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草乌抗肝癌靶向制剂
有效部位的浸出 !纯化与确证
黄园 侯世祥 谢瑞犀 3
k华西医科大学药学院 成都 ytsswtl
庄镇华 王舫彤 钟宁
k国家医药管理局四川抗菌素工业研究所 成都 ytssxtl
摘要 对草乌抗肝癌有效部位进行浸出 !纯化 !药理实验及化学分析 ∀结果表明 o生草乌确具有对
小鼠肝癌明显抑制作用的有效部位 o其抗癌活性可能主要源于毒性成分酯型生物碱 ∀肝器官靶向给药
系统将是其抗癌制剂首选的给药系统 o抗癌有效部位 ≠v¤适宜于靶向微球的制备 ∀
关键词 草乌 抗肝癌有效部位 浸出 纯化 确证
草乌为毛茛科植物北乌头 Αχονιτυ µ
κυσνεζοφφιι ¬¨¦«¥q的干燥块根≈t o中医药典籍
中有关于其抗癌作用的记载≈u ov o但因其为大
毒之品 o对心肌及神经系统尤甚 o影响并限制了
抗癌作用的研究和应用 ∀近 ts年来 o国外未见
有这方面的报道 o国内文献≈v ∗ x 亦少 ∀
本课题拟以草乌为样本 o采用肝靶向给药
系统制备技术 o将草乌抗癌有效部位定向输送
至肝脏 o提高靶器官药物浓度 o避免药物与其他
正常组织细胞的作用 o从而使大毒的乌头安全
高效地用于癌症的防治 ∀
中药有别于西药之处 o在于复杂成分的综
合疗效 ∀因此 o从中药材中浸出 !纯化有效部位
及对有效部位靶向适应性的质量评价 o就成为
中药靶向给药系统研究必须首先解决的关键问
题 ∀本文初报草乌抗癌有效部位的浸出 !纯化
方法 o有效部位与毒性及抗癌活性间的关系 o为
中药靶向系统研究奠定基础 ∀
1 实验材料
试剂与药物 试剂皆为分析纯 ~有机溶剂
为化学纯或药用规格 ∀
乌头碱k∞1 ∞ l !次乌头碱 !新乌头碱
对照品k中国药品生物制品检定所l ∀环磷酰胺
k上海第十二制药厂 o批号 |wtsttl ∀
生草乌药材经本院生药教研室王曙讲师鉴
定为北乌头的块根 ∀
强酸性苯乙烯阳离子交换树脂k交联度 t
≅ vl购自天津南开大学新技术实业公司 ∀
仪器 ∂2uxs 型紫外分光光度计k日本
岛津l ∀
实验动物与瘤株 系小鼠 o小鼠肝癌
uuk四川抗菌素工业研究所药理室l ∀
2 方法与结果
211 有效部位的浸出与纯化≈y oz
取生草乌药材粉碎成粗粉 o按图 t工艺流
程浸出并分离纯化 o共得 ts个不同浸出纯化供
试品 o结果见图 t ∀
3 九五届本科生 k成都市第一人民医院 成都
ytssssl
#zyy# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 tt期
图 t 不同浸出纯化工艺流程图
212 有效部位的药理实验筛选
取上述供试品干浸膏用生理盐水溶解 o配
成适宜浓度的供试液 o按卫生部药政局对新药
临床前研究指导原则5抗肿瘤药药效学技术要
求6的规定 o取体重为kus ? ulª的 小鼠 o
雌雄各半 o腋下接种 tΒv的小鼠肝癌 uu细胞
悬液 ouw«后称重分组 o分别腹腔给药 o同时 o以
环磷酰胺为阳性对照 o生理盐水为阴性对照 o每
日 t次 o连续 ts§o于停药次日处死小鼠 o称体
重 o解剖剥离瘤块 o称瘤重 o计算抑瘤率 o结果见
表 t ∗ v ∀
213 有效部位的化学分析
21311 薄层色谱分析
点样液的配制 精密称取上述供试品适
量 o配成相当于 t°ª药材r °¯ 的点样液作为供
试液 ∀同法配制浓度为 t°ªr°¯ 的乌头碱 o次
乌头碱 o新乌头碱对照液 ∀
#{yy# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 tt期
表 t 不同供试品对荷瘤小鼠瘤体生长的影响
组别
剂量tl
°ª药物r®ª
动物数
ν
死亡数
ν
瘤体重
ξ ? σ ª
抑制率
h
Π
≠w xs ts s u1|s ? s1wy s s1sx
tss ts s u1xs ? s1x{ s s1sx
≠t xs ts s u1ws ? s1v| w1s s1sx
tss ts t u1uu ? s1ww tt1u s1sx
≠v¥ uux ts s u1vv ? s1zx s1{ s1sx
wxs ts s u1xx ? s1xs s s1sx
≠v¦ xs ts s u1ww ? s1y{ s s1sx
tss ts s u1{s ? s1z| s s1sx
÷u xs ts s u1sy ? s1wy tz1y s1sx
tss ts s t1xx ? s1ys v{1s s1st
环磷酰胺组 us ts s t1tx ? s1xv xw1s s1st
生理盐水组 us s u1xs ? s1y|
uss ts s t1yx ? s1wz ts1{ s1sx
yss ts t t1u{ ? s1ww vs1{ s1sx
环磷酰胺组 us ts s s1ys ? s1ut yz1y s1sx
生理盐水组 ut s t1{x ? s1yz
ux ts s u1wx ? t1st ux1{ s1st
xs ts s u1tx ? s1|w vw1{ s1st
tss ts s t1{x ? s1xv wv1| s1st
环磷酰胺组 us ts s t1vx ? s1x{ x|1t s1st
生理盐水组 tx s v1vs ? s1zv
≠v¤ ux ts s t1vv ? s1zt tt1t s1sx
xs ts s t1ss ? s1vv vv1v s1sx
÷t xs ts u s1{t ? s1uy wx1{ s1st
tss ts v s1vy ? s1v{ zy1u s1st
环磷酰胺组 us ts s s1ys ? s1v| ys1s s1st
生理盐水组 tx s t1xs ? s1ys
乌头碱标准品 s1sx ts s t1xw ? s1vs vs1s s1st
s1tsul ts v t1xy ? s1zs u|1t s1sx
环磷酰胺组 us ts s s1zz ? s1vs yx1s s1st
生理盐水组 tx s u1us ? s1ws
注 }tl供试品为 °ª药材r®ªo对照品为 °ª药物r®ªk表 u ov同l ~ul给药 v§即死 v只小鼠 o故由第 w§停药 ots§后剖取肿瘤称定
色谱条件 以含 s1x h ≤ ≤2¤的硅胶
为吸附剂 ~氨水饱和的石油醚2环己烷2乙酸乙
酯2乙醇ktΒwΒu1wΒtl为展开剂 o改良碘化铋钾
为显色剂 ∀
取供试液与对照液点于同一薄层板上 o展
开 o显色 o结果见图 u ∀
21312 总生物碱含量测定
参照文献≈{ o用离子对萃取2分光光度法测
定供试品中总生物碱含量 o结果见表 w ∀
21313 酯型生物碱含量测定
参照文献≈t o测定供试品中酯型生物碱的
含量 o结果见表 w ∀
图 u 草乌供试品 ×≤ 图
t1 u1 ÷¯ v1 ÷v¤ w q ≠v¥ x q ≠v¦
y otu q对照品 }¤1 次乌头碱 ¥1 乌头碱 ¦1 新乌头碱
z q÷¯ { q ≠u | q ≠t ts q÷u tt1
#|yy# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 tt期
表 u 供试品 对荷瘤小鼠瘤体生长影响
实验次数
组别
剂量
°ª药物r®ª
动物数
死亡数
瘤体重
ξ ? σ ª
抑制率
h Π
第一次 kxs ≅ tsl¬³ ts s u1tx ? s1|w vw1{ s1st
ktss ≅ tsl¬³ ts s t1{x ? s1xv wv1| s1st
≤ × ÷ kus ≅ tsl¬³ ts s t1vx ? s1x{ x|1t s1st
kux ≅ tsl¬³ ts s u1wx ? t1st ux1{ s1st
生理盐水组 tx s v1vs ? s1zv
第二次 kxs ≅ tsl¬³ ts s s1zx ? s1vx xs1s s1st
ktss ≅ tsl¬³ ts u s1yv ? s1uv x{1v s1st
≤ × ÷ kus ≅ tsl¬³ ts s s1ys ? s1v| ys1s s1sx
生理盐水组 tx s t1xs ? s1ys
第三次 kxs ≅ tsl¬³ ts s s1ys ? s1yt vy1s s1st
ktss ≅ tsl¬³ ts t s1|w ? s1vs yu1w s1st
≤ × ÷ kus ≅ tsl¬³ ts s t1tx ? s1xv xw1s s1st
生理盐水组 us t u1xs ? s1y|
表 v 供试品 ≠v¤对荷瘤小鼠瘤体生长的影响
实验次数
组别
剂量
°ª药物r®ª
动物数
瘤体重
ξ ? σ
抑制率
%
Π
第一次 ƒ kux ≅ tsl¬³ ts t1vv ? s1zt tt1t s1sx
kxs ≅ tsl¬³ ts t1ss ? s1vv vv1v s1sx
≤ × ÷ kus ≅ tsl¬³ ts s1ys ? s1v| ys1s s1sx
生理盐水组 tx t1xs ? s1ys
第二次 ƒ kxs ≅ tsl¬³ ts t1{s ? s1{y ts1s s1sx
ktss ≅ tsl¬³ ts t1ys ? s1wy us1s s1sx
≤ × ÷ kus ≅ tsl¬³ ts s1{x ? s1uw xz1x s1sx
生理盐水组 ty u1ss ? s1x{
第三次 ƒ kux ≅ tsl¬³ ts t1ux ? s1yw vu1w s1sx
kxs ≅ tsl¬³ ts t1tx ? s1xv vz1{ s1sx
≤ × ÷ kus ≅ tsl¬³ ts s1ys ? s1ut yz1y s1sx
生理盐水组 ut t1{x ? s1yz
注 }死亡数均为 s
表 w 浸出物收率及总生物碱 !酯型生物碱含量
评价
指标
ξ ? σ
≠t ≠u ≠v¤ ≠v¥ ≠v¦ ÷t ÷u
收率tl t|1u{ ? t1u vw1xs ? u1u t{1sy ? t1s tt1uv ? s1{ |1yz ? s1z ts1vx ? t1t t1ss ? s1t s1us ? s1st u1ss ? s1u
总碱ul ty1{s ? s1z tw1{{ ? s1y tw1{x ? s1y {1tx ? s1w ts1ss ? s1x t1ts ? s1t x1ss ? s1v ty1ys ? s1zt tt1xs ? s1x
酯型生物碱vl u1|{ ? s1u t1uu ? s1t u1su ? s1w u1ss ? s1y u1xx ? s1z s1|| ? s1t t1zy ? s1t u1xs ? s1w u1sw ? s1u
注 }≠ ν v tlª固体物rtssª药材 ul °ª乌头碱rª药材 vl °ª乌头碱rª药材
3 讨论与小结
311 实验结果表明 o生草乌确含有对小鼠肝癌
有明显抑制作用的有效部位 o但能否获得该抗
癌活性部位 o很大程度上决定于有效部位的浸
出 !纯化方法 o方法不当可致有效部位活性丧
失 ∀研究发现 o水煎煮k
l可使抗癌活性丧失
kΠ s1sxl o而酸水冷渗漉法kl则会获得显著
抑瘤结果k Π s1stl ~在纯化方法中 o醇沉与上
树脂的乙醚洗脱物 ≠v¤可基本保留抗癌活性
部位k与 相比 oΠ s1sxl o其他方法所得样品
#szy# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 tt期
均与阴性对照无显著差异 ∀样品 ≠w 为生物
碱反应呈阴性的水液 o无抗癌作用的结果表明 o
草乌抗癌作用与其所含生物碱有关 ∀对草乌的
化学分析表明 o具抑瘤活性的供试样品 o
÷t o÷u o ≠v¤o其 ×≤ 图谱基本接近 o均与乌
头碱 !新乌头碱对照品有相同的清晰色斑 o且酯
型生物碱含量均在 u°ªr°¯ 以上 ~而无明显抑
瘤作用者 o色斑个数明显减少 ∀
在研究中还发现 o草乌抗肝癌有效部位在
水溶液中不稳定 o长期放置后 o其酯型生物碱含
量下降 o疗效亦随之降低 ∀从总体趋势看 o其抗
肝癌活性可能源于易水解的酯型生物碱 ∀
312 草乌抗癌有效部位与毒性和剂量间的关
系
从具有抗癌活性的样品 o÷t可知 o随剂
量增加kxs°ª药材r®ªψ tss°ª药材r®ªl o其
抑瘤率亦增加kxs1s h ψ x{1v h o÷uwx1{ h
ψzy1u h o但动物死亡数也随之增加ks ψ u o
÷tu ψvl ∀由此表明 o草乌的毒性成分可能即
是其抗癌活性成分 ∀
乌头碱对照品的抑瘤实验亦表明 o给药剂
量为 s1sx°ªr®ª时 o抑瘤率为 vs h ~当剂量增
至 s1t°ªr®ªo仅给药 v 次 o动物死亡率即达
vs h o停药 z 天后 o瘤重仍较对照组减少
u|1t h k Π s1sxl o再次说明 o草乌的毒性成分
可能即是其抗癌有效成分 ∀
综上所述 o草乌的抗癌活性可能源于其主
要毒性成分酯型生物碱 ∀此研究结果国外未见
有报道 o而国内有关通过热压处理使草乌酯型
生物碱水解以得到毒性降低且具抗肝癌作用的
样品的报道≈v ∗ x 尚待商榷 ∀以上研究结果亦
表明 o欲充分发挥草乌抗癌作用 o肝器官靶向给
药系统将是其抗癌制剂首选的给药系统 ∀在乌
头碱含量相当的情况下 o有效部位 ≠v¤抑瘤率
及毒性均高于其主要单体有效成分乌头碱 o且
收率仅 t h o适宜于靶向微球的制备 o故将中药
抗癌有效部位制成靶向微球 o具有一定的必要
性及实用性 ∀
4 参考文献
t 中国药典 1 一部 1t||x }utv
u 杨仓良等 1 毒剧中药古今用 1 北京 }中国医药科技出版
社 ot||v }tut
v 黄永融 1 福建中医药 ot||t ~uuktl }xw
w 孙学朴 1 新药与临床 ot|{z ~ykul }zz
x 汤铭新等 1 北京中医杂志 ot|{y ~kvl }uz
y 方起程等 1 药学学报 ot|{y ~tvk{l }xzz
z 顾学裘 1 药物制剂注解 1 北京 }人民卫生出版社 ot|z| }tv
{ 杨华元等 1 华西药学杂志 ot||s ~xkwl }uty
t||y ) tu ) ty收稿
高效液相色谱法测定加味逍遥丸中
栀子甙和芍药甙
狄留庆 郭戎 谢辉 范碧亭
k南京中医药大学 南京 utssu|l
摘要 采用高效液相色谱法 o选用 ≤t{柱和乙腈2s1t h磷酸ktvΒ{zl为流动相分离测定加味逍遥丸
中栀子甙和芍药甙 ∀方法简便 !快速 !准确 o测定组分具有良好的线性关系和分离度 o栀子甙的平均回收
率为 tst1{s h oΡΣ∆u1v{ h o芍药甙的平均回收率为 |{1zy h oΡΣ∆t1|y % ∀
关键词 栀子甙 芍药甙 °≤
#tzy# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 tt期