr„ • 2⁄ ≤≥2
≤«µ²°²¶²µ¥ • k{s ∗ tss目l毛细管柱 ozxu≤ 型紫外
可见分光光度计 o纤维素薄层板k  µ¨¦®出品l o葡萄
糖 !半乳糖 !甘露糖 !鼠李糖 !阿拉伯糖 !木糖k均为
ƒ ∏¯®¤出品l o赤芝子实体多糖 °tk葡聚糖 o本实验室
自制l o香菇多糖k葡聚糖 o本实验室自制l o其他试剂
均为国产分析纯 ∀
2 方法与结果
2 q1 多糖提取
vss °ª破壁与未破壁赤芝孢子分别置于 tx °¯
试管中 o加蒸馏水 { ∗ ts °¯ ovz ε 提取 x次 o每次 v
«∀苯酚2硫酸法检测 o合并提取液 o加等体积三氟三
氯乙烷 os ε 搅拌几分钟 o低温离心 o重复 u次 ∀水
层液室温蒸馏水搅拌透析 uw «o非透析液定容于 xs
°¯ 容量瓶中 ∀另取破壁与未破壁赤芝孢子粉分别
用沸水浴及水煮条件下提取多糖 o分别重复 v次 ∀
2 q2 标准多糖的选择
2 q2 q1 水溶性多糖的糖组成分析
取破壁赤芝孢子水煮提取的多糖 v qx °ªou °²¯
#pt三氟醋酸k׃„l于 tts ε 水解 u «o减压除去
× ƒ„ o加几滴蒸馏水 o分成两部分 o一部分以标准单
糖作对照 o进行纤维素薄层色谱 ~另一部分用 ‘¤…‹w
还原 o乙酰化后进行气相色谱分析≈z  ∀结果表明水
溶性多糖的糖组成很单一 o仅含葡萄糖 o不含其他常
见的戊糖和己糖 o紫外检测表明也不含糖醛酸 ∀
2 q2 q2 水溶性粗多糖的分子量分布测定
根据粗多糖的糖组成分析 o选择 ×2⁄¨ ¬·µ¤±系
列分子量为 t ≅ tsv ∗ t ≅ tsy 的标准多糖作对照 o
‹°≥∞≤ 分析待测多糖的分子量分布及平均分子量 ∀
结果表明其主含两个交叉重叠很严重的色谱峰 o分
子量分布从几千到大于 xs万 o根据峰强和保留时间
粗略计算 o其混合多糖的平均分子量约在 t ≅ tsx ∗
t qx ≅ tsx ∀根据待测多糖的糖组成分析及水溶性粗
多糖的 ‹°≥∞≤ 的分子量分布测定 o选择糖组成相同
且接近待测多糖平均分子量 t qt ≅ tsx 的 ×2⁄¨ ¬·µ¤±
葡聚糖作为标准多糖 ∀
2 q3 改良苯酚2硫酸法测定多糖释放能力
精确配制 s ∗ uss Λª# °¯ p t梯度为 vs Λª# °¯ p t
的标准多糖溶液 ∀吸取不同糖浓度的标准溶液各
uss Λ¯ o加 x h苯酚 s qu °¯ o振荡 o加 u °¯ 硫酸 o振荡
并于室温下显色 vs °¬±∀以蒸馏水加显色剂作参
比 o于 w|s ±°处测定吸光度 o绘制标准曲线 ∀待测
多糖溶液k需要时可稀释l于同样条件下测定其吸光
度 o标准曲线求多糖释放能力 ∀破壁前后赤芝孢子
在水提k包括 vz ε o沸水浴和水煮l条件下的多糖释
放能力见表 t ∀赤芝孢子在不同条件下的水提多糖
均能很好溶于室温水中k定容完即可进行测定l o测
定结果 o破壁孢子的多糖释放能力远远大于同质量
的未破壁的孢子 o尤其是 vz ε 条件下更相差悬殊 ∀
表 t 赤芝孢子粉破壁前后的多糖释放能力比较 h
条件 未破壁k„l 破壁k…l k…p „lr„
vz ε s qv{ s q{v tt{ qw
沸水浴 s q{s t qxs {z qx
水煮 s q|u t qxy y| qy
注 }≠ „ o…为多糖释放量占样品总量的百分比 ok… p „lr„ 为破
壁与未破壁的多糖释放能力差异  ν € v
2 q4 改良苯酚2硫酸法的准确度 !重现性试验
准确称取香菇多糖 o赤芝子实体多糖 °t 和
⁄¨ ¬·µ¤± × xss各 tx qs °ªo分别定容于 tss °¯ 容量
瓶中 ot qt ≅ tsx 的 ×2§¨ ¬·µ¤±葡聚糖作标准糖 o重复
v次测定 o其回收范围为 |y qw h ∗ tss qu h ov次测
定的平均值与实际值的相对误差 [ t qx h ∀优于以
单糖作标准所得的准确度k [ w h l≈{  ∀
赤芝孢子破壁前后的样品测定时均分别重复测
定 v次 oΡΣ∆  v qx h o平均为 t qv h ∀
室温显色在较长时间内保持稳定 o糖含量在 u
∗ wx Λªo吸收度与浓度成良好线性关系 o标准曲线
Ψ € p tt .vv| n y .|{ ≅ tsu Ξ , ρ€ s q|||u ∀
3 讨论
3 q1 目前市场上赤芝孢子类保健品几乎都采用直
接口服形式 ∀多糖的释放能力直接影响免疫调节作
用 o从这点而言 o作为免疫调节抗肿瘤辅助品的赤芝
孢子应当先进行破壁 ∀
3 q2 文献报道采用薄层色谱法分离多糖与寡糖和
单糖≈|  o但我们认为此方法不可取 ∀一方面 o切割随
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第 uy卷第 x期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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意性太大 o范围难以掌握 o也无法除去大分子的蛋白
质和蛋白多糖 ~另一方面 o某些多糖k多为酸性多糖
及长链多糖l与载体的吸附力较强而不易洗脱下来 o
影响分析结果 ∀
3 q3 改良的苯酚2硫酸法与文献报道相比 o使用 xs
ª#pt代替 {ss ª#p t的苯酚 o使样液与苯酚易充分
混合 o提高显色反应的稳定性 ∀本法采用室温放置
vs °¬±后 o快速加入硫酸 o结果令人满意 ∀本方法适
合于企业生产过程中以多糖为重要质量标准的产品
质控及实验室中准确分析中草药或保健品中的多糖
含量 ∀
≈参考文献 
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临床 ot||v o|kwl }t q
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分离 q中国中药杂志 ousss ouxkxl }u{{ q
≈z  董 群 o丁思伟 o方积年 q ≥·µ∏¦·∏µ¤¯ ƒ ¤¨·∏µ¨¶²©¤ ‹ ·¨¨µ²¬¼¯ ¤±
©µ²° Σοπηορα συβπροστρατα • ²²·¶q °«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼ ot||| oxs }
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≈{  董 群 o郑丽伊 o方积年 q改良的苯酚2硫酸法测定多糖和寡糖
含量的研究 q中国药学杂志 ot||y ovtk|l }xxs q
≈|  何倩琼 o李 英 q保健食品中水溶性多糖的测定 q中国综合医
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Στυδιεσ ον ∆ιφφερενχε βετωεεν Σποροδερµ2βροκεν ανδ
Νονβροκεν Σπορεσ οφ Γανοδερµ α λυχιδυµ (Λεψσσ. εξ Φρ .) Καρστ .
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