全 文 ：黄芪皂苷甲对组胺引起的大鼠脑软膜
微血管内皮增加的影响
吴大正 o胡之璧
k上海中医药大学 中药研究所 o上海 usssvul
≈摘要 目的 }观察黄芪皂苷甲对组胺引起的脑软膜微血管通透性增加的抑制作用 ∀方法 }脑软膜微血管通
透性用跨脑软膜微血管内皮的电阻表示 o跨脑软膜微血管内皮的电阻通过将微电极插入微血管腔内记录 o并用电
缆公式计算获得 ∀结果 }脑软膜微血管经灌流人工脑脊液 o测得的跨内皮电阻大约为 u xss 8 #¦°u o说明微血管内
皮是具有较低通透性的致密屏障 o在人工脑脊液中加入 ts p w °²¯#p t组胺引起跨内皮电阻快速的和可逆性的下
降 ∀在配对实验中 ots p w °²¯#p t组胺引起跨内皮电阻的下降能够被在人工脑脊液中加入 s q{ ≅ ts p w °²¯#p t黄芪
皂苷甲所抑制 ∀结论 }实验结果表明组胺能够引起脑微血管通透性增加 o而黄芪皂苷甲能够抑制组胺引起脑微血
管通透性增加 ∀有关黄芪皂苷甲引起通透性反应的细胞机制需进一步研究 ∀
≈关键词 黄芪皂甙甲 ~组胺 ~微血管通透性
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstltu2s{xs2sw
黄芪是中医临床治疗疾病中最常用的补气要
药 o具有补气固表 !利尿 !托毒排脓生肌之功 ∀从黄
芪中分离提纯的黄芪皂苷甲k¶¤·µ¤ª¤¯²¶¬§¨ ·l是一
种三萜类皂甙 o分子量为 z{w o具有抗应激 !抗生物
氧化 !升高白细胞 !抗肝损伤 !提高机体免疫功能 !抗
缺血缺氧≈t ou 等作用 ~还证实具有降压和抗炎的作
用≈v ∀为了进一步探索黄芪皂苷甲的抗炎作用 o本
研究应用根据 ²§ª®¬±和 ¤·½的渗漏性电缆学说
所建立的电生理技术 o测定脑软膜微血管内皮的跨
膜电阻 o评价黄芪皂苷甲是否对炎症介质组胺k¬¶2
·¤°¬±¨ l引起的大鼠脑毛细血管通透性增高具有调
制作用 ∀
1 材料与方法
1 q1 基本原理
脑的毛细血管如同神经纤维那样 o呈圆柱型结
构 ∀由此 o可以把毛细血管视为一根特殊的电缆 ∀
根据 ²§ª®¬±和 ¤·½的渗漏性电缆学说 o将电流注
入具有较高电阻的毛细血管膜内 o可以记录到由电
流注入引起的电位变化k∃ ςl o以此推导出毛细血管
的膜电阻 ∀
在理想的条件k等张性 !导电良好的外部介质l
≈收稿日期 usss2sz2t{
≈基金项目 国家中医药管理局 / 九五 0 攀登预选项目
k|{°⁄s|l
下 o通过向毛细血管膜内注入直流电k⁄≤l o在
一段 kt sss Λ°左右l 毛细血管的不同距离点记录
的电位 k ςk¬ll 可用下式表示 }
ςk¬l ςksl ¬¨³# k p ¬ rΚl tl
式中 ςksl指在电流注入毛细血管起始点所记录的
膜电位 o¬指在毛细血管不同点注入电流的位置 oΚ
指长度常数 o亦称空间常数 ∀Κ µ°rµ¬o这里µ°是
每平方厘米毛细血管的膜电阻 oµ¬指每平方厘米毛细
血管的内阻 ∀µ¬ Θ¬rΠΑu oΘ¬是毛细血管中的血液电
阻率 o¤是直径 ∀由于毛细血管膜电阻与 u ΠΑµ°呈正
比 o所以其膜电阻k Ρ °l o可用下式表示 }
Ρ ° Χ¬# Κu# u ΠΑ ul
根据公式 ul o脑毛细血管膜电阻能用以下 v个
参数测定求得 }≠长度常数kΚl o 血管的直径k¤l o
≈ 血液电阻率kΘ¬l ∀
1 q2 材料
试剂 !药品 }有芯微玻管k上海生理研究所l !琼
脂k上海华美试剂公司l ! ∞°∞≥k≥¬ª°¤l !组胺k≥¬ª2
°¤l !戊巴比妥钠k上海化学试剂采购供应站l !无机
离子均为分析纯k上海化学试剂采购供应站l !实验
中所用的黄芪皂苷甲由我所中药化学研究室提供 ∀
仪器 }≥2u 型立体定位仪k¤µ¬¶«¬ª¨ l o≥ 2ut
型微操纵器k¤µ¬¶«¬ª¨ l !≥∞2vvst 型电子刺激器
k¬«²± ²«§¨ ±l ! ƒ⁄2uuv型双路辨差电位计k • °2
#sx{#
第 uy卷第 tu期
usst年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qtu
⁄¨ ¦qousst
±¶·µ∏° ±¨·l !vsyy型笔记录仪k≠²®²ª¤º¤ ²®∏¶«¬±
∞¯ ¦¨·µ¬¦l ! °2{vt
型微电极拉制仪k上海生理研究
所l !÷ ×2t型实体显微镜k南京江南光学仪器厂l !
÷wvu{型双踪示波器k上海新建仪器厂l ∀
1 q3 动物
幼年k体重约 xs ∗ ys ªl的雄性 • ¬¶·¤µ种大鼠 o
经腹腔注射 wx °ª#®ªp t戊巴比妥钠麻醉 o将动物头
部固定在立体定位仪k≥2u型l上 o通过用手术刀片
将头部颅顶骨刮薄 o并将一小片ku ∗ x °°ul顶骨轻
轻剔除 o仔细地切开硬脑膜和蛛网膜 o暴露大脑表面
软膜 ∀此时将一个自制的有机玻璃环或塑料环k高
s qx ¦° !直径 t ¦°l用粘合剂固定在颅顶骨上 o作为
人工脑脊液的灌流槽 ∀在整个实验过程中 o向灌流
槽持续灌流用去离子水配制成的人工脑脊液k°°²¯
#ptl }¤≤¯ tv{ o¤≤ v w qu o≤¯ v o ª≥w t qu o
≤¤≤ u¯ t quy o∞°∞≥ ts o³ z qw o渗透压 u{s °¶° ∀
整个灌流系统的温度控制在 vx ε 左右 ∀所应用的
药物溶于人工脑脊液中 o灌流速度控制在 u ∗ v °¯ #
°¬±p t ∀
1 q4 跨膜电阻的测定≈w ox
当动物头部开窗后 o进行人工脑脊液灌流过程
中 o在实体显微镜下 o寻找待测的毛细血管 ∀大脑表
面的毛细血管分成静脉和动脉 o静脉的标志为暗红 o
血流方向从脑的内侧向外 o并附有许多分叉 ∀动脉
的标志为鲜红 !血流的走向从脑的外面向内 o无分
叉 ∀在测量过程中 o我们选择直径 ux ∗ xs Λ°的动
脉微血管 ∀当选择好待测血管后 o用冷光源光束作
为光源 o直接照射在标本上 ∀将两支内充 u °²¯#pt
≤¯溶液的玻璃微电极k尖端约为 t Λ° o阻抗 ts ∗
us °8l固定在 u台 ≥ 2ut型微操纵器上 o通过三维
空间调节插入灌流槽 o两支内含 u °²¯ #pt ≤¯的
u h 琼脂盐桥固定在普通微操纵器上 o通过三维空
间调节同样插入灌流槽作为参比电极k接地电极l ∀
这样上述四支电极形成两个回路 o一个是用于电流
注入的回路 o另一个是用于记录膜电位的回路 ∀在
实体显微镜的监控下 o将两支玻璃微电极k一支注射
电流的电流电极 o另一支记录膜电位的电位电极l插
入待测的毛细血管 ∀通过电流电极向微血管内注入
一个恒定的电流脉冲k时程 uss °¶o频率 u ½oxs ∗
tss ±l o通过电位电极记录注入电流后的电位变化
k∃ ςl ∀在同一条微血管 o一般选择 w ∗ x个不同的
距离点 o刺入电极记录电位的变化 o记录完毕后 o以
电流注入的距离为 ÷ 轴 o以记录的电位变化的对数
值为 ≠ 轴 o作直线回归k Ψ ¤Ξ n ¥l o得到的截距
k¥l就是 ςksl ∀以 ςksl的电位值为 tss h o下推 Ψ
值至 ςksl的 vz h o将此值代入直线回归公式 o计算
出 Ξ值 o此值即为 Κ∀
通过以上实验求得Κo已知大鼠脑毛细血管中血
液电阻率 Θ¬为 |s 8 o毛细血管的直径k¤l可利用实
体显微镜的目镜方格图k每格 vx Λ° !放大倍数 ≅
wsl进行测量 o那么 °就可以根据公式 ul Ρ ° u Θ¬
ΚurΑ求出 ∀
在整个实验过程中 o由于 ∂ ksl值是不变的 o所以
任何电位幅度的变化都直接与 Κ相关 o而 Κ又与 °
直接相关 o这样在实验过程中 o任何影响电位的因
素 o都直接与 ° 相关 ∀因此在实验过程中可连续
测定药物和各种试剂对毛细血管膜电阻影响的研
究 ∀
1 q5 评价
内皮细胞膜电阻反映的是内皮对离子扩散的总
阻抗 ∀膜电导是电阻的倒数 ∀离子通透性 k°l 与
电导 kl 的关系可用下式表示 }
× r ƒu 2 u# ≤# ° vl
式中 是离子价 o≤是离子浓度 oƒ 是法拉第常数 o
是气体常数 o× 是绝对温度 ∀从公式 vl 可以看出
毛细血管膜的通透性直接与电导呈正比 o电导的变
化反映了离子通透性的变化 ∀因此应用该项技术测
定脑毛细血管的膜电阻 o能直接反映脑毛细血管即
血脑屏障的离子通透性 ∀
2 结果
2 q1 组胺对大鼠脑表面跨毛细血管电阻的影
通过对正常大鼠的 xy条毛细血管灌流人工脑
脊液k≤≥ƒl o进行跨毛细血管电阻的在位k¬± ¶¬·∏l测
定 o表明在脑表面动脉微血管的跨毛细血管电阻最
小值为 t tuv qz| 8 # ¦°u o最大值为 w xv| q{s 8 #
¦°u o平均为kuxuu q|y ? {{u q|vl 8#¦°u ∀在应用含
tsp w °²¯#pt组胺的 ≤≥ƒ 对脑微血管灌流的 uz个
配对实验中 o观察到在应用含 tsp w °²¯#pt组胺前 o
对照的电阻值为kuwus qux ? zxs qyxl 8#¦°u o当在灌
流液中加入组胺后 o电阻值在几秒钟内迅速地下降
到kxux quz ? t|u qsyl 8#¦°u o为对照值的 ut qz h ∀
2 q2 黄芪皂苷甲对组胺引起的大鼠脑表面跨毛细
血管电阻下降的抑制作用
在用黄芪皂苷甲的 y个动物的脑表面微血管灌
#tx{#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qtu
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流 ≤≥ƒ所记录到的跨毛细血管电阻的对照值为ku
uwv qtz ? {yw qztl 8 #¦°u o当在灌流液中加入 tsp w
°²¯#pt组胺后 o电阻值迅速地下降到kxyv qwt ?
t|{ qxul 8#¦°u ∀待电阻值完全恢复后 o灌流 s q{ ≅
tsp w °²¯#p t黄芪皂苷甲 o黄芪皂苷甲对电阻值无
明显的影响 o持续灌流 us °¬±后加入 tsp w °²¯#pt
组胺 o电阻值从原来的对照值下降到k|uy qxt ? t{v q
tyl 8#¦°u o其下降程度与单纯灌流组胺比较 o明显
改善k Π s qstl ∀当电阻值完全恢复后 o再一次灌
流 tsp w °²¯#p t组胺 o作为后对照 o其数值为kwst q
|y ? tzy qyyl 8#¦°u ∀上述结果表明黄芪皂苷甲对
由炎症介质组胺引起的大鼠脑表面跨毛细血管电阻
下降具有一定程度的抑制作用k表 tl ∀
表 t 黄芪皂苷甲对组胺引起的大鼠脑表面
跨毛细血管电阻下降的抑制作用
灌流药物 药物剂量r°²¯#p t 电阻值r8# ¦°u
脑脊液 uuwv qtz ? {yw qzttl
组胺 ts p w xyv qwt ? t|{ qxu
黄芪皂苷甲 s q{ ≅ ts p w |uy qxt ? t{v qtytl
组胺k后对照l ts p w wst q|y ? tzy qyy
注 }≠ ξ ? σ 与组胺比较 t) Π s .st
3 讨论
在脑血管内皮细胞膜上介导的炎症介质受体有
组胺 !缓激肽 !x2羟色胺等 ∀当这些受体被激活后 o
引起内皮细胞的收缩 o导致细胞旁路的开放或跨细
胞穿透的膜孔径增宽 o随之使血管内皮通透性增加 ∀
其通透性增加机制涉及到细胞外 ≈≤¤u n 的内流和
细胞内 ≈≤¤u n 的释放 ~信号转导系统的激活 o包括
蛋白和磷脂酶 ≤k°≤l信号 !蛋白激酶k°≤l和酪
氨酸激酶k× l的激活 !以及肌球蛋白轻链k ≤l的
磷酸化和去磷酸化等≈y ∀近年来 o ≤ 的磷酸化和
去磷酸化的研究倍受重视 ∀细胞外≈≤¤u n 的内流
和细胞内 ≈≤¤u n 的释放以及 ≤ 的去磷酸化能
够诱导肌动2肌球蛋白间相互作用 o中心张力增加 o
引起细胞骨架的变化和细胞间裂隙形成 ∀应用
≈≤¤u n 内流阻断剂和外源性 ¦ °能够抑制炎症
介质所致的内皮通透性增加≈z o{ ∀
本实验采用测定脑微血管内皮跨膜电阻的技
术 o应用电缆公式将实验中实测的电压值精确地转
换成跨膜电阻 o以此定量地反映脑毛细血管通透性 ∀
正常大鼠的脑表面微血管的电阻超过 t sss 8#¦°u o
是一种紧密连接的屏障 o在生理情况下对离子的通
透性是很低的 ∀当脑表面微血管经活性介质组胺刺
激后 o跨毛细血管电阻急聚下降 o说明组胺对血2脑
屏障的开放具有很强的调制作用 ∀应用黄芪皂苷甲
能够减轻因组胺引起的大鼠脑表面跨毛细血管电阻
下降 o说明黄芪皂苷甲对组胺造成的脑毛细血管通
透性增加具有改善作用 ∀组胺是为数不多的能引起
血2脑屏障开放的中枢神经系统神经递质之一 o目前
在软膜血管和培养的内皮证明组胺引起的脑血管通
透性的增加是受 u受体和细胞内 ≤¤u n的上升所调
节 o而其降低受 t受体与¦ °之间而调制 ∀根据
现有的知识 o降低脑血管通透性的药物能够促进炎
症 !脑水肿和脑缺血症状的改善 ∀本实验结果表明
黄芪皂苷甲具有抑制组胺引起脑血管通透性增加的
效应 o这一作用很可能对改善炎症 !脑水肿和脑缺血
等症状具有很重要的意义 o进一步的工作将在病理
模型上进行验证 ∀
≈参考文献
≈t 张银娣 o尤丽芬 o徐勤娥 o等 q黄芪甙升高白细胞及抗应激作
用 q南京医学院学报 ot||u otu kvl }uww q
≈u 尤丽芬 o陈仲英 q黄芪的免疫及抗病毒作用机理 q江苏医药 o
t||u ot{ ktl }xu q
≈v 张银娣 o王幼林 o沈建平 o等 q黄芪皂甙甲的抗炎和降压作用 q
药学学报 ot|{w ot| kxl }vvv{ q
≈w ¥¥²··q±©¯¤°°¤·²µ¼ §¨¬¤·²µ¶¤±§ ²§∏¯¤·¬²± ²©
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Εφφεχτ οφ Σατραγαλοσιδε · ον τηε Ινχρεασε οφ Μιχροϖασχυλαρ
ΠερµεαβιλιτψΙνδυχεδ βψ Ηισταµινειν Πιαλ Μιχροϖεσσελσ οφ Ρατ
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k±¶·¬·∏·¨ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤ §¨¬¦¤o≥«¤±ª«¤¬±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ×µ¤§¬·¬²±¤¯
≤«¬±¨ ¶¨ §¨¬¦¬±¨ o≥«¤±ª«¤¬ usssvu o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨ ¦·²©¶¤·µ¤ª¤¯²¶¬§¨ · ²± ·«¨ °¬¦µ²√¤¶¦∏¯¤µ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ ¬±§∏¦¨§
¥¼ «¬¶·¤°¬±¨ ¬± ³¬¤¯ °¬¦µ²√ ¶¨¶¨ ¶¯q Μετηοδ : ׫¨ °¬¦µ²√¤¶¦∏¯¤µ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ º¤¶ ¬¨³µ¨¶¶¨§ ¥¼ ¦«¤±ª¨¶¬± ·«¨
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√¤¶¦∏¯¤µ¯ ∏° ±¨ ¤±§¥¤¶¨§²± ¦¤¥¯¨¤±¤¯¼¶¬¶²©√ ¶¨¶¨ ¶¯¬± µ¤·qΡεσυλτ : ׫¨ ·µ¤±¶¨±§²·«¨ ¬¯¤¯ ¨¯ ¦¨·µ¬¦¤¯ µ¨¶¬¶·¤±¦¨ ²©
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¬¨·µ¨ °¨¯¼ ²¯º ¬²± ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ o¤±§¤³³¯¬¦¤·¬²± ²©tsp w °²¯#pt «¬¶·¤°¬±¨ ¬±¶∏³¨µ©∏¶¤·¨ ¦¤∏¶¨§¤µ¤³¬§¤±§µ¨2
√ µ¨¶¬¥¯¨§¨¦µ¨¤¶¨ ¬±·µ¤±¶¨±§²·«¨ ¬¯¤¯ ¨¯ ¦¨·µ¬¦¤¯ µ¨¶¬¶·¤±¦¨ q± ³¤¬µ¨§ ¬¨³¨µ¬° ±¨·o·«¨ §¨¦µ¨¤¶¨ ²©·µ¤±¶¨±§²·«¨ ¬¯¤¯
¨¯ ¦¨·µ¬¦¤¯ µ¨¶¬¶·¤±¦¨ ¬±§∏¦¨§¥¼ tsp w °²¯#pt «¬¶·¤°¬±¨ º¤¶¬±«¬¥¬·¨§¥¼ ¤§§¬±ªs q{ ≅ tsp w °²¯ #p t ¶¤·µ¤ª¤2
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§∏¦¨§¥¼ «¬¶·¤°¬±¨ o¤±§¶¤·µ¤ª¤¯²¶¬§¨ · ¦¤±¬±«¬¥¬··«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨¶¬±·«¨ °¬¦µ²√¤¶¦∏¯¤µ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼¬±§∏¦¨§¥¼
«¬¶·¤°¬±¨ q·¬¶±¨ ¦¨¶¶¤µ¼ ·«¤··«¨ ¦¨¯¯∏¯¤µ° ¦¨«¤±¬¶° ²© ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼ µ¨¶³²±¶¨ ¬±§∏¦¨§¥¼ ¶¤·µ¤ª¤¯²¶¬§¨ · ¥¨
©∏µ·«¨µ¨¯∏¦¬§¤·¨§q
[ Κεψ ωορδσ] ¶¤·µ¤ª¤¯²¶¬§¨ · ~«¬¶·¤°¬±¨ ~°¬¦µ²√¤¶¦∏¯¤µ³¨µ° ¤¨¥¬¯¬·¼
≈责任编辑 方文贤
苦丁茶对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响
蒋建敏t o许实波t o江润祥u
kt q中山大学 生命科学学院药学系 o广东 广州 xtsuzx ~
u q香港中文大学 中医学院 o香港 新界 沙田l
≈摘要 目的 }研究苦丁茶对豚鼠离体气管平滑肌的影响 ∀方法 }以累积技术建立 ≤¤≤ u¯ 和组织胺k¬¶l的量
效曲线 o研究了苦丁茶对 ≤¤≤ u¯ o¬¶和乙酰胆碱k¦«l等致喘介质对豚鼠离体气管平滑肌收缩功能的影响 ∀结果 }
≤¤≤ u¯和 ¬¶引起气管条明显的收缩 o³⁄u分别为 v qx|和 x qvw ∀苦丁茶能明显压低 ≤¤≤ u¯ 和 ¬¶的量效曲线 o并使
曲线右移 ∀苦丁茶对 ¦«和 ¬¶v ≅ ts p y °°²¯#p t引起的气管平滑肌收缩有明显的逆转作用 o≤xs分别为 s qty °ª
# °¯ p t和 s qut °ª# °¯ p t ∀结论 }提示苦丁茶有明显的舒张豚鼠离体气管平滑肌的作用 ∀
≈关键词 苦丁茶 ~氯化钙 ~组织胺 ~乙酰胆碱
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstltu2s{xv2sw
苦丁茶 o学名大叶冬青 Ιλεξ λατιφολια ׫∏±¥q
kl o古称皋卢 o自汉魏就有文字记述 o迄今已有
≈收稿日期 usss2s{2ty
≈基金项目 香港工业署工业发展科技基金项目kƒrvuvr|zl
tzss多年历史≈t ∀苦丁茶既是传统饮料 o又有药用
价值≈u ∀民间采用其嫩梢作为清凉饮料 o可消风热 o
除烦渴 o治疗痧气和腹痛 o用叶片煮水外洗 o治疗烫
伤和皮肤病 o杀菌消炎止痒效果特别显著 ∀自 zs年
代起 o市面上各种苦丁茶产品纷纷出笼 o但药理学研
#vx{#
第 uy卷第 tu期
usst年 tu月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qtu
⁄¨ ¦qousst