全 文 ：#栽培与饲养#
中药白芷种质资源的 • „°⁄分析 3
黄璐琦 王敏 付桂芳 杨滨
k中国中医研究院中药研究所 北京 tsszssl
王年鹤 袁昌齐
k江苏省中国科学院植物研究所 南京 utsstwl
摘要 目的 }对中药白芷的种质资源进行分析 ∀方法 }用 tu个随机引物对野生白芷 !杭白芷的 w个
居群超过 tz个个体的基因组 ⁄‘„进行 • „°⁄分析 ∀结果 }共扩增出 ws个位点 o其中多态位点 uy个 o
占 y qx h ~祁 !杭白芷的多态位点的百分率显示出低水平的遗传变异 ∀根据 • „°⁄¬¶·¤±¦¨ 分析 o祁 !杭间
的遗传距离ks qtysl小于祁白芷居群内单株间和杭白芷不同居群间遗传距离 o并且它们都小于野生白芷
与祁 !杭白芷间的遗传距离 ∀结论 }祁 !杭白芷应属同一类群 o与野生白芷有一定区别 ∀
关键词 野生白芷 祁白芷 杭白芷 • „°⁄ 种质分析
白芷为常用中药 ∀按国内用药历史和习
惯 o现代所用商品药材均为栽培品 o分为祁k禹l
白芷和杭k川l白芷两大类 o由于对其原野生植
物来源尚未真正搞清 o白芷类药材种名鉴定至
今尚无统一的定论 ∀据有关文献报道≈t ou  o祁
k禹l白芷与分布于东北的兴安白芷k大活l为同
种植物 o定名为白芷 Ανγελιχα δαηυριχαkƒ¬¶¦«ql
…¨ ±·«q¨·‹²²®qo而杭k川l白芷则分别作为独立
种或共同作为白芷的变种 o定名为 Α . δαηυριχα
kƒ¬¶¦«ql…¨ ±·«q¨·‹²²®q√¤µ φορµοσαναk…²¬¶¶l
≥«¤± ·¨≠∏¤±≈u  ∀因此 o我们对上述兴安白芷 !
祁白芷 !杭白芷三者进行了 • „°⁄分析 o探索相
互间分子遗传关系和分类地位 o为正确划分白
芷的种类提供依据 ∀
1 仪器 !试剂和材料
111 仪器 °• ’Š∞‘∞ × ‹∞•  „≤ ≠ ≤∞•
k× ¦¨«±¨ 公司 o英国l ~¬¦µ²2  … vyty型高速离
心机kŒ∞≤ 公司 o美国l ~˜ ∂2 ´型多功能紫外透
射仪k北京市新技术应用研究所l ∀
112 试剂 פ´ 酶k˜2° …¬²·¨¦«oŒ±¦˜≥„l ~琼
脂糖k°µ²° ª¨¤公司l ~§‘×°¶k°µ²° ª¨¤公司l ~
≤ × „…k≥¬ª°¤公司l ~溴化乙锭kƒ ∏¯®¤公司l ~其
余试剂为北京化工厂产的分析纯 ∀
113 材料 取各种材料的新鲜叶子 o见表 t ∀
表 t 实验材料来源及多态位点百分率的比较
编
号
名称 个体数 来源
位点
总数
多态位
点数k h l
t 杭白芷 { 浙江杭州药用植物园 ws uskxsl
u 杭白芷 w 江苏南京植物研究所 ws uvkxz qxl
v 祁白芷 x 河北安国县 ws t{kwxl
w 兴安白芷 tu 沈阳药科大学 ws |kuu qxl
注 }引物数均 tu
2 实验方法
211 ⁄‘„模板的提取和浓度测定 取新鲜叶
片少许 o置 t qx °¯ ∞³管中 o加入液氮用镊子研
碎 o立即加入 xssΛ¯ 保温 ys ε 的 u ≅ ≤ × „…提取
液≈ ≤ × „… u h o×µ¬¶2‹≤¯k³‹ { qsltss°°²¯ #
p t o∞⁄× „ us°°²¯#pt o‘¤≤¯t qw°²¯#pt o巯
基乙醇 u h  及 usΛ¯ 巯基乙醇混匀 oys ε 保温
ws°¬±~加入等体积的氯仿2异丙醇kuwΒtl抽提 o
轻轻颠倒混匀 otssssµ#°¬±p t离心 ts°¬±o吸取
上清液 o加入 trts体积的 ts h ≤ × „…溶液 o再
加入等体积氯仿2异丙醇kuwΒtl重复抽提 t次 o
吸取上清液加入等体积的沉淀缓冲液≈ ≤ × „…
t h o×µ¬¶2‹≤¯k³‹ { qsl xs°°²¯ # pt o∞⁄× „
ts°°²¯ # pt o巯基乙醇 t h   o室温下放置
3 国家中医药管理局青年课题 ‘²1|z≠suv
国家自然科学基金资助课题 ‘²1v|yzss{t
#zxw# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 {期
vs°¬±以上 otssssµ# °¬±p t离心 ts°¬±o小心去
上清液 o分别用 zs h乙醇和无水乙醇各洗涤 t
次 o弃掉洗液挥干 ∀用分光光度计测定 ⁄‘„浓
度后进行 °≤ • 扩增 ∀所用引物编号及其序列
见表 u ∀
212 • „°⁄扩增 反应体系总体积 xsΛ¯ o其中
引物为 t°°²¯ #p t o总 ⁄‘„ 约 txs±ªoפ´ 酶
u ˜ o§‘×°¶各s qsx °°²¯ #p t ∀扩增程度为预
变性 x°¬±o|w ε ws¶ov{ ε wx¶ozu ε wx¶ws 个
循环 o后延伸 zu ε x°¬±∀取 tsΛ¯ 扩增产物于
t qs h琼脂糖凝胶上用 t ≅ × „∞电泳缓冲液电
泳 o紫外检测拍照k见图 tl ∀
图 t 样品不同个体以不同引物 • „°⁄
扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图谱
„1v号引物 …1ts号引物
表 u • „°⁄所用引物编号及其序列
编号 序列kxχ ψ vχ l
t × ≤ ŠŠ≤ Š„× „Š
u ≤ „„„≤ Š× ≤ ŠŠ
v „ŠŠŠŠ× ≤ × × Š
w Š× Š„≤ Š× „ŠŠ
x „„× ≤ ŠŠŠ≤ × Š
y ŠŠŠ× „„≤ Š≤≤
z ≤ „ŠŠ≤≤ ≤ × × ≤
{ ≤ „Š≤ „≤≤ ≤ „≤
| „≤ × ≤ „Š≤≤ „≤
ts × Š≤≤ Š„Š≤ × Š
„× Š„× Š„Š„× × ≤ × × „Š
tt × ≤ ≤ × ≤ × ≤ × × × Š≤ × „
× ≤ „× Š≤≤ „× „× × Š× × ×
tu ≤ Š„× × ≤ „Š≤ „Š≤ „„
213 数据分析 电泳图谱中的每一条带k⁄‘„
片段l均为一个分子标记k ¤µ®¨ µl o并代表 t个
引物结合点 ∀根据各分子标记的有无及其迁移
率统计得到所有位点的二元数据 o无带k隐性l
计为 s o有带k显性l计为 tk强带和弱带的赋值
均为 tl ∀对于多态位点 o仅在重复实验中能稳
定出现的差异带用于数据分析 ∀用 • „°⁄分析
软件 • „°⁄¬¶·¤±¦¨ °¤¦®¤ª¨2∂ µ¨¶¬²± t qsw中 ⁄¬¦¨
的方法计算任意两个样品间的遗传距离 o得到
单株间和居群间的遗传距离 o见表 v ∀
表 v 白芷单株间和居群间的平均遗传距离
操作分类单位
’ × ˜¶tl
材料来源
编号 t u v w
t t s qttvul
u u s qtz| s qtyyul
v v s qtys s qtzy s qtyyul
w w s quv| s quxt s qusy sul
注 }tl’³¨µ¤·¬²±¤¯ פ¬²±²°¬¦˜±¬·t2{ u2w v2x w2± ~
ul居群内单株间的平均遗传距离
3 结果与讨论
311 琼脂糖电泳分析表明 o在 • „°⁄分析中
tu个 ° µ¨随机引物在不同样品中共检测出 ws
个位点 o其中多态位点 uy个 o占 yx h ~祁 !杭白
芷的多态位点的百分率分别是 wx h oxs h 和
xz qx h k表 tl o近似于 ²¶¶¨¯¨ µ≈w 等用 tt个引
物在 °¬¦¨¤ ª¯¤±¦¤和 °¬¦¨¤ °¤µ¬¤±¤各 v个个体
的研究中所得结果 o显示出低水平的遗传变异 o
这可能与栽培过程中群体内和群体间的遗传多
样性明显下降有关 ∀
312 • „°⁄所得的遗传距离表明祁白芷与杭
白芷中杭州居群的遗传距离ks qtysl小于祁白
芷居群内单株间的遗传距离ks qtyyl o也小于杭
白芷不同居群间的遗传距离ks qtz|l ~并且它们
都低于与野生白芷的遗传距离 o这证实了潘泽
惠等的细胞学研究认为祁白芷不能与兴安白芷
等同及祁 !杭白芷关系密切等≈x  ~并就此进一步
得出祁 !杭白芷应属同一类群 o支持5中国植物
志6≈y 把祁 !杭白芷作为同种处理 ~但它们是否
经兴安白芷栽培而来 o有待在本实验的基础上
研究它们与 Α1 δαηυριχα的近缘种类 o如分布
于河北 !河南的 Α . πορπηψροχαυλισ和分布于台
湾的 Α . φορµοσανα等进行比较研究 o才能最终
解决白芷类药材野生种质来源这一至今尚未解
决的问题 ∀
313 • „°⁄分析显示出祁白芷与兴安白芷的
遗传距离ks qusyl相对杭白芷与兴安白芷的遗
传距离ks quv|和 s quxtl要小些 o这与祁白芷在
地理分布上更近于兴安白芷相符合 o但其中是
#{xw# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 {期
否有必然的联系有待进一步的研究 ∀
4 参考文献
t 宋万志 o朱兆仪 o诚静容 o等 1 中药白芷的原植物问题 1 药
学学报 ot|yx otukzl }wys
u 袁昌齐 1 中药白芷药材和原植物的鉴定整理 1 中草药通
讯 ot|z| otskzl }vx
v 汪小全 o邹喻苹 o张大明 o等 1 银杉遗传多样性的 • „°⁄分
析 1 中国科学k≤ 辑l ot||y ouykxl }wvy
w  ²¶¶¨¯¨ µ„ o∞ªª¨µŽ‘o‹∏ª«¨ ¶Š „ q²º ¨√¨¯¶²© Š ±¨¨ ·¬¦
⁄¬√ µ¨¶¬·¼ ¬± • §¨ °¬±¨ ≤²±©¬µ° §¨ ¥¼ • ¤±§²° „ °³¯¬©¬¨§
°²¯¼°²µ³«¬¦⁄‘„ ¤µ®¨ µ¶q≤¤±  ƒ²µ• ¶¨ot||u ouu }tvvu
x 潘泽惠 o秦慧贞 o吴竹君 o等 1 白芷的核型研究及其意义 1
植物分类学报 ot|{x ouvkvl }t{x
y 中国科学院中国植物志编辑委员会 1 中国植物志 1 北京 }
科学出版社 ot||u oxvkvl }vx
t||{2s|2uu收稿
北五味子种子发芽特性及胚发育动态的研究
张丽萍 陈震 马小军 李先恩
k中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 北京 tsss|wl
摘要 目的 }探索北五味子种子的发芽特点 ∀方法 }采用低温和赤霉素处理 ∀结果 }低温 !赤霉素均
能提高种子的裂口率 o但裂口不整齐 o表现出较强的野生特性 ∀此外 o胚发育也表现出一些特点 o即裂口
前胚形态变化不大 o裂口后胚增大很快 ∀结论 }北五味子种子胚形态发育不完全 o不是种子长时期休眠
的主要原因 ∀
关键词 北五味子 种子 胚 裂口率
北五味子系木兰科北五味子 Σχηισανδρα
χηινενσισk×∏µ¦½ql…¤¬¯¯ q属多年生藤本 o以果实
入药 o具有敛肺 !滋肾 !止汗 !止泻 !涩精等功能 o
是广泛应用的重要药材 ∀生产上 o多用种子繁
殖 o但五味子种子有长达 x ∗ y个月的休眠期 o
在休眠期内必须对种子进行处理 o第 u年方可
发芽 o否则 o春播发芽率很低 o仅有 t qw h ≈t  ∀
为此 o我们于 t||x年冬进行了北五味子种子处
理实验 o观察了胚的发育情况 o现介绍如下 ∀
1 材料和方法
111 种子的前处理
取当年吉林采集的北五味子果实 o水浸泡
zu«o搓去果肉 o洗净种子 o再于水中将秕粒漂出
去 o取沉于水中下部的饱满种子为供试种子 ∀
112 种子的贮放处理及观察方法
11211 贮放处理 }≠将湿沙和供试种子按 uΒt
的比例均匀混合 o分成两组 o于 t||x年 tu月 u{
日贮放于冰箱ks ∗ w ε lkŒl和室温ktw ∗ tz ε l
下 o定期补充适量水分 ∀t||y年 u月 x日用同
样方法存于冰箱下一份k µl o观察裂口情况 ~
将冰箱内存放 vs§的 µ和 yx§的 Œ以及室温下
存放 yx§的 ≤Ž部分种子 ot||y年 v月 y日分
别用 s oxs otss ouxs owss oxssΛª#ªp t不同浓度
的赤霉素浸泡 uw«o每处理 tss粒 o置于培养皿
中 o湿沙贮存 o分两组存放 o„ 组继续放冰箱内
kŒ„ oµ „l o…组和对照组 ≤Ž放室温下kŒ… oµ… o
≤Žl o定期补充适量水 o观察裂口情况 ∀
11212 胚发育动态的观察 }另选一些 t||x年
tu月 u{日冰箱下低温处理的 ot||y年 v月 y
日 u qx ≅ tsp {Λª#ªp t赤霉素浓度处理的种子 o
存于室温下 ∀每月取种子 ts 粒 o从种子的中
间 o纵向切开 o将胚一分为二 o在显微镜下观察
胚的变化 o并测定其胚与胚乳的最长长度 o计算
其胚占胚乳的比率k即胚率l ∀
2 结果与分析
211 低温贮存 }存放于冰箱 k低温l内 vs§
k µl oyx§kŒl以及 y个月的种子 o无论赤霉素处
理与否 o在低温期间均未见有裂口 ∀
212 经低温和赤霉素处理后的情况 }经低温处
理后 o未经赤霉素处理的 o先后放室温下的 ´ … o
#|xw# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 {期