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黑面神水提物抗皮肤Ⅰ型超敏反应的研究



全 文 :中国药房 2013年第24卷第19期 China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 19
3 486.
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(收稿日期:2013-02-06 修回日期:2013-03-15)
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Δ基金项目:中山市科技计划资助项目(No.20102A033)
*主任中药师,教授,硕士研究生导师。研究方向:中药制剂研
发。电话:0760-88815106。E-mail:pww200688@21cn.com
黑面神水提物抗皮肤Ⅰ型超敏反应的研究Δ
彭伟文*,戴卫波,梅全喜,高玉桥,林 慧,胡 莹,张文霞(广州中医药大学附属中山市中医院,广东 中山
528401)
中图分类号 R285;R97 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2013)19-1747-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2013.19.07
摘 要 目的:研究黑面神水提物抗皮肤 I型超敏反应的药理作用。方法:内源性组胺和外源性组胺实验均分为空白对照(等容
蒸馏水)、扑尔敏(4 mg/kg)与黑面神水提物高、中、低剂量(18、9、4.5 g/kg)组,灌胃给药,每天1次,连续5 d。末次给药1 h后尾静
脉注射0.025%低分子右旋糖酐-40(1.25 mg/kg)诱发小鼠阵发性皮肤瘙痒模型,记录小鼠30 min内皮肤瘙痒发作次数与时间;末
次给药1 h后于小鼠腹部正中脱毛皮肤处皮内注射0.1%磷酸组胺(0.1 ml/10 g),观察毛细血管通透性。结果:与空白对照组比较,
黑面神水提物高、中、低剂量组小鼠30 min内瘙痒发作次数显著减少,瘙痒持续时间显著缩短,毛细血管通透性显著降低(P<0.01
或P<0.05)。结论:黑面神水提物可通过抑制组胺的释放发挥抗皮肤 I型超敏反应作用。
关键词 黑面神;水提物;I型超敏反应;组胺
Experimental Study on Antagonizing TypeⅠHypersensitivity Effect of Water-extract of Breynia fruticosa
PENG Wei-wen,DAI Wei-bo,MEI Quan-xi,GAO Yu-qiao,LIN Hui,HU Ying,ZHANG Wen-xia(The Affiliated
Zhongshan Municipal TCM Hospital of Guangzhou University of TCM,Guangdong Zhongshan 528401,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To investigate the pharmacological effect of water-extract of Breynia fruticosa antagonizing type I hy-
persensitivity. METHODS:Endogenous and exogenous histamine experiments were divided into blank control(constant volume of
distilled water),chlorphenamine maleate(4 mg/kg),water-extract of B. fruticosa high-dose,medium-dose and low-dose(18,9,
4.5 g/kg)groups. They were given medicine intragastrically once a day for consecutive 5 days. Paroxysmal skin pruritus mice mod-
el was induced by injecting with 0.025% low molecular dextran(1.25 mg/kg)via tail vein 1 h after last medication. The frequency
and time of paroxysmal skin pruritus attack were recorded within 30 min. 1 h after last medication,0.1% histamine phosphate(0.1
ml/10 g)was injected intracutaneously on wound surface of abdominal middle region in mice. The permeability of capillary vessel
was observed. RESULTS:Compare with blank control group,the frequency and duration of paroxysmal skin pruritus attack were
decreased significantly,while the permeability of capillary vessel was decreased apparently in water-extract of B. fruticosa
high-dose,medium-dose and low-dose groups(P<0.01 or P<0.05). CONCLUSIONS:The water-extract of B. fruticosa could re-
strain type I hypersensitivity by suppressing release of histamine.
KEY WORDS Breynia fruticosa;Water extract;TypeⅠhypersensitivity;Histamine
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China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 19 中国药房 2013年第24卷第19期
黑面神为大戟科植物黑面神Breynia fruticosa(L.)Hook.f.
的干燥地上部分,又名青凡木、钟馗草,主要分布于广东、广
西、海南、云南、福建、浙江、贵州等省,为广东习用地产药材,
具有清热袪湿、活血解毒的功效[1]。现代研究表明,黑面神含
有萜、生物碱、黄酮、鞣质等成分,具有抑菌、抗病毒、抗炎等药
理作用[2-3],临床常用于治疗湿疹、荨麻疹、皮肤瘙痒、漆过敏等
Ⅰ型超敏反应性皮肤病[4-5]。为进一步开发、应用黑面神,笔者
对其水提物抗皮肤Ⅰ型超敏反应的药理作用进行了研究。
1 材料
1.1 仪器
UV-754型紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);
微量移液器(上海求精生化试剂仪器有限公司);TD25-WS型
48孔多管架自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公
司);JA1203型电子天平(上海天平仪器厂)。
1.2 药材
黑面神,购于广州致信中药饮片有限公司,经广东省中山
市中医院曾聪彦主任中药师鉴定为真品。
1.3 药品与试剂
磷酸组胺(国药集团化学试剂有限公司,批号:
F20040831);马来酸氯苯那敏片(扑尔敏,广东南国药业有限
公司,批号:111104);右旋糖酐 -40葡萄糖注射液(批号:
R11112702)、氯化钠注射液(批号:T11093009)均购自四川科
伦药业股份有限公司;伊文斯蓝(中国医药集团总公司,批号:
871225)。
1.4 动物
SPF级昆明种小鼠,♀♂兼半,体质量(20±2)g,购于广
东省医学实验动物中心 [动物使用许可证号:SCXK(粤)
2008-0002]。
2 方法
2.1 黑面神水提物的制备
取黑面神药材粗粉500 g,用冷水浸泡1 h,第1次煎煮用5
L水,煮沸 1 h,滤过。第 2、3次煎煮分别用 2.5 L水,煮沸 30
min,滤过。合并 3次滤液,4℃贮藏 24 h后抽滤,旋转蒸发仪
中浓缩滤液至1 000 ml,4℃贮藏,临用前制备成所需浓度的溶
液。
2.2 黑面神水提物对小鼠全身性皮肤瘙痒的影响
实验分为5组,即空白对照(等容蒸馏水)、扑尔敏(0、0.04
g/kg)与黑面神水提物高、中、低剂量(18、9、4.5 g/kg)组。ig给
药,每天 1次,连续 5 d,于末次给药后 1 h尾 iv 0.025%低分子
右旋糖酐-40(1.25 mg/kg)。以小鼠前爪搔抓头部,后爪搔抓躯
干,嘴咬全身各部位作为瘙痒指征。记录瘙痒持续总时间与
30 min内瘙痒发作次数。
2.3 黑面神水提物对外源性组胺所致毛细血管通透性的影
响[6-7]
分组与给药同“2.2”项下方法操作。于末次给药 l h后尾
iv 0.5%伊文斯蓝(0.1 ml/10 g),立即于小鼠腹部正中事先已脱
毛皮肤处皮内注射 0.1%磷酸组胺(每只 0.1 ml),形成一个小
皮丘。注射完毕后留针 10 s,以防药液外渗。30 min后,将小
鼠脱颈椎致死,剖开腹部,剪下腹部蓝染皮肤,用手术剪剪碎,
置试管内,加入 4 ml丙酮-生理盐水(7 ∶ 3,V/V)混合液,振摇。
浸泡24 h后,2 000 r/min离心10 min,取上清液于610 nm波长
处测定吸光度(OD)值。
2.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件包统计分析。数据以x±s表示,
采用单因素方差分析,进行Dunnet-t或 t′检验。P<0.05为差
异有统计学意义。
3 结果
3.1 黑面神水提物对左旋糖酐-40所致小鼠皮肤瘙痒的影响
与空白对照组比较,黑面神水提物高、中、低剂量组瘙痒
次数显著减少,瘙痒持续时间显著缩短(P<0.01或 P<
0.05)。表明黑面神水提物对右旋糖酐-40所致小鼠全身瘙痒
有明显的抑制作用。黑面神水提物对右旋糖酐-40所致小鼠
皮肤瘙痒的影响见表1。
表1 黑面神水提物对右旋糖酐-40所致小鼠皮肤瘙痒的影响
(x±s,n=10)
Tab 1 Effect of water extract of B. fruticosa on skin pruri-
tus caused by dextran(x±s,n=10)
组别
空白对照组
扑尔敏组
黑面神水提物高剂量组
黑面神水提物中剂量组
黑面神水提物低剂量组
剂量,g /kg
0.004
18.000
9.000
4.500
瘙痒次数,次
18.11±6.75
12.30±4.14**
12.20±3.74**
13.56±3.28*
13.67±1.73*
瘙痒持续时间,s
314.88±252.05
185.31±60.06*
198.70±76.74*
178.35±69.87*
133.35±61.99**
与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
vs. blank control group:*P<0.05,**P<0.01
3.2 黑面神水提物对外源性组胺所致毛细血管通透性的影响
与空白对照组比较,黑面神水提物高、中、低剂量组小鼠
蓝染皮肤OD值显著减少(P<0.01或P<0.05)。表明黑面神
水提物有明显抑制外源性磷酸组胺引起的小鼠皮肤毛细血管
通透性增高的作用。黑面神水提物对组胺所致毛细血管通透
性的影响见表2。
表 2 黑面神水提物对组胺所致毛细血管通透性的影响
(x±s,n=10)
Tab 2 Effect of water extract of B. fruticosa on the
penetrability of capillary vessel induced by histamine( x±s,
n=10)
组别
空白对照组
扑尔敏组
黑面神水提物高剂量组
黑面神水提物中剂量组
黑面神水提物低剂量组
剂量,g /kg
0.004
18.000
9.000
4.500
蓝染皮肤OD值
0.338±0.238
0.206±0.095*
0.169±0.048**
0.216±0.060*
0.191±0.079*
与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01
vs. blank control group:*P<0.05,**P<0.01
4 讨论
湿疹、荨麻疹、漆过敏等皮肤Ⅰ型超敏反应主要是由免疫
球蛋白(IgE)介导,肥大细胞、嗜碱粒细胞和嗜酸粒细胞等效应
细胞以释放生物活性介质的方式参与发生[8]。组胺是由左旋
组氨酸脱酸生成后以肝素结合形式储存于组织肥大细胞、嗜
碱性粒细胞及血小板的胞浆中的生物活性介质。当这些细胞
受到免疫性原因或其他理化因素刺激后,可导致组胺释放,通
过组胺H1或H2受体引起皮肤和黏膜毛细血管扩张和渗透性增
高,可使皮肤黏膜水肿、充血、血浆外渗,出现风团、红斑、丘
疹,并能通过刺激神经末梢而引起瘙痒[9]。低分子右旋糖酐-40
是有一定数量的大分子右旋糖酐,这些大分子排泄缓慢,易造
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中国药房 2013年第24卷第19期 China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 19
成蓄积,是多糖化合物中促组胺释放作用最显著的物质[10]。本
研究结果表明,黑面神水提物可显著减少尾 iv右旋糖酐-40所
致全身瘙痒模型小鼠的 30 min内瘙痒次数和瘙痒持续总时
间,表现出良好的止痒作用;同时,黑面神水提物也可抑制外
源性磷酸组胺引起的小鼠皮肤毛细血管通透性增高。由此提
示,黑面神水提物对内源性组胺和外源性组胺均有抑制作用,
表明黑面神水提物可通过抑制组胺的释放而发挥抗Ⅰ型超敏
反应的药理作用。
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(收稿日期:2012-06-05 修回日期:2012-09-24)
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Δ基金项目:河北联合大学博硕基金项目(No.2002-17)
*副主任医师,副教授,博士。研究方向:耳科学基础与临床。电
话:0315-3725279。E-mail:bj1368317@126.com
丹参对听功能损伤模型豚鼠的保护作用研究Δ
张再兴*,付兴华(河北联合大学附属医院,河北唐山 063000)
中图分类号 R276.1;R979.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2013)19-1749-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2013.19.08
摘 要 目的:研究丹参对听功能损伤模型豚鼠的保护作用。方法:连续5 d腹腔注射顺铂2 mg/kg以复制豚鼠听功能损伤模型。
实验分为3组,即对照(等容生理盐水,5 d)、模型、丹参(8 ml/kg,7 d)组,腹腔注射给药,每天1次。测定豚鼠听性脑干反应(ABR)
阈值与Ⅰ波潜伏期变化;透射电镜观察内耳形态变化。结果:与对照组比较,模型组豚鼠ABR阈值显著升高、Ⅰ波潜伏期显著延
长(P<0.01);与模型组比较,丹参组豚鼠ABR阈值显著降低、Ⅰ波潜伏期显著缩短(P<0.01)。丹参组内耳毛细胞变性坏死程度
较模型组明显减轻。结论:丹参对顺铂导致的内耳损伤有一定的保护作用。
关键词 丹参;顺铂;豚鼠;听功能;形态;内耳
Study of the Protective Effect of Salvia miltiorrhiza on Hearing Function Damage Model of Guinea Pig
ZHANG Zai-xing,FU Xing-hua(The Affiliated Hospital of Hebei United University,Hebei Tangshan 063000,
China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To study the effects of Salvia miltiorrhiza on hearing function in cisplatin injury model guinea pigs.
METHODS:The hearing function injury model was induced by intraperitoneal injection of cisplatin 2 mg/kg for consecutive 5
days. The model rats were divided into 3 groups,i.e. control(constant volume of normal saline,5 d),model,S. miltiorrhiza(8 ml/
kg,7 d)groups. They were given medicines intraperitoneally once a day. The changes of auditory brainstem response(ABR)thresh-
old and latency of waveⅠwere determined,and the morphological changes of inner ear were observed by transmission electron mi-
croscope. RESULTS:Compared with control group,ABR threshold in model group increased significantly,and latency of waveⅠ
prolonged significantly(P<0.01);compared with model group,ABR threshold in S. miltiorrhiza group decreased significantly,and
latency of waveⅠshortened significantly(P<0.01). The necrosis of bristle cells in inner ear in S. miltiorrhiza group was slighter
than in model group. CONCLUSIONS:S. miltiorrhiza shows protective effects against cisplatin-induced injury to the inner ear.
KEY WORDS Salvia miltiorrhiza;Cisplatin;Guinea pigs;Hearing function;Morphology;Inner ear
顺铂主要用于治疗头颈部和泌尿系统的恶性肿瘤,内耳
损伤是其主要副作用之一,减轻内耳损伤是研究顺铂副作用
的重要方向。有研究报道,丹参被广泛应用于治疗心脑血管
疾病、肝肾疾病、颈肩腰腿疾患等多种疾病,疗效令人满意[1],
但丹参是否能减轻顺铂造成的内耳损伤还未知。本研究拟采
用顺铂内耳损伤的动物模型,通过听性脑干反应(ABR)测定、
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